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中国结核分枝杆菌复合群菌株pstS1基因中人T/B细胞表位多态性分析
目的 研究我国结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)菌株中pstS1基因及其中的人T细胞和B细胞表位区的序列多态性.方法 选取180株临床分离MTBC菌株及11株世界不同来源的BCG疫苗株,PCR扩增其pstS1基因并测序后,结合已经公布的1株牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)及3株BCG菌株的pstS1基因序列,与从免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)中查询到的表位序列进行比对和分析,总结该基因序列中的变异特征.结果 在所有菌株中,共发现2个单碱基插入造成的移码突变(Frame-shift mutation)和4个单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点,共造成79.17% (19/24)的B细胞表位和65.22%(15/23)T细胞表位区的序列变异.pstS1基因的dN值为0.000 14,其中T细胞表位区与非T细胞表位区的dN值分别为0.000 17和0.000 05,B细胞表位区与非B细胞表位区的dN值分别为0.000 23和0,由于未发现同义突变位点,所有序列区的dS值均为零.结论 MTBC菌株的pstS1基因具有较高的序列多态性,且其中的T、B细胞表位区具有更高的多态性水平.
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免疫组化技术(一)
1 引言新引进的有关预测预后方面的免疫组化标记物在患者的治疗和处理上产生了巨大的影响.过去的60年中,关于免疫组化方法的理论在逐步发展,方法学上实现了在甲醛固定和石蜡处理的组织上使用抗体和适当的标记系统来鉴别特异性或高选择性的细胞表位.当前诊断实验室的趋势是尝试着尽量在甲醛固定石蜡包埋的组织上进行免疫组化研究,避免使用冷冻切片.
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HFRS患者BLCL的建立及HTNV S基因片段在其内获得长期稳定的表达
虽然对汉坦病毒核蛋白(HV NP)氨基端蛋白的原核表达产物的抗原性及免疫原性已进行了许多研究,并已用于出血热的诊断,但该抗原表位的精确一级结构及其基因定位迄今尚未完全明确.而研究T细胞表位的前提是首先要构造含病原体抗原基因片段的表达载体质粒.要实现CTL效应细胞对靶细胞的有效杀伤,前提条件之一是效靶细胞必须具有相同的HLA型别.通常选用与效应细胞同源即同一供者的PBMC建立靶细胞,本研究采用与HV特异性CTL同源的患者自身的EB病毒转化的B淋巴母细胞系(EBV-transformed B lymphoblastoid cell line,BLCL)建立靶细胞系,将含有不同汉滩病毒(HTNV)S基因片段的重组真核表达载体转染入BLCL,获得长期稳定表达,为下一步进行CTL杀伤试验提供靶细胞系.
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人C5a B细胞表位的设计与其单克隆抗体的结合
我们在分子设计的基础上,采用B细胞优势表位预测并结合实测的方法,设计合成人C5a的B细胞表位多肽,以此为抗原按常规方法免疫BALB/c小鼠,制作表位多肽单克隆抗体,在传统ELISA鉴定的基础上,利用生物传感器分析方法,分别研究单克隆抗体与表位多肽和全长C5a分子的结合动力学规律.
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铜绿假单胞菌B细胞表位-MyD88表达质粒的构建及其相关研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白F(OprF)的主动免疫能诱发机体产生特异性体液免疫应答,发挥局部保护作用.然而OprF的完整蛋白对机体具有潜在的危害性.现有研究表明OprF蛋白含有大量的B细胞表位,因此,应用OprF优势抗原表位设计的疫苗,既能诱导机体产生抗Pa的中和抗体,又能克服非抗原决定簇成分潜在的毒副作用.考虑到表位蛋白的免疫原性较弱,不足以引发良好的免疫应答,故利用新型免疫佐剂MyD88来调节机体.
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卡氏肺孢子菌A12抗原表位及其蛋白质特征的预测
卡氏肺孢子菌A12抗原是近年来发现的一种相对分子质量为30×10~3的抗原蛋白.在SWISS-PROT数据库中检索其蛋白序列号为AAR20917.1.本实验通过DNAStar软件对A12蛋白的二级结构、亲水性、可及性及可塑性参数进行分析来综合性预测A12蛋白B细胞抗原表位;同时在SYFPE1THI服务器上预测A12蛋白T细胞表位.
