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优化手术策略下两镜联合胆总管探查取石术在胆总管结石中48例的应用
两镜联合一步法治疗胆总管结石具有操作一次性、低花费的优点,同时缩短住院天数[1]。经验丰富的医师在探查过程中可取出90%患者的胆管结石[2]。2012年1月至2014年12月,本院为48例胆囊结石合并胆总管结石患者采用优化手术策略下腹腔镜联合胆道镜胆总管切开T 管引流手术,现报告如下。
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两种二重染色法进行胎仔骨和软骨畸形检查的对比研究
胎仔骨骼畸形检查是基础毒理学中评价化学物是否具有发育毒性的重要内容.而刚出生的胎仔骨骼只有部分被骨化,另一部分骨骼仅以软骨的形式存在.传统的毒理学骨骼畸形检查方法只能使硬骨组织着色,因此仅能检查硬骨组织畸形的变化,而不能观察出软骨组织是否有畸变[1].因此不能全面的衡量化学物质是否具有致骨骼畸形的作用.本研究采用了两种二重染色法对胎仔进行了骨骼及软骨染色检查,比较了两种方法染色的效果及获得标本的质地,为今后进行胎仔骨骼畸形检查时方法的选择提供实验依据.
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血清唾液酸测定的临床意义与参考值调查
血清唾液酸(SA)水平的升高与一些肿瘤特别是肺癌之间的关系密切.近年来又有报道,SA可能是一个新的心血管疾病潜在的危险因素[1].随着检测SA的快速一步法的问世,使其在临床的应用更为方便.为探讨SA的临床价值,对油田职工846人做了SA检查,从中筛选出健康者183人,得出油田区域内的SA参考值.另对我院心内科冠心病(CHD)住院患者76例做了SA检测,探讨CHD患者血清SA是否升高,已证实SA在动脉粥样硬化的发生发展过程中具有重要作用.现将结果报告如下.
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双重荧光定量一步RT-PCR法同时检测GⅠ、GⅡ型诺如病毒
建立一种可同时检测诺如病毒GⅠ和GⅡ型的双重荧光定量一步法RT-PCR方法.应用针对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的特异性引物以及Taqman探针,优化反应体系及条件,建立双重荧光定量一步法RT-PCR方法.对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并对粪便标本进行检测,以传统RT-PCR方法作为参考评价此方法.结果表明,该方法特异性强,与肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒均无交叉反应,对GⅠ和GⅡ型诺如病毒核酸的低检出限分别可达103拷贝/μL,具有很好的重复性.对100份粪便标本进行检测,诺如病毒的阳性率为31%,其中GⅠ型为3%,GⅡ型为28%,而传统RT-PCR法的检出率为22%.本文建立的双重荧光定量一步RT-PCR法能同时对GⅠ和GⅡ型诺如病毒进行快速检测,其灵敏度高、特异性好,可应用于胃肠炎病人中检测诺如病毒.
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一种新型沙眼衣原体核酸检测试剂的临床应用探讨
目的 通过对比实验,对新型沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂(以下简称“一步法试剂”)的临床使用进行评估.方法 用1例CT强阳性样本进行梯度稀释,用新型沙眼衣原体免核酸提取的荧光定量PCR检测试剂和市场上为稳定的煮沸法试剂分别进行检测,考评其精确度与灵敏度.用一步法试剂与煮沸法试剂对345例临床收集的样本进行CT DNA定性检测并对比其结果.结果 强阳性样本梯度稀释实验显示,一步法试剂的检测结果重复性好,灵敏度高;一步法试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比为98.78%,阴性一致性百分比为99.24%,总一致性百分比为99.13%.对此结果进行Kappa检验一致性分析,结果 Kappa值=0.976,表明一步法试剂与煮沸法试剂检测的结果具有很好的一致性.结论 一步法试剂与已上市的煮沸法试剂检测结果具有很好的一致性,并且操作简单、结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值.
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胃液潜血检验与临床
胃液潜血检验是临床早期发现上消化道出血及肿瘤等的一种常见筛查方法, 本文采用"速而准"一步法和邻联甲苯胺法对不同颜色、性状与pH值和不同疾病病人的胃液作了潜血试验,现报道如下:
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Max VisionTM即用型快速免疫组化一步法染色的病理应用
在临床实践中通过与SABC法、SP法和EnVision染色对比,我们发现,MaxVisionTM即用犁快速免疫组化一步法操作更简便,更快捷,并可达到满意的效果,是一种较为理想的免疫组化染色方法.
