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美科学家开发出原位检测艾滋病病毒的分子显微镜
《科技日报》报道,艾滋病病毒原位分析技术再次取得突破。美国科学家在上周召开的国际艾滋病会议上,展示了他们开发的全新检测技术及检测结果,这个被称为分子显微镜的探针能够准确检测到艾滋病病毒在细胞内外的隐藏之地。美国过敏性和传染性疾病研究所疫苗研究中心副主任瑞查得·普表示,这一分子显微镜新技术堪称神奇,它的超能力完全可以洞察到艾滋病病毒在任何细胞内的蛛丝马迹,终能帮助弄清艾滋病病毒长时间存留的谜底,从而将其从体内彻底清除。目前所用的检测组织中艾滋病病毒的原位分析技术都面临共同的大难题。这些探测技术,无论是利用荧光物质作标记物,还是放射性物质作标记,在精确定位组织样本中艾滋病病毒的位置时,经常难以将周围的细胞物质与目标检测物,如艾滋病病毒的RNA和DNA区别开来。这些标记物会将细胞组织当作病毒进行错误识别,对结果分析造成背景干扰。
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分子生物学技术在诊断细胞学中的应用
自人类开始重组DNA实验25年后的今天,分子生物学技术已经成为一种定量的分子诊断(molecular diagnostics)手段,并在不断影响着传统的诊断技术.一般认为,常用的分子生物学技术包括核酸杂交分析和各种基因扩增方法,但不包括免疫细胞化学法.目前临床常用的技术有Southem印迹杂交、多聚酶链反应(PCR)及其扩增产物的电泳分析、原位杂交和荧光原位杂交(FISH)等;其他较新的分子生物学技术,如生物芯片和核酸扩增的原位检测,亦将很快用于细胞学的研究和诊断[1,2].传统的肿瘤细胞学诊断方法是根据经验来判断是否为恶性细胞,缺乏客观指标;而分子生物学技术具有高度的特异性和敏感性,是细胞学诊断的重要手段.
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原位检测细胞凋亡率及增殖率对骨髓增生异常综合征的诊断意义
观察原位检测骨髓细胞凋亡率及增殖细胞核抗原(PCNA)表达率在MDS临床鉴别、疗效观察及向白血病转化中的诊断作用.采用原位末端转移酶介导标记(TUNEL)法和免疫组化ABC法对60例MDS,30例AML,21例CAA,16例溶血性贫血,15例巨幼细胞性贫血以及30例正常对照进行检测,统计凋亡细胞阳性率及PCNA表达率.结果发现,骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率在各类疾病的表达有显著差异,低增生MDS可与其他疾病相鉴别,MDS转化的白血病与原发白血病的骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率无差异,临床治疗对MDS组,CAA组,AML组骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率有显著影响.结论:原位检测骨髓有核细胞凋亡率及PCNA阳性表达率可作为MDS临床诊断、鉴别诊断的有效方法,临床治疗对凋亡率及PCNA表达率有明显影响,可作为疗效判断指标之一.
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幽门螺杆菌感染与慢性胃炎胃黏膜组织中COX-2、iNOS表达的相关性研究
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染对曼性胃炎胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)表达以及对胃上皮细胞增生与凋亡的影响,阐明Hpylori可能的致癌机制.方法:22例经胃镜及病理确诊为慢性浅表性胃炎患者,采用快速尿素酶及改良Giemsa染色法检测Hpylori;采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测胃黏膜中COX-1、COX-2和iNOS的表达;以染色法原位检测胃上皮细胞的凋亡;以免疫组化法检测胃上皮细胞的增生.结果:与正常对照组相比,Hpylori相关性胃炎胃黏膜组织COX-2和iNOS表达明显增高,增生、凋亡指数差异显著;Hpylori感染导致的COX-2和iNOS表达程度与胃黏膜上皮细胞增生、凋亡呈正相关(r=0.716,0.603,P<0.01;r=0.665,0.572,P<0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜COX-2和iNOS的高表达,与胃上皮细胞的增生与凋亡失衡有关,从而参与致癌.