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变异链球菌表面蛋白质抗原真核表达质粒的构建及免疫动物的研究
变异链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是龋病主要致病菌,S.mutans的表面蛋白质抗原PAc是其主要毒力因子之一,参与了唾液介导的S.mutans在牙面的粘附。S.mutans PAc分子的氨基端不仅富集免疫显性T、B细胞表位,而且含有唾液糖蛋白结合区,因此氨基端是理想的表位多肽防龋疫苗选择区。此外,Streptococcus sobrinus(S.sobrinus)的PAg分子与S.mutans PAc分子的氨基端具有保守的B细胞表位,以PAc分子该区段制备的多肽疫苗可激发宿主对S.sobrinus的交叉保护性反应。因而,初次以变异链球菌表面蛋白质抗原PAc氨基端的编码基因构建真核表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察所诱导的体液免疫应答,为基因疫苗防龋的动物实验提供资料。
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衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1二级结构及B细胞抗原表位预测
目的:预测衣原体噬菌体Chp3Vp1蛋白的二级结构和B细胞表位.方法:以Chp3Vp1氨基酸序列为基础,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Hopp-Woods法、Emini法和Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原表位.结果:Chp3Vp1蛋白含多个抗原位点,预测其N端1-10,101-112,159-166,174-184,189-195,288-299,323-333,419-435,477-490为优势表位.结论:Chp3vp1蛋白有较强的免疫原性,预测的抗原位点为之后蛋白相互作用研究和单抗制备提供了理论依据.
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衣原体MOMP蛋白生物多态性及细胞表位分析
目的:预测并分析比较衣原体MOMP蛋白的二级结构和B细胞表位.方法:以各株衣原体MOMP蛋白的氨基酸序列为基础,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原表位;以ClustalX软件序列比对分析其多变区.结果:各株MOMP蛋白含多个抗原位点,各序列在第80-107、165-178、249-264、332-346位序列高度差异,并出现比对“空沟”.多个强表位位于序列保守区内.结论:MOMP蛋白有较强的免疫原性,预测的抗原位点为之后蛋白相互作用研究、单抗制备、亚单位疫苗设计提供了理论依据.
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白细胞介素13抗体对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响
目的 基于白细胞介素13(IL-13)抗原表位制备抗IL-13抗体,观察其对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响.方法 通过软件分析获得IL-13的B细胞表位LTKELIEELSNITQ,合成肽段与KLH蛋白耦联制备多克隆抗体.将支气管哮喘小鼠模型分为IL-13抗体治疗组、兔IgG治疗组和PBS组,同时设正常对照组,观察IL-13抗体对小鼠支气管哮喘的治疗作用.结果 获得针对IL-13全蛋白的多克隆抗体.IL-13抗体组较兔IgG组和PBS组白细胞数量明显减少,支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5和γ-IFN含量明显降低.结论 IL-13中和抗体对小鼠支气管哮喘症状有明显缓解作用.
关键词: 白细胞介素13中和抗体 细胞表位 气道炎症 支气管哮喘 -
抗原表位预测的免疫信息学方法研究进展
表位是抗原分子中由特殊的化学基团组成的结构,根据与抗原受体结合的不同可分为B细胞表位和T细胞表位.B细胞表位是抗原中可被B细胞抗原受体或抗体特异性识别并结合的线性片段或空间构象性结构.B细胞表位只有很少的一部分是线性表位,而绝大部分(约90%)是构象性表位.
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B细胞表位人源化的猪ZP4在大肠杆菌中的表达与鉴定
近年来,以卵透明带为靶抗原的疫苗制备已从初的卵透明带及其组分水平向更高层次发展.Minoru等[1]发现用人工合成的LDPENLTL八肽B细胞表位片段与外源性T细胞表位所得嵌合肽免疫小鼠所得抗血清可有效抑制猪精卵结合试验,但对人精卵结合试验却效果甚差.
