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HCG在小鼠卵母细胞体外受精胚胎发育过程中的作用
目的 探讨HCG在小鼠卵母细胞体外受精胚胎发育过程中的作用.方法 选择性成熟4～6周ICR雌性小鼠进行促排卵,体外受精并培养至96 h.在受精液及胚胎培养液中分别加入HCG浓度为0 U/L(对照组)和1 500 U/L(HCG组),对两组的体外受精率、2-细胞分裂率及囊胚形成率进行比较;用实时定量PCR法(qPCR)比较两组4个囊胚质量相关基因mRNA的表达水平,包括多能性相关基因八聚体结合蛋白4(Oct4)、分化相关基因尾端型同源盒2(Cdx2)、氧化应激相关基因锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、侵袭相关基因基质金属蛋白酶9(Mmp9);采用免疫荧光法,对两组囊胚进行Cdx2蛋白标记,并用DAPI染色料标记所有细胞的细胞核,在激光共聚焦显微镜下对细胞总数、内细胞团(ICM)、外滋养层(TE)细胞数目进行计数并比较.结果 HCG组的受精率(95.6％)、2-细胞率(96.6％)以及囊胚形成率(83.9％)与对照组(分别为95.8％,96.0％0,81.6％)相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);HCG组相关基因Cdx2、MnSOD mRNA的表达水平显著高于对照组(P＜0.05);与对照组相比,HCG组Mmp9基因mRNA表达水平显著上调(P＜0.01);两组的Oc以基因mRNA表达水平无显著性差异(P＞0.05);HCG组囊胚细胞总数(61.7±16.3)显著高于对照组(52.3±9.1)(P＜0.05),HCG组ICM细胞数(15.4±3.8)及TE细胞数(46.2±13.1)多于对照组[分别为(13.2±3.9)和(39.1±7.8)],但差异无统计学意义(P＞0.05);两组ICM/TE值相比较,差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 胚胎培养液中加入HCG增加囊胚细胞总数及某些质量相关基因的表达,提高体外发育潜能,HCG具有潜力成为优化植入前胚胎培养体系的有益成分.
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小鼠着床前胚胎miRNA表达的实验研究
目的 研究微小RNA(miRNA)在小鼠着床前胚胎各发育阶段的表达谱,探讨miRNA在着床前胚胎发育中的作用和意义. 方法 建立小鼠超排卵、交配和胚胎收集系统,采用miRNA扩增、miRNA芯片和荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法研究小鼠着床前胚胎miRNA表达. 结果 小鼠卵母细胞、2细胞胚胎、4～8细胞胚胎和囊胚分别表达55、53、62和72个miRNA;四个发育阶段共筛查到表达94个miRNA, 32个在各发育阶段均表达,62个在不同发育阶段特异性表达.实时荧光定量PCR方法验证mmu-miR-721在小鼠着床前胚胎中表达. 结论 小鼠着床前胚胎表达大量的miRNA,其可能对胚胎发育和胚胎细胞的分化起重要调控作用.
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锌缺乏和锌过量对小鼠胚胎长骨发育的影响
锌是维持人和动物正常生命活动不可缺乏的必需微量元素之一,许多实验证明锌缺乏可引起骨骼的生长迟缓,但锌过量对骨的毒性作用报道较少[1～4].采用小鼠胚胎长骨体外培养,研究锌缺乏和锌过量对骨发育的影响,为阐明锌影响骨发育的机理积累资料,为合理指导使用锌强化食品以及发挥锌的合理营养作用提供依据.
