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端粒酶hTR基因在石蜡包埋肝脏活检组织中的原位杂交检测
为了探讨肝脏活检组织中端粒酶RNA基因 hTR表达与肝炎病毒表达的关系,及hTR与肝癌发生的关系,我们用原位杂交方法分析了70份石蜡包埋肝脏疾患组织中的hTR活性表达,及HBV HCV和HAV-IgmAb的检测结果,并与癌旁及正常组织进行比较,其中46份针吸活检肝组织:包括20份肝细胞癌,14份肝硬化,12份慢性肝炎;24份手术切除的肝细胞癌组织;2份尸解死婴肝脏组织做正常对照.
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肝细胞癌组织中细胞间隙连接蛋白Cx32的表达改变
目的:探讨细胞间隙连接蛋白Cx32在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及正常肝组织中的表达、定位及其在HCC发生中的意义和机制.方法:应用SP免疫组化方法检测Cx32蛋白在34例HCC组织和10例正常肝组织中的表达和定位.结果:Cx32蛋白在HCC及正常肝组织中的阳性率分别为38.2%和90%,经X2检验,Cx32蛋白在HCC中的表达低于正常肝组织(P<0.01).HCC各级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的阳性率分别为57.1%、40%和29.4%,其中HCCⅡ和HCCⅢ与正常肝组织相比在统计学上有显著性差异(P<0.05).并且随着HCC分化程度的降低,其阳性率也随之下降,但HCC各级之间在统计学上无显著性差异.Cx32蛋白在正常肝细胞中定位于相邻细胞间相互接触的细胞膜上;而在HCC中既定位于细胞质,又定位于细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上.结论:间隙连接蛋白Cx32在HCC中的表达下调及定位异常可能是HCC发生的重要环节.
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TDI-FP法分析肝细胞癌组织中HBV核心启动子双突变
目的:通过TDI-FP法检测肝细胞癌组织中HBV DNA核心启动子区A1762 T和G1764A双突变并分析二者之间的相关性,同时建立一种新的突变检测方法.方法:以20例肝细胞癌组织为研究标本,通过PCR扩增含有HBV DNA核心启动子区的DNA片段,然后用TDI-FP法检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值,鉴定nt1762和nt1764的基因型.结果:20例肝细胞癌组织中经HBV检测试剂盒鉴定后,18例为HBV感染阳性,阳性率为90%.经TDI-FP检测,其中有13例为T1762和A1764双突变型,1例为T1762-A1764/A1762-G1764突变杂合型,4例检测结果为阴性.经测序,阳性结果及突变杂合型与TDI-FP结果完全吻合,阴性结果中2例在nt1762前有8个核苷酸缺失突变,导致突变检测引物无法与模板结合,故产生TDI-FP检测出现假阴性结果.在肝细胞癌组织HBV DNA中,Ti762-A1764突变阳性率为75%,突变杂合型为5%,野生型为10%.结论:在肝细胞癌组织中,HBV感染率非常高,而且其核心启动子区出现nt1762和nt1764双突变率较高,提示双突变与肝细胞癌关系密切;同时本实验所建立的TDI-FP法操作快速简便,可以进行高通量自动化操作,具有进一步推广应用的前景.
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肝细胞肝癌组织中P21WAF1/CIP1与PCNA的表达及意义
目的:检测p21WAF1/CIP1与PCNA在肝脏各种病变组织中的表达与分布情况,探讨P21WAF1/CIP1与PCNA在肝细胞癌发病机制中的作用,以及在肝良性与恶性病变鉴别诊断中的价值.方法:采用免疫组织化学方法(Dako EnVision Systems)结合组织病理学观察,检测了36例慢性肝炎、28例不典型增生、52例肝细胞癌组织中的P21WAF1/CIP1与PCNA的表达与分布情况.结果:在慢性肝炎、不典型增生和肝细胞癌组织中,P21WAF1/CIP1阳性检出率明显下降,阳性检出率分别为72.2%(26/36),53.6%(15/28)和26.99%(14/52);三种病变组织中PCNA标记指数明显增加,分别为24.2±6.5%,55.6±7.2%和76.9±10.4%.P21WAF1/CIPI与PCNA的表达在三者之间均存在着显著的差别(P<0.05),明P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均与组织分化程度相关,即组织分化程度高,P21WAF1/CIP1表达多;组织分化程度低,P21WAF1/CIP1表达少或不表达;PCNA的表达则相反.结论:在肝细胞癌发病过程中,P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均有可能起着重要的作用;同时检测P21AF1/CIP1与PCNA的表达、分布情况,在肝癌患者预后判断中具有辅助诊断价值.
