首页 > 文献资料
-
纳米二氧化硅致人永生化表皮细胞膜蛋白质组的影响
目的 采用蛋白质组学技术探讨15 nm二氧化硅致体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT)膜蛋白质表达的变化.方法 分别以2.5、5.0和10.0 mg/L的15nm二氧化硅溶液处理HaCaT细胞24 h,以ddH2O为溶剂对照.应用CCK-8方法检测细胞增殖情况.运用亚细胞蛋白质组提取试剂盒对10.0 mg/L的15 nm二氧化硅溶液处理24 h的HaCaT细胞和正常对照组细胞进行膜蛋白提取,采用差异荧光双向凝胶电泳(2D-DIGE)分析和基质辅助激光解析飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱鉴定.对差异蛋白质进行GO(gene oncology)功能聚类及跨膜结构域预测分析,采用Western blot免疫印迹验证差异蛋白的表达.结果 细胞增殖实验显示,15 nm二氧化硅可以引起HaCaT细胞整体增殖水平下降,呈剂量依赖关系;与正常细胞相比,HaCaT细胞经15 nm二氧化硅以2.5、5.0和10.0 mg/L处理24 h后,活力水平分别为(91.3％±6.1％)、(81.7％±7.0％)和(74.0％±2.6％),差异有统计学意义(P＜0.05).质谱鉴定了10个差异表达蛋白,其中7个差异蛋白具有1个以上的跨膜结构域,GO功能聚类表明这些差异蛋白主要涉及结合活性和结构分子活性.Western blot免疫印迹结果表明G蛋白偶联受体179和L-肌动蛋白表达变化趋势与蛋白质组学分析结果一致.结论 15 nm二氧化硅能够引起HaCaT细胞增殖水平降低,并且导致膜蛋白表达水平的下降.
-
大黄酚及P38阻断剂对紫外线诱导人永生化表皮细胞光老化的影响及机制研究
目的 研究大黄酚及P38阻断剂SB203580抑制中波紫外线诱导的人永生化表皮细胞(HaCaT immortalizedhuman epidermal cells,HaCaT)光老化的作用及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度的大黄酚及SB203580对HaCaT细胞增殖的影响;将细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、大黄酚组、P38阻断剂组.培养24 h后,大黄酚组及P38阻断剂组分别加入10-6 mol/L大黄酚及10-7 mol/L SB203580溶液.继续培养24 h,除空白组外,其他各组细胞于紫外灯下照射,照射强度0.61 mW/cm2,照射时间7 min,照射距离10 cm.继续培养24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性;Western Blot检测各组细胞中P38、磷酸化P38(P-P38)、TNF-α 及IL-6蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组HaCaT细胞增殖率降低(P<0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组HaCaT细胞增殖率升高(P<0.01);与模型组比较,大黄酚组及P38阻断剂组细胞P-P38[(0.419±0.029)、(0.398±0.015)比(0.497±0.051)]、TNF-α[(0.435±0.025)、(0.411±0.021)比(0.509±0.040)]及IL-6[(0.457±0.027)、(0.432±0.018)比(0.478±0.036)]蛋白表达降低(P<0.01).结论 大黄酚及SB203580可抑制紫外线诱导的HaCaT细胞光老化,其作用机制可能与抑制P38MAPK通路及炎症因子表达有关.
关键词： 大黄酚 p38有丝分裂原激活蛋白激酶类 人永生化表皮细胞 光老化 -
白花蛇舌草提取物对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡和TNF-α诱导的炎症因子影响
目的 观察白花蛇舌草提取物(Hedyotis diffusa extract,HDE)对HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症因子的影响,并探究可能的分子机理.方法 实验分为3组:空白组不加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和HDE处理,对照组只加EGF而不加HDE处理,白花蛇舌草组分别用25、50、100 mg/mL HDE和EGF共培养.CCK-8法检测HaCaT细胞增殖情况,流式细胞仪检测HaCaT细胞生长周期和凋亡率,Western blot法测定Ki67、Bcl-xL、clAP1、procaspase-3、cleaved caspase-3的蛋白表达,ELISA法检测HaCaT细胞培养基上清液中IL-6、IL-8、IL-10的浓度,Western blot检测NF-κB p65亚基磷酸化(p-p65)水平.结果 与空白组比较,对照组HaCaT细胞吸光度及Ki67蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),p-p65、IL-6、IL-8水平升高(P ＜0.05,P＜0.01),IL-10水平降低(P＜0.01);与对照组比较,白花舌草组25、50、100 mg/mL浓度时HaCaT细胞吸光度及Ki67蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01),p-p65、IL-6、IL-8水平降低,IL-10水平升高(P ＜0.05,P＜0.01);同时白花蛇舌草组各浓度组凋亡率较对照组增加(P ＜0.05,P＜0.01).对照组处于G1期的细胞数量百分比为52.85％,白花蛇舌草组25、50、100 mg/mL浓度时分别是58.51％、73.12％和79.95％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与白花蛇舌草组25 mg/mL比较,白花蛇舌草组50和100 mg/mL处于G1期的细胞数量百分比及凋亡率升高(P＜0.01),且白花蛇舌草组100 mg/mL时处于G1期的细胞数量百分比及凋亡率高于白花蛇舌草组50 mg/mL(P＜0.05).与对照组比较,白花蛇舌草组100 mg/mL时Bcl-xL和clAP1蛋白表达降低(P ＜0.01,);caspase-3总量变化差异无统计学意义(P＞0.05),cleaved caspase-3表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HDE可能通过将HaCaT细胞阻滞在G1期而抑制其增殖,通过抑制Bcl-xL和clAP1蛋白表达、提高cleaved caspase-3蛋白表达而促进HaCaT细胞凋亡,通过调控NF-κB而抑制HaCaT细胞炎症反应.
