首页 > 文献资料
-
p66Shc对亚砷酸钠诱导心肌细胞氧化应激的影响
目的 探讨p66Shc在亚砷酸钠介导的心肌细胞氧化应激中的作用. 方法 利用亚砷酸钠诱导的H9C2心肌细胞氧化应激模型,分别用CCK-8比色法检测细胞活力;双氯荧光素探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western Blot法检测p66Shc、磷酸化p66Shc的表达变化;免疫荧光共聚焦检测p66Shc的亚细胞定位. 结果 与对照组相比,5 μM亚砷酸钠处理组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞内ROS水平显著升高(P<0.001);砷引起了p66Shc表达量增加,而且磷酸化p66Shc与p66Shc蛋白总量的比值也显著升高(P<0.05),p66Shc在砷刺激下从细胞浆向线粒体转位.过表达野生型p66Shc质粒增加砷介导的心肌细胞内ROS水平,而过表达突变型p66Shc质粒和敲低p66Shc的表达都降低砷处理组细胞内ROS水平. 结论 研究显示亚砷酸钠可能通过上调p66Shc的表达和磷酸化水平诱导心肌细胞ROS水平的升高.
-
亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的机制研究
目的 探究亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的分子机制. 方法 利用5μmol/L亚砷酸钠处理HEK293ET细胞,收集细胞样品,利用实时定量PCR(Q-PCR)检测p66Shc转录水平,Western Blot检测Sirt1的蛋白表达;利用Sirt1 siRNA和对照siRNA分别转染细胞,随后5μmol/L亚砷酸钠处理细胞,收集细胞样品,Western Blot检测亚砷酸钠对Sirt1和p66Shc蛋白表达的影响. 结果 与对照组相比,5μmol/L亚砷酸钠处理组p66Shc转录水平显著升高(P＜0.001),Sirt1蛋白水平显著降低(P＜0.001).Sirt1 siRNA转染能够抑制细胞Sirt1的表达.亚砷酸钠处理后,Sirt1 siRNA转染组Sirt1的表达与对照siRNA转染组相比显著降低(P＜0.001),p66Shc的表达显著升高(P＜0.001). 结论 亚砷酸钠可能通过抑制Sirt1的表达上调p66Shc的表达.
-
低砷染毒对小鼠的一般作用研究
目的 动态观察低剂量砷染毒小鼠后其一般情况的变化.方法 96只健康雄性KM小鼠随机分组,设0、50、500和5 000μg/L 4个染毒组,再将每个剂量组分4、6和8周3个染毒时间点,经饮水染毒,测定饮水量、饲料消耗量及主要的脏器系数,用原子荧光吸收光谱法测血、肝和肾的总砷含量.结果 体重在低和中剂量染毒4周明显增高,高剂量组8周则显著降低.肝脏和肾脏系数均是随染毒时间和染毒剂量的增加出现先增高后降低的现象.脾脏和心脏系数均随染毒时间和染毒剂量的增加而增加(P＜0.05),肺脏系数在中剂量有明显增高(P＜0.05).血砷、肝砷、肾砷含量随着染毒时间和染毒剂量的增加而逐渐增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 短时间低剂量砷可以诱导小鼠代偿性反应,随着染毒时间和剂量的增加,主要脏器出现损伤.
-
亚砷酸钠对大鼠红细胞影响及N-乙酰半胱氨酸干预研究
目的 研究亚砷酸钠对大鼠红细胞参数及膜蛋白含量的影响,探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对其的干预作用.方法 30只健康雌性SD大鼠随机分为3组,每组10只,即对照组,给予普通洁净自来水；亚砷酸钠染毒组,自由饮用含360μg/L砷水；N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)干预组,饮用含360μg/L砷水,隔天灌胃NAC 20 mg/kg体重.4周后将大鼠处死.采用MEK-6318K全自动血细胞分析仪测定红细胞参数,低温离心沉淀红细胞膜,SDS-PAGE凝胶电泳分离红细胞膜蛋白,Bandscan5.0凝胶分析软件分析红细胞膜蛋白条带的面积灰度值.结果 大鼠红细胞参数未发生异常改变(P＞0.05)；染毒组红细胞膜带3蛋白含量高于对照组,N-乙酰半胱氨酸干预后带3蛋白含量降低(P＜0.05),干预组带3蛋白和对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；染毒组红细胞膜锚蛋白含量低于对照组和干预组(P＜0.05),对照组和干预组锚蛋白含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 亚砷酸钠可致大鼠红细胞膜带3蛋白表达增高,锚蛋白表达减少；NAC可减少亚砷酸钠所致红细胞膜带3蛋白的表达.
