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纳米二氧化硅致人永生化表皮细胞膜蛋白质组的影响
目的 采用蛋白质组学技术探讨15 nm二氧化硅致体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT)膜蛋白质表达的变化.方法 分别以2.5、5.0和10.0 mg/L的15nm二氧化硅溶液处理HaCaT细胞24 h,以ddH2O为溶剂对照.应用CCK-8方法检测细胞增殖情况.运用亚细胞蛋白质组提取试剂盒对10.0 mg/L的15 nm二氧化硅溶液处理24 h的HaCaT细胞和正常对照组细胞进行膜蛋白提取,采用差异荧光双向凝胶电泳(2D-DIGE)分析和基质辅助激光解析飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱鉴定.对差异蛋白质进行GO(gene oncology)功能聚类及跨膜结构域预测分析,采用Western blot免疫印迹验证差异蛋白的表达.结果 细胞增殖实验显示,15 nm二氧化硅可以引起HaCaT细胞整体增殖水平下降,呈剂量依赖关系;与正常细胞相比,HaCaT细胞经15 nm二氧化硅以2.5、5.0和10.0 mg/L处理24 h后,活力水平分别为(91.3%±6.1%)、(81.7%±7.0%)和(74.0%±2.6%),差异有统计学意义(P<0.05).质谱鉴定了10个差异表达蛋白,其中7个差异蛋白具有1个以上的跨膜结构域,GO功能聚类表明这些差异蛋白主要涉及结合活性和结构分子活性.Western blot免疫印迹结果表明G蛋白偶联受体179和L-肌动蛋白表达变化趋势与蛋白质组学分析结果一致.结论 15 nm二氧化硅能够引起HaCaT细胞增殖水平降低,并且导致膜蛋白表达水平的下降.
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细菌膜蛋白质组成分提取方法的建立及优化
蛋白质组学研究技术体系的关键环节是建立以高效蛋白质提取为基础的双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE),因此,如何提高样品蛋白质的提取量和增多样品蛋白质的溶解度是获得高分辨率、高灵敏度和高重复性双向电泳凝胶蛋白质图谱的前提条件.常规主要运用一步法和三步法.目前细菌膜蛋白质的提取多采用一步法,此方法的缺陷严重影响了蛋白质的第一向等电聚集、第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳及质谱分析的结果.
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冷冻治疗肺部肿瘤的手术配合
液氮冷冻是利用液氮从液相变成气相时大量吸热效应,达到迅速制冷,起到对组织的杀伤作用.液氮的沸点为-196.6℃,这种超低温可因脱水,水结晶后增加细胞内电解质浓度,细胞膜破裂,细胞膜蛋白质变性,血液阻滞等而使细胞破坏.冷冻技术用于治疗肺部肿瘤更有其独特的特点,可以减少扩散,产生免疫作用,大限度地切除病灶,同时大限度地保留正常组织.
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水通道蛋白的新的生理功能
水是生命的必需成分,目前发现,水分子通过细胞膜有两种方式,一种是通过脂质双分子层的弥散作用,另一种是通过细胞膜蛋白质的选择性转运作用,这种转运作用由水通道蛋白(AQP)介导.AQP是一组细胞膜转运蛋白,在人体中已发现共有13种AQP[1],分别为AQP0~AQP12.随着AQP的分布、功能以及与疾病的关系的研究不断深入,其在生理和病理情况下的作用正逐步被大家认识.现简要综述近年关于AQP的研究进展.
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生物膜蛋白质组学研究对阐述龋病机制的意义
龋病是一种危害人类口腔健康的主要疾病,其危害不分年龄、性别、人种、民族和职业,被世界卫生组织列为三大严重影响人类健康的疾病之一,对龋病发病机制的研究一直是口腔医学界关注的焦点.现代龋病学的研究认为,牙菌斑(dental plaque)由黏性基质和嵌入其中的细菌构成,具有典型的生物膜(biofilm)结构,是有序的微生态系统.
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现代医学200词192.药物载体
药物载体(drug transporters)是一种重要的膜蛋白质,能够决定摄人体内的药物动力学(吸收、分布、排泄).药物载体的作用涵盖营养物质的摄取、异物的解毒等,多种载体分担着药物载体的功能,分别制约着表达脏器及细胞膜局部的药物动态变化.近年来,经克隆得到了多种药物载体基因,其作用机制逐渐从分子水平解析.
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ATP对人不死化成纤维细胞DNA的合成、膜蛋白表达及离子通道的影响
目的:探讨ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖过程中对其DNA合成、细胞膜蛋白的表达以及离子通道的影响.方法:将正常人TIG-7和OUMS-36细胞株,不死化人KMST-6和SUSM-1细胞株在不同浓度的ATP、ADP、AMP条件下分别进行24和96h的常规细胞培养,观察存活细胞数目、DNA的合成、[32P]ATP标记膜蛋白的表达以及不死化KZMST-6细胞分别在无钙离子培养基和应用Ca2+和K+通道拮抗剂时,细胞增殖率的改变.结果:培养96h后,0.4 mmol/L ATP对不死化细胞KMST-6的抑制率为77%,且DNA合成明显地被抑制,而正常OUMS-36细胞抑制率为41%,且DNA合成无明显改变.在1 mmol/LATP时,多数KMST-6细胞发生死亡,而正常OUMS-36细胞的增殖无明显影响.当ADP、AMP和腺苷或磷酸处理的细胞,仅有ADP处理的不死化细胞存活数目减少(P<0.01).与正常细胞比较,不死化细胞30,31,33和40kD的[32P]-ATP标记膜蛋白呈高表达.0.4 mmol/L ATP与KMST-6细胞共培养时分别加入Ca2+以及K+通道拮抗剂,这些药物在某种程度上可以降低ATP的增殖抑制作用,当ATP处理的细胞液中无钙离子时,它们的增殖不受影响.结论:ATP对不死化人成纤维细胞的DNA合成有明显的抑制作用;并且使磷酸化细胞膜蛋白表达增高;其过程中有钙通道和钾通道的参与.
