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无机砷对Chang肝细胞核转录因子Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA表达的影响
目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)对Chang肝细胞株核转录因子Nrf2及Nrf2调控的下游抗氧化酶醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)mRNA表达的影响.方法 分别以不同浓度NaAsO2(5、10、25和50μmol/L)染毒人类Chang肝细胞株6h,采用RT-PCR法测定Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA表达水平.结果 5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露6h,Nrf2的mRNA表达分别为对照组的(100.74±3.70)%、(105.96±1.75)%、(101.76±1.01)%和(101.81±6.33)%,与对照组比较,差异未见统计学意义(P＞0.05);各暴露组NQO1的mRNA表达均较对照组相比显著增加(P＜0.05),分别为对照组的(106.52±3.11)%、(113.27±2.84)%、(111.96±6.96)%和(107.33±2.76)%;NaAsO2暴露还能够显著诱导HO-1的mRNA表达增强,且具有剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P＜0.01).5、10、25和50μmol/L NaAsO2暴露,HO-1的mRNA表达分别为对照组的(186.92±1.75)%、(194.08±2.75)%、(196.93±2.55)%和(200.02±0.83)%.结论 无机砷暴露未显著增强Chang肝细胞核转录因子Nrf2的转录,却能够显著提高Nrf2调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA表达水平.
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FH基因在遗传性平滑肌瘤病及肾癌综合征中的研究进展
遗传性平滑肌瘤及肾细胞癌(HLRCC)综合征不同于普通家族性肾癌,其肾肿瘤比其他类型的家族性肾癌更具侵袭性.延胡索酸水化酶(FH)基因突变导致"假缺氧"驱动机制不依赖低氧环境的低氧诱导因子2α(HIF-2α)的稳定表达,这可能是HLRCC的生物学发病机制.该文就FH基因突变、HIF-α表达及其肿瘤作用机制,与其相关的核转录因子Nrf2基因失活的新观点进行阐述.
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叔丁基对苯二酚对皮肤角质细胞核因子Nrf2通路的影响
目的 观察叔丁基对苯二酚(tert-butylhydrquione,tBHQ)对皮肤角质细胞核因子Nrf2 (tanscription factor NF-E2-related factor 2)及其调控的下游靶基因NAD(P)H醌氧化还原酶[NAD(P)H:quinone oxidoreductase1,NQ01]和血红素单加氧酶-1(heme oxygenase1,HO-1)蛋白表达的影响.方法 向HaCaT细胞中加入终浓度为50 μmol/L的tBHQ溶液分别培养0(对照)、2、6、12、24、36 h；或分别加入终浓度为0(对照)、25、50 μmol/L的tBHQ溶液培养24h.采用western blot法检测细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达.结果 与对照组比较,50 μmol/L的tBHQ染毒2～36 h时HaCaT细胞Nrf2蛋白表达水平,染毒12～36 h时HaCaT细胞NQO1蛋白表达水平以及染毒6～36 h时HaCaT细胞HO-1蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).25 μmol/L和50 μmol/L tBHQ分别染毒24h后HaCaT细胞的Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).与25 μ mol/L tBHQ染毒组比较,50 μmol/L tBHQ染毒组Nrf2和HO-1蛋白表达水平均下降,NQO1蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 tBHQ能够诱导皮肤角质细胞的核转录因子Nrf2及其调控的下游靶基因NQO1和HO-1的蛋白持续表达,从而对皮肤角质细胞产生保护作用.
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亚砷酸钠对核转录因子Nrf2和血红素单加氧酶-1表达的影响
目的 观察亚砷酸钠(NaAsO_2,sodium arsenite)对Chang肝细胞核转录因子Nrf2(transcription factor NF-E2-related factor2)及血红素单加氧酶-1(heineoxygenase 1,HO-1)蛋白表达的影响,并应用谷胱甘肽(GSH)合成抑制剂丁硫氨酸亚矾胺(buthionine sulfoximine,BSO)探讨NaAsO_2诱导Nrf2和HO-1蛋白活化的可能机制.方法 不同浓度NaAsO_2(5、10、20 μmol/L)单独作用Chang肝细胞24 h;同时将Chang肝细胞用BSO(3 mmol/L)预处理12 h后,再用NaAsO_2(5、10、20μmol/L)作用24 h.以Western Blot法检测细胞Nrf2和HO-1的蛋白表达.结果 5、10和20 μmoI/L NaAsO_2单独作用显著提高细胞Nrf2和HO-1蛋白含量;BSO预处理组细胞Nrf2和HO-1的蛋白表达则更显著高于NaAsO_2单独作用组(P<0.01).结论 无机砷能够诱导细胞Nrf2和HO-1蛋白活化;细胞内巯基可能对无机砷诱导的Nrf2和HO-1蛋白活化具有重要作用.
