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2.89肠易激综合症患者回结肠黏膜VIP活性与结肠动力的关系研究
目的通过对IBS患者回结肠黏膜上皮细胞内肽类激素-血管活性肠肽(VIP)免疫活性的测定,研究其在细胞内含量与IBS患者的不同症状关系,探讨IBS的发病机理,指导临床治疗.方法选择IBS患者80例,每位患者通过结肠镜检查取回结肠结合处黏膜3块,采用免疫组化方法对肠粘膜组织进行处理、染色.
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2.115Cajal间质细胞介导促胰液素抑制胃平滑肌运动
目的观察大鼠ICC介导促胰液素抑制胃平滑肌细胞收缩作用.方法采用大鼠胃体上1/3起博区及胃窦环行肌8×2mm肌条在95%O2,5%CO2的恒温37℃灌流Kreb's液,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动.用美蓝(methylene blue)加光照破坏ICC,观察促胰液素作用,并用鼠抗c-kit抗体(ACk2)免疫组化方法对破坏平滑肌条ICC进行鉴定.
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Cajal间质细胞在先天性巨结肠发病中的作用
先天性巨结肠(HD)是儿童较常见的疾病,其病理表现主要是结肠远端神经节细胞完全缺乏.近来,有学者发现并证实肠道间质细胞(intestital cell of Cajal,ICC)是肠道一种特殊类型细胞,其在控制胃肠道运动方面起重要作用,它可产生持续性慢波,引起肠道蠕动.ICC的异常与许多肠道疾病的发生有关.我们采用免疫组化方法,观察ICC在HD各肠段的表达情况,以探讨ICC与HD的关系.
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免疫组化技术(四)
3 免疫组化方法这里有大量用于定位和验证组织抗原的免疫组化染色技术.选择合适的技术应基于各种研究标本的类型、研究的预处理的类型等参数,例如:冷冻切片、石蜡切片、树脂切片或细胞学制品以及所需敏感性的程度.
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免疫组化技术(三)
2.3 标记物2.3.1 酶标记酶是在免疫组化中广泛使用的标记.通过标准的免疫组化方法,酶能够与色原一起进行孵育,产生适用于光学显微镜的稳定有色的反应终产物.
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免疫组化技术(一)
1 引言新引进的有关预测预后方面的免疫组化标记物在患者的治疗和处理上产生了巨大的影响.过去的60年中,关于免疫组化方法的理论在逐步发展,方法学上实现了在甲醛固定和石蜡处理的组织上使用抗体和适当的标记系统来鉴别特异性或高选择性的细胞表位.当前诊断实验室的趋势是尝试着尽量在甲醛固定石蜡包埋的组织上进行免疫组化研究,避免使用冷冻切片.
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髓系肉瘤的临床和病理特征
目的:探讨髓系肉瘤的临床病理特点、鉴别诊断和治疗方法.方法:回顾性分析10例髓系肉瘤的临床表现,实验室、组织病理学、免疫组织化学和临床转归等资料.10例中男5例,女5例,中位年龄36(23-71)岁.结果:2例继发于慢性髓系白血病,1例发生在急性髓系白血病异基因造血干细胞移植后,7例没有前驱恶性血液病史;发生部位包括骨、脑、皮肤、乳腺、附睾、宫颈、小肠、卵巢和淋巴结.镜下肿瘤细胞呈弥漫性浸润或列兵样排列;形态一致,圆形或卵圆形;细胞质少,胞核呈圆形、卵圆形或不规则形,核分裂象易见,可见幼稚嗜酸粒细胞散在分布.免疫组织化学染色显示,肿瘤细胞表达MPO、CD34、CD43、CD45、CD99和CD117.4例在髓系肉瘤诊断后2-10个月发展成急性髓系白血病,诱导化疗后均达完全缓解,但有3例在缓解后3-12个月复发,生存时间仅14-23个月;4例髓系肉瘤在骨髓受累前接受化疗,无病生存1-48个月.结论:髓系肉瘤需与淋巴母细胞性淋巴瘤、Bur-kitt淋巴瘤、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤等相鉴别,其诊断和鉴别诊断依赖于病理形态和免疫组织化学特点.应用如急性髓系白血病的化疗以及异基因造血干细胞移植是治疗髓系肉瘤的主要方法.
