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流感病毒实验室检测技术研究进展
流感病毒属于正粘病毒科,为单股、负链、分节段RNA病毒.根据核蛋白(nucleocapside protein,NP)和基质蛋白(matrix protein,MP)的不同分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,根据甲型流感病毒血凝素抗原(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶抗原(neuraminidase,NA)的结构及基因特性的不同,又可分为若干亚型,至今已发现甲型流感病毒的HA有16个亚型(H1～H16),NA有9个亚型(N1～N9)L,这是流感病毒在自然界中发生基因重组和抗原漂移的巨大资源库2.
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STD患者中四种难培养支原体的分离培养结果分析
本文报告了用病原学方法,了解我国STD患者中是否存在生殖支原体、发酵支原体、穿通支原体和梨支原体的感染.采集泌尿生殖道分泌物,接种在SP-4培养基作分离培养.阳性培养物用代谢抑制实验和聚合酶链反应等加以鉴定.292例标本中分离到了11株生殖支原体、2株发酵支原体和2株穿通支原体.从病原学上首次证实,江苏地区STD患者中存在生殖支原体、发酵支原体和穿通支原体的感染,在STD防治工作中应予以重视.
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一起副溶血性弧菌引起的食物中毒
2003年7月20日,据报告某单位有数人因在酒店用餐后发生腹泻,腹泻物多为黄色水样便.我们赶赴现场,进行流行病学调查和实验室检验,采集酒店内墩板刀具等涂抹样4份、熟食2份、活扇贝1份以及现症病人肛拭4份进行分离培养.活扇贝1份和2份病人肛拭中检出副溶血性弧菌.
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346份临床呼吸道标本中肺炎支原体感染情况研究
目的 了解肺炎支原体菌株培养特点及其引起疾病的临床特点,提高对肺炎支原体感染疾病的认识,为国内临床肺炎支原体的诊治提供数据支持.方法 对346份临床咽拭子标本进行肺炎支原体分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测,了解临床标本中肺炎支原体分离培养特点,对不同年龄段和不同类型临床标本中肺炎支原体感染率比对分析.结果 346份标本肺炎支原体的分离培养和real-time PCR检测阳性率分别为28.6％和32.1％;其中205例社区获得性肺炎病例中肺炎支原体感染率为52.2％,141例上呼吸道感染病例标本中肺炎支原体检测阳性率仅为4.2％,两组感染率差异存在统计学意义.肺炎支原体人群感染率有随年龄段增加而降低的趋势,但感染率在＜ 14岁的儿童组中与40岁以下的成年人组中差异无统计学意义.结论 本研究表明肺炎支原体是引起社区获得性肺炎的重要病原,但在上呼吸道感染病例中少见;相比儿童病例而言,成人病例中肺炎支原体感染率也非常高,需引起临床更多关注.
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感染性腹泻患者弯曲菌感染的实验室检测及监测
目的 了解我国腹泻患者弯曲菌的感染现状.方法 采用体外分离培养以及特异核苷酸检测法对某医院腹泻患者粪便标本进行持续8个月的弯曲菌感染的监测.2013年4-11月持续收集北京某医院感染性腹泻门诊患者粪便标本278份,分别采用直接划线培养、增菌培养以及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)的方法检测感染性腹泻患者弯曲菌的感染现状.结果 278份感染性腹泻患者粪便标本使用分离培养和特异核苷酸检测共有16份标本为空肠弯曲菌阳性.其中直接划线培养分离到6株空肠弯曲菌,阳性率为2.2％ (6/278),增菌培养分离到2株空肠弯曲菌,阳性率为0.7％(2/278);特异核苷酸检测获得14份阳性标本,阳性率为5.0％(14/278).分离培养、real-time PCR方法检测感染性腹泻患者粪便标本中弯曲菌的阳性率差异有统计学意义(x2=36.425,P=0.039).结论 本次检测结果表明感染性腹泻患者中弯曲菌的检出率显著低于国内新报道7.1％.与直接分离培养相比,增菌培养法检测粪便中弯曲菌的灵敏度显著降低.real-time PCR法能够快速检测腹泻患者弯曲菌的感染情况,其灵敏度(14/16,87.5％)高于分离培养(6/16,37.5％).