-
低砷染毒致小鼠肝脏氧化损伤的影响
目的 动态观察低剂量砷染毒小鼠致肝脏脂质过氧化情况.方法 96只健康雄性KM小鼠随机分组,设0、50、500和5 000μg/L4个组,再将每个剂量组分4、6和8周3个染毒时间点,经饮水染毒,测定肝脏和血液中总砷含量、肝组织脂质过氧化和抗氧化水平.结果 血砷、肝脏砷含量随着染毒时间和染毒剂量的增加而逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05).在肝组织中,丙二醛(MDA)含量均随染毒时间和染毒剂量的增加而增高,差异有统计学意义(P<0.05);过氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性则是均随着染毒时间和染毒剂量的增加出现先增高后降低的现象,其增高差异均有统计学意义(P<0.05).GSH-Px活性降低与对照组之间,差异有统计学意义(P<0.05),而SOD活性降低与对照组相比无明显差异(P>0.05).结论 在本试验条件下,低砷可以诱导小鼠肝脏抗氧化损伤系统出现适应性的增高,但随着剂量和作用时间增加终会造成小鼠的氧化损伤.
-
茶多酚对亚砷酸钠致小鼠骨髓细胞遗传损伤的保护作用
地方性砷中毒是世界性公共卫生问题之一,流行病学研究表明砷是人类的一种公认的致癌物.长期饮用含砷化物的水可对体内染色体DNA造成损伤[1],亚砷酸钠是砷化物的一种,给小鼠染毒后可导致体内骨髓等多种脏器细胞的DNA损伤[2]及诱发微核的形成[3].这些研究均提示砷及其化合物有一定的遗传损伤作用,对于其导致遗传损伤的机制,有研究认为可能与其在代谢过程中产生的自由基有关[4].茶多酚(Teapolyphenols,TP)是一种从茶叶中提取出的纯天然复合物,约占茶干重的25%,它有30多种酚性物质,其中的儿茶素为重要,约占多酚总量的60%～80%.儿茶素类化合物因含有酚性羟基,极易发生氧化、聚合、缩合等变化,决定其具有较好的抗氧化能力和清除自由基的能力[5].本研究将以小鼠的骨髓细胞作为研究对象,以亚砷酸钠(Sodium arsenite,NaAsO2)进行小鼠体内急性染毒,在此基础上以茶多酚进行预防性干预,以单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)和微核试验作为遗传损伤的检测手段,观察茶多酚的预防性干预是否能对亚砷酸钠所致的遗传损伤具有保护性作用,从而对地方性慢性砷中毒的防治提供一定的实验依据.