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胃癌淋巴结增生与p53、nm23基因表达关系的研究
肿瘤抑制基因p53的突变是人们研究较深入的基因,突变型p53促进细胞的转化[1] .nm23基因的存在缺失、扩增和突变,与肿瘤的转移有关[2] .我们对87例胃癌采用免疫组化方法,观察胃癌淋巴结反应性增生和癌转移与p53、nm23基因表达的关系.
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胃癌组织及转移淋巴结中DC和NK细胞与VEGF表达及其意义
血管内皮生长因子(VEGF)和NK细胞在胃癌中的作用已有许多报道[1-5],但树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞与VEGF表达及DC与NK细胞在胃癌浸润、转移中的作用还未明确,因此,我们采用免疫组化方法对其进行了观测,结果报告如下.
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病毒性心肌炎原癌基因c-fos的表达
原癌基因c-fos参与了细胞的生长、分化和信息传递,它在某些疾病和病理生理过程中表达增加,可能参与其发生与发展.有关病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中c-fosmRNA的表达目前罕见报道.本研究就是利用免疫组化方法和原位杂交方法探讨原癌基因c-fos的mRNA及蛋白质在小鼠VMC心肌细胞中的表达.
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环氧合酶-2表达与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病
目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)表达与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关性胃十二指肠疾病的关系,并通过抗菌治疗评价根除Hpylori感染对胃窦黏膜中COX-2表达的影响.方法:用免疫组化方法半定量检测264例经胃镜和组织病理学检查患有十二指肠球部溃疡、胃溃疡、复合性溃疡、胃癌、单纯性慢性胃炎及胃黏膜正常者的胃窦黏膜COX-2蛋白的表达,比较Hpylon感染与非感染者之间的差异.对检出的35例Hp+的单纯慢性胃炎进行Hpylori抗菌根除治疗,比较根除前后胃窦黏膜COX-2蛋白的表达变化.根据2000-05全国慢性胃炎研讨会共识意见(江西.井冈山)对胃黏膜炎症、活动性、异型增生、肠化生和Hpylori密度进行半定量测定.结果:胃黏膜表面上皮、腺上皮细胞和固有层间质细胞的胞质中可见COX-2蛋白表达,但阳性染色细胞多集中在表层上皮.253例患者中,143例Hp+者(56.5%)COX-2平均阳性细胞率显著高于110例Hp-者(43.5%,P=0),各疾病组Hp+患者的COX-2平均阳性细胞率均显著高于Hp-者(P=0),各疾病组Hp-患者COX-2平均阳性细胞率也均显著高于正常对照组(P<0.05).27例Hpylori根除后的胃黏膜COX-2平均阳性细胞率明显下降(P=0),但仍明显高于正常对照组(P=0).不同程度胃炎间、以及活动性胃炎与非活动性胃炎之间胃窦黏膜COX-2平均阳性细胞率均有显著差异(P=0),与正常对照组比较,慢性胃炎仅伴有活动性75例,异型增生5例,肠化生13例的胃窦黏膜COX-2阳性细胞率明显增加,并以异型增生组高.COX-2表达与Hpylori感染密度和慢性炎症程度密切相关,分别为(rs=0.780,P<0.01;rs=0.686,P<0.05).结论:Hpylori感染导致胃黏膜COX-2表达升高,且与Hpylori感染密度、炎症程度密切相关.根除Hpylori后COX-2明显下降,但仍明显高于正常对照组,Hp-的各种胃十二指肠疾病的胃黏膜COX-2表达也较正常对照组高;肠化生和异型增生的COX-2表达均明显升高,推测COX-2表达升高与良恶性胃十二指肠病的发生发展有密切关系.