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HCG嵌合肽CP12基因的构建和原核系统表达
发展可组合靶抗原多个线性B细胞表位和自身或外源T细胞表位的基因工程嵌合肽免疫原,是当今疫苗学和免疫学界又一新的研究方向[1-3].我们曾以克服hCG避孕疫苗研制中存在的佐剂和免疫应答的MHC遗传限制等突出问题为目标,报道了hCG嵌合肽CP1编码基因的合成和原核生物表达的阶段性实验结果[4]. 本研究是系列基因工程hCG嵌合肽疫苗研究项目内容之一.其目的是,一在DNA和蛋白质分子设计水平积累提高靶CP肽在大肠杆菌中表达率的经验,二分析探讨所设计的不同表位组合顺序和CP肽链长度对其免疫原性的影响. CP12的分子设计与CP1的相似,即以同样顺序组合了hCGβ的3个线性B细胞表位和6个Th细胞表位(其中2个是广谱性的),区别是CP12在CP1的N端接上一段无B-和T-细胞表位的肽段, 它出自能在大肠杆菌中高表达的与人透明带1(ZP1)高度同源的猪ZP4肽的N端.CP12编码基因的构建分二步走,也就是,先化学合成正负链四段猪ZP4 25聚肽编码基因(含CP1编码基因5'端ATG后至BamH I位点间的短片段),两两配对退火复性后,通过酶促反应连接成1个ZP肽编码基因片段.然后再借助其两端EcoR I和BamH I酶切位点,重组插入经上述2种酶双酶切的pBV2 21-CP1重组表达质粒.DNA测序验证了CP12全序列.
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狂犬病毒MHC限制性CTL与Th表位的预测与鉴定
目的:预测并筛选鉴定狂犬病毒糖蛋白及核蛋白BALB/c小鼠MHC限制性CTL和Th表位.方法:从NCBI数据库中获取狂犬病毒糖蛋白及核蛋白的完整氨基酸序列,然后运用生物信息学软件BIMAS、SYFPEITHI和RANKPEP对CTL表位及Th表位进行预测并合成相关抗原表位.BALB/c小鼠经狂犬疫苗免疫后,通过淋巴细胞增殖实验对预测的多肽进行初步筛选.初步筛选的多肽再利用ELISPOT和流式细胞法进行进一步筛选,检测指标主要包括细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平以及多肽对CD3+CD4+/ CD3+CD8+T细胞亚群的影响情况.结果:经软件预测获得8条可能的CTL与Th表位,多肽合成后经分析各条多肽纯度大于90%.实验验证后证明2条多肽G367-381及G333-341能够成为细胞表位,其中G367-381作为Th表位,G333-341作为CTL表位.结论:G367-381及G333-341是狂犬病毒的细胞表位,可用于未来狂犬病毒表位疫苗的研究.
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以通用肿瘤相关抗原为靶点的免疫治疗
近几十年的研究证明人类肿瘤可以表达被细胞免疫特异识别的抗原,这一发现加速了以T细胞免疫为基础的抗肿瘤免疫治疗的发展.临床上成功的特异性肿瘤免疫治疗取决于对肿瘤抗原的发现,肿瘤相关抗原的寻找是体液免疫和细胞免疫治疗发展的关键因素.随着分子医学和分子免疫学技术的发展,特别是计算机在生物学中的广泛应用,对T细胞表位进行初步预测成为可能.本篇综述简要阐述肿瘤相关抗原(Tumor associated antigen, TAA)的分类、通用TAA抗原表位的筛选方法以及四种通用TAA在临床方面的初步研究.
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HSP65-HBV 表位融合蛋白对人PBMC的激活作用
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)HSP可引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原性物质在抗原递呈细胞内经MHC Ⅰ类途径加工递呈,提供激活抗原特异性CTL的信号.PADRE是一种辅助T细胞表位,辅助T细胞的活化对CTL的激活有促进作用.
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汉坦病毒结构蛋白抗原表位的研究进展
汉坦病毒结构蛋白抗原表位的研究对于阐明该病毒结构蛋白的结构与功能及其基因工程疫苗研制至关重要。本文综述了近年来汉坦病毒抗原表位研究中应用的各种生物新技术以及汉坦病毒结构蛋白B细胞表位和T细胞表位的新进展。
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实验性肺炎球菌荚膜多糖-辅助性T淋巴细胞表位结合疫苗的研制
为了讨论小分子合成肽能否替代大分子细菌蛋白用于疫苗制备,美国Epimmune公司Alexander等将含13个氨基酸的全人白细胞抗原(HLA)-同向重复(DR)表位(PADRE)与肺炎球菌荚膜多糖(PS)结合制成糖结合疫苗(PADRE-PS),评估了PADRE作为糖结合疫苗蛋白载体的可能性.
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071 编码38kDa蛋白细胞毒性和辅助性T细胞表位的DNA疫苗对抗结核杆菌细胞免疫的诱导
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122不同地区分离恶性疟原虫红外期特异性抗原-1(LSA-1)的HLA退变T细胞表位的高度保守性