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甘氨鹅脱氧胆酸钠致阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中bcl-2 mRNA的表达意义
目的:探讨bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的调控作用.方法:健康♂Wistar大鼠,进腹,游离出胆总管,于肝门部结扎胆总管并切断,远端再予以结扎.进腹后不结扎切断胆总管作为阴性对照.结扎后3,7,14,21 d处死大鼠,每组8只.采用胶原酶原位肝灌注法获取体外培养正常大鼠及阻塞性黄疸大鼠肝细胞.分别收取正常大鼠及胆总管结扎大鼠肝细胞1×109/L-1,用Trizol试剂盒一步法提取大鼠肝细胞总RNA,行RT-PCR扩增;用PCR扩增bcl-2和对照β-actin基因片段;分离的正常大鼠及胆总管结扎14 d大鼠的肝细胞行原代培养,培养板内置小飞片,使用100μamd.L-1甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法分析肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测.结果:体外培养正常大鼠及结扎3 d大鼠肝细胞bel-2 mRNA的表达为阴性,仅见β-actin条带;胆总管结扎大鼠体外培养肝细胞在结扎后7 d即可见肝细胞内bel-2 mRNA的表达,其吸光度A值为O.13±0.15;结扎后14、2l d也可检测其表达,bcl-2 mRNA吸光度在结扎14 d达高峰,为O.56±0.21,且与结扎7、2l d相比,两者差异有显著性(P<0.05);100tanol@L-1的G,CDC作用正常大鼠肝细胞后,凋亡明显增加,凋亡率为34.9±2.9%;胆总管结扎14d大鼠的肝细胞凋亡比率为15.6±2.1%,100μanol@L-1的GCDC作用胆总管结扎14 d大鼠肝细胞后,凋亡率无明显增加,为17.3±1.1%,两者差异无显著性(P>0.05);GCDC作用的两组大鼠肝细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05).结论:阻塞性黄疸大鼠肝细胞有bcl-2基因的表达,正常大鼠肝细胞则无表达;在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达bcl-2来抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用.
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幽门螺杆菌在胃癌及其癌前疾病中的原位检测及意义
目的:探讨pylori感染在胃癌及癌前疾病中的分布状态以及在胃癌的发生及分化中的作用以及免疫组化法检测Hpylori感染的价值.方法:随机选取辽宁省庄河地区不同胃疾病胃黏膜活检标本327例,包括慢性浅表性胃炎63例、萎缩性胃炎62例,胃癌202例,常规HE染色及免疫组织化学染色,观察黏膜、黏液Hpylori感染密度.结果:不同胃疾病Hpylori在胃黏膜定植状态为浅表性胃炎、萎缩性胃炎高于胃癌(X2=96.998,87.542,均P<0.01),胃癌组织低于癌周黏膜(X=25.378,P<0.01),肠型胃癌高于弥漫型胃癌(X2=19.253,P<0.01).不同胃疾病Hpylori在胃黏液游离状态为H pylori密度评分≤2时,浅表性胃炎、萎缩性胃炎低于胃癌(X2=6.526,6.218,均P<0.01),Hpylori密度评分>2时,浅表性胃炎、萎缩性胃炎高于胃癌(X2=20.252,46.248,均P<0.01),萎缩性胃炎高于浅表性胃炎(X2=4.746,P<0.05),胃癌与癌周黏膜无统计学差异,肠型胃癌高于弥漫型胃癌(X2=6.784,P<0.01).结论:不同胃疾病Hpylori分布,浅表性胃炎、萎缩性胃炎高于胃癌,胃癌低于癌周黏膜.肠型高于弥漫型.黏液内游离Hpylori密度评分胃癌组织与癌周黏膜无差异.免疫组化染色检测Hpylori优于HE.