-
纳米二氧化硅致Nrf-2基因缺陷人永生化表皮细胞氧化损伤的研究
[目的]探讨纳米二氧化硅(nano-SiO2)致核因子E2相关因子2(Nrf-2)基因缺陷型人永生化表皮细胞的氧化应激损伤效应.[方法]采用RNA干扰技术构建人永生化表皮细胞(HaCaT)Nrf-2基因缺陷细胞模型,以终质量浓度(后称浓度)为2.5、5.0、10.0mg/L的nano-SiO2(15 nm粒径)分别染毒HaCaT细胞和Nrf-2基因缺陷细胞24h,检测细胞内活性氧(ROS)、8-羟化脱氧鸟苷(8-oHdG)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(r-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等氧化应激指标,并对细胞总蛋白和核蛋白中Nrf-2蛋白的表达水平进行分析.[结果]5.0、10.0 mg/L nano-SiO2可引起HaCaT细胞的活力明显降低(P＜0.05),而2.5 mg/L nano-SiO2开始即可引起Nrf-2基因缺陷细胞活力呈剂量依赖性降低(r=-0.914,P＜0.05),Nrf-2基因缺陷细胞的活力均明显低于同浓度组的HaCaT细胞(P＜0.05).各浓度组细胞内ROS、8-oHdG和MDA水平均呈剂量依赖性增高,而T-SOD和GSH-Px的含量则呈剂量依赖性降低;与同浓度组HaCaT细胞相比,Nrf-2基因缺陷细胞中相关指标的变异程度更大,差异有统计学意义(P＜0.05).正常HaCaT细胞中,低剂量组总Nrf-2蛋白和低、中剂量组核Nrf-2蛋白的表达水平增高(P＜0.05);而随着nano-SiO2暴露浓度的进一步增高,两种蛋白的表达水平又呈降低的趋势.与HaCaT细胞的阴性对照比较,Nrf-2基因缺陷细胞中总Nrf-2蛋白表达水平下降,核Nrf-2蛋白表达水平未见差异.[结论] 5.0mg/L nano-SiO2可体外诱导HaCaT细胞发生氧化应激性损伤,Nrf-2基因缺陷可通过改变细胞的抗氧化防御能力,增加HaCaT细胞对nano-SiO2的敏感性.
关键词： 核因子E2相关因子2 纳米二氧化硅 人永生化表皮细胞 氧化应激 -
马钱子组分对人HaCaT细胞毒性作用的比较
目的 研究马钱子生物碱及其不同组分对人永生化表皮细胞系HaCaT细胞的毒性作用.方法 体外培养HaCaT细胞,加入相同质量浓度的马钱子碱、士的宁、马钱子碱与士的宁的混合物,和马钱子总生物碱作用于细胞24 h后,采用MTT比色法测定不同生物碱的细胞增殖抑制作用;流式细胞仪检测对HaCaT细胞的凋亡,比较马钱子生物碱不同组分对HaCaT细胞的毒性作用.结果 士的宁对HaCaT细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子碱;马钱子碱和士的宁混合物组对HaCaT细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子总生物碱.结论 马钱子生物碱组分均对HaCaT细胞存在细胞毒作用,呈剂量依赖关系,但马钱子碱的细胞毒性明显小于士的宁.
-
亚砷酸钠诱导人永生化表皮细胞恶性转化模型的建立
目的：探讨砷诱发永生化人表皮细胞（HaCaT）的恶性转化作用。方法（1）长期低浓度亚砷酸钠（NaAsO2）处理HaCaT，观察细胞生长性状变化；（2）流式细胞术检测细胞周期；（3）注射处理后的HaCaT至裸鼠皮下致瘤试验。结果（1）0．05 mg／L NaAsO2处理的HaCaT传代培养25代以后，细胞形态和生长方式均发生明显改变，增殖能力旺盛，倍增时间明显缩短；（2）0．05 mg／L NaAsO2处理的HaCaT细胞周期发生改变，处于S期的细胞比例增加；（3）0．05 mg／L NaAsO2所致恶性转化的HaCaT能在裸鼠皮下形成肿瘤；肿瘤组织病理切片显示为低分化鳞癌。结论长期暴露于低浓度NaAsO2可引起HaCaT发生恶性转化，且具有致瘤性。
