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枯否细胞在酒精性肝病发病中作用的研究进展
酒精是一种常见的肝脏毒物,过度饮酒会导致肝脏发生脂肪变性、坏死和再生,引起酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD).ALD早期表现为可逆性的酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL),并可逐渐进展为酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌.在欧美发达国家,酒精一直是引起肝脏疾病的重要因素;在我国,ALD的发病率呈现逐年增高趋势,已成为不可忽视的公共卫生问题[1].流行病学调查显示,几乎所有的重度饮酒者都会出现脂肪肝,其中10％～35％会发展为酒精性肝炎,10％ ～ 20％会发展为酒精性肝硬化.ALD发病分子机制复杂,目前尚无有效防治药物.尽管早期出现的AFL具有一定的可逆性,但部分AFL患者即使戒酒仍然会向重度ALD进展[2].
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谷氨酰胺对大鼠枯否细胞抗原提呈的免疫调节作用
目的:观察谷氨酰胺对大鼠枯否细胞抗原提呈的调节作用.方法:以特异性抗原——破伤风类毒素(TT)、体外致敏的大鼠枯否细胞和体内致敏的大鼠胸腺T淋巴细胞,作为枯否细胞抗原提呈功能的检测系统,3H-TdR掺入量反映胸腺T淋巴细胞受特异性抗原TT刺激后的增殖状况.结果:标准培养液中(谷氨酰胺浓度为2mmo1/Lo1/L),胸腺T淋巴细胞3H-TdR掺入量为4841±619DPM/×106cells,掺入率为33.89%;培养液中谷氨酰胺浓度降至0.50mmol/Lol/L以下时,3H-TdR掺入量为3179±566DPM/×106cells.掺入率为23.67%,差异显著(P＜0.05).结论:体外培养液中谷氨酰胺缺乏或不足将下调大鼠肝脏枯否细胞的抗原提呈表达,导致枯否细胞免疫功能抑制.
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五灵胶囊对脂多糖诱导枯否细胞内核转录因子-κB表达的作用
目的:通过体内、体外实验探讨五灵胶囊(WL)对免疫性肝脏炎症反应的作用机制.方法:制备卡介苗(BCG)+免疫佐剂+脂多糖( LPS)诱导小鼠免疫性肝损伤模型,WL灌胃给药12d,处死小鼠分离血清并制备肝组织蛋白;予大鼠WL 10、6.25g/kg灌胃4d,腹主动脉取血并制备含药血清;另取SD大鼠分离原代肝细胞和原代枯否细胞( KCs);采用Transwell小室下层培养KCs,含药血清-KCs条件培养上清对小室上层肝细胞作用.酶法测定免疫性肝损伤小鼠血清AST、ALT及条件培养上清中AST、ALT和LDH-L活性.取KCs培养成单层并同步化24h,PDTC和WL分别干预KCs 24h,再加入60μg/L的LPS诱导121,Real-timePCR检测LPS诱导KCs表达MCP-1、IL-1、TNF-α mRNA水平,Western Blot检测免疫性肝损伤肝组织中和体外培养KCs表达TNFR Ⅰ、NF-κBs亚蛋白及IκK β、IκB.结果:WL明显降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性并抑制肝组织内活化NF-κB信号通路;含药血清Ⅰ、Ⅱ组明显抑制活化KCs分泌促炎因子损伤肝细胞,WL抑制LPS诱导KCs表达NF-κBs信号通路蛋白,下调MCP-1、IL-1、TNF-αmRNA表达.结论:WL治疗慢性肝病炎症反应的作用机制与下调活化NF-κBs信号通路蛋白,阻滞KCs释放过量促炎因子所致肝细胞损伤相关.
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降酶合剂对内毒素刺激大鼠肝脏枯否细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α的影响
目的:研究中药复方降酶合剂对内毒素(LPS)刺激肝枯否细胞(KC)分泌细胞因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否具有调节作用.方法:利用血清药理学方法制备SD大鼠降酶合剂和联苯双酯的含药血清,分别以LPS和含药血清刺激SD大鼠KC,4h后吸取培养上清,采用ELISA夹心法检测其中细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α水平.结果:培养细胞在加入LPS刺激后,上清中IL-6、IL-8和TNF-α浓度明显高于对照组(P＜0.01).而在加入降酶合剂后,上清中的IL-6、IL-8和TNF-α水平与未加降酶合剂者比较有明显下降(P＜0.01).结论:降酶合剂对慢性肝病患者降低ALT的作用可能与其通过对机体免疫机制的调节,降低IL-6、IL-8和TNF-α等细胞因子的产生有着密切的关系.
