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清开灵注射液对登革病毒Ⅱ型的抗病毒作用研究
目的 检测清开灵注射液在细胞模型上抗登革病毒Ⅱ型(DENV-Ⅱ型)作用.方法 本实验以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞,阿昔洛韦(ACV)为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT法检测细胞存活率来测定药物的细胞毒性、药物对DENV-Ⅱ的直接灭活作用、以及药物抗DENV-Ⅱ对细胞的吸附和对DENV-Ⅱ在细胞内复制的抑制作用.结果 该药在体外对DENV-Ⅱ无直接灭活作用,也不能阻止其对细胞的吸附,但对病毒在细胞内的增殖有明显的抑制作用,且呈一定的剂量效应依赖性.结论 该药在体外有一定的抗DENV-Ⅱ感染作用.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白4B研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)是至今为止功能尚不明确的HCV非结构蛋白,近年来的研究表明其定位于内质网膜,与细胞内膜结构的功能有关.在体外实验中,它和NS4A一起可以抑制宿主细胞的翻译;在一定程度上可以减弱机体对抗病毒药物干扰素-α(INF-α)的反应,同时使病毒可以逃避宿主对病毒的免疫;在HCV病毒的致瘤性方面亦有重要作用.可以与NS3、NS4A、NS5A、NS5B等相互作用,对其它非结构蛋白的功能起协同、促进甚或是下调作用.
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雪旺细胞体外培养纯化的方法学研究进展
已知雪旺细胞在周围神经损伤后的修复过程中发挥关键作用,如何获得大量纯化的雪旺细胞已成为当前临床医学和基础毒理学领域的专家们所共同关注的现实问题.本文旨在概述目前国内外公认的体外培养纯化雪旺细胞的方法,比较其优缺点,为雪旺细胞的广泛应用提供一定的技术支持,同时也期望对其他神经细胞的培养提供方法学上的借鉴.
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全氟辛烷磺酸对体外培养小鼠淋巴细胞增殖功能和细胞因子分泌水平的影响
目的 探讨全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)体外处理对脾淋巴细胞增殖功能及其分泌细胞因子水平的影响.方法 分别以不同浓度的PFOS(0、1、5、10、50、200和300μmol/L)处理C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,培养48 h后收取上清液,以刀豆蛋白A(ConA)和大肠杆菌脂多糖(LPS)作为刺激原,采用MTT法检测T、B淋巴细胞增殖功能;采用Griess法检测NO含量;用双抗体夹心ELISA试剂盒检测IL-2、IL4、IL-10和IFN-γ产生水平.结果 淋巴细胞的增殖功能与PFOS暴露剂量并不存在剂量.反应关系.300μmol/L PFOS处理组T淋巴细胞的增殖功能显著低于对照组(P<0.05);而B淋巴细胞增殖功能暴露于200μmol/L PFOS时显著的受到抑制(P<0.05).PFOS可对脾细胞分泌NO功能产生抑制(P<0.05),但对Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的水平和Th2型细胞因子IL-4和IL-10的水平并没有发生明显的改变(P>0.05).结论 PFOS体外处理可降低淋巴细胞的增殖功能,且B淋巴细胞对PFOS的敏感性要高于T淋巴细胞.而PFOS体外处理对脾细胞分泌细胞因子的功能并没有产生显著的影响但可显著降低NO分泌水平,表明PFOS可直接抑制小鼠巨噬细胞的活化.
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微波对大鼠脑突触小体膜的钙外排率影响
微波是指频率范围在300MHz～300GHz的电磁波.某些研究显示低功率微波及超短波可对生物体的钙信使体系产生影响并可呈现频率窗和功率窗效应[1～3].本研究采用体外实验,用微波调制和非调制场,不同功率密度,不同照射时间照射大鼠脑突触小体膜(spm),观察spm钙跨膜外排率的改变、Ca2+-Mg2+-ATPase活性、膜脂流动性以及腺苷酸环化酶(AC)活性.以便探讨微波对spm钙跨膜外排产生的影响及其途径,并且说明所产生的效应与微波功率密度,调制频率,照射时间的关系.