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病理学检测在慢性乙型肝炎诊断治疗中的价值
0引言乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒,感染肝组织后,常使肝脏出现一定的病理变化,通过对活体或尸解肝组织病理检查,可以对病变的器官或组织直视地观察形态和结构的改变、了解病变的发展阶段及其趋势,分析判断机体的抗病毒机能状态,是明确诊断、判断炎症活动度、纤维化程度以及药物疗效的金标准.此外,采用分子病理学的检测技术还可以对肝组织中的乙肝病毒的抗原或核酸进行原位检测,以验证或确定HBV的感染及病毒复制状态.
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肝细胞癌DNA修复酶hMTH1基因mRNA及其蛋白的表达
目的:通过检测DNA修复酶hMTH1 mRNA及其蛋白在肝细胞癌组织及细胞株中的表达,探讨hMTH1在肝细胞癌发生、发展及防御机制中的作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究肝癌(HT,n=33)、癌旁组织(HST,n=33)和正常肝细胞株(L-02)、肝癌细胞株(SMMC7721,HepG2)中hMTH1mRNA的表达,同时采用免疫组织化学方法原位检测了上述的肝癌组织(n=17)及癌旁组织(n=17)中hMTH1蛋白的表达.结果:绝大部分检测对象中均有不同程度hMTH1 mRNA及其蛋白的表达.肝癌组织中hMTH1 mRNA的表达较癌旁组织显著升高(t=2.424,P=0.021<0.05);SMMC7721,HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达显著高于L-02细胞(F=6.810,P=0.009<0.01).SMMC7721与HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达没有显著差异(P=0.395>0.05).hMTH1蛋白主要在肝细胞胞质中表达,肝癌组织中hMTH1蛋白水平明显高于癌旁组织(t=2.618,P=0.019<0.05).结论:hMTH1mRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞株中表达升高.
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核因子-KB与大肠肿瘤细胞凋亡及增生的关系
目的:通过观察大肠腺瘤、腺癌和正常大肠组织中的细胞凋亡、细胞增生及其调控基因Bcl-2,BcI-Xl,C-myc和核因子-κB的表达状态,探讨核因子-κB在大肠癌发病过程中的作用.方法:利用DNA缺口末端标记技术和NF-кB,Bcl-2,Bcl-Xl,C-myc,PCNA蛋白免疫组化染色,原位检测30例大肠腺瘤和30例大肠腺癌中凋亡细胞、细胞增生和NF-кB,Bcl-2,Bel-Xl,C-myc阳性表达细胞的密度和分布,以10例正常大肠组织作对照.结果:NF-fcB,Bcl-2,Bcl-Xl,C-myc蛋白的表达率和表达强度腺癌和腺瘤高于正常组织(70.9±7.2vs 54.0±4.5 vs 30.6±2.4;78.2±8.3 vs 55.6±6.5 vs 11.0±1.9;77.3±6.5 vs 56.4±4.7vs 9.3±1.1;70.3±6.7 vs 50.1±4.2vs14.2±1.7,P<0.01),腺癌高于腺瘤(70.9±7.2vs54.0±4.5;78.2±8.3vs 55.6±6.5;77.3±6.5 vs 56.4±4.7;70.3±6.7vs 50.1±4.2,P<0.01).腺瘤和腺癌中的凋亡细胞指数均高于正常组织(105.9±6.1 vs31.5±3.7vs 10.0±1.5,P<0.01),腺瘤高于腺癌(105.9±6.1vs 31.5±3.7,P<0.01).腺癌和腺瘤中的细胞增生高于正常组织(75.4±5.6 vs 50.7±4.9vs 29.6±3.0,P<0.01),腺癌高于腺瘤(75.4±5.6 vs 50.7±4.9,P<0.01).结论:NF-κB在大肠肿瘤中促进细胞增生、抑制细胞凋亡,在其发病过程中发挥重要作用.
