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与病毒感染相关的细胞凋亡分子
病毒感染是诱导细胞凋亡的重要因素之一,多种病毒感染可介导细胞凋亡,研究病毒感染引起细胞凋亡的机制,将有助于进一步认识病毒感染性疾病的发生、发展及转归,为防治提供一些新思路.本文综述了近年来病毒感染细胞后激活Caspase,Fas/FasL,TNF-a,P53等细胞凋亡相关基因与蛋白酶介导细胞凋亡的研究进展.
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银屑病组织中bc1-2基因蛋白的表达
近年来人们认识到细胞凋亡不仅在皮肤发育、更新、平衡稳定中起作用,在某些增殖性皮肤病如银屑病中也表现异常.bcl-2是与细胞凋亡关系密切的原因之一,为探讨bcl-2基因蛋白的表达与银屑病发病之间的关系,我们采用免疫组化技术对28例银屑病组织中细胞凋亡相关基因bcl-2的表达情况进行了检测,现将结果报道如下.
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辐射诱导大鼠肺细胞凋亡及相关基因表达
细胞凋亡(Apoptosis)是指由基因控制的细胞程序性死亡.辐射作为一种确定的诱发凋亡的方法[1],被长期应用于肿瘤的治疗,而有关辐射诱导离体正常细胞及肿瘤细胞凋亡的研究已成为热点.另一方面,对动物整体辐射后肺细胞凋亡的研究很少报道.我们采用流式细胞术,检测γ-射线整体照射后大鼠肺细胞的DNA含量及凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,以探讨诱发凋亡的剂量和时间效应关系.
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补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的抑制及凋亡相关因子研究
目的:研究补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其凋亡相关基因的研究.方法:制备补肾疏肝方大鼠含药血清,与肺癌A549细胞共同培养,MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响.流式细胞术检测含药血清,对A549细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响.Western blot检测含药血清对P53、Bcl-2蛋白表达的影响.结果:随着补肾疏肝方药物浓度的增加,处理时间的延长其抑制作用呈明显的时间-剂量效应,与顺铂联合作用效果显著,其24、48、72h联合组的抑制率分别为26.71％、30.86％、41.74％;含药血清可以诱导细胞的凋亡,且随着浓度的增加G2/M期细胞的百分比增加,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);其在诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达,也使P53蛋白表达量增高.结论:补肾疏肝方对A549细胞的增殖有抑制作用,并呈时间、剂量依赖方式,其作用机制可能是通过抑制Bcl-2蛋白表达,活化P53蛋白表达从而诱导肺癌细胞A549的凋亡而抑制细胞增殖.
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从凋亡相关基因水平探讨中药作用机制的研究思路
从凋亡相关基因水平探讨中药的作用机制时,应选择特异性的、相互拮抗的凋亡相关基因作研究指标,进一步研究中药对凋亡信号传导途径的影响;体外研究应与体内研究相结合;应复制病证结合的动物模型,加强复方研究.
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参麦注射液对脑出血大鼠神经细胞凋亡相关基因表达影响的实验研究
目的:观察参麦注射液对大鼠脑出血后神经细胞凋亡相关基因的影响.方法:采用Rosenberg法复制大鼠脑出血模型,测定脑出血后大鼠海马CA1区神经细胞病理形态结构及其Bcl-2基因、Bax基因表达;结果:参麦注射液减少大鼠脑出血后海马CA1区锥体细胞凋亡数目,显著增加Bcl-2基因表达,降低Bax基因表达,使Bax mRNA/bcl-2 mRNA比率下降.结论:参麦注射液能调节凋亡基因,减少大鼠脑出血后神经细胞的凋亡.
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胃镜下局部注射大蒜素对进展期胃癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨胃镜下大蒜素局部应用对进展期胃癌的影响及作用机制.方法 进展期胃癌患者80例,胃镜及病理均证实为腺癌,分为两组;大蒜素组40例,术前48 h胃镜下病变处局部注射大蒜素,对照组40例局部注射生理盐水;手术切除胃癌组织,采用美国Becton Dickinson公司产的FACS-420型流式细胞仪检测,观察胃癌组织周期(Go/G.期、S期、G2/M期)各时相百分比、细胞凋亡率、增殖指数(proliferation index,PI),以及胃癌组织细胞凋亡相关基因(Fas、Bax、Bcl-2)蛋白表达.结果 大蒜素组与对照组细胞凋亡率(%)分别为9.60±1.52、2.20±0.58,G0/G1期(%)分别为72.12±8.35、69.56±5.15,G2/M期(%)分别为9.54±3.20、13.20±3.05,P/值分别为27.80±8.35、30.40±5.15;两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);大蒜素组可增加凋亡促进基因Bax基因蛋白、凋亡始动基因Fas基因蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01),降低凋亡抑制基因Bcl-2基因蛋白的表达(P＜0.05).结论 本项研究初步证明胃镜下局部注射大蒜素能够抑制进展期胃癌组织细胞生长、增殖,并促进胃癌细胞凋亡.