-
牛黄解毒片、雄黄与其他砷化物急性毒性的比较研究
目的 比较含砷牛黄解毒片、雄黄与其他砷化物的毒性。方法 昆明种成年小鼠随机分为9组：牛黄解毒片低、中、高剂量组(60、180和600 mg/kg)、京制牛黄解毒片(600 mg/kg)组、雄黄(600 mg/kg)组、二硫化二砷(As2S2，600 mg/kg)、亚砷酸钠(NaAsO2，As3+，42 mg/kg)、砷酸氢二钠(Na2HAsO4·7 H2O，As5+，100 mg/kg)及正常对照组，每组6只。分别一次灌胃给药，8 h后取血及肝、肾组织，检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血尿素氮(UREA)、血肌酐(CREA)水平及肝肾组织病理学变化；原子荧光光谱测定肝肾组织中的砷蓄积量；实时荧光定量PCR检测砷毒性敏感基因金属硫蛋白-1(Metallothionein，MT-1)mRNA的表达。结果 As3+和As5+组肝肾中砷蓄积量显著增加，并伴肝肾功能和病理损伤，且MT-1 mRNA表达明显上调；牛黄解毒片各剂量组和京制牛黄解毒片组的肝肾功能和病理检查与正常对照组相似，未见异常；雄黄和As2S2组仅在肝脏中检测到砷，肝肾轻度病理变化，但明显轻于As3+和As5+组；牛黄解毒片仅高剂量组、雄黄、As2S2组的肝脏检测到微量的砷，但远低于As3+和As5+组；且未见MT-1 mRNA表达的升高。结论 牛黄解毒片、雄黄的急性毒性远小于亚砷酸钠、砷酸氢二钠。砷化物的毒性与其化学价位/可溶性关系密切，不能单用总砷含量评价含砷中成药的毒性。
-
亚砷酸钠对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA的表达及VEGF、CyclinD1、PR蛋白含量的影响
目的 采取不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)灌胃染毒,针对其对雌性SD大鼠性成熟前期ERmRNA(雌激素受体mRNA)的表达及VEGF(血管内皮生长因子)、CyclinD1(细胞周期蛋白D1)和PR(孕激素受体)蛋白含量的影响,探讨其对生殖毒性的可能机制.方法 SD大鼠40只,随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,经灌胃,分别给予其双蒸水,1.25、2.5和5 mg/kg·d的NaAsO2,4周后,断颈处死,取血、左侧卵巢做以下检测:①Elisa法测定VEGF、CyclinD1和PR蛋白的含量;②实时荧光定量PCR检测卵巢组织中ERmRNA的表达.结果 Elisa结果显示,随着灌胃的NaAsO2剂量增加,中和高剂量大鼠血清VEGF、CyclinD1和PR蛋白含量分别为(13.54±1.98) ng/L、(12.44±2.06) ng/L、(1.089±0.133)μg/L、(1.040±0.136) μg/L、(324.27±19.77) ng/L和(320.46±18.01) ng/L呈下降趋势,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,大鼠卵巢ER mRNA基因的表达降低,且低、中和高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 染毒NaAsO24周后可引起SD雌性大鼠卵巢与子宫结构改变,在性成熟前期染毒NaAsO2,可能通过下调卵巢ER mRNA基因,使得ER下游的VEGF、CyclinD1蛋白以及PR蛋白生成减少,终导致卵泡发育异常,产生生殖毒性.
-
亚砷酸钠致人肝细胞凋亡及NF-κB信号通路影响的研究
目的 观察亚砷酸钠染毒对人肝细胞(L02)凋亡及其机制的探讨.方法 采用人肝细胞L02细胞株,亚砷酸钠染毒剂量范围为0～40μmol/L,处理时间为24和48 h.MTT法检测细胞增殖,并将活力为80％以上作为染毒剂量,选择亚砷酸钠终浓度为0、1.0、5.0和10 μmol/L,处理24h.Hochest33258染色法观察细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光染色法观察胞内ROS形成,Western bloting检测NF-κB信号通路p-p65及p65蛋白的表达,用NAC干预2h,加亚砷酸钠5.0 μmol/L处理后,进一步观察上述指标.结果 随着砷染毒剂量的增加,细胞增殖呈现先增高后降低的趋势,凋亡细胞数和胞内ROS则呈现逐步增多的现象,但NAC预处理后ROS产生及凋亡细胞数目则显著降低,提示氧化应激在砷致人肝细胞L02中发挥作用;p-p65蛋白表达水平随砷染毒剂量的增加而增加,NAC预处理可降低其形成,以上差异均有统计学意义.结论 亚砷酸钠可经由氧化应激引起人肝细胞L02发生凋亡,且激活NF-κB信号通路有关.