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鱼油对高果糖高脂高胆固醇饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的影响
目的 探讨鱼油对高果糖高脂高胆固醇饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预效果.方法 45只6周龄C3H小鼠随机分为3组:普通饲料组(对照组)、猪油组(模型组)、鱼油组(干预组).分别在4、8、16周末处死小鼠,每组次5只.观察血生化指标,肝指数(肝脏湿重/体重)、肝脏炎症程度及炎症相关基因的表达情况.结果 16周末模型组血清总胆固醇(TC)和血清ALT及AST比对照组显著升高,鱼油组TC和ALT、AST水平与猪油组相比明显下降.基因表达检测显示猪油组单核细胞趋化因子MCP-1的表达在第4周显著上调(P＜0.05),而鱼油组MCP-1mRNA水平明显低于猪油组(P＜0.05).猪油组TNF-α和TGF-β在第8周表现出上调趋势,鱼油组对此上调有抑制作用.HE染色显示猪油组和鱼油组在第8、16周出现明显的脂肪变及炎症细胞浸润.猪油组的炎症浸润较鱼油组显著.肝库普弗细胞的标记物CD68在8周(P＜0.05)、16周表达上调,鱼油组对此上调有抑制作用.结论 鱼油能减轻高果糖高脂高胆固醇诱导的小鼠NASH肝损伤.
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高脂高果糖诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠枯否细胞及其信号分子的活化
目的 探讨高脂高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠枯否细胞(KCs)活化及其信号通路蛋白的变化,了解KCs在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)致病机制中的意义.方法 将20只6～8周龄SPF级C3H小鼠随机分为4组(正常组、果糖组、高脂组、高脂果糖组)饲养,每组5只.16周后处死小鼠,做肝脏病理检查,同时使用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测肝组织中F4/80、NF-κB、p-AKT、AKT的表达情况.结果 与正常组比较,果糖组、高脂组、高脂果糖组肝组织脂质沉积明显,肝脏HE染色存在明显的炎症及肝细胞脂肪变,高脂高果糖组为严重.与正常组比较,3组模型组小鼠肝组织中F4/80、NF-κB显著升高,果糖组p-AKT(P＜0.01)、高脂高果糖组AKT(P ＜0.05)明显降低.结论 高脂高糖饮食可使C3H/HeN小鼠出现典型的非酒精性脂肪肝表现,NAFLD形成涉及肝组织中KCs活化及其相关信号通路的激活.
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RNA干扰TLR4信号通路对枯否细胞吞噬功能的影响
目的 探讨RNA干扰Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路对枯否细胞(Kupffer cells,KCs)吞噬功能的影响.方法 以RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞为研究对象,经QPCR验证得到优干扰RNA为Tlr4-mus-1567后,以正常细胞为对照组,Negative Control RNA 干扰为NC对照组,Tlr4-mus-1567 RNA干扰为实验组,倒置显微镜观察各组细胞吞噬酵母菌情况,并测定各组的吞噬细胞百分数和吞噬指数,组间进行比较.结果 实验组平均吞噬细胞百分数较正常对照组明显降低(17.67％±3.51％和32.00％±3.00％,P＜0.01),实验组平均吞噬指数较正常对照组明显降低(46.33％ ±7.51％和82.00％±6.08％,P＜0.01).结论 RNA干扰TLR4信号通路能降低KCs的吞噬功能.