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血液病患者血液中肺炎支原体和发酵支原体的检出
目的 探讨血液病患者血液中肺炎支原体和发酵支原体的分离检出.方法 分别对101例确诊为血液病患者和65名非血液病对照者的血液标本进行肺炎和发酵支原体分离培养和聚合酶链反应鉴定,阳性标本进一步经电镜确认.结果 101例血液病患者血液标本中共计检出肺炎和发酵支原体17例(16.8%),其中肺炎支原体9例(8.9%),发酵支原体8例(7.9%),体柃对照组血液中未检出肺炎和发酵支原体(0.0%),组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 血液病患者血液中肺炎支原体和发酵支原体的检出显著高于非血液病对照组,确切机制有待进一步探讨.
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西藏左贡县美玉乡两起皮肤炭疽散发流行的调查报告
2004年2月27-29日,西藏昌都地区左贡县美玉乡报告该乡因剥食病死牛、羊肉后连续发生2起疑似皮肤炭疽病例,发病人数3人.接报告后,我站到该乡雄嘎村、格冲村(堆瓦自然村)进行调查处理,经与该县联合采样进行病灶处分泌物涂片镜检、增菌分离培养,证实为炭疽牙孢杆菌.本次流行为局部散发,经采取对症治疗、抗生素(青霉素)治疗应急预防等综合措施后,疫情得到有效控制.现将调查情况报告如下.
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聚合酶链反应法和分离培养法筛检小肠结肠炎耶尔森菌方法的比较研究
目的 比较针对小肠结肠炎耶尔森菌的两种不同检测方法,即ail基因联合foxA基因的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测和分离培养法的差异.方法 从生猪咽拭子和回盲部肠内容物标本中提取细菌基因组DNA并进行小肠结肠炎耶尔森菌保守基因foxA和粘附侵袭位点基因ail的PCR检测；菌株分离培养按常规方法进行.将两种方法的检出结果进行统计分析,以判定哪种更有优势.结果 700份标本中,小肠结肠炎耶尔森菌特异性基因PCR检测阳性402份,阳性率57.43％；小肠结肠炎耶尔森菌分离培养阳性278份,阳性率39.71％.在PCR检测阳性的402份标本中,分离小肠结肠炎耶尔森菌271株,分离阳性率为67.41％；PCR检测阴性的298份标本中,分离小肠结肠炎耶尔森菌7株,分离阳性率仅为2.35％.结论 本次实验证实,检测来源于生猪标本中的小肠结肠炎耶尔森菌,采用foxA和ail基因联合的PCR检测法,检出率明显高于小肠结肠炎耶尔森菌分离培养法(P＜0.05).
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副溶血性弧菌快速检测方法研究
目的 以检测toxR基因作为副溶血性弧菌种水平上的特异性基因鉴定,建立一种快速、准确、简便的副溶血性弧菌(VP)筛选方法.方法 根据toxR基因序列设计合成引物,扩增被检VP所含的相应基因.分别用标准株及地方株做对照,同时与常规鉴定方法比较.结果 对浙江省2005年收集的286株来自临床病人和海产品的可疑VP鉴定,用常规方法鉴定出VP占总数的62.24%;用toxR基因检测,鉴定率占所有菌株的61.54%;两者差异无统计学意义(x2=0.03,P＞0.05),对40份海产品增菌液直接检测toxR基因与常规增菌分离鉴定法,均有37份标本检出VP,检出率为92.5%.结论 该检测方法快捷、特异性好、敏感性高,可以作为VP快速筛选方法.