-
硒多糖、亚砷酸钠对大鼠肝微粒体酶和GSH-Px等的影响
研究了硒多糖、亚砷酸钠在体内、外对大鼠肝微粒体酶细胞色素P-450、b5、NAD(P)H-细胞色素C还原酶、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的影响;并通过测定硒多糖、亚砷酸钠对肝谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和脂质过氧化(LPO)的影响,探讨了硒、砷相互作用的机理.结果表明:连续7天腹腔注射0.2mg/kg硒多糖,细胞色素P-450、b5的含量、GST的活性降低(P<0.05);硒多糖明显诱导GSH-Px的活性,降低脂质过氧化,拮抗亚砷酸钠对LPO的作用.亚砷酸钠显著增强肝细胞脂质过氧化(P<0.05),对GSH-Px和肝微粒体酶无明显影响.
-
不同剂量亚砷酸钠染毒大鼠多药耐药相关蛋白2表达水平的变化
目的观察不同剂量亚砷酸钠染毒大鼠肝细胞膜转运蛋白-多药耐药相关蛋白2(multidrugresistance-associatedprotein2,MRP2)表达水平的变化及与砷代谢的关系.
-
外源性还原型谷胱甘肽对亚砷酸钠诱导遗传毒性及氧化应激的保护作用
目的 探讨外源性还原型谷胱甘肽(GSH)能否拮抗亚砷酸钠(NaAsO2)诱导的遗传毒性及氧化损伤.方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,按处理方式分为对照组、单独NaAsO2或GSH处理组及不同浓度GSH和NaAsO2联合组,观察GSH处理对细胞存活、氧化应激水平、DNA单链断裂及染色体损伤的影响.结果NaAsO2单独染毒处理可导致细胞存活率、集落形成率、SOD酶活性和GSH含量低于对照组,而ROS水平、彗星率、Oliver尾距和微核细胞率较对照组增加(P＜0.05).GSH浓度为0.5～5 mmol/L时,联合处理组与单独NaAsO2处理组比较上述各项检测指标差异无显著性;而当GSH剂量为10和20 mmol/L时,NaAsO2处理产生的毒性作用虽有所改善,却仍显著低于对照组(P＜0.05);随着GSH剂量水平的增加,在GSH为40或50 mmol/L时,细胞存活、集落形成、氧化应激水平及DNA和染色体损伤情况与对照组比较差异已无显著性.结论 外源性添加高浓度的GSH能够显著减弱NaAsO2的细胞毒性,减轻DNA、染色体损伤及氧化应激水平.
-
亚砷酸钠对HaCaT细胞的氧化应激作用
目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤永生化角质形成细胞株(HaCaT)的氧化应激作用.方法用AlamarBlue还原法检测NaAsO2对细胞活力的影响,用PI染色法检测细胞的凋亡和坏死率,利用2′7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内ROS水平,同时用荧光法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量.结果0.001μmol/L至1μmol/L组的AlamarBlue还原率显著高于对照组,而10μmol/L以上组的AlamarBlue还原率下降,20μmol/L组的凋亡和坏死率显著高于对照组,各实验组的DCF荧光强度与对照组相比明显提高,1μmol/L以上组细胞内GSH水平增高,5μmol/L组GSSG水平增高.结论各浓度砷引起HaCaT细胞内ROS增多,低浓度时促进细胞增殖,高浓度则抑制细胞活力,砷诱导HaCaT细胞内的GSH增多,发挥解毒作用.
-
亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞增殖与凋亡效应的影响
目的 研究亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞L02增殖与凋亡效应的影响.方法 分别采用亚砷酸钠和三氧化二砷处理人正常肝细胞L02,比色实验和集落形成实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,试剂盒法测定细胞内活性氧水平和谷胱甘肽含量,微核实验评价细胞染色体损伤.结果 随着亚砷酸钠或三氧化二砷染毒浓度的增加,L02细胞的存活率、集落形成率和谷胱甘肽含量均下降,而集落形成抑制率、凋亡率、活性氧水平和微核率均增加,此外细胞周期都被阻滞在G2/M期.结论 亚砷酸钠和三氧化二砷均能诱导人正常肝细胞L02活性氧增加和谷胱甘肽含量下降,继而引起细胞染色体损伤、细胞凋亡、细胞周期阻滞和细胞生长抑制,提示氧化应激是亚砷酸钠和三氧化二砷“致癌”与“治癌”共同的分子机制.