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尾加压素Ⅱ对原代大鼠肝脏枯否细胞分泌TGF-β1的影响
目的 探讨尾加压素Ⅱ (UⅡ)对原代大鼠肝脏枯否细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 分离培养的原代枯否细胞接种于24孔板内培养,以不同浓度UⅡ刺激原代大鼠枯否细胞24 h,以1×10-6 mol/LUⅡ刺激原代大鼠枯否细胞不同时间,细胞上清液中TGF-β1蛋白含量用酶联免疫吸附试验方法测定;将原代枯否细胞分为对照组、UⅡ组、UⅡ+ Palosuran组.各组培养24 h、48 h,检测各组上清液中TGF-β1蛋白含量,以实时定量PCR检测各组TGF-β1及TβR Ⅰ的基因表达.结果 UⅡ以时间依赖方式促进枯否细胞分泌TGF-β1,在24 h达峰,48 h呈下降趋势(P＜0.01).UⅡ以浓度依赖方式促进枯否细胞分泌TGF-β1(P＜0.01).UⅡ的促TGF-β1分泌作用能被Palosuran所阻断(P＜0.01);UⅡ亦可促进TGF-β1及TβR Ⅰ的基因表达,Palosuran可抑制其高表达(P＜0.01).结论 UⅡ能够以时间及浓度依赖方式促进大鼠枯否细胞表达TGF-β1,而UⅡ受体拮抗剂Palosuran可阻断其高表达,其机制可能与抑制TβR Ⅰ的表达有关.
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肝硬化合并感染127例的临床研究
肝硬化患者为各种肝病的终末阶段,由于枯否细胞功能减退,极易发生细菌感染,影响预后,甚至严重感染威胁患者生命.但是某些感染呈隐匿性,难以发现,影响救治.本文以127例肝硬化合并感染的患者作为样本,对肝硬化合并感染进行回顾性分析.
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小分子干扰RNA沉默T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达对暴发性肝衰竭小鼠Kupffer细胞分泌细胞因子的影响
目的探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族3（Tim-3）的小分子干扰RNA（siRNA）质粒对暴发性肝衰竭小鼠肝Kupffer细胞活化的调节作用并探讨其相关机制。方法采用D-氨基半乳糖（D-Galactosamine，D-GalN）和脂多糖（LPS）建立暴发性肝衰竭小鼠模型。将30只大鼠分成对照组及模型组，每组15只。分离所有小鼠Kupffer细胞，用特异性靶向Tim-3的siRNA片段沉默小鼠肝Kupffer细胞中的Tim-3，同时将模型组小鼠进一步分成空转染组、特异siRNA组及阴性siRNA组。采用Real time PCR和Western blot检测Tim-3的表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Tim-3沉默后Kupffer细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）及IL-6的表达，并采用ELISA及Western blot检测核因子-κB（NF-κB）通路对炎性细胞因子表达的影响。结果模型组Tim-3 mRNA的表达显著高于对照组（48.3±6.8 vs.10.3±1.8，t=0.007，P<0.05），且特异siRNA组Tim-3 mRNA的表达（18.3±3.5）显著低于空转染组（58.3±7.5）及阴性siRNA组（57.3±7.1）的表达（F=118.5，P<0.05）。在转染后3、6、24 h，特异siRNA组中TNF-α（F=68.76、73.55、92.36，P均<0.05），IL-1β（F=32.1、86.5、112.3，P均<0.05）及IL-6（F=178.9、98.7、89.9，P均<0.05）的表达均显著高于空转染组及阴性siRNA组。同时，特异siRNA组的NF-κB蛋白的表达在转染3 h （F=48.9，P=0.020）、6 h （F=107.4，P=0.002）、24 h （F=148.9，P=0.001）均显着高于空转染组及阴性siRNA组。结论 Tim-3通过NF-κB蛋白表达参与了暴发性肝衰竭小鼠肝Kupffer细胞活化的调节。
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大鼠枯否细胞的分离、鉴定以及LPS刺激诱导TNF-α的表达
目的:分离、培养和鉴定枯否细胞,并探讨LPS刺激对细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达和分泌的影响.方法:采用在体原位灌注、密度梯度离心和早期细胞换液等方法分离纯化大鼠肝枯否细胞(kupffer cell,KC),并采用墨汁吞噬和ED2染色试验对分离培养的细胞进行鉴定.TNF-α表达和分泌采用RT-PCR和酶联免疫技术(cnzyme-linked immunosorbent,ELISA)检测.结果:成功分离和纯化大鼠肝KC,并经墨汁吞噬和ED2染色试验鉴定证实:LPS刺激KC细胞内TNF-α mRNA的表达较非刺激细胞(PBS处理细胞)显著升高(1.l0±0.02 vs 0.09±0.01,P＜0.001).另外,LPS刺激较非刺激KC培养上清液TNF-α蛋白的水平也显著升高(487.10pg/mL±5.56 pg/mL vs 39.41 pg/mL±15.30pg/mL,P＜0.001).结论:原位灌注和密度梯度离心法能有效分离纯化大鼠KC,LPS刺激可诱导其表达和分泌大量TNF-α.