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肝细胞癌DNA修复酶hMTH1基因mRNA及其蛋白的表达
目的:通过检测DNA修复酶hMTH1 mRNA及其蛋白在肝细胞癌组织及细胞株中的表达,探讨hMTH1在肝细胞癌发生、发展及防御机制中的作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究肝癌(HT,n=33)、癌旁组织(HST,n=33)和正常肝细胞株(L-02)、肝癌细胞株(SMMC7721,HepG2)中hMTH1mRNA的表达,同时采用免疫组织化学方法原位检测了上述的肝癌组织(n=17)及癌旁组织(n=17)中hMTH1蛋白的表达.结果:绝大部分检测对象中均有不同程度hMTH1 mRNA及其蛋白的表达.肝癌组织中hMTH1 mRNA的表达较癌旁组织显著升高(t=2.424,P=0.021<0.05);SMMC7721,HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达显著高于L-02细胞(F=6.810,P=0.009<0.01).SMMC7721与HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达没有显著差异(P=0.395>0.05).hMTH1蛋白主要在肝细胞胞质中表达,肝癌组织中hMTH1蛋白水平明显高于癌旁组织(t=2.618,P=0.019<0.05).结论:hMTH1mRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞株中表达升高.
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肝细胞癌和癌周肝硬化组织中VEGF不同表达的比较
1998年EL-Assal等[1]发现VEGF在癌周肝硬化组织中的表达明显高于肝癌组织和非肝硬化组织,指出肝硬化组织中的肝细胞长期处于机械性的血流减少的环境中,组织中氧压力的降低强烈刺激VEGF的产生,得出结论:VEGF引起的血管发生是在肝硬化组织中而非肝癌组织中.我们在对肝细胞癌组织切片进行免疫组化的实验过程中也发现了同样的现象,因此想通过本研究进一步证实VEGF在肝硬化组织中表达较肝细胞癌组织中明显.
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肝细胞癌组织RASSF1A基因的表达及临床意义
RASSF1A是2000年报道从3号染色体短臂克隆出来的肺癌新型候选抑癌基因[1],有关其在人肝细胞癌组织标本中的转录表达以及与临床病理关系的研究报道甚少,为此我们就34例肝细胞癌病人癌与癌旁组织中RASSF1A mRNA的表达情况进行了观察,并与临床资料进行比较分析.
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多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达的检测在原发性肝细胞癌中的临床意义
化疗在原发性肝癌以手术为主的综合治疗中发挥着重要作用,而多药耐药的产生可能是其临床化疗失败的原因之一.近来研究提示MRP基因过表达参与了癌细胞多药耐药的发生[1],检测其表达可能具有重要的临床意义.本研究运用RT-PCR和免疫组织化学技术,检测原发性肝细胞癌组织中MRP的表达,结合临床病理资料,探讨MRP基因表达在原发性肝细胞癌中的临床意义.
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肝细胞癌组织内COX-2表达的临床意义
环氧合酶(cyclooxygenase,COX)又称前列腺素合成酶,是前列腺素合成过程中的限速酶[1].近研究表明,COX-2在肝细胞癌(HCC)等多种恶性肿瘤的癌变过程中起重要作用,且为肿瘤预防和治疗的潜在靶分子.本研究探讨肝细胞癌COX-2的表达情况及其表达与HCC临床病理生物学行为的关系.
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趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌组织中高表达的临床意义初探
目前肝细胞癌骨转移治疗总是姑息性放疗,如能预测其骨转移,筛选出术后骨转移高危人群,则能使用双磷酸盐类药物减少骨转移发生.