-
谷胱甘肽与蛋氨酸对饮水砷暴露小鼠体内砷化物的分布和甲基代谢的影响
目的 探讨外源性谷胱甘肽(glutathione,GSH)和L-蛋氨酸(L-Methionine,L-Met)干预后,对饮水砷暴露小鼠肝、肾和血中化物的分布和甲基代谢的影响.方法 将实验小鼠随机分为对照组(Con组)、单纯染砷组(As组)、GSH干预组(GSH组)与L-Met干预组(L-Met组).小鼠自由饮用舍砷50mg/L的水.从第4周起.染砷组同时腹腔注射GSH和L-Met进行处理,共处理7天.末次注射后24h处死小鼠,取其肝、肾和血组织样品.采用氢化物发生.超低温捕集-原子吸收分光光度法分别检测小鼠肝、肾和血中无机砷(inorganicarsenic,iAs)、一甲基胂(monomethylarsenic acid,MMA)和二甲基胂(dimethylarsenic acid,DMA)含量.结果 L-Met组小鼠肝中DMA含量和砷二甲基化率(SMI)显著高于As组;GSH干预组小鼠肝中砷一甲基化率(PMI)和SMI显著高于As组.L-Met组和GSH组小鼠血中DMA、总砷舍量和PMI均显著高于As组.结论 GSH和L-Met对小鼠体内的砷甲基化代谢具有促进作用、可加速无机砷在体内的甲基化过程,终使砷甲基代谢的终产物DMA含量增加.从而促进了总砷的代谢与排泄.
-
不同砷化合物对血管内皮细胞毒性的研究
目的 观察不同砷化合物对体外培养的牛主动脉血管内皮细胞(BAEC)的细胞毒性.方法 培养的BAEC分别暴露于亚砷酸钠(NaAsO2,iAsⅢ0～50μmol/L)、砷酸钠(Na2HAsO4,iAsⅤ,0～10mmol/L)和甲基亚胂酸(CH3AsO,MMAⅢ,0～2μmol/L)24h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;诱导性偶联质谱分光光度(ICP-MS)法测定细胞内总砷(tAs)含量.结果 不同剂量范围内的iAsⅢ、iAsⅤ和MMAⅢ均能够显著降低BAEC的细胞生存率(P＜0.01),且具有剂量-效应关系;iAsⅢ、iAsⅤ和MMAⅢ暴露24h的BAEC细胞的50%生存率(IC50)经计算分别为24.1μmol/L、155.9μmol/L和1.7μmol/L,对BAEC的细胞毒性从大到小依次为:MMAⅢ＞iAsⅢ＞iAsⅤ;相同暴露剂量和时间下,BAEC对MMAⅢ暴露的砷摄取速度明显高于iAsⅢ暴露(P＜0.01).结论 无机砷甲基化的活性中间产物MMAⅢ对BAEC的细胞毒性要明显强于无机砷化合物.
-
长期低剂量亚砷酸钠染毒对人支气管上皮细胞和人角质形成细胞增殖的影响
目的 探讨1.0μmol/L亚砷酸钠慢性染毒对人支气管上皮细胞(HBE)和人角质形成细胞(HaCaT)体外增殖的改变及其调控机制.方法 以体外培养的HBE和HaCaT细胞恶性转化模型为研究对象,应用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期改变,利用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin E、cyclin D1、cylin A蛋白的表达.结果 染砷组HBE细胞36代和43代、HaCaT细胞28代和35代相对增殖率均高于传代对照组(P ＜0.01和P＜0.05);细胞周期G1期细胞比例下降(P＜0.05),S期细胞比例上升(P＜0.05);此外,细胞周期相关蛋白cyclin E表达升高(P＜0.05),并在晚期持续性高表达.结论 低剂量亚砷酸钠可通过上调HBE和HaCaT细胞中cyclin E的表达从而使细胞从G1期逃逸至S期,加速细胞增殖,终导致细胞发生恶性转化.