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维生素A缺乏及补充对小鼠子代发育的影响
目的 通过建立小鼠维生素A缺乏模型，研究维生素A对小鼠胎仔发育的影响。方法 对维生素A缺乏之孕鼠分不同阶段补充维生素A，观察胎鼠发育情况。结果维生素A缺乏使胎鼠的体重、身长、尾长明显小于正常对照组(P＜0.05)，囟门矢义冠内0.268cm×0.228cm，明显大于对照组的0.206cm×0.078cm；骨异常率为33.33％，对照组仅为7.32％，胸骨异常率为48.72％，对照组为2.44％，差异均有显著性明显大于正常对照组，胎仔骨骼发育异常，神经反射发育迟缓，且出现脑膨出及细小肾等畸形。交配后第7天补充组明显好于缺乏组，但与正常对照组相比仍有差异。交配后第0天补充组与正常对照组无差异。结论揭示维生素A对胚胎的生长发育十分重要。
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锌缺乏及补锌对小鼠胚胎HOX3.5基因表达的影响
为研究锌缺乏及补锌对小鼠胚胎HOX3.5基因表达的影响,将昆明种雌性小鼠随机分为缺锌组(ZD)、缺锌后补锌组(ZR)和常锌对照组(ZN).ZD组及ZR组喂饲含锌量为(3.0±0.5)mg/kg的缺锌饲料,但ZR组小鼠从孕第7天开始改喂含锌量为30mg/kg 的常锌饲料.ZN组小鼠一直食用常锌饲料.经25天喂养后,与同系成年雄鼠交配.于妊娠第12天时处死动物,并立刻剖腹取出胎鼠.用地高辛标记的探针,采用原位杂交方法检测小鼠胚胎HOXC4(3.5)基因mRNA在鼠胚冰冻切片上的表达量.结果发现:ZD、ZR组HOX3.5基因阳性表达的面密度及其平均光密度明显低于ZN组(P<0.05).提示:锌缺乏时可导致HOX3.5基因表达量下降,这种调控作用乃发生在胚胎发育的早期,从孕早期(孕7天)开始补锌仍无法纠正.
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小鼠胚胎皮层神经细胞原代培养的形态学观察
为了探讨鼠皮层神经细胞的形态学变化规律,本研究建立了小鼠胚胎皮层神经细胞体外原代培养的模型,连续培养6周,应用NSE染色法进行形态学观察.
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小鼠胚胎大脑皮质与中脑神经干细胞培养与分化比较的研究
目的比较小鼠胚胎脑皮质与中脑来源的神经干细胞在培养与分化方面的差异,为更好的研究和利用神经干细胞提供实验依据.方法无菌条件下分别分离鼠胚大脑皮质与腹侧中脑,经胰酶消化及机械吹打成单细胞后接种于含有B27、bFGF的DMEM/F12培养基,培养扩增;倒置显微镜观察比较生长状况;机械方法传代;10%血清接种分化;免疫荧光细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向,并作比较.结果小鼠胚胎脑皮质与中脑均存在神经干细胞,其免疫细胞化学鉴定均呈Nestin阳性,并都能分化为神经元和胶质细胞;但皮质部位所含神经干细胞明显多于中脑,也更宜成球;有血清条件下分化,皮质神经干细胞未见分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元;中脑神经干细胞则可少量分化为TH阳性神经元结论同样条件下皮质神经干细胞比中脑神经干细胞更易增殖与培养,两者在有血清条件下分化为TH阳性神经元能力方面有差异.
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小鼠2-细胞、4-细胞胚胎G1期检测及同步化的研究
目的研究小鼠2-细胞、4-细胞胚胎同步化的方法,并检测其G1期的持续时间.方法先用低温抑制和噻胺酯哒唑阻断的方法分别将小鼠2-细胞和4-细胞胚胎同步化于G1期,然后利用放射自显影技术检测胚胎DNA的合成.结果(1)小鼠2-细胞胚胎G1期的持续时间短于3h.(2)噻胺酯哒唑对胚胎细胞的抑制作用及对胚胎发育的影响有浓度依赖性.(3)小鼠4-细胞胚胎的G1期约3～4h.结论小鼠早期胚胎细胞周期的G1期持续时间都很短,利用噻胺酯哒唑阻断和低温控制的方法能够得到大量同步于G1期的胚胎细胞.
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小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立
目的优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法. 方法小鼠胚胎用4%多聚甲醛4℃固定过夜,10mg/L蛋白酶K(PK)室温消化30min,预杂交2h后,加入探针63℃反应16～18h,用盐溶液高温洗涤多次,RNA酶37℃消化1h,封闭4h后加入地高辛抗体4℃过夜.抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇,NBT和BCIP显色系统避光显色.提取图像灰度值,扣除背景、对照等假阳性信号. 结果 KIAA1708探针在脑、脊髓等8个区域有杂交信号,对图像数据分析结果表明,只有1个区域的信号在95%可信限范围内,为阳性信号. 结论通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度,以及洗涤、显色过程,得到了低本底、着色清晰的杂交结果,结合图像的数据分析步骤,消除假阳性结果.建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法.