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补肾、活血类复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达调控模式的比较研究
目的:探讨两个补肾复方(右归饮和补肾益寿胶囊)及活血复方下调老年大鼠T细胞凋亡的基因调控模式.方法:用TUNEL标记的流式细胞检测和荧光实时定量RT-PCR技术,研究老年大鼠和年轻大鼠T淋巴细胞抗凋亡和促凋亡基因(Fas、FasL、Bcl-2、Bax、TNFR1、TNFR2)的表达以及凋亡级联反应中半胱氨酸蛋白酶(如Caspase8和Caspase3)活性的差异,及比较两个补肾复方和活血复方对老年大鼠T细胞抗凋亡和促凋亡基因表达的调控以及对Caspase活性的影响.结果:两个补肾复方均能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡,下调FasL及TNFR1基因的转录和Caspase8及Caspase3的活性.而活血复方对于T细胞的过度凋亡无显著作用.结论:激活诱导的T细胞过量凋亡与肾虚密切相关,两个补肾复方均可下调促凋亡基因FasL和TNFR1的转录,从而抑制老年大鼠过度的T细胞凋亡,是补肾法所特有的对老年T细胞凋亡相关基因的调控模式.
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补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响
目的 观察补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4~+T细胞的调节作用.方法 将30例AS患者随机分为补肾强脊颗粒组和柳氮磺吡啶(SASP)组各15例,在治疗前和治疗后12周后分别采集两组患者外周血,分离CD4~+T细胞,采用RT-PCR测定细胞凋亡相关基因Fas、FasL及Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 补肾强脊颗粒可促进AS患者外周血CD4~+T淋巴细胞Fas、FasL的表达(P＜0.05或P＜0.01),而对Bcl-2、Bax的表达无明显影响.结论 补肾强脊颗粒可能是通过Fas-FasL途径影响CD4~+T细胞的激活诱导的细胞凋亡作用.
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三羟异黄酮诱导人肝癌细胞凋亡及对凋亡相关基因的影响
目的 探讨三羟异黄酮(genistein)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法 将三羟异黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721),MTT法检测增殖抑制率,光镜下观察凋亡细胞的形态,凝胶电泳分析DNA改变;通过免疫组化技术检测凋亡基因蛋白P53、survivin和caspase-3的表达.结果 三羟异黄酮呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞的增殖.5 mg/L、10 mg/L和20 mg/L三羟异黄酮作用48 h对肝癌细胞的抑制率分别为9.86%、19.13%和25.64%.形态学显示,三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,细胞DNA电泳出现典型梯状条带;且凋亡相关基因蛋白survivin表达明显减少,而P53和caspase-3的表达增加.结论 三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制之一可能是下调survivin基因蛋白表达,增强P53和caspase-3的表达.
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牛磺酸对家兔缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响
研究表明,牛磺酸(taurine, Tau)对心肌缺血再灌注损伤有防护作用[1],但其确切的机制尚不十分清楚.心肌缺血损伤除引起心肌细胞坏死外,也可诱发心肌细胞凋亡.近几年的研究表明,细胞凋亡受多种因素调控,其中以细胞凋亡相关基因蛋白(如Bcl-2、Bax和Fas等)的作用较为重要;但牛磺酸对家兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有何影响,以及是否调控凋亡相关基因的表达,目前尚不十分明确.本实验观察了牛磺酸对家兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关调控基因蛋白表达的影响.
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三七总皂甙抑制兔血管平滑肌细胞增殖及促进C-MYC基因表达
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的异常增殖与凋亡在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病理生理过程中起核心作用[1～3].三七总皂甙(panax notoginsengsaponins,PNS)具有抗AS的作用.本研究观察PNS对VSMCs增殖周期、细胞凋亡过程及凋亡相关基因C-MYC表达的影响,探讨其作用机制.
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凋亡相关基因pnas-2的表达谱分析
为了确定凋亡相关基因pnas-2在正常组织及急性白血病患者组织中的表达谱,应用Northern blot检测了pnas-2在心脏、脑、胎盘、肺、肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、淋巴结、胸腺、白细胞、骨髓和胎肝等组织中的表达,应用实时PCR(real-time PCR)和Northem blot检测了该基因在急性白血病44份初发、9份未缓解、27份缓解、12份复发样本中的表达,并检测了pnas-2在31例恶性肿瘤患者癌组织及正常组织中的表达.结果表明,pnas-2基因除了在胎盘中表达外,在其他检测的组织中均无表达.pnas-2基因在初发,未CR和复发急性白血病患者中的表达显著高于CR和癌肿患者的癌组织及正常组织中的表达.在7例急性白血病患者的自身前后对照中,pnas-2的表达变化与病程演变有关,即初发时高表达,未CR时无明显改变,但在CR时显著下降,复发时表达又上升.结论:pnas-2的高表达在急性白血病中是特异的,可能是一种癌基因,并很可能参与了白血病的发病.