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JAK/STAT信号通路在胰弹性蛋白酶诱导大鼠Kupffer细胞分泌IL-18中的作用
目的:探讨JAK/STAT信号通路在胰弹性蛋白酶(elastase)诱导Kupffer细胞分泌IL-18中的作用机制.方法:采用酶消化法及密度梯度离心法将提取的肝脏Kupffer细胞分为4组,A组:生理盐水组(正常对照组);B组:脂多糖(LPS)处理组;C组:LPS和elastase处理组:D组:AG490预处理组.采用酶免疫吸附(ELISA)法检测Kupffer细胞上清液中IL-18含量;细胞免疫荧光染色技术和Westem blot法检测细胞总蛋白中JAK2的表达.结果:与A组比较,B组在给予LPS刺激后.JAK2蛋白的表达以及上清液中IL-18含量均明显增加(IL-18:312.23±20.5 ng/Lvs 13.50±2.18 ng/L,P<0.01);C组在同时给予LPS和elastase刺激后,JAK2的表达显著升高,上清液中IL-18含量与B组比较也显著增加(P<0.01);而D组在预先给予AG490处理后,JAK2表达明显下降,上清液中IL-18含量也有不同程度降低,与C组比较差异有统计学意义(317.31±25.24 ng/L vs438.86±21.32 ng/L,P<0.01),但与B组比较,各值仅有轻微变化,差异无统计学意义.结论:抑制JAK/STAT通路的活化可下调elastase诱导Kupffer细胞分泌促炎症因子IL-18的表达,这可能有助于减轻急性胰腺炎时炎症反应和肝损伤.
关键词： 急性胰腺炎 JAK/STAT信号通路 白介素-18 枯否细胞 肝损伤 -
脂多糖对高糖环境下肝脏Kupffer细胞增殖和分泌及超微结构的影响
目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对高糖环境下肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)增殖和分泌功能及超微结构的影响.方法 将小鼠原代KCs培养扩增后随机分为4组:高糖组[(high glucose,HG),25.0 mmol/LD-葡萄糖],正常对照组[(normal control,CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖],LPS+高糖组[(LPS+high glucose,LPS-HG),25.0 mmol/LD-葡萄糖],LPS+正常对照组[(LPS normal+control,LPS-CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖].培养24 h后,LPS-HG和LPS-CON组分别加入等量LPS,继续培养6h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Luminex xMAP技术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平,透射电镜观察KCs细胞超微结构.结果 MTT比色法测定结果显示,KCs经LPS干预6h后吸光度(absorbance,OD)测值显著升高,HG和LPS-HG组的OD测值明显低于相对照的CON组和LPS-CON组(P＜0.05).流式细胞仪技术检测结果显示,KCs经LPS干预6h后G0/G1期细胞分布明显下降,S期+G2/M期细胞分布明显升高(P＜0.01).HG和LPS-HG组的G0/G1期细胞分布显著高于相对照的CON和LPS-CON组,HG和LPS-HG组的S期+G2/M期细胞分布显著低于相对照的CON和LPS-CON组(P＜0.01);Luminex xMAP技术结果显示,KCs经LPS干预6h后TNF-α、IL-1β、IL-6水明显升高,TNF-α和IL-1p的变化更为显著.电镜观察KCs结果显示,HG组可见自噬体形成,CON组个别细胞胞质内仅见少量空泡;LPS-HG组可见大量空泡及自噬体形成,LPS-CON组可见空泡形成而未见自噬体.结论 LPS能激活并强化高糖环境中肝脏KCs的增殖和分泌功能,高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.