关键词: MaxVisionTM 一步法 免疫组化 -
应用双重聚合酶链反应检测乙型、丙型肝炎病毒
常规聚合酶链反应(PCR)方法对患者HBV和HCV需要分别检测,因而操作繁琐,费时费力,且增加了污染的机会,为此,我们建立了双重PCR技术,实现一步法同时进行HBV和HCV的检测。 选取肝病患者血清标本115例,20例正常对照标本采自HBsAg阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶K消化,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,将提取的DNA和RNA复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中,并加入2U RNA酶抑制剂Rnasin。PCR反应在核酸提取管中进行,总体积50μl,反应条件为10 mmol/L Tris·Cl(pH8.3),50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.5μmol/L HBV和HCV引物,0.2 mmol/LdNITP,AMVRT逆转录酶2U,Tag DNA聚合酶2U,RNA酶抑制剂Rnasin 10 U,混匀。
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细菌膜蛋白质组成分提取方法的建立及优化
蛋白质组学研究技术体系的关键环节是建立以高效蛋白质提取为基础的双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE),因此,如何提高样品蛋白质的提取量和增多样品蛋白质的溶解度是获得高分辨率、高灵敏度和高重复性双向电泳凝胶蛋白质图谱的前提条件.常规主要运用一步法和三步法.目前细菌膜蛋白质的提取多采用一步法,此方法的缺陷严重影响了蛋白质的第一向等电聚集、第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳及质谱分析的结果.
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残余卵清蛋白ELISA定量检测方法建立及初步验证
卵清蛋白(ovalbumin,OVA)作为异源物质,接种人体后易引起过敏副反应.因此残余OVA含量检测是生物制品尤其是以鸡胚为培养基质的流感疫苗生产过程中必须监控的指标之一[1].本研究在建立定量检测OVA双抗体夹心ELISA两步法后,对此方法进行优化,建立双抗体夹心ELISA一步法.通过与德国Seramun试剂盒对比,考察此检测方法的适用性.
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HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验
1995年,美国Simons等和Linnen等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的基因组,并建立了检测血清GBV-C/HGV RNA的逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)方法.但是,该检测方法的灵敏度存在着较大差异.本实验使用A~E共5套PCR引物,基中A、B、D为自行设计的HGV 5′端非编码区引物,目的产物长度分别为368bp, 158bp及220bp;C引物为参照文献设计的核心区引物,目的产物为302bp;E引物为李倬副研究员设计的NS3区引物,目的产物长度为591bp.采用改良的异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取HGV RNA,套式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR).
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中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法 TaqMan 荧光定量RT-PCR 检测方法的建立
流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是黄病毒科黄病毒属的单股正链 RNA 病毒,三带喙库蚊是其主要的传播媒介,感染人体后可引起流行性乙型脑炎(乙脑)。人群对本病普遍易感,15岁以下儿童发病率较高。大多数人感染后不会出现任何症状或只会引起一些轻微的症状;若治疗不及时,少部分感染者会发展为急性脑炎,病死率为20%~30%,30%~50%的康复者会留下严重的神经系统损伤后遗症,以儿童多见[1]。本病主要流行于亚洲地区,中国是乙脑的主要流行区域,每年都有病例报道。2013年,乙脑在山东省暴发流行,造成11人死亡。因此建立一种快速、准确的 JEV 特异检测方法对该病的早发现、早诊断、早治疗仍具有重要意义。 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 具有敏感性高、特异性强、快速定量检测等优点。因此,本研究针对中国大陆地区已上传的91株乙脑全基因组序列进行比对分析,选取保守的区域设计引物及探针,利用荧光定量技术建立乙型脑炎病毒的一步法 TaqMan qRT-PCR 检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。
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粪便潜血单克隆抗体一步法试验
粪便潜血试验是化道出血的重要筛选指标,其试验方法主要有化学方法和免疫学方法两种.近年来为解决潜血试验的特异性和联苯胺及邻-联苯胺的强致癌性,已有应用免疫学方法的趋势.我们对免疫学方法中的单克隆抗体(单抗)一步法进行了临床和方法学的评价试验,现报告如下.
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乙肝表面抗原假阴性结果的分析
乙肝标志物(HBV-M)五项指标[乙肝表面抗原(HbsAg)、乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝e抗原(HbeAg)、乙肝e抗体(抗-Hbe)、乙肝核心抗体(抗-HBc)]是临床常用的检测项目,我们在实际工作中用酶联免疫吸附(ELISA)一步法发现HBeAg及抗-HBc阳性血清而HBsAg呈阴性反应;用传统的反向间接血凝二步法(R-PHA)检测呈不同滴度的阳性反应,对此我们分析了2004年~2005年1 015份血清,现报告如下.
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检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析
卫生部下发的<血站管理办法(暂行)>中规定,对献血者血液乙型肝炎病毒(HBV)检测的质量标准是"HBV表面抗原(HBsAg)酶免疫吸附法(ELISA):阴性",但未要求用一步法还是二步法检测.目前,国内检测HBsAg绝大多数采用ELISA中的双抗体夹心双位点一步法.用该方法检测HBsAg,当标本中的HBsAg浓度过高时,会因钩状效应(Hook)现象出现假阴性,而造成漏检,增加输血传播HBV的风险度,严重威胁输血安全.HBVe抗原(HBeAg)和HBV核心抗体(HBcAb)两项阳性时,大多数HBsAg都为阳性,但HBsAg阴性也可能存在漏检问题.为此,我们将对HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后,再用一步法和二步法进行分别检测及比较,以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床应用意义及价值.