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牛磺酸对甲基汞染毒大鼠脑皮质Nrf2及HO-1、γ-GCS、Gpx-1表达的影响
目的 研究甲基汞对大鼠脑皮质Nrf2及HO-1、γ-GCS、Gpx-1表达的影响及牛磺酸的干预作用.方法 Wistar大鼠40只按体重随机分为4组,每组10只,分别为(1)对照组、(2)低剂量染甲基汞组、(3)高剂量染甲基汞组、(4)牛磺酸干预组,染毒前,1～3组大鼠只给予皮下注射生理盐水,第4组大鼠给予皮下注射1 mmol/kg牛磺酸；2h后,第1组仍腹腔注射生理盐水,第2组大鼠腹腔注射4μmol/kg氯化甲基汞,3、4组大鼠则腹腔注射12μmol/kg氯化甲基汞溶液,每周染毒5次,隔日干预1次,连续4周.后一次染毒24h后,处死大鼠,分离大脑皮质,用冷原子吸收法检测汞含量,Real-time PCR和Western blotting法测定Nrf2、HO-1、γ-GCS、GPx-1的mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组比较,低、高甲基汞组中汞含量、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表达均显著升高；高甲基汞组Nrf2的mRNA和蛋白表达显著升高,Gpx-1的表达显著降低.与高甲基汞组比较,牛磺酸干预组大鼠大脑皮质中汞含量无明显差异；Nrf2、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表达明显降低,Gpx-1的mRNA和蛋白表达明显上调.结论 甲基汞可能通过激活Nrf2及其下游靶基因HO-1和γ-GCS,抑制抗氧化酶Gpx-1诱发氧化应激,而牛磺酸对其具有拮抗作用.
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姜黄素在缺氧致视网膜神经节细胞氧化应激损伤中的作用及机制
目的 观察姜黄素对缺氧致小鼠视网膜神经节细胞RGC-5氧化应激损伤的影响,并探讨其作用机制.方法 以小鼠RGC-5细胞株为研究对象,按照不同处理因素将细胞随机分为4组:正常对照组、缺氧组、缺氧+溶剂(二甲基亚砜)对照组、缺氧+姜黄素预处理组.2'7'-二氯荧光素探针法检测细胞内活性氧自由基(ROS),四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性,Western blot检测细胞内核转录因子Nrf2蛋白的表达,实时荧光定量RT-PCR检测醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达.结果 与正常对照组相比,缺氧组细胞内ROS含量明显增高(P＜0.05),细胞活性明显降低(P＜0.05);而缺氧+姜黄素预处理组缺氧导致的细胞氧化应激损伤明显减轻,并且细胞内的Nrf2蛋白水平明显增加(P＜0.05),NQO1和HO-1 mRNA表达明显提高(P＜0.05).结论 姜黄素能够激活视网膜神经节细胞内Nrf2抗氧化通路,上调其介导的Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶基因NQO1和HO-1的转录活性,从而减轻缺氧导致的视网膜神经节细胞氧化应激损伤.
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苦瓜总皂苷对环磷酰胺所致卵巢损伤大鼠卵巢组织Nrf2表达的影响
目的:观察苦瓜总皂苷对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)所致大鼠卵巢损伤的作用.方法:60只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、苦瓜总皂苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)和高(40mg/kg)剂量组以及阳性药物逍遥丸(20 mg/kg)干预组,每组10只.大鼠腹腔注射CTX(162 mg/kg)造模成功后,各组给予相应剂量药物灌胃,连续给药6周.处死大鼠,观察卵巢组织病理学变化,测定血清和卵巢组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot、半定量PCR测定卵巢细胞核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid-related factor 2,Nrf2)蛋白和mRNA的表达.结果:病理学HE染色可见正常组卵泡丰富,皮髓质结构清晰;模型组有明显卵泡闭锁,同时皮质结构破坏,苦瓜总皂苷3剂量组和逍遥丸组相较于模型组病理改变有明显的改善.与正常组相比,模型组血清和卵巢组织MDA含量明显增加(P＜0.05),CAT和SOD活性明显降低(P＜0.05);苦瓜总皂苷各剂量血清和卵巢组织MDA含量明显下降(P＜0.05),CAT和SOD活性明显升高(P＜0.05);且高剂量组效果优于逍遥丸组(P＜0.05).与正常对照组相比,模型组大鼠卵巢细胞Nrf2蛋白及mRNA表达明显增加,而苦瓜总皂苷3剂量组和逍遥丸组Nrf2表达显著增强(P＜0.05);苦瓜总皂苷高剂量优于逍遥丸组(P＜0.05).结论:苦瓜总皂苷对环磷酰胺诱导的卵巢组织损伤具有一定的保护作用,与其可增强Nrf2表达及提高抗氧化活性.
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阿司匹林增加人肝癌细胞对三氧化二砷敏感性的实验研究及机制探讨
目的 研究阿司匹林能否增加肝癌细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性,并从氧化应激角度探索其增敏的机制.方法 采用10 μmol/L As2O3和不同浓度的阿司匹林联合处理人肝癌细胞HepG2 24 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测总蛋白中血红素氧合酶1(HO-1)和核蛋白中核转录因子Nrf2的表达水平.结果 与空白对照相比,10 μmol/L As203可引起肝癌细胞存活率降低,凋亡率、ROS水平、HO-1和Nrf2表达升高;不同浓度(0.1、1.0、2.5、5.0 mmol/L)的阿司匹林与10 μmol/L As2O3联合处理时,HepG2细胞存活率、总蛋白HO-1以及核内Nrf2的表达均随着阿司匹林浓度的增加呈现先升高后降低的趋势,而细胞凋亡率和细胞内ROS水平则表现为先降低后升高.结论 阿司匹林对As2O3的增敏作用有限,只有在较高浓度(5 mmol/L)时表现出一定的增敏作用,其增敏机制可能是通过抑制Nrf2-HO-1途径从而导致ROS蓄积,增强As2O3对HepG2的凋亡诱导能力,进而增加HepG2对As2O3的敏感件.
