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抗突变型瓜氨酸波形蛋白与类风湿关节炎活动性相关分析
类风湿关节炎(RA )是一种累及多关节、甚至内脏器官的一种慢性自身免疫病,其发病率为0.5%~1%[1]。在过去对R A的研究中,临床表现和类风湿因子(RF )始终是诊断 RA必不可少的条件,但随着对RA和RF研究的深入,发现RF虽然敏感性高,但特异性差[2],且相当部分 RA 临床表现不典型,给广大风湿科医师诊断带来了不小麻烦。因此,2009年美国风湿病学会(ACR )联合欧洲抗风湿病联盟(EULAR)不仅提出了RA新的诊断标准,并要求重视抗环瓜氨酸肽蛋白抗体(A C‐PA )在RA 诊断中的作用[3]。作为 ACPA 的典型代表,抗突变型瓜氨酸波形蛋白(M C V )和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在RA诊断中(尤其早期RA )特异性相当[4],但前者敏感性更高,与 RF相当。可能原因是 CCP 为人工合成,其相对分子质量比MCV小20倍,仅有1~2个抗原决定簇,而MCV具有45个可被瓜氨酸化的潜在抗原凹位。不仅如此,已有研究显示RF、抗CCP抗体与 RA 病情活动性指标DAS28[5][根据触痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率(ES R )、患者自我症状等评分评价RA活动性的有效指标]具有一定相关性[6],但很少有研究显示MCV与RA活跃性的关系。因此本研究旨在通过 M C V 与28个关节疾病活动指数(DAS28)关系的研究,探讨MCV 在 RA活跃性中的作用,为广大专科医师判断RA活跃性方面提供一条可行的途径。
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抗独特型抗体的研究现状
在目前的免疫技术中,抗独特型抗体的研制是一种可行的免疫原替代技术.抗体的独特型是指存在于抗体分子上的独特型抗原决定簇的总称,它反映抗体分子的多样性.独特型抗体(Ab1)是指具有独特型抗原决定簇的抗体,而抗独特型抗体(Ab2)是指针对抗体的独特位产生的抗体.该技术首次出现于1974年,Jerne在Burnet的细胞克隆选择学说的基础上提出了著名的免疫网络学说,在Jerne提出免疫网络学说的基础上,Nisonoff和Lamoyi明确指出,抗独特型抗体实质上能替代抗原诱导特异性免疫应答,是近年来生物技术研究的一个热点,尤其作为人、畜疾病防治的一种新制剂,已展示出十分诱人的前景[1].
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热处理的Ⅰ型嗜肺军团菌细胞抗原作酶联免疫吸附试验检测抗体的应用
菌细胞为抗原的酶联免疫吸附试验(BCA-ELISA),不用提取抗原,可测定直接作用于宿主体内的菌细胞表面裸露抗原决定簇(蛋白质、脂多糖)激起的抗体,能更确切地反映机体的免疫状态,其敏感性较肥达氏等细菌凝集试验测得的这种抗体滴度高10~100倍,已用于检测许多细菌表面(或菌毛)抗原的抗体[1-4].
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单克隆抗体:生命科学的革命、治疗肿瘤的希望
1 单克隆抗体的概念及制备免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素.当动物体受抗原刺激后可产生抗体.抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇,各种抗原分子具有很多抗原决定簇,因此,免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物.
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甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素HA1氨基端的表达及双抗体夹心ELISA法的建立
甲型H1N1流行性感冒(简称流感)病毒是一种人类常见的流感病毒之一,2009年引起流感大流行的病毒并非一种全新的流感病毒[1],陆一涵等[2]推测可能是北美地区的H1N4病毒发生了一定程度的变异(包括重组和重排)所致。基因组测序发现,该病毒包含禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的基因片段[3-4],其中血凝素(HA)蛋白来源于猪谱系,一直存在于经典猪流感病毒和三源重排子猪流感病毒中[5]。HA蛋白是流感病毒主要的表面抗原,与病毒吸附穿膜及宿主对病毒易感性有关[6-8],其变异率较高,常通过突变使病毒逃脱宿主免疫引起新的流感大流行。这种变异主要体现在HA1氨基端球形头部的受体结合部位与抗原决定簇氨基酸的改变,因此甲型H1N1病毒HA1氨基端蛋白的表达是建立特异性检测方法的关键。笔者通过原核表达此次甲型H1N1流感病毒血凝素HA1氨基端蛋白,制备多抗血清,建立了特异性双抗体夹心ELISA检测法。
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不同冷却方法对免疫组化检测结果的影响
在免疫组化中,组织固定、抗原修复、显色反应是保证免疫组化染色质量的重要步骤.我们用PV6000免疫组化染色法,经过长时间的摸索与实验,发现在严格按照染色步骤要求操作的同时,高温高压抗原修复后用自然冷却法检测比快速冷却法效果好.现在以乳腺癌为例,介绍如下.