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TFF1在正常及损伤胃黏膜中的表达改变
目的:通过观察TFT1在人消化性溃疡及阿司匹林诱导的兔胃溃疡中的表达,探讨TFF1在胃黏膜保护中的作用.方法:采用免疫组化方法测定正常及消化性溃疡患者、正常及阿司匹林诱导的兔胃溃疡模型中胃黏膜TFF1的表达,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况.结果:(1)消化性溃疡患者胃黏膜中TFF1的表达高于正常胃黏膜(P<0.01),其中,多发/复合性溃疡表达高于单发消化性溃疡(P<0.05).(2)阿司匹林诱导的兔胃溃疡周围黏膜TFF1表达高于正常兔胃黏膜(P<0.05).结论:TFF1在人消化性溃疡及药物诱导的兔胃溃疡中的表达较正常升高,提示其在胃黏膜保护及上皮重建机制中具有重要的作用.
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维生素E、硒对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1及脂质过氧化的干预作用
目的:研究维生素E、硒对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1及脂质过氧化的干预作用.方法:♂SD大鼠,随机均分为5组:对照组(普通饲料)、模型组(高脂饲料)、VE干预组、Se干预组、VE+Se干预组,建模5 wk处死全部大鼠.生化方法检测血清及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝细胞色素P4501A1 mRNA表达的变化,免疫组化方法测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)表达的变化.结果:与对照组比较,模型组血清及肝组织中SOD显著降低(312.72±49.51 kU/L vs 583.23±63.37 kU/L;8.13±0.63 U/mgprot.vs 13.99±2.33 U/mgprot.,P<0.01),MDA增高(13.40±4.24 mmol/L vs 6.43±1.76 mmol/L;9.79±0.94 nmol/mgprot.vs 6.80±0.97 nmol/mgprot.P<0.01),细胞色素P4501A1 mRNA表达水平,肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达明显增强(0.6284±0.116 vs 0,0.230±0.013 vs 0.03±0.006,0.069±0.01 vs 0.003±0.001:P<0.05).与模型组比较VE组、Se组的血清及肝组织中SOD增高,MDA降低,细胞色素P4501A1mRNA表达水平略下降;肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达下降(P<0.05).VE+Se组与模型组比较,血清SOD明显增高,其值接近对照组水平;细胞色素P4501A1 mRNA表达水平显著下降(0.324±0.070 vs 0.6284±0.116,P<0.05).结论:非酒精性脂肪肝的脂质过氧化损伤及相关因子的表达可能与肝细胞色素P4501A1表达上调有关.VitE和硒能提高机体的抗氧化能力,对非酒精性脂肪肝有保护作用,二者联合作用更明显.
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大鼠肝部分切除术后肝窦内皮细胞对肝细胞增生的影响
目的:探讨大鼠肝部分切除术后肝窦血管内皮细胞(LSEC)对再生肝细胞增生的影响.方法:建立Wistar大鼠70%的肝切除模型和肝窦血管内皮细胞、肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞和肝窦血管内皮细胞,进行培养.实验分组:肝部分切除组(PO)和假手术组(SO);肝细胞培养分两组:A组(肝细胞)、B组(肝细胞+LSEC上清液),利用放射免疫法测定肝细胞DNA合成率、免疫组化方法测定肝细胞PCNA表达指数的变化.结果:在术后的6、24 h,B组的肝细胞的PCNA表达指数较A组显著升高(5.9±0.1 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6 vs 58.0±3.9 P<0.01).而且B组肝细胞的DNA合成量较A组显著升高(226±18 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6vs 58.0±3.9 P<0.01).结论:体外实验证实肝部分切除术后肝窦内皮细胞上清可以促进肝细胞的增生,促进肝细胞的DNA合成,增强再生肝细胞增生活性.