-
无机砷对Chang肝细胞核转录因子Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA表达的影响
目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)对Chang肝细胞株核转录因子Nrf2及Nrf2调控的下游抗氧化酶醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)mRNA表达的影响.方法 分别以不同浓度NaAsO2(5、10、25和50μmol/L)染毒人类Chang肝细胞株6h,采用RT-PCR法测定Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA表达水平.结果 5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露6h,Nrf2的mRNA表达分别为对照组的(100.74±3.70)%、(105.96±1.75)%、(101.76±1.01)%和(101.81±6.33)%,与对照组比较,差异未见统计学意义(P＞0.05);各暴露组NQO1的mRNA表达均较对照组相比显著增加(P＜0.05),分别为对照组的(106.52±3.11)%、(113.27±2.84)%、(111.96±6.96)%和(107.33±2.76)%;NaAsO2暴露还能够显著诱导HO-1的mRNA表达增强,且具有剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P＜0.01).5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露,HO-1的mRNA表达分别为对照组的(186.92±1.75)%、(194.08±2.75)%、(196.93±2.55)%和(200.02±0.83)%.结论 无机砷暴露未显著增强Chang肝细胞核转录因子Nrf2的转录,却能够显著提高Nrf2调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA表达水平.
-
N-乙酰半胱氨酸抑制亚砷酸钠诱导心肌细胞凋亡和自噬作用的研究
目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制亚砷酸钠诱导H9C2细胞凋亡和自噬作用及机制.方法:用亚砷酸钠诱导H9C2细胞构建凋亡和自噬模型.采用CCK-8比色法检测细胞的存活率,Hoechst 33258核染色法观察凋亡细胞的形态和数量改变,双氯荧光素染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western Blot法测定蛋白P53、Bcl-2、Bax及LC3的表达水平,以及磷酸化ERK1/2蛋白及ERK1/2蛋白总量的表达水平.结果:与对照组相比,15μM亚砷酸钠处理的H9C2细胞存活率显著降低,细胞内ROS水平明显增加,凋亡细胞数量明显增多,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值明显增大(P＜0.01).1 mM NAC预处理后显著减少H9C2细胞内ROS的生成和促凋亡蛋白P53和Bax的表达,诱导抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高,同时降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ的比值.亚砷酸钠处理诱导ERK1/2蛋白磷酸化(P＜0.01),而NAC和亚砷酸钠共处理抑制了ERK1/2蛋白的磷酸化.结论:亚砷酸钠降低H9C2细胞的存活率,增加细胞内ROS的生成,诱导细胞凋亡和自噬.NAC通过降低H9C2细胞内的ROS水平和抑制ERK1/2蛋白的磷酸化拮抗亚砷酸钠诱导的细胞凋亡和自噬.
-
亚砷酸钠致早期鸡胚胚胎发育毒性与基因甲基化的关系
目的:研究亚砷酸钠致鸡胚胚胎毒性与基因组DNA整体甲基化的关系以及补充甲基供体胆碱对无机砷致胚胎毒性的影响.方法:以鸡胚为模式动物检测亚砷酸钠及其与胆碱联合处理对鸡胚生存能力、体重及形态的影响;采用whole-mount免疫荧光技术检测鸡胚基因组DNA整体甲基化水平;应用荧光定量PCR技术,研究受甲基化调节的bcl2、c-myc、cdkn2a,calb2基因在不同处理组鸡胚中的表达模式.结果:砷处理组鸡胚存活率下降(P<0.01),体重降低(P<0.01),并诱导鸡胚发育畸形,基因组DNA整体甲基化水平降低(P<0.01),受甲基化调节的基因bcl2(P<0.05)、c-myc(P<0.01)表达下调;补充甲基供体胆碱,未明显恢复鸡胚的生存力和改变鸡胚发育异常,对鸡胚基因组DNA整体甲基化水平亦无明显影响,但c-myc(P<0.01)、cdkn2a(P<0.01)、calb2(P<0.05)基因的表达均显著下降.结论:亚砷酸钠能够诱导鸡胚发育异常,其作用可能是通过降低基因组DNA整体甲基化水平实现.补充甲基供体胆碱不能拮抗其致畸效应.