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甘氨鹅脱氧胆酸钠致阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中bcl-2 mRNA的表达意义
目的:探讨bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的调控作用.方法:健康♂Wistar大鼠,进腹,游离出胆总管,于肝门部结扎胆总管并切断,远端再予以结扎.进腹后不结扎切断胆总管作为阴性对照.结扎后3,7,14,21 d处死大鼠,每组8只.采用胶原酶原位肝灌注法获取体外培养正常大鼠及阻塞性黄疸大鼠肝细胞.分别收取正常大鼠及胆总管结扎大鼠肝细胞1×109/L-1,用Trizol试剂盒一步法提取大鼠肝细胞总RNA,行RT-PCR扩增;用PCR扩增bcl-2和对照β-actin基因片段;分离的正常大鼠及胆总管结扎14 d大鼠的肝细胞行原代培养,培养板内置小飞片,使用100μamd.L-1甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法分析肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测.结果:体外培养正常大鼠及结扎3 d大鼠肝细胞bel-2 mRNA的表达为阴性,仅见β-actin条带;胆总管结扎大鼠体外培养肝细胞在结扎后7 d即可见肝细胞内bel-2 mRNA的表达,其吸光度A值为O.13±0.15;结扎后14、2l d也可检测其表达,bcl-2 mRNA吸光度在结扎14 d达高峰,为O.56±0.21,且与结扎7、2l d相比,两者差异有显著性(P<0.05);100tanol@L-1的G,CDC作用正常大鼠肝细胞后,凋亡明显增加,凋亡率为34.9±2.9%;胆总管结扎14d大鼠的肝细胞凋亡比率为15.6±2.1%,100μanol@L-1的GCDC作用胆总管结扎14 d大鼠肝细胞后,凋亡率无明显增加,为17.3±1.1%,两者差异无显著性(P>0.05);GCDC作用的两组大鼠肝细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05).结论:阻塞性黄疸大鼠肝细胞有bcl-2基因的表达,正常大鼠肝细胞则无表达;在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达bcl-2来抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用.
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诊断妊娠期糖尿病或许仍需两步法
今年上半年,美国国立健康研究院(NIH)召集的一个独立小组仍然推荐使用两步法诊断妊娠期糖尿病(GDM).这个包含15人的独立小组认为,尽管在美国广泛使用的一步法筛查GDM有许多优点,但在取代目前的标准筛查策略(两步法)之前仍需要更多的研究.独立小组主席Peter VanDorsten博士(美国南卡罗来纳医科大学)指出,一步法虽然有潜在的优势,但仍有许多应该探讨的地方,例如一步法策略使得GDM诊断率至少增加了2~3倍.因此,对于两种诊断方式的选择及优缺点仍需要更多的评估.
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一步法经皮球囊扩张术治疗二尖瓣狭窄及瓣膜分离术后再狭窄
目的:旨在研究一步法经皮球囊扩张术(PBMV)治疗风湿性心脏病二尖瓣狭窄和瓣膜分离术后二尖瓣再狭窄15年经验及长期随访. 方法:摒弃传统的三步法,采用一步法经皮经房间隔穿刺球囊扩张治疗二尖瓣狭窄. 结果:492例二尖瓣球囊扩张术成功率98.2%(483/492),术后二尖瓣口面积明显增加从(0.89±0.18) cm2至(2.21±0.41) cm2.211例随访8个月至9年2个月,二尖瓣再狭窄率为11.14%(24/211),病死率为(4.2/211),二尖瓣再置换术为5.2%(11/211).46例二尖瓣闭式分离术后再狭窄.球囊扩张治疗后临床症状明显改善,二尖瓣外科术后再狭窄患者瓣口面积 (MVA)由(1.03±0.28)cm2增至(1.94±0.27)cm2(P<0.001),其中28例随访(4.3±2.1)年,MVA为(1.81±0.27)cm2(与术前比较,P<0.001,与术后即刻比较,P>0.05),发生再狭窄3例,已成功第二次PBMV. 结论:一步法PBMV治疗严重二尖瓣狭窄成功率高,并发症低;对年龄≥50岁伴轻度二尖瓣(和)主动脉瓣反流者,二尖瓣闭式分离术后再狭窄者,近远期疗效显著,具有创伤小,安全、有效可重复性等特点.
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代谢综合征患者大网膜脂肪组织中胰岛素受体底物-1和葡萄糖转运蛋白-4m RNA表达的研究
代谢综合征(MS)的病理生理基础是胰岛素抵抗,其发生机制十分复杂,迄今尚未完全阐明.本研究采用一步法半定量逆转录(RT)-PCR技术,测定MS患者大网膜脂肪组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)和葡萄糖转运蛋白-4(Glut4)mRNA的表达水平,探讨其在MS发病中的作用.
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复合皮移植在大面积烧伤晚期整形中的应用
大面积烧伤病人后期的整形治疗常因自体健康皮肤的皮源匮乏给治疗带来一定的困难,难以获得良好的治疗效果,脱细胞真皮的出现为解决这一难题提供了一种新的临床治疗方法.我科自2003年3月~2006年9月应用脱细胞异体真皮与自体刃厚皮组成复合皮(composite skin,CS)采用一步法移植对大面积烧伤功能部位进行整形治疗取得了满意的效果.