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枯否细胞在肝纤维化中的作用
枯否细胞(Kupffer cells,KC)是肝脏内一种重要的非实质细胞,其在发挥防御作用的同时,可释放多种化学介质介导肝脏损伤,在诸多肝脏病理性改变中起重要作用.肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是诸多慢性肝病共同的病理过程,也是各种慢性肝病向肝硬化转归的中转站.KC分泌的细胞因子作为重要的影响因素,参与HF的发生与发展.因此,深入研究KC在HF发生与发展中的作用和机制,并研究与KC相关的抗纤维化治疗策略及方法,对于临床工作中防治肝脏损伤,提高患者生存率具有实际意义.
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氯磷酸二钠对急性坏死性胰腺炎大鼠肝损伤的影响
目的 探讨氯膦酸二钠对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肝损伤的保护作用.方法 SD大鼠48只,按随机表法分为对照组、ANP组和氯磷酸二钠组.采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型.利用薄膜法制备包裹氯磷酸二纳的脂质体.ANP组和氯磷酸二纳组于制模后立即经尾静脉分别注射空白脂质体和包裹氯磷酸二钠的脂质体.制模后2.6 h分批处死动物,取血检测血清淀粉酶(AMS)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及IL-6、IL-12的含量,取肝脏和胰腺组织,观察病理学变化.结果 对照组、ANP组和氯磷酸二纳组6 h点的ALT含量分别为(73±11)U/L、(257±33)U/L和(184±29)U/L;AST分别为(190±32)U/L、(590±70)U/L和(430±52)U/L;AMS为(814±80)U/L、(5031±471)U/L和(2843±236)U/L;IL-6为(26.7±5.7)pmol/L、(218.0±4.7)pmol/L和(112.3±8.0)pmol/L;IL-12为(4.2±1.0)pmol/L、(309.5±8.5)pmol/L和(153.7±6.3)pmol/L.ANP组和氯磷酸二纳组上述血清指标均显著高于对照组,而氯磷酸二纳组的含量又较ANP组显著降低(P值均<0.01).氯磷酸二纳组大鼠的胰腺及肝脏病理变化均较ANP组明显减轻.结论 静脉给予脂质体包裹的氯磷酸二纳对ANP大鼠的肝损伤具有一定保护作用.
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Clodronate脂质体对急性坏死性胰腺炎大鼠Kupffer细胞凋亡的作用
目的 探讨clodronate 脂质体对急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)大鼠Kupffer 细胞(KC)凋亡的诱导作用.方法 利用薄膜法制备 Clodronate 脂质体;采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠4 mL/kg体重制作ANP模型,分离培养ANP大鼠KC,加入50、100、150 μl的Clodronate脂质体进行干预,然后采用MTT法、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测KC细胞增殖、凋亡情况.结果 所制备的脂质体直径100～200 nm,透射电镜检查见其大小均匀;50、100、150 μl Clodronate 脂质体干预24 h后,KC的生长抑制率分别为17.4%、24.2%和31.1%;细胞凋亡率分别为(14.12±0.37)%、(18.74±0.43)%和(27.51±0.39)%,差异均有显著性(P<0.01);随着clodronate 脂质体量的增加,KC的DNA出现降解,逐渐呈现清晰的特征性梯状条带.结论 Clodronate 脂质体对ANP大鼠KC生长具有明显抑制作用.并可诱导其凋亡.
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Toll样受体在高迁移率族蛋白B1诱导严重烧伤后枯否细胞分泌促炎性细胞因子中的作用
目的:探讨Toll样受体(TLRs)在高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)诱导严重烧伤后枯否细胞(KCs)产生促炎性细胞因子TNF-α和IL-1 β中的作用.方法:32只健康成年雄性SD大鼠随机分为两组.烫伤组大鼠采用背部置于98℃水中12 s的方法制成30％TBSA Ⅲ度烧伤模型并立即行液体复苏,假烫组以室温水替代98℃热水且不予液体复苏.伤后24 h,分离出肝脏KCs,分别以0、50、100、200 ng/ml HMGB1刺激48 h,ELISA法检测上清液中TNF-α和IL-1β含量.另将烫伤大鼠肝脏KCs随机分为对照组(正常培养48 h)、HMGB1组(100 ng/ml HMGB1刺激48 h)、HMGB 1+ TLR2/TLR4抗体组(以20 μ g/ml TLR2抗体或TLR4抗体培养2h后加入100ng/ml HMGB1刺激48 h),ELISA法检测培养上清液中TNF-α和IL-1β含量,Northern blot法检测各组KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达.结果:不同浓度HMGB1刺激严重烧伤及假烫大鼠KCs后,上清液中TNF-α和IL-1β含量呈剂量依赖性升高,且烧伤组水平明显高于假烫组(P＜0.05或P＜0.01);同时,KCs中TNF-α和IL-1β mRNA表达也显著升高.TLR2抗体和TLR4抗体均明显抑制HMGB1诱导的KCs产生TNF-α和IL-1β水平的升高,且TLR2抗体对HMGB1诱导的IL-1β升高的抑制作用强于TLR4抗体,而TLR4抗体对HMGB1诱导的TNF-α升高的抑制作用强于抗TLR2抗体.结论:TLR2和TLR4介导了HMGB1诱导严重烧伤大鼠KCs促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达.