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严重急性呼吸综合征冠状病毒的分子生物学研究进展
引起严重急性呼吸综合征的冠状病毒是一种新型正股单链RNA病毒,长度约30kb.不同的流行毒株间,只存在点突变.病毒基因组中,存在着调控病毒转录、包装的关键序列.病毒编码的膜蛋白质(S、M、E)以及病毒内部的N蛋白和复制酶、蛋白酶,对于病毒进入宿主、复制、包装、病理等过程起着重要作用,因而成为重点研究对象.本文综述了该病毒分子生物学、生物信息学研究的进展.
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恶性疟原虫表面抗原及其与致病的关系
恶性疟原虫在感染红细胞后,会将一些蛋白质运输到红细胞表面,这些蛋白质与红细胞本身的膜蛋白质相互作用,造成宿主细胞在形态学、生理学和功能上的本质变化,而由这些变化所导致的病理特征,正是每年150万~300万恶性疟患者死亡的主要原因之一.随着基因组学和生物化学的发展,在过去的十几年里,对于这些表面抗原分子的了解越来越深入.该文就恶性疟原虫起到黏附和抗原变异作用的分子进行了概述.
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046 糖尿病肠病患者血液流变性改变及抗凝活血化瘀对糖尿病的临床意义
目的: 研究糖尿病肠病患者血液流变性改变及抗凝活血化瘀对糖尿病的临床意义. 方法: 临床确诊糖尿病肠病组(DE组), 共30例. 糖尿病组(DM), 共32例. 对照组为健康人组(NS), 共30例. 观察对象在取血前2周停用消炎药、阿司匹林等对血液系统有影响之药物. 血液流变性检测, 在25 ℃温度下用NXE-1型锥板粘度计测高切变率(230.4 s-1)及低切变率下(5.74 s-1)全血粘度; 用电子计算机自动分析毛细血管粘度计测血浆粘度, 血沉测定采用温化法, 甘油三酯及总胆固醇测定采用酶法. 白蛋白测定采用血浆分离法, 糖化血红蛋白指数测定采用酯化硝基唑兰比色法. 结果: DE、 DM组低切变率下, 全血粘度、红细胞聚集指数、血沉等明显异常, 显示高粘、高聚; 血中白蛋白减少时, 显示血红细胞间交联的能力减弱; 糖化血红蛋白指数增高间接反映了红细胞膜蛋白质非酶糖基化增加, 后者可使红细胞膜负电荷减少, 又使红细胞间的电斥力减弱. 蛋白质非酶基化过程中可产生自由基, 使红细胞膜蛋白质变性而粘度增加, 即红细胞膜表面产生粘着性物质. 结论: 糖尿病肠病患者存在高粘血症并有高血小板聚集、微血管病变, 因而采用抗凝及活血化瘀治疗对DE的治疗是有积极意义的.
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金葡菌万古霉素耐药株相关蛋白的减少与耐药关系的初步研究
目的研究金黄色葡萄球菌膜蛋白减少或缺失与金葡菌对万古霉素耐药之间的关系.方法应用琼脂平板稀释法及MRSA特异性基因mecA的扩增鉴定MRSA,诱导产生万古霉素耐药株(Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus,VRSA).以超声破碎法提取外膜蛋白(OMP),经SDS-PAGE分析OMP的成分,分光光度法扫描仪测定相关膜蛋白的相对含量.结果 MRSA和金葡菌ATCC25923膜蛋白质图谱基本相似,与VRSA相比,发现凝胶上分子量为45KD、44KD、30KD、20KD、16KD、14KD的条带较VRSA清晰,分子量为45KD和14KD的膜蛋白的相对含量较VRSA多.结论 VRSA14KD及45KD膜蛋白的相对含量较MRSA低.上述结果提示VRSA耐药的原因之一可能与包括45KD和14KD在内的一些膜蛋白质减少有关.
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基底膜蛋白质与糖尿病的微血管病变
基底膜主要由胶原蛋白和非胶原蛋白组成,Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ,CIV)是基底膜的核心胶原成分,层粘连蛋白(Laminin,LN)是广泛分布于基底膜的透明层,二者结合形成基底膜的骨架,是基底膜主要的组成蛋白.近年来的研究发现,基底膜蛋白与糖尿病(DM)微血管病变关系密切.
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石英粉尘与DNA的氧化损伤
石英粉尘广泛存在于采矿、掘进、玻璃制造、陶瓷工业等生产环境当中,它对人体的各种损害作用倍受广泛关注.研究表明,石英粉尘通过相关的自由基(free radicals,FR)的介导,可对膜蛋白质、膜脂质、糖类、DNA分子等产生广泛的损伤作用,引起以矽肺、肺癌为主的一系列临床疾病.本文就石英粉尘的DNA损伤作用作一概述.