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幽门螺杆菌感染100例根除治疗对照分析
自1982年澳大利亚学者M arshall和Warren首先从人胃黏膜中分离培养出幽门螺杆菌并证明幽门螺杆菌与胃炎和消化性溃疡的发病相关后，幽门螺杆菌相关疾病被不断认识，根除幽门螺杆菌治疗对消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤意义重大，但幽门螺杆菌感染并不是以上疾病的唯一的因素。也有学者报道一些非胃部疾病如不明原因贫血、特发性血小板减少性紫癜亦与幽门螺杆菌的感染有一定关系，上述疾病经根除幽门螺杆菌治疗后痊愈好转。我科针对2012年100例患者根除治疗中不同性别患者选用不同药物做对照研究，所检测设备为14 C呼气试验检测仪（安徽养和），报告如下。
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烟碱对新生牛脑微血管内皮损伤的作用机制
烟碱是使人们吸烟成瘾的主要物质,已有研究表明,烟碱对心脑血管等组织和器官有直接损伤作用.本研究采用新生牛脑组织,分离培养脑微血管内皮细胞,观察烟碱作用于内皮细胞后细胞黏附分子的表达,探讨了烟碱对脑血管损伤的分子机制,主要结果如下:
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甲型流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化
目的 优化甲型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高甲型流感病毒的分离率和监测效果.方法 将三种甲型流感病毒液(甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3 N2)分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量(25、50、75、100、125和150 μl/cm2)、不同的TPCK-胰酶添加浓度(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和3.5μg/ml)以及不同的MDCK细胞增毒代次(连续盲传四代),对三种甲型流感病毒易感性的影响,确定其佳分离效果.结果 三种甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2的佳病毒接种量分别为:100、75和75 μl/cm2;胰酶佳使用浓度分别为2.5、2.0和2.0 μg/ml;适宜的细胞增毒传代次数为:一代、二代、二代;低代次的MDCK细胞对甲型H1N1流感病毒的易感性高于季节性H1N1和季节性H3N2;甲型H1N1流感在培养后病毒的HA滴度低于季节性H1N1与季节性H3N2.结论 甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞上的分离效果低于季节性H1N1与季节性H3N2;季节性H1N1流感病毒和季节性H3N2流感病毒的分离条件基本相同.
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老年肺结核患者对10种抗结核药物的耐药性分析
为了了解老年肺结核的耐药特点,现将本院结果报告如下.材料和方法1.对象:选择我院1996～1999年的60～82岁老年肺结核患者的痰、支气管肺泡灌洗液进行分离培养,共分离出125株结核菌.
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2000年全国流调新疆自治区结核病细菌学检查的分析与评价
在结核病控制工作中,痰结核杆菌检查对发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果都具有重要意义.而肺结核病人的痰标本直接涂片和痰分离培养又是结核杆菌检查的原始、传统、经典的方法,两种检查方法及经济、操作简单易行,是世界卫生组织推荐的方法之一,目前,已被各级实验室广泛应用.
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配制小批量改良罗氏培基方法的改进
目前,改良罗氏培养基仍然是基层实验室作为分离培养结核分枝杆菌所采用的培养基,由于标本量不多,培养基用量少,按传统方法每月配制小批量培养基,每次称取少量多种成分,手续较为繁琐又耗时,因此,在配制方法上我们做了一些改进,现介绍如下.