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Bcl-2、Bax、Bcl-2α导致凋亡双向调节作用在肝癌中的意义
为了解凋亡调节基因Bcl-2、Bax和Bcl-2α在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其双向调节作用,现应用免疫组化SP法,对57例肝细胞癌组织中Bcl-2、Bax、Bcl-2α的表达进行了观察和分析。1 材料和方法1.1 材料选用外科手术切除及肝活检诊断为肝细胞癌标本57例,经10%甲醛固定、石蜡包埋、5μm连续切片,分别做HE和免疫组化染色。鼠抗Bcl-2单克隆抗体及鼠抗Bax单克隆抗体均为Santa Cruz公司产品(购自北京中山生物技术有限公司),抗体稀释度为1∶200和1∶100;鼠抗Bcl-2α(Ab-1)单克隆抗体为Maxim公司产品(购自福州迈新生物技术有限公司),抗体稀释度为1∶50;SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。1.2 方法免疫组化染色采用SP法,抗原热修复用微波修复15分钟,4℃过夜,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固。PBS代替-抗设阴性对照,阳性对照为扁桃体组织。 结果判定标准:阳性细胞为胞浆或胞膜棕黄色染色,阳性表达程度分三级:低倍镜野阳性细胞少于1/3为(+)、1/3~2/3为(++)、大于2/3为(+++)。1.3 统计学处理系四格表及配对资料χ2检验。2 结果2.1 光镜所见 57例HCC中,40例癌组织光镜下为梁状和窦隙状结构,9例癌组织内见假腺样和腺泡状结构,15例癌组织部分或大部分区域呈透明细胞癌,2例癌组织周围见大量坏死。组织学分级,在57例HCC中,高分化者22例(38.6%),中分化者18例(31.6%),低分化者17例(29.8%)。2.2 免疫组化结果 Bcl-2、Bax主要定位于胞浆部分呈粗大颗粒状分布,阳性标本表达强度不尽相同。Bcl-2α定位于胞膜,部分胞浆表达,且表达程度以(+)~(++)为主。57例HCC癌组织中,Bcl-2、Bcl-2α和Bax的表达阳性率分别为40.4%(23/57)、17.5%(10/23)和89.5%(51/57)。其中高分化组中的阳性率分别为50.0%(11/22)、13.6%(3/22)和86.4%(19/22);中分化组中的阳性率分别为44.4%(8/18)、16.7%(3/18)、94.4%(17/18);低分化组中的阳性率分别为23.5%(4/17)、23.5%(4/17)和88.2%(15/17)。Bcl-2、Bax、Bcl-2α在不同分化程度的HCC中,表达阳性例数无显著差异(见表1)。
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bcl-2及其相关蛋白bax在肝细胞癌中的表达
采用免疫组化技术对28例肝细胞癌组织中bcl-2及相关蛋白bax的表达进行观察,探讨其在肝细胞癌发病中的作用.
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FXR 在肝细胞癌组织和癌旁正常组织中的差异表达
肝细胞癌(HCC)占原发性肝癌的90%。每年大约有67万新发病例,在全世界恶性肿瘤中,发病率占第五位,而死亡率则排第三,严重危害人民的健康[1]。HCC 的发生和发展是一个涉及多因素、多基因和多步骤的复杂过程[2],其具体机制仍在不断探索之中。近年来,越来越多的证据显示长期高水平胆汁的刺激、脂肪肝等机体代谢失调与 HCC 的发生有关[3,4]。法尼酯 X 受体(FXR)是核受体超家族的一员,人的 FXR 基因定位于12号染色体(12q23.1),主要在肝、小肠、肾及肾上腺组织中表达,调节胆汁酸代谢、胆固醇代谢、脂代谢,有维持机体代谢稳态的作用[5]。可见 FXR 的正常表达对抑制 HCC的发生有很大意义。在动物实验中,Yang F[6]首次发现 FXR 基因敲除的小鼠将会自发形成 HCC,随后 Kim[7]的研究也证实了这一结论。但是,人 HCC的形成与 FXR 表达的关系尚不清楚。本研究拟通过分析50例临床 HCC 患者癌组织及癌旁正常组织 FXR 表达的差异,探讨人 HCC 的形成与 FXR表达的变化关系。为 HCC 的临床治疗实践制定新策略及药开发新靶点提供理论基础。
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p73基因在肝细胞癌组织中的表达与临床意义
本文通过检测35例原发性肝细胞癌与相对应的癌旁组织中p73基因的表达及突变情况,结合临床资料,探讨肝细胞癌组织中p73基因的表达与临床预后的关系.
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肝细胞癌组织中CD44v6和p16基因的表达及意义
我们采用免疫组化方法,对肝细胞癌(HCC)组织进行CD44v6及p16基因检测,并结合临床随访资料分析、探讨其表达与HCC侵袭转移和预后的关系及两种基因表达的相关性.
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肝细胞癌组织中HBV、HCV和HGV感染的研究
为了从组织学角度探讨乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及庚型肝炎病毒(HGV)与肝细胞癌(HCC)之间的相互关系,我们采用免疫组织化学法,以抗-HBs,抗-HCV NS5及抗-HGV NS5 3种单克隆抗体(单抗),对26例HCC组织中的HBV、HCV及HGV的表达和分布情况进行了研究.
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人肝细胞癌组织中血管内皮生长因子及其受体的表达和临床意义
肝细胞癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居我国恶性肿瘤第二位.肝癌的发生、发展、浸润、转移与其脉管系统(包括微血管、微淋巴管)密切相关[1].血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)家族与血管、淋巴管系统的生长发育密切相关.