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血管祖细胞研究进展
干/祖细胞是当今医学研究的热点.在小鼠胚胎干细胞分化模型中的研究已经证实,心肌细胞、内皮细胞和血管平滑肌细胞,这三种细胞亚系均来源于一种血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2又称KDR,Flt-1)阳性的心血管祖细胞,这一类祖细胞是带有中胚层标志的向心血管亚系分化过程中的早阶段的细胞[1].
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Runx3与胃癌关系的研究进展
Runx3基因是近年来发现的一个新的肿瘤抑制基因,是Runx转录因子家族成员.因其在小鼠胚胎发育过程及人类多种恶性肿瘤尤其是在胃癌的发生过程中起重要作用而倍受关注.现介绍Runx3的结构功能、传导通路、编码蛋白的结构及分子生物学特征,重点对Runx3基因与胃癌发生的关系及其分子机制的研究进展作一综述.
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X射线灭活小鼠胚胎成纤维细胞制备MEF的方法研究
目的：目前小鼠胚胎成纤维细胞制备MEF的常用方法是丝裂霉素C法和γ射线辐射法。丝裂霉素C使用方便，制作成本较低，因此被广泛采用，但若MEF中若存在少量丝裂霉素C，势必影响干细胞的生长。而γ射线辐射法操作简单，且不存在上述弊端，但仪器昂贵。本研究采用X射线辐射制备MEF，探究一种相对便宜且简单的方法有助于实验的顺利进行。
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Sonic hedgehog在小鼠胚胎颌面部的表达
目的探讨Sonic hedgehog(Shh)在小鼠胚胎颌面部正常发育中的表达.方法应用免疫组织化学ABC法和图像分析系统研究Shh在小鼠胚11.5 d,13.5 d及17.5 d颌面部的表达情况.结果 Shh在胚胎11.5 d,13.5 d及17.5 d的颌面上下颌突均有表达,且较对照组有差异(P<0.05),但在上下颌突之间表达没有差异,在上皮和结缔组织之间表达基本无差异.结论 Shh在小鼠胚胎颌面部正常发育有明显表达,提示Shh可能参与颌面部生长发育.
关键词： Sonic hedgehog 小鼠胚胎 颌面部 免疫组化 图像分析 -
可卡因的欣快效应可能与脑中多个化学位点有关
已知神经元通过释放神经递质向邻近的神经元传递信息.一旦这种传递工作完成,神经元表面上的运输蛋白便将神经递质送回到神经元内,当下一个神经冲动来时再释放.研究显示可卡因可作用于多巴胺、5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素等神经元的运输蛋白,阻断这些神经递质的重摄取.据此,一些研究人员假设可卡因可提高脑细胞外多巴胺水平.这样,过多的多巴胺可持续作用于这些部位的神经元而导致欣快感.若上述假设是真实的,则清除脑中多巴胺运输蛋白就可以消除可卡因的欣快效应.为此,研究人员在小鼠胚胎上将这种与运输蛋白有关的基因灭活或将之破坏,从而养育出缺乏多巴胺运输蛋白的小鼠.然后,用自身给药和位置偏爱技术进行研究以确定其使用可卡因时所获得的欣快效应.结果显示那些被破坏了基因的鼠尽管不具有多巴胺运输功能,但依然表现出对可卡因的渴求与嗜好.这一结果显示多巴胺运输蛋白对可卡因奖赏效应来说并不是必需的.研究人员采用同样方法对破坏了5-HT运输蛋白的小鼠做了研究,结果也发现了可卡因的奖赏效应.研究人员假设可卡因通过同时阻断多巴胺运输蛋白和5-HT运输蛋白而产生奖赏效应,这样,多巴胺和5-HT二者水平均升高可能产生欣快感.另一项研究发现破坏小鼠后脑部多巴胺运输蛋白后,细胞外多巴胺水平较正常高出近5倍.因为不能将多巴胺送回到神经元内部,因此当给这些小鼠可卡因时,细胞外多巴胺水平不再升高.这些鼠的多巴胺运输蛋白基因虽被破坏,但并不影响可卡因对5-HT运输蛋白的阻断,所以就像在正常小鼠所做研究显示的那样,5-HT水平是先上升后下降.为此,认为业已存在的高多巴胺水平加之5-HT水平上升可能是破坏了多巴胺运输蛋白的小鼠呈现可卡因奖赏的原因.以上研究提示脑内不只是由一个神经递质来调节愉快.若一些因素破坏了一个系统,其他系统依然能够正常工作以产生奖赏效应.可卡因具有如此强烈的吸引力,可能是它可同时作用于几个神经递质,共同参与调节愉快情绪.上述研究成果支持这样一种设想,就是在治疗可卡因成瘾时除针对可卡因外,还应考虑其他神经递质.20世纪90年代美国药物滥用研究所已与药厂合作开发一些可用于治疗可卡因成瘾的化合物.这些化合物可程度不同地作用于多巴胺、5-HT和去甲肾上腺素运输蛋白.动物实验已表明它们对人是安全的,并有潜在的效能.有些化合物正处于一期临床试验的早期阶段.