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南方五省口岸蚊类携带虫媒病毒调查
[目的]掌握南方口岸蚊媒携带病毒的本底资料,为蚊传疾病的预防控制工作提供依据.[方法]采用电动吸蚊器人工法和捕蚊磁场自动法采集南方5省口岸各类蚊虫.采集到的蚊类超低温送至实验室,研磨处理后用荧光PCR方法检测登革病毒、乙脑病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,结果阳性的标本进一步进行PCR扩增和核苷酸序列测定分析;蚊标本研磨液同时用C6/36细胞进行虫媒病毒分离培养,出现细胞病变后分别用黄病毒科、甲病毒科各自的通用引物进行鉴定;对未能鉴定的未知病毒进一步用随机PCR方法进行扩增、克隆、序列测定、Blast搜索.[结果]从南方5省口岸采集到各类蚊虫12575只,鉴定后共分成254组.各组标本经荧光PCR方法检测,结果登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒均为阴性;检测到2份福建省来源三带喙库蚊的标本乙脑病毒核酸阳性,经乙脑病毒E基因引物PCR扩增、测序分析证实为G Ⅰ型病毒.254份标本经C6/36细胞分离培养出现42份细胞病变,用黄病毒科、甲病毒通用引物PCR扩增,均未得到特异片段.选取1份典型病变的细胞培养物进行随机PCR鉴定,结果发现了1种潜伏于C6/36细胞中的浓核病毒.[结论]南方5省口岸蚊媒中可能未携带登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,只有少量蚊虫携带乙脑病毒,蚊虫体内检测到的G Ⅰ型乙脑病毒属于福建省首次发现,出现病变的C6/36细胞可能是由自身潜伏的1种C6/36细胞浓核病毒引起.
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口岸入境人员腹泻病原体快速检测流程的建立
目的 建立一种适合国境口岸入境人员腹泻样本中病原体快速检测的流程.方法 联合使用荧光PcR和细菌培养分离鉴定法,先用荧光PCR法对引起人类腹泻的常见4种病毒(轮状病毒、诺如病毒、星状病毒、札如病毒)和11种细菌(沙门菌、志贺菌、肠致病性大肠埃希菌、肠出血性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌、肠产毒性大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、李斯特菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌)进行核酸检测,阳性样本再采用选择性培养基进行有针对性的细菌培养分离鉴定.结果 2016年8-10月,用建立的检测流程从14份口岸入境人员肛拭子样本中检出2份肠致病性大肠埃希菌、1份肠炎沙门菌、1份温和气单胞菌和1份铜绿假单胞菌,检测时间均只用3d.结论 建立的荧光PCR结合细菌培养分离鉴定的联合检测流程,可大幅缩短检测时间,值得在口岸推广应用.
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人类男性生殖组织库的发展趋势及伦理问题
以生殖力保存和预防疾病为目的,建立大型冷冻贮存库,分类冻存男性生殖细胞和组织,包括:精子、睾丸组织以及精原干细胞,并开展相关技术的研究,包括睾丸组织冷冻及原位和异位自体移植、精原干细胞的分离培养与低温保存、精原干细胞生精小管内移植,从而发展成为较为完善的男性生殖细胞/组织库,可能成为人类辅助生殖技术的一个发展趋势.
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深低温保存胃黏膜标本对Hp检出率的影响
目的:了解深低温(-80℃)保存胃黏膜标本对幽门螺杆菌(Hp)分离率的影响.方法:将从现场采取的经13C呼气实验证实为Hp阳性的283份胃黏膜标本随机分为两部分,228份在现场1星期之内分离培养;55份保存于-80℃冰箱中,18个月之后分离培养,比较Hp的分离率.结果:1周内和深低温保存18个月后胃黏膜标本的Hp分离分别为51%和53%,经统计学分析二者没有显著差别.结论:胃黏膜标本在保存液中置于-80℃的低温条件下18个月不会影响Hp的分离率.
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应用纤维膜过滤方法从鱼肠内容物中分离到一株布氏弓形杆菌
目的 建立弓形杆菌的分离培养方法.方法 通过纤维滤膜过滤的方法时菌悬液过滤,用CCDA平板对弓形杆菌进行分离培养.将分离到的可疑菌落进行分纯培养,然后通过生化和16S rRNA序列分析进行鉴定.结果 从鱼肠内容物中分离到一株疑似菌株,对其进行袁型生化分析和16S rDNA全序列分析,鉴定该菌为布氏弓形杆菌.结论 该检验方法适用于对弓形杆菌进行分离培养.