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肝移植术后移植肝组织P-选择素、ICAM-1基因mRNA表达的实验研究
目的研究移植肝组织P-选择素、ICAM-1基因mRNA表达变化以及供肝交感神经、枯否细胞对mRNA表达的影响.方法使用氯化钆抑制供肝枯否细胞、六甲胺阻断供肝交感神经,观察肝移植术后4,8,16,24 h移植肝P-选择素、ICAM-1 mRNA表达的变化.结果肝移植术后肝组织P-选择素、ICAM-1基因mRNA表达增高,阻断供肝交感神经和抑制供肝枯否细胞,可下调P-选择素、ICAM-1的mRNA表达.结论阻断供肝交感神经和抑制供肝枯否细胞能明显下调肝组织P-选择素、ICAM-1基因表达,减轻移植肝的缺血再灌注损伤.
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AA-861抑制5-LO途径对KC和HSC的影响
目的 探讨5-脂氧合酶(5-LO)特异性抑制剂AA-861对肝枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC)的活化、增殖和基因表达的影响.方法 (1)观察AA-861对脂多糖(LPS)诱导的活化KC凋亡、KC中5-LO mRNA和蛋白表达的影响;(2)分别将LPS和AA-861处理后的KC上清液加入静止HSC中,观察HSC的活化、增殖及基因表达情况.结果 (1)经LPS刺激后,KC中5-LO的mRNA和蛋白表达均显著增加,同时5-LO代谢产物的含量也显著增加;AA-861显著降低活化KC中5-LO mRNA和蛋白的表达及其培养上清中5-LO代谢产物的含量,并显著增加KC的凋亡,AA-861对静止状态的KC的凋亡和基因表达无明显影响.(2)加入活化KC上清液后,静止HSC的增殖显著增加,其活化相关基因如平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)等的表达也显著提高;加入AA-861处理后的活化KC上清液可抑制静止HSC的活化,降低其增殖力和活化相关基因的表达.结论 AA-861可通过抑制5-LO途径,诱导过度增殖的KC凋亡,从而抑制HSC的活化和增殖,并降低HSC活化相关基因的表达.
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人枯否细胞在同种肝移植免疫中作用机制初步探讨
目的 探讨肝脏枯否细胞(KC)在肝移植后早期免疫反应中的可能作用.方法 将KC和(或)异体PBMC共培养,收集细胞上清液,培养结束时分别收获培养的KC和PBMC.检测HLA-G在细胞表面的表达;测定上清液中NO、IFN-γ、IL-10和TGF-β1的浓度;MTT试验观察KC对淋巴细胞增殖的影响.结果 实验组及对照组中KC和PBMC表面均未检测到HLA-G的表达.与不含KC实验组相比,含KC实验组中,NO、IL-10和TGF-β1的产量显著升高,而IFN-γ呈相对偏低趋势;对照组中未能检测到IL-10和IFN-γ的分泌,仅含KC的对照组中含少量NO及TGF-β1,且显著低于实验组.MTT实验发现,不含KC实验组OD值显著高于含KC实验组及对照组.结论 体外KC接触异体PBMC后早期,各细胞膜表面均无HLA-G表达,但参与了NO及Th2/Th3样细胞因子的分泌调节,并能抑制淋巴细胞增殖反应,可能促进肝脏移植早期免疫耐受的形成.