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K-ras基因在胰腺癌和慢性胰腺炎中突变和表达异常及其临床意义
目的:探讨Ras蛋白过度表达与胰腺癌和慢性胰腺炎临床病理的关系,以及K-ras突变在慢性胰腺炎中的临床意义和在胰泉癌诊断中的价值.方法:应用EnVision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织(24例)、癌旁组织(77例)、手术切缘正常组织(16例)和慢性胰腺炎(24例)石蜡包埋组织中P21 ras的表达情况.应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法分别检测胰腺癌、癌旁组织、手术切缘正常组织、慢性胰腺炎石蜡包埋组织的K-ras突变并进行DNA测序确认.结果:P21 ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为58.3%(14/24),与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的P21 ras表达阳性率45.8%(11/24)相比,二者差异无显著性(P>0.05):P21 ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为36.6%(30/82),与其在正常胰腺组织中的表达阳性率(0%)相比,有显著性差异(P<0.05);P21 ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率分别为0%、36.6%和78.9%,呈渐进过程,而且增生性导管病变与不典型增生相比,P21 ras表达阳性率的差异具有显著性(P<0.05).胰腺癌K-ras12密码子突变率(79%)显著高于慢性胰腺炎(33.3%)(P<0.01),且在切缘正常组织→癌周导管增生→癌周不典型增生→胰腺癌过程中,突变率有逐渐上升的趋势.突变方式以12密码子GGT→GAT、GTT、CGT为主且同1例患者突变方式一致.结论:P21 ras过度表达和K-ras基因突变在胰腺癌发生中起到作用,但K-ras基因突变作为胰腺癌诊断的分子标志缺乏特异性.
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牛黄酸与维生素C对慢性砷暴露小鼠肝组织DNA损伤的保护作用
目的:观察牛黄酸与维生素C对慢性砷暴露小鼠肝组织DNA损伤的保护作用.方法:将小鼠40只随机分为4组,即:染砷组(4 ppm AS2O3)、牛黄酸保护组(4 ppm AS2O3)+150 mg/kg牛黄酸)、维生素C保护组(4 ppm As2O3+45 mg/kg维生素C)以及生理盐水对照组,用HE染色法进行组织病理学观察,用免疫组化及图像分析检测肝组织内8-OH-dG的水平.结果:染砷组小鼠肝组织出现胞质疏松化和气球样变等病理学改变,牛黄酸和维生素C保护组肝组织上述病理学变化较轻.免疫组化结果表明,染砷组肝组织呈现8-OH-dG的高表达(P<0.01).两保护组小鼠肝组织8-OH-dG的表达显著低于染砷组(P<0.01),其中牛黄酸保护组小鼠肝组织8-OH-dG免疫染色总光密度值(0.824±0.1062)显著低于维生素C保护组(246.7±61.81,P=0.012).结论:牛黄酸和维生素C对慢性砷暴露小鼠肝组织DNA损伤具有保护作用,其中牛黄酸的保护作用更明显.
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前哨淋巴结活检在胃癌外科中的应用
目的:探讨胃癌前哨淋巴结活检(sentinellymph node biopsy,SLNB)的临床应用及临床意义.方法:40例胃癌患者作为研究对象,于术中肿瘤四周注射亚甲兰,寻找并摘取早蓝染集中的淋巴结,即前哨淋巴结(sentinellymph node,SLN).所取得的SLN进行HE染色组织学检查及CK20、CEA抗原表达的免疫组化方法检查.结果:40例胃癌患者中取得SLN的38例,检出率为38/40(95%),术后病理证实Ⅰ、Ⅱ期胃癌15例,Ⅲ、Ⅳ期胃癌25例.由SLNB预测胃周淋巴结转移Ⅰ、Ⅱ期胃癌的准确率93.33%,Ⅲ、Ⅳ期的准确率69.57%;特异性均为100%;Ⅰ、Ⅱ期胃癌的灵敏性87.5%,Ⅲ、Ⅳ期的灵敏性68.18%.结论:SLNB是预测胃癌淋巴结转移的一种有效方法,他能准确的预测Ⅰ、Ⅱ期胃癌胃周淋巴结转移情况,而在Ⅲ、Ⅳ期胃癌中SLNB不能准确预测胃周淋巴结转移情况.