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抗肾小球基底膜抗体的抗原决定簇与患者肾损伤程度相关
目的研究抗肾小球基底膜(GBM)抗体的抗原决定簇及其与临床病理表现的关系.方法用辣根过氧化物酶标记的亲和层析纯化的抗GBM自身抗体(APab-HRP)和抗α1、3、5(Ⅳ)NC1单克隆抗体(Mab1、3、5)作为识别GBM上不同抗原决定簇的探针,应用竞争性ELISA法测定抗GBM抗体的抗原决定簇.结果59例患者中,58(98.3%)例可抑制Mab3,20(33.9%)例可抑制Mab1,均不抑制Mab5.同一血清对APab-HRP和对Mab3的抑制率呈平行关系(P<0.01).不同患者血清抗体对APab-HRP的抑制率与该患者确诊时的血肌酐浓度呈正相关(P<0.05).出现少尿或无尿的患者血清抗体对APab-HRP的抑制率较高(P<0.01).单纯抗GBM抗体阳性组较合并ANCA阳性组对APab-HRP的抑制率较高(P<0.05).是否出现咯血、肾脏病理新月体所占比例、肾转归以及其他临床表现不同的患者,对各种探针的抑制率均无差异.结论抗GBM抗体的主要抗原决定簇位于α 3(Ⅳ)NC1,但并不完全一致.抗原决定簇的差异可能与肾损害的程度相关.
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影响免疫组化染色结果的几点体会
近年来,国外一些公司推出了即用型抗体,使免疫组化染色变得非常方便和简单.但是,免疫组化染色成功与否,抗原决定簇的暴露是其中一个关键环节,目前常用的抗原修复法有微波、高压和酶消化等方法.用不同的修复方法所导致的结果亦不相同,考虑到抗原修复时内源性生物素对实验结果的影响建议在抗原修复时做阴性对照以排除假阳性结果,否则易影响诊断结果.现将我们的体会报道如下:
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抗原修复对端粒酶逆转录酶免疫组化染色效果的影响
常规石蜡切片标本,一般均用甲醛固定,而经甲醛固定的组织,其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成羧甲基而封闭了抗原决定簇,使其免疫组化标记的敏感性明显降低.免疫组化染色的成功与否,抗原决定簇的保存和暴露是其中一个重要的环节.要充分暴露抗原决定簇,目前常用的抗原修复法有微波、高压和酶消化等,它们对大多数抗体的标记是有益的,但是,有些抗体经抗原修复后不再发生反应或阳性率降低.
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几种组织抗原修复技术的探讨
应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇,是免疫组织化学技术中的关键步骤.近两年来,我们对细胞不同部位的抗原采用各种修复方法进行详细对照,旨在探讨各部位抗原的佳修复方式.
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高压锅水浴法修复组织抗原防脱片技术的应用
目前用于免疫组化的抗体近千种,不同抗体对病理切片的要求不尽相同.有些抗体(单抗或多抗)必须在组织切片经高压修复后才能有效使用,如ER、PR、p53及一些多药耐药标记等.用于免疫组化的病理组织,经福尔马林固定后许多抗原决定簇被醛基交联封闭,无法与抗体结合,采用高温高压(下称常规法)处理这些组织,就可破坏醛基交联,使抗原暴露,从而与抗体有效结合.
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甲醛固定和抗原修复的分子机制(英)
Shi等(1991)发现在重金属溶液中煮沸组织切片能改变甲醛固定效应,即煮沸的组织切片中许多组织抗原决定簇的抗体反应性被修复,这个过程常常被称为抗原修复.
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提高肝组织中HBsAg、HBcAg阳性率的体会
常规石蜡切片标本,一般均用甲醛固定,而经甲醛固定的组织,其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成羧甲基而封闭了抗原决定簇,使其免疫组化标记的敏感性明显降低,且背景着色明显.免疫组化染色的成功与否,组织内源性过氧化物酶清除以及抗原决定族的保存和暴露是一个重要的环节.在日常工作中,我们发现同一肝穿组织采用不同的预处理方法,明显影响HBsAg、HBcAg的检出率.
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甲型肝炎纯化灭活疫苗(VAQTA(R))的临床效果
甲型肝炎(甲肝)纯化灭活疫苗(VAQTA(○R),默沙东)是一种经福尔马林灭活的甲肝疫苗,通过对甲肝病毒(HAV)的F′病毒株(CR326F)进行一系列高度减毒过程后获得.早先自F′变异病毒株获得的活疫苗有很长的潜伏期,有些志愿受试者在接种3.5个月后仍未有血清抗体阳转,而用福尔马林灭活病毒可能会增加病毒颗粒表面抗原决定簇的暴露,从而加快血清抗体阳转.