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自发性高血压大鼠心肌凋亡及bcl-2、bax蛋白的表达
1材料与方法8周龄自发性高血压大鼠(SHR)30只,雌雄各半.随机分为两组,分别为缬沙坦组和无药组各15只.8周龄雄性Wistar大鼠15只作为正常血压对照组.缬沙坦组给予血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂,缬沙坦20mg·kg-1·d-1,溶解于饮用水中每天1次胃管灌入.无药组及正常血压对照组每天饮用水10 ml/kg灌胃.每2周测尾动脉血压.至16周龄所有大鼠乙醚麻醉后断头处死,迅速取左心室组织(包括室间隔)称重.计算心脏指数=心脏重量/体重(mg/g).采用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术原位检测凋亡细胞.采用免疫组织化学定位研究心肌组织bcl-2及bax蛋白表达情况.同时应用Western印迹定量研究心肌bcl-2及bax蛋白表达.研究数据以-x±s表示,P<0.05为差异有显著性意义.
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原位检测细胞凋亡率及增殖率在骨髓增生异常综合征诊断中应用
细胞凋亡与增殖对机体的发育、存活及保持正常生理功能都有重要意义,并参予疾病的发生和发展.造血细胞凋亡与增殖紊乱在不同血液疾病中表现不一.因此测定有核细胞凋亡率及增殖率为骨髓增生异常综合征(MDS)等血液疾病的临床诊断、鉴别诊断提供了可能性.我们采用原位末端转酶标(TUNEL)法原位测定骨髓有核细胞凋亡率,采用免疫组化方法测定增殖率,并结合苏木精复染首次在骨髓涂片上区别粒、红两系有核细胞凋亡率和增殖率,具有简单、灵敏、经济、特异性高的特点.
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端粒酶基因在恶性淋巴瘤和良性淋巴结病变中的表达
我们应用原位杂交技术对良性淋巴结病变和恶性淋巴瘤进行端粒酶基因hTR(human telomerase RNA component)和限速组分hTRT(human telomerase reverse transcriptase)的原位检测,探讨端粒酶蛋白亚单位hTRT基因在恶性淋巴瘤中的表达及其意义,结合文献探讨端粒酶在淋巴造血系统的表达及恶性转化过程中的调节机制.
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肺癌中增殖细胞核抗原表达的意义
增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)能真实地反映细胞增殖活动 [1].近年来,PCNA作为原位检测肿瘤细胞增殖状态的一种新技术开始应用于肿瘤细胞动力学研究,并实验应用S-P免疫组化方法研究PCNA在肺癌中表达的临床意义.
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PBL教学法在免疫组织化学教学中的应用
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体结合的特点,用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行原位检测的技术[1].在临床常规病理诊断中,免疫组织化学是一种不可缺少的手段.病理专业本科生对这项技术的掌握程度直接影响到日后的临床和科研工作.传统的教学模式以教师讲授为主,学生被动的接受知识,抑制了学生学习的主动性和积极性.PBL(problem-based learning)是指基于现实世界的问题,以学生为中心的教育方式,已成为近年来国际上受到广泛重视的教学模式[2].本研究将PBL教学模式应用于病理专业本科生免疫组化的教学中,使学生的知识、能力和素质协调发展,促进了教学质量的提高.
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乳腺癌端粒酶活性原位检测与雌、孕激素受体的相关性研究
乳腺癌为一常见病,多发病,近年来其发病率和死亡率均呈上升趋势.但其与乳腺纤维腺瘤,纤维腺病的诊断和鉴别诊断还存在一些棘手问题,给临床治疗和预后评估造成困难.同时,据文献报道端粒酶活性,雌激素与乳腺癌组织发生关系密切[1,2],故我们采用端粒酶活性原位标记技术(ISLT)对乳腺癌进行临床病理研究,探索其在病理诊断上的意义及其与雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)之间的关系.