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肝癌相关成纤维细胞在人肝细胞癌组织中的表达情况及其与微血管密度的关系
目的 探讨肝细胞癌(HCC)中肝癌相关成纤维细胞(hCAF)和微血管密度(MVD)的表达情况,分析两者间的相关性.方法 选取2015年6月-2016年1月昆明医科大学第二附属医院收治的原发性HCC患者56例,均经病理组织学检查证实为HCC,男38例,女18例.根据Edmondson病理分级:低分化癌(Ⅲ、Ⅳ级)36例、中高分化癌(Ⅰ、Ⅱ级)20例.采用免疫组织化学染色检测HCC组织中hCAF[结果以α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表示]和MVD(结果以MVD-CD34表示)表达情况,分析hCAF和MVD与HCC患者临床和病理特征间的关系,采用Spearman法分析hCAF与肿瘤MVD间的相关性,采用Western印迹法检测不同Edmondson病理分级HCC组织中hCAF(结果以α-SMA/β-actin表示)和CD34(结果以CD34/β-actin表示)蛋白表达情况.结果 Edmondson病理分级Ⅲ、Ⅳ级和肿瘤直径>5 cm的HCC组织中hCAF值和MVD值分别显著高于Edmondson病理分级Ⅰ、Ⅱ级和肿瘤直径≤5 cm的HCC组织(P值均<0.05),不同年龄、性别、美国东部肿瘤协作组体能状态评分(ECOG评分)、肝功能Child分级、甲胎蛋白水平、癌周肝组织情况间,以及不同肝炎病毒感染、有无肝内或淋巴结转移者间HCC组织中hCAF值和MVD值的差异均无统计学意义(P值均>o.05).Spearman法分析结果显示,HCC组织中hCAF与MVD表达水平呈正相关(r=0.894,P=0.000).癌旁正常组织和Edmondson病理分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级HCC组织中α-SMA/β-actin表达量分别为0.18±0.02、0.24±0.03、0.63士0.06、0.75±0.07和0.88±0.09,CD34/β-actin表达量分别为0.33±0.02、0.74±0.08、1.82±0.12、2.20±0.13和2.51±0.12;Edmondson病理分级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级HCC组织的a-SMA/β-actin和CD34/β-actin表达量均显著高于癌旁正常组织(P值均<0.05),且随着Edmondson病理分级增加,α-SMA/β-actin和CD34/β-actin表达量有升高趋势.结论 hCAF可能对人HCC组织中的血管生成具有一定促进作用.
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VEGF单克隆抗体在肝细胞癌中的表达及临床意义
血管内皮细胞生长因子(VEGF),是特异血管内皮细胞刺激因子,它刺激肿瘤的血管形成,从而为肿瘤的生长提供了重要的条件,同时也是抗血管生成治疗肿瘤的理想靶位。我们应用VEGF单克隆抗体对一组原发性肝细胞癌标本进行了检测,旨在探讨VEGF单克隆抗体在肝细胞癌组织中的表达情况及临床意义。……
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MicroRNA-185通过靶向调节 DN-MT1/PTEN/Akt通路抑制肝细胞癌的生长
近来研究表明miRNAs与肝癌的发生密切相关,然而单个miRNAs的具体作用机制仍未完全阐明。作者对microR-NA-185(miR-185)在肝细胞癌生物学功能和分子机制方面做了一些研究。实验发现,与非肿瘤性的肝脏实质相比, miR-185在人肝细胞癌组织中的表达减少;qRT-PCR检测显示,与原代肝细胞相比, miR-185在人肝细胞癌细胞中的表达下降;在体外人肝细胞癌细胞中miR-185的过表达会抑制细胞的增殖和侵袭,并且阻止SCID小鼠体内肿瘤的生长。miR-185的过表达能够抑制肝细胞癌细胞中DNMT13′端非翻译区域荧光素酶的活性,当 miR-185结合位点发生突变时,就不存在该效应;miR-185的复制或过表达会减少肝细胞癌细胞中DNMT1蛋白的表达。这些结果表明DNMT1是miR-185在肝细胞癌细胞中的靶向作用蛋白。 DNMT1在miR-185诱导抑制肝细胞癌的增殖中所起的作用,可进一步通过DNMT1的过表达阻止miR-185诱导抑制肝细胞癌细胞的增殖和侵袭这一事实所证实。 miR-185的复制或过表达能够减少PTEN启动子DNA甲基化并且提高PTEN的表达,从而抑制Akt磷酸化;如果DNMT1过表达,这些效应刚好相反。以上结果表明:miR-185靶向作用于DNMT1,通过诱导PTEN和抑制Akt,从而抑制肝细胞癌细胞的增殖,活化或激活miR-185可能成为肝细胞癌新的治疗策略之一。