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牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究
胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.
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HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究
目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果,为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础.方法采用乙二醇作为冷冻保护剂,以野生型P21+/+小鼠为对照,用OPS法对P21HBsAg/HBsAg及P21HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3.5 d的胚胎进行玻璃化冷冻,并比较不同基因型小鼠的超数排卵数,胚胎的复苏率及发育率.结果 P21+/+、P21HBsAg/HBsAg及P21HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27.89、15.56、9.14枚;复苏率分别为88.7%、81.1%、80.3%;发育率分别为82.6%、79.4%、56.6%.结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数,解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别,而解冻后发育率,P21HBx/HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠.结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响.
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首次用小鼠干细胞体外制造出功能精子
中国科学家2016年2月25日说,他们首次实现小鼠胚胎干细胞体外分化并获得具有功能的精子细胞.这被认为是干细胞研究的一项重要进展,为无精子症男性生育后代带来希望.
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原始心肌的存在对小鼠胚胎心脏流出道心内膜特征的维持作用
目的观察小鼠胚胎心脏流出道原始心肌对心内膜特征的影响.方法用抗α-横纹肌肌节肌动蛋白抗体(α-SCA),抗α-平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)单克隆抗体对胚龄9～11 d小鼠胚胎心脏连续切片进行染色.结果流出道远侧部原始心肌转分化成升主动脉、肺动脉干近半月瓣处的游离壁后,心内膜特征发生改变.结论小鼠胚胎心脏流出道心内膜特征的维持依赖于原始心肌的存在.
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VitA对小鼠胚胎组织Hox gene蛋白表达的影响
目的从发育基因角度探讨维生素A(VA)缺乏导致先天畸形的机理.方法通过建立小鼠VA缺乏模型,用免疫组织化学等方法研究VA缺乏对小鼠胚胎组织Hox gene蛋白表达水平的影响.结果维生素A缺乏使胎鼠的Hox gene蛋白表达明显低于正常对照组(P＜0.05).VA补充组明显高于VA缺乏组,但仍比正常对照组低.结论 VA缺乏可能在翻译水平影响小鼠胚胎组织Hox gene蛋白表达.
关键词： VA缺乏 小鼠胚胎 Hox gene蛋白表达 -
小鼠胚胎皮质、海马来源的神经干细胞在体外增殖特性的比较研究
目的 探讨皮质、海马来源的神经干细胞增殖特性的异同,为神经干细胞基础和临床研究在取材部位上提供参考资料.方法 无菌条件下分别分离E11-15天小鼠胚脑皮质和海马,经胰酶消化及机械吹打制成单细胞悬液后,在含B27和bFGF的DMEM/F12 24孔板中培养扩增,倒置显微镜观察比较生长状况,免疫细胞化学染色技术鉴定神经干细胞,采用BrdU掺入法检测不同部位来源NSCs的增殖情况.结果 小鼠胚胎脑皮质与海马均存在神经干细胞,皮质部位神经干细胞比海马部位神经干细胞更易培养,也更易成球,前者神经球数目、BrdU阳性细胞率也明显高于后者.结论 同样条件下皮质神经干细胞比海马神经干细胞更易培养和增殖.