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抑瘤饮影响S180瘤组织中Bcl2和Bax表达的动态研究
凋亡相关基因Bcl2和Bax的表达与肿瘤细胞凋亡与否密切相关.抑瘤饮是依中医抗肿瘤理论组成的中药复方水煎剂,其主要成分为:黄芪、党参、云芝、三七、仙鹤草、墨旱莲、鸡血藤、卷柏、大枣、陈皮等;临床和动物实验显示其在体内确有一定抗肿瘤效果,但尚不知其在体内是否对肿瘤细胞凋亡相关基因表达有影响.
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血必净对活化诱导T细胞凋亡的调节
目的 观察活化诱导对脾脏T淋巴细胞凋亡、凋亡相关基因mRNA表达及caspase3活性的影响,以及活血化瘀中药的调节作用.方法 提取BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞并培养,以Con A+IL-2诱导T细胞活化凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Fas、FasL、Bcl-2、Bax、IL-2 mRNA表达水平,分光光度法测定caspase3酶活性,并观察活血化瘀中药对上述各项指标的影响.结果 活化T淋巴细胞于诱导18h后凋亡率明显增加,于诱导6h时未见FasL、Bax mRNA表达,Fas、Bcl-2 mRNA表达无明显变化;于诱导18 h后Fas、FasL、Bax mRNA表达升高,Bel-2 mRNA表达下降,caspase3活性增高.活血化瘀中药可降低T细胞凋亡,并可分别降低Fas、FasL、Bax mRNA表达,提高Bcl-2 mRNA表达,减轻easpase3酶活性.在活化诱导早期(6 h)促进T淋巴细胞内IL-2 mRNA表达,在晚期(18 h)减少IL-2 mRNA表达.结论 过度活化是脾脏T淋巴细胞异常凋亡的诱发因素,而凋亡的发生与Fas、FasL、Bax、Bcl-2 mRNA表达的改变有关.活血化瘀中药可通过调节IL-2及凋亡相关基因mRNA表达而减轻脾脏T淋巴细胞凋亡,同时可以促进T淋巴细胞的增殖活性.
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脑源性神经营养因子预处理对沙土鼠脑缺血-再灌注损伤的影响
目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)预处理对沙土鼠脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 蒙古种沙土鼠48只,随机分为6组,每组各8只:正常对照组(C);缺血-再灌注组(I/R),全脑缺血20 min后再灌注24 h;BDNF预处理6,12,24,48 h组(PR6,PR12,PR24,PR48),PR6,PR12,PR24,PR48各组分别于脑缺血前6,12,24,48 h经侧脑室注射BDNF(0.5 μg/只)进行预处理,缺血20 min后分别再灌注24 h.实验地点在贵阳医学院动物实验中心.采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉20 min后去除动脉夹使血流再通的方法制作全脑I/R损伤模型,夹闭过程中出现瞳孔散大、对光反射消失及翻正反射消失等则说明产生全脑缺血.除C组外的所有动物分别于脑缺血20 min再灌注24 h结束时断头取脑,取视交叉后1～4 mm处的额叶皮层组织制备石蜡切片,TUNEL法检测脑皮层凋亡神经细胞,免疫组化法检测Bcl-2,Bax蛋白的表达.统计分析采用方差分析法.结果 C组未检测到凋亡细胞及Bcl-2,Bax蛋白阳性表达细胞;I/R组及BDNF预处理各组沙土鼠脑皮层均可检测到凋亡细胞,且BDNF预处理各组细胞凋亡指数均明显低于I/R组,P值均为0.000;与I/R组比较,BDNF预处理各组脑皮层Bcl-2蛋白阳性细胞指数均显著增高,而Bax蛋白的阳性细胞指数均显著降低,P值均为0.000;BDNF预处理各组中以6,12 h预处理组的细胞凋亡指数及Bax蛋白阳性细胞指数较低,P值分别为0.056和0.001,而Bcl-2蛋白阳性细胞指数较高,P值为0.005.结论 不同时间窗的BDNF预处理均能不同程度的减轻脑I/R后神经细胞凋亡,有明显脑保护作用,以脑I/R损伤前6,12 h时间窗内给予BDNF预处理的脑保护效果较明显;其机制可能是通过上调Bcl-2蛋白的表达及抑制Bax蛋白的表达而实现.