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煤尘对人肺泡上皮细胞DNA损伤作用的体外实验
目的以体外培养的人肺泡上皮细胞(A549)作为靶细胞,探讨煤尘对DNA的损伤作用.方法将人肺泡上皮细胞(A549)用3种煤尘作用2 h或24 h,用MTT法测定细胞存活情况及用单细胞凝胶电泳技术测定DNA链断裂情况;采用两种细胞共培养的方法,用MTT法测定煤尘在巨噬细胞介导作用下对A549细胞存活情况的影响及用单细胞凝胶电泳技术测定DNA链断裂情况.结果 3种煤尘(游离SiO\-2含量分别为4.33%、1.79%、0.67%)以3种剂量(100、500、1 000 μg/ml)直接作用于A549细胞24 h,在500和1 000 μg/ml时均可引起细胞存活率的明显下降;直接作用于A549细胞2 h或24 h及通过巨噬细胞介导作用下A549细胞,均未能引起A549细胞DNA链断裂程度的明显增加.结论煤尘对A549细胞具有明显的细胞毒性,但不具有明显的遗传毒性.
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体外实验在肾脏毒理研究中的应用与展望
肾脏是药物在体外代谢与排泄的主要器官,它的高血流率和浓缩功能使其对血液中的毒物极其敏感而易受到损害.但是它巨大的储备与代偿功能常会掩盖其功能障碍的迹象,所以肾脏疾病的早期诊断很难.尽管许多关于肾脏毒理的研究已广泛开展,并得出了一定的结论,但是由于肾脏组织结构极其复杂,传统的实验方法在细胞和分子水平的毒性机制探讨受到限制.而体外实验方法的发展,促进了这些方面的精确研究.体外试验是通过在体外维持某一个靶器官或靶细胞,甚至靶分子的正常生理功能,观察受试物对其产生的作用,从而提供毒理学资料的方法,它具有简便、快捷、经济及可直接利用人体细胞等优点,与整体试验一起用于毒理学的研究.
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马齿苋对乙醇致小鼠肝损伤的抗氧化作用
马齿苋是我国很常见的一种野菜,具有食药二重性.实验研究表明马齿苋在体内、体外实验均具有抗氧化作用并能抑制肝脂质过氧化作用[1,2],本文观察了马齿苋对乙醇诱导小鼠肝损伤的保护作用,为进一步开发利用野生资源提供参考.
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虎杖中有效成分白藜芦醇对HeP-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用初探
目的对白藜芦醇的体外抗肿瘤作用进行研究,探讨其作用机制.方法用体外细胞培养,采用MTT法,并用流式细胞仪观察不同浓度白藜芦醇对HeP-2细胞生长的影响.结果一定浓度白藜芦醇能抑制HeP-2细胞的恶性增殖,诱导HeP-2细胞出现凋亡峰,使HeP-2 G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,呈现G0/G1期阻滞现象.同时,不影响正常小鼠成纤维3T3细胞的生长.结论一定浓度白藜芦醇可以抑制HeP-2生长,诱导HeP-2细胞发生凋亡,具一定的时间-剂量依赖性,且对正常细胞是无害的.
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组合体外与临床测试评价植物抗氧化剂抗老化功效
目的 基于非动物测试理念,研究植物抗氧化剂复配后的皮肤抗老化功效.方法 体外培养HaCaT角质细胞,紫外线照射诱发氧化损伤模型,分别加入白藜芦醇、原花青素和二者复配物,用MTT比色法、荧光素标记法和ELISA法检测细胞活性、活性氧簇自由基(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、细胞周期及细胞凋亡的变化.对含两种植物原料的眼霜配方进行鸡胚尿囊膜血管试验(CAMVA)和牛角膜混浊渗透试验(BCOP)的组合测试评价其眼刺激性.选择平均年龄40岁的女性志愿者25名,眼部连续使用该眼霜60 d,于使用产品的第0、30和60 d分别检测皮肤的水份、水份流失、弹性和肤色等皮肤老化相关指标.结果 白藜芦醇-原花青素复配的植物抗氧化剂可明显缓解紫外线造成的HaCaT细胞氧化损伤,SOD水平明显升高(P＜0.001),ROS荧光强度、细胞凋亡率及S期细胞比例均明显降低(P ＜0.001),细胞修复作用强于单独作用.经过替代方法组合评价其安全性后进行临床志愿者测试,证明皮肤保湿、弹性和皮肤颜色等指标得到改善.结论 白藜芦醇和原花青素两种植物抗氧化剂复配使用可有效减少皮肤氧化应激和明显改善皮肤性能.