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凋亡相关基因bcl-2与bax在人食管鳞癌中的表达
目的:探讨bcl-2及bax基因在我国食管鳞癌中的表达特点,研究其在食管癌变中的可能作用.方法:应用原位杂交技术、流式细胞术及免疫组化方法对81例食管鳞癌中bcl-2及bax基因的表达进行检测,并应用图像分析技术对原位杂交及免疫组化结果进行定量分析.结果:bcl-2 mRNA在正常食管上皮无表达,在癌旁上皮主要是上皮近基底部细胞中呈阳性表达.食管鳞癌细胞胞质可见明显的bcl-2 mRNA表达.图像定量分析显示bcl-2mRNA表达与分化程度有显著相关性(灰度值37.88±11.40vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36,P<0.05;44.89±15.26 vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36,P<0.05).Bcl-2蛋白在食管鳞癌中表达随癌组织的分化程度降低其表达显著增高并且在不同分化组间差异显著(F=8.738,P<0.01).Bax蛋白在食管鳞癌细胞中都有表达,但各组间均无显著性差异.结论:在食管鳞癌中凋亡相关基因bcl-2,bax表达异常增高,尤其是抗凋亡基因bcl-2可能在食管鳞癌癌变及浸润过程中起着重要作用.
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表皮生长因子及其受体mRNA在胃溃疡发生与愈合过程中的表达
目的:探讨人胃溃疡愈合过程中表皮生长因子(EGF)含量及表皮生长因子受体(EGFR)表达的变化及其作用.方法:采用放免及免疫组化方法,对正常胃黏膜(10例)、胃溃疡活动期(GA组,20例)、愈合期(GH组,20例)、瘢痕期(GS组,20例)胃液EGF含量及胃黏膜组织EGFR的表达进行测定及定位观察和图像分析.结果:正常胃黏膜和GA组的胃液EGF的含量分别为502.6±51.3、156.2±46.7 ng/L,经统计学处理差异有显著性意义(P<0.05);GH和GS组胃液的EGF含量分别为386.1±76.8、466.3±95.4ng/L,与GA组比较,差异有显著性意义(P<0.05).GA组胃黏膜EGFR的表达均较正常时增加,GH及GS组更加明显;GA组EGFRmRNA表达阳性密度(18.27±3.95)较正常组(8.52±1.18)增高(P<0.01),而GH组(24.61±4.98)和GS组(27.92±5.44)又较GA组明显增高(p<0.05).结论:人胃溃疡愈合过程中,胃液EGF与溃疡的发生和愈合有关,胃黏膜EGFR的表达由弱到强.
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COX-2与Hmlh1、Hmsh2在大肠癌中表达的相关性研究
目的:研究大肠癌及其癌旁正常组织中COX-2、hMLH1、hMSH2的表达情况及其与临床病理参数的关系,并探讨其相关性.方法:应用COX-2、hMLH1、hMSH2多克隆抗体,采用免疫组化方法(SP法)检测78例大肠癌手术切除标本及其癌旁正常组织中COX-2、hMLH1、hMSH2蛋白的表达情况.结果:在采用免疫组化方法所检测的78例大肠癌及其癌旁正常组织中,COX-2的阳性表达率分别为74.36%(58/78)、0%,hMLH1的阴性表达率分别为29.49%(23/78)、0%,hMSH2的阴性表达率为28.21%(22/78)、0%.结论:在大肠癌中,COX-2蛋白表达与hMLH1、hMSH2蛋白的表达缺乏有相反关系,即COX-2蛋白表达阴性的病例中,大多存在hMLH1或hMSH2蛋白表达缺乏,错配修复酶缺乏主要发生在COX-2蛋白表达阴性的病例中.说明二者可能通过不同的途径参与了结肠癌的发生和发展.