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ALA-PDT对食管癌细胞Eca-109凋亡相关基因的作用研究
目的 观察经5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy,ALA-PDT)处理后的食管癌Eca-109细胞,其凋亡相关基因Bcl-xL,Bad和Bid的变化,初步探讨ALA-PDT对凋亡通路的作用.方法 实验分为两组,分别为对照组和ALA-PDT组,治疗组细胞给予ALA-PDT处理,ALA终浓度为0.25 mM,孵育6h后,采用波长630 nm激光照射,激光功率200 mW/cm2,照光150 s,能量密度30 J/cm2.对照组仅给予相同体积10％ FBS-1640培养基孵育6h,不加入光敏剂和照光处理.两组细胞于处理后继续于37℃,5％ CO2培养箱内分别培养0.5、3和24 h后收集细胞,提取细胞RNA,采用PCR法检测Bcl-xL,Bad和Bid基因表达的变化.结果 Bcl-xL在ALA-PDT作用于Eca-109细胞后3和24 h其表达均显著下调(P均＜0.05),Bad在作用后3和24h,Bid在作用后0.5,3和24 h表达与对照组相比均轻微上调,但与对照组相比其差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 ALA-PDT作用于食管癌细胞,可能激活了线粒体凋亡通路,Bcl-xL可能为其作用基因.
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氦氖激光重复照射对培养瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响
目的:从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制.方法:以波长632.8nm、功率密度100mW/cm2的氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞,每日1次,每次30min,连续照射3天,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定Bcl-2、Bax、Fas、ICE、p53、c-myc蛋白的细胞分布与表达.结果:在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布,氦氖激光照射后,Fas、ICE表达增加,Bcl-2表达降低,Bax、p53、c-myc的表达无变化.结论:氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas、Bcl-2、ICE表达蛋白有关.
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添加rhGH与Gln的肠外营养对短肠大鼠小肠代偿作用的研究
目的研究添加生长激素(rhGH)及谷氨酰胺(Gln)的肠外营养(PN),对短肠大鼠残存小肠代偿的作用及作用机制.方法将SD大鼠按2×2析因设计方案随机分成STD组(-rhGH,-Gln)、rhGH组(+rhGH,-Gln)、Gln组(-rhGH,+Gln)及GG组(+rhGH,+Gln)共四组,建立PN短肠大鼠动物模型,行PN6天.PN结束后行小肠粘膜形态学定量检查,以免疫组化及TUNEL法行小肠粘膜上皮细胞PCNA表达及凋亡小体测定,RT-PCR法行凋亡相关基因bcl-2与baxmRNA表达测定,Northernblot法行小肠粘膜IGF-ImRNA表达测定.结果GG组残余小肠粘膜形态学上呈显著代偿表现,其PCNA表达明显增高,凋亡指数下降;凋亡相关基因bcl-2mR-NA表达升高,baxmRNA表达下降,P<0.01.析因分析表明rhGH与Gln间存在协同作用.小肠局部IGF-ImRNA表达在rhGH组及Gln组均增高,在GG组增高为明显,P<0.05.结论联用rhGH组与Gln,显著促进PN时短肠大鼠残余小肠代偿,二者间作用存在协同肠粘膜上皮细胞增生增加及凋亡抑制与小肠代偿密切相关;小肠局部IGF-I在rhGH与Gln协同作用的发挥中起重要介导作用.
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幽门螺杆菌对胃癌细胞BGC-823形态及凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨H.pylori 刺激人胃癌细胞BGC-823 后,对细胞形态以及凋亡抑制基因Survivin和凋亡基因caspase-3 mRNA表达的影响.方法:分别用东亚型H.pylor i 菌株和西方型H.pylor i 菌株超声提取物,刺激胃癌细胞BGC-823,显微镜下直接观察细胞形态的变化.同时利用荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR) 检测胃癌细胞BGC-823 凋亡抑制基因Survivin 和凋亡基因caspase-3 mRNA的表达水平.结果:H.pylori 刺激胃癌细胞BGC-823 后12 h,出现蜂鸟表型,呈时间依赖性,24 h明显,东亚型组与西方型组相比,引起的细胞蜂鸟表型百分率明显增加(29.3%±2.1% vs 8.0%± 2.0%,F = 164.73,P <0.05).H.pylori 超声提取液刺激胃癌细胞BGC-823 后,在东亚型组和西方型组均出现凋亡抑制基因Survivin mRNA 的表达量明显上调,与对照组相比caspase-3 mRNA的表达量明显下降(P <0.05);并且东亚型组Survivin mRNA的表达的上调以及caspase-3 mRNA的表达较西方型组均明显下降(P <0.05).结论:H.pylori 超声提取液可诱导胃癌细胞BGC-823 发生形态学改变,并且引起凋亡抑制基因Survivin mRNA表达上调、凋亡基因caspase-3 mRNA表达下降.东西方型H.pylori 菌株之间存在生物活性的差异.