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中药对于幽门螺杆菌体外抑杀实验的系统评价
目的 依据国际认可的药物抑菌活性检测实验的实验方法对现有的中药抑杀幽门螺杆菌体外实验相关文献的实验方法及文献质量进行系统评价.方法 通过检索中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、中国博士学位论文全文数据库、中国优秀硕士学位论文全文数据库、中国重要会议论文全文数据库、中国重要报纸全文数据库及万方数据库自1978年以来有关中药对于幽门螺杆菌体外抑杀实验的相关文献对符合纳入标准的文献进行系统评价.结果 检索到相关文献33篇,全部符合纳入与排除标准的文献为22篇,运用抑菌环法及菌液稀释法有5篇,只采用菌液稀释法的有13篇,只采用抑菌环实验的有3篇,而无一篇采用国际认可的微量菌液稀释法.
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盐酸吡格列酮对GK大鼠胰岛β细胞凋亡的影响
胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能受损是2型糖尿病重要的发病因素,由B细胞凋亡导致的胰岛细胞功能受损在发病过程中所起的作用日益受到重视[1].有研究显示,噻唑烷二酮类(TZDs)药物在改善胰岛素抵抗的同时,还有效地保护胰岛β细胞功能[2],体外实验显示,TZDs药物能够抑制高血糖诱导的胰岛β细胞凋亡[3].
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仙草提取物的体外抗氧化实验研究
仙草(hsian-tsao,Mesona procumbens Hemsl),又名凉粉草,唇形科仙草属一年生草本植物,因其具有清热、解毒、消暑的功效,民间常用作制备龟苓膏和天然凉茶的主要原料,是我国传统的药食两用植物资源.仙草的水提取液具有较强的抗氧化作用[1],为了探讨其抗氧化作用机制,我们采用体外实验方法研究了仙草提取物对大鼠脂质过氧化和抗氧化酶活性的影响.
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毒理学系毒理学实验设计中存在的问题
毒理学实验可采用整体动物、游离的动物脏器、组织和细胞进行.根据所采用的方法不同,可分为体内实验和体外实验.毒理学还利用限定人体试验和流行病学调查直接研究外源性化学物对人体和人群健康的影响.这些方法各有利弊,应根据不同的实验目的来选择.
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毒理学实验中的质量控制
毒理学实验可分为体内实验(in vivo test)和体外实验(in vitro test),分别采用整体动物、动物器官、组织及细胞等进行.为提高研究效率、保证实验结果的可靠性,在毒理学实验中必须重视实验质量的控制.毒理学实验的质量保证涉及到实验室管理、人员素质、仪器设备、动物、试剂、技术因素、环境等各个方面.另外,在毒理学实验设计中遵循随机、对照、重复三个基本原则是得到高质量实验结果的前提[1].每一种毒理学实验、每一项检测或操作都有各自影响质量的因素和需要注意的事项.本文中仅介绍和毒理学实验质量有关的问题.
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中药复方在体外实验的研究进展
纵观现代医学研究史,体内(in vivo)实验和体外(in vitro)实验是不可分割的两个方面.体外实验的结果终要通过体内实验来证实其价值,由此可见体内实验尤为重要.然而,体外实验以实验条件和因素易于控制、需要时间短,便于进行作用机制的实验设计、避免体内实验的伦理学问题等优点发挥了极为重要的作用.
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华佗消毒液体外实验研究
目的 研究纯中药组成的华佗消毒液杀菌和杀病毒的作用.方法 将不同浓度的华佗消毒液与大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌(金葡萄菌)ATCC6538、枯草杆菌黑色变种芽胞(枯黑芽胞)ATCC9372等混合后进行定量杀灭实验；对HBsAg和HBeAg的灭活采用酶联免疫法并与0.2％过氧乙酸(C2H403)消毒效果进行比较,同时对乙型肝炎病毒聚合酶(HBVDNA-P)亦进行灭活实验和在电子显微镜下观察消毒前后的乙型肝炎病毒颗粒(HBV)的结构与形态的改变.结果 华佗消毒液对大肠杆菌8099作用15分钟,对金葡萄ATCC6538作用30分钟其杀菌率均达99.9％,对枯黑芽胞ATCC9372作用60分钟其杀菌率达99.82％；对HBsAg、HBeAg、HBVDNA-P均具灭活作用电镜下HBV的形态与结构均被破坏.结论 华佗消毒液可广泛用于卫生、保健、家庭、旅游业等消毒用于伤口、感染、皮肤性病等有消毒杀菌作用.