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青海省2010~2012年H3亚型流感病毒HA1基因特性研究
目的 了解2010~2012年青海省H3亚型流感病毒HA1基因变异情况,评价2010~2012WHO推荐流感疫苗株对当地H3亚型流感的预防效果. 方法 随机选择2010~2012年流感病原监测中分离到的H3亚型流感毒株,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,采用MEGA4.0软件对其核苷酸序列及所推导的氨基酸序列进行基因特性分析. 结果 与2010~2012年WHO推荐疫苗株A/Perth/16/2009相比,青海省2010年H3亚型分离株有5~6个位点发生氨基酸替换,其中N81D处于抗原决定簇E区;2011年分离株有7个位点发生氨基酸替换,L157S处于抗原决定簇B区;2012年分离株有9个位点发生氨基酸替换,K144N和A198S、N278K分别处于抗原决定簇A区和B区,并在第45和144位增加了2个糖基化位点. 结论 2010~2012年青海省H3亚型流感病毒HA1基因发生不同程度的变异;2010~2012年WHO疫苗株A/Perth/16/2009对2010和2011年H3亚型流感的预防有效,对2012年H3亚型流感的预防效果不够理想.
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噬菌体随机肽库技术及其在寄生虫学领域的应用
1985年Smith率先将EcoRI内切酶的部分基因片段插入丝状噬菌体fl的外壳蛋白基因Ⅲ区,使目的基因编码的多肽呈现在噬菌体表面,并建立了噬菌体表面呈现技术(Phage display techniques).在此基础上,1990年Scott首次将编码随机序列肽的DNA与丝状噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ整合,使随机肽与噬菌体蛋白以融合形式表达,并呈现在噬菌体表面,从而建立了噬菌体随机肽库技术(Phage display random peptide libraries).近年来,噬菌体随机肽库已成为探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探测未知蛋白空间结构表位的有利工具,在抗原表位(抗原决定簇)定位和模拟蛋白相互作用位点定位、功能配体或药物的筛选、新型疫苗的研制以及肿瘤治疗上拓宽了研究者的思维,提供了新的途径.目前,该技术在寄生虫学领域同样受到研究者的青睐.本文就噬菌体随机肽库技术及其在寄生虫学领域中的应用作一综述.
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pH9.0 Tris-EDTA 和pH6.0 Citrate在抗原修复中的应用
甲醛是形态学和免疫组织化学的标准固定液.但是,经甲醛固定的组织常引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇的封闭.抗原决定簇是否充分暴露,是免疫组织化学成败的关键因素之一.抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色中是一种简单有效的增强方法,但目前尚没有单一的化学物质既能作为基本的修复液又能作为佳的抗原修复液,为了确定理想的修复液,我们采用"组合实验"的方法,比较了0.05 mol/L Tris +0.001 mol/L EDTA pH9.0(简称pH9.0 Tris-EDTA)和0.01 mol/L pH6.0 Citrate微波热修复及不修复的情况下,免疫组织化学染色的表达效果.
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不同的抗原修复条件对免疫组织化学染色结果的影响
抗原是指能刺激机体产生抗体,并能与抗体相结合的物质.物质所具有的这种特性称为抗原性,它主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定[1].但是部分组织经甲醛固定、石蜡包埋后,部分甚至全部抗原决定簇被封闭,影响免疫组织化学的标记效果,误导诊断.因此,不少的研究者纷纷采用不同的方法去暴露被封闭的抗原决定簇.笔者比较了30种常用的抗体在9种不同的抗原修复条件中的表达情况,以探讨各种不同的抗体佳的修复方法和佳的修复条件.
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HE染色切片褪色后免疫组织化学染色抗原修复方法
经甲醛固定的组织,由于各种交联键的形成,引起蛋白质的空间结构的改变,终导致部分或全部的抗原决定簇被封闭,从而影响免疫组织化学检测的敏感性.
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免疫活性细胞回输前后HCV滴度及C区和E2区CTL表位变化
目的观察免疫活性细胞回输前后慢性丙型肝炎患者外周血丙型肝炎病毒(HCV)滴度及C区和E2区CTL表位的变化情况.方法定量PCR检测4例接受免疫活性细胞回输的慢性丙型肝炎患者外周血HCV滴度,并利用分子克隆、基因测序和计算机辅助分析技术分析不同时间点不同分离株CTL表位的变化情况.结果 4例患者在接受免疫活性细胞回输前后血清ALT水平存在不同程度波动,其差值从第2例患者的58到第1例患者的198,同时HCV滴度也发生了较大变化,其变化倍数从第3例患者的25.37倍到第4例患者的882.35倍,其对数转换值的波动幅度在1.40~2.94之间.在免疫活性细胞回输后4例患者外周血HCV滴度均出现了不同程度的一过性下降.在全部观察期内HCV C区和E2区的CTL表位编码区均未出现明确的变化.结论机体免疫攻击状态发生改变时可引起患者体内丙型肝炎病毒滴度的变化,但不伴随目前观察的CTL表位编码基因的改变.