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生物医学上现实的心脏储备模型的研究和展望
心脏建模不但具有理论和方法学意义,也具有重要的临床意义,例如,某些临床指标离开了心脏的几何模型将无法计算.在心脏建模中至少存在四个问题:(1)在心脏的几何模型的临床应用中存在着个体化的困难,例如,把具体病人心脏的影象检测数据与理想的几何形状拟合所报告的射血分数值所带来的误差;同时,心脏超声检查心腔体积定量计算研究报告中缺少金标准的选择和对照;(2)在心脏的力学模型方面,心肌收缩能力概念本身至少存在两个严重缺陷,即缺乏能在原位检测而又无可非议的有力指标,特别是缺少可接受的无创性指标,不能区别心肌收缩能力改变与负荷和心率改变在细胞层次上机制,这限制了心脏力学模型的实用性;(3)对不同层次上的心脏模型作生物医学上现实的整合亟待进行,以期对临床心脏病学作出更大支撑;(4)缺少心脏储备建模的研究,而作为心脏病的严重后果的心力衰竭的基本问题正是心脏储备的降低.
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原位检测骨髓粒、红两系凋亡率对骨髓增生异常综合征的诊断意义
目的:观察原位检测骨髓有核细胞凋亡率在粒细胞系及红细胞系的表达.方法:采用原位末端转移酶介导标记(TUNEL)法对60例MDS、30例AML、21例CAA、16例溶血性贫血、15例巨幼细胞性贫血以及30例正常对照者骨髓标本进行检测,统计凋亡细胞阳性率在粒细胞系及红细胞系的表达.结果:骨髓有核细胞粒、红两系凋亡率在各类疾病的表达有显著差异,MDS的粒系凋亡率高,CAA的红系凋亡率高,AML粒、红两系凋亡率均低于其它疾病,巨幼贫红系凋亡率明显高于正常对照,低增生MDS可与其它疾病相鉴别.结论:原位检测骨髓有核细胞凋亡率在粒、红两系的表达可作为MDS等疾病临床诊断、鉴别诊断的有效方法,以及MDS病情进展的动态观察指标.
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人乳头瘤病毒感染中细胞生长分化标志分子的表达
角蛋白10(K10)、角蛋白17(K17)、角蛋白16(K16)、角质形成细胞转谷酰胺酶(TGK)、细丝聚集素是表皮细胞增生分化的重要标志分子.在病理情况下伴随着表皮角质形成细胞的生长分化异常,这些分子可有异常表达[1,2].我们通过免疫组化LAB法,以银屑病和正常人皮肤为对照,原位检测了K17、K16、TGK、细丝聚集素、K10在扁平疣、寻常疣、尖锐湿疣中的表达情况,现报道如下.
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TUNEL法与EnVision法多重染色技术的应用
我们在酒精性肝病及慢性病毒性肝炎的病理研究中,采用TUNEL法原位检测凋亡细胞,选用简便而敏感的EnVision法免疫组化染色,分别显示肝星状细胞、枯否细胞及肝相关淋巴细胞(Pit细胞)以改良Masson三色染色法做对比染色以显示肝纤维化程度。其结果背景清晰、反差鲜明,取得了较好的效果。
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先天性无神经节细胞症的病理学诊断研究进展
先天性无神经节细胞症(hirschsprung disease,HD)又称先天性巨结肠症,是一种由于肠壁黏膜下层神经丛和肌间神经丛中神经节细胞缺失导致的先天性肠道阻塞性疾病.临床诊断HD除了依据典型的临床表现、钡剂灌肠X线片、直肠测压外,病理检查仍是金标准.目前常用的病理检查方法是苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)染色,研究较广泛的是免疫组织化学染色法,而相关基因表达蛋白的原位检测能从基因水平解释HD的发病机制,有广阔的应用前景.本文综述近年来病理技术在HD诊断方面的进展.