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补肺益肾方对脂多糖刺激细胞分泌细胞因子的影响
目的:从补肺益肾方药对脂多糖(LPS)刺激细胞分泌细胞因子变化的影响,揭示补肺益肾方药治疗COPD分子机理.方法:LPS刺激肺泡上皮细胞A549、气道上皮细胞H292、单核巨噬细胞THP-1,每种细胞均分为正常组(20％正常大鼠血清)、LPS组(20％正常大鼠血清和75 pg·mL-1LPS)、用药组(20％补肺益肾方药大鼠血清和75 pg· mL-1LPS),ELISA法检测细胞因子,应用网络工具分析细胞因子的转录因子.结果:与正常组比较,LPS组THP-1细胞分泌MMP-9、TGF-β增多,分泌TNF-α、PPAP2B减少；A549细胞分泌TIMP增多,分泌IL-3、TGF-β减少；H292细胞分泌IL-8增多.与LPS组比较,用药组THP-1细胞分泌TNF-α、TGF-β、TIMP-1、MMP-9 (P＜0.01)及GM-CSF、SOD、CD36 (P＜0.05)增加,TGF-β分泌减少(P＜0.01)；H292细胞分泌IL-8减少(P＜0.01),TNF-α、TIMP-1、PPAP2B (P＜0.05)和TGF-β(P＜0.05)分泌增加；A549细胞分泌TIMP-1、TNF-α(P＜0.01)和PPAP2B(P＜0.05)减少,MMP-9、IL1B增加(P＜0.01).与LPS组比较,用药组有改变细胞因子的转录因子:THP-1细胞的AP1、NFKB1、STAT3、SMAD3和PPARG,A549细胞的STAT3和PPARG满足激活条件.结论:LPS对单核巨噬细胞THP-1分泌细胞因子影响大,补肺益肾含药血清对LPS引起的细胞因子分泌变化有一定调节作用.
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新药金龙蛇颗粒体外抗肿瘤作用研究
目的 观察新药金龙蛇颗粒的体外抗肿瘤作用.方法 采用MTT比色法和软琼脂克隆形成实验,观察金龙蛇颗粒体外对人胃癌细胞MKN-45、人肺癌细胞SPCA-1的作用.结果 MTT法结果表明,对MKN-45细胞金龙蛇低、中、高剂量组24 h抑制率为30.69%、32.67%、43.56%,48 h为36.99%、39.04%、43.84%,对SPCA-1细胞24 h抑制率则为23.33%、24.44%、37.78%,48 h为28.46%、33.33%、46.34%,皆与空白组存在统计学差异,并且体现了剂量依赖效应,抑制率随剂量增加而增高.软琼脂克隆形成实验结果显示,对MKN-45细胞金龙蛇低、中、高剂量组100个细胞克隆形成率为25.67%、22.17%、19.83%,200个细胞为22.09%、19.75%、17.67%,对SPCA-1细胞100个细胞克隆形成率为33.50%、28.17%、24.17%,200个细胞为24.59%、20.25%、18.25%,同样与空白组存在差异,并体现出了剂量效应.结论 体外实验观察新药金龙蛇颗粒具有一定的抗肿瘤作用.
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外感清热解毒方抗呼吸道病毒活性的体外实验研究
目的:研究外感清热解毒方体外抗呼吸道病毒的活性.方法:体外培养MDCK、HEL和A549细胞,分别接种流感病毒H1N1、腺病毒AV1和呼吸道合胞病毒RSV1,给予外感清热方进行干预,以病毒唑作为对照.采用MTT法检测药物对细胞的毒性和对病毒的治疗指数,采用红细胞凝集实验和观察细胞病变(CPE)进行分析,研究该方抗呼吸道病毒活性.结果:外感清热方对H1N1的IC 50为0.028 mg/mL,TI为2.07.预防给药在0.01 mg/mL时红细胞凝集实验为阴性,表明该方能够阻断H1N1病毒入侵,有预防作用.治疗给药在0.01 mg/mL时红细胞凝集实验为阴性,表明该方对病毒有治疗作用.直接杀伤实验该方能够降低病毒滴度1个梯度.在0.005 mg/m:时抗AV1红细胞凝集实验为阴性,表明该方能够抑制AV1.镜下观察CPE表明0.01 mg/mL以上浓度的中药能够抑制RSV1.结论:外感清热解毒方具有较好的抗H1N1、AV1和RSV1的活性,具有高效低毒的特点.
