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风疹病毒E1包膜糖蛋白的结构与功能研究进展
风疹病毒(RV)是致人类先天性畸形的重要病原体之一.其E1包膜糖蛋白在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用.对其氨基酸和核苷酸序列结构与蛋白功能的深入研究有助于我们理解RV产生免疫的机理,以研制亚单位疫苗、多肽疫苗等新型疫苗.本文对RVE1糖蛋白结构与功能关系的研究进展进行了综述.
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噬菌体展示技术在病毒抗原表位筛选中的应用
病毒的抗原表位分析在揭示病毒抗原分子的结构和功能,抗原-抗体反应机制方面具有重要意义,亦为研制诊断试剂,设计多肽疫苗和筛选药物等研究提供依据.近年来,许多学者将噬菌体展示技术应用于病毒抗原表位的筛选中,结果显示:这种新型分析技术弥补了传统分析技术的不足,为基于抗原表位的后继研究奠定了基础.
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慢性病毒性肝炎的治疗现状与评价
我国慢性病毒性肝炎病人数量多,治疗难度大,既严重影响人民的身体健康,又消耗了大量的经济资源.客观地讲,目前并没有能够彻底根治慢性病毒性肝炎的特效药物.但是我国有丰富的中药资源,近年来国外新研制的抗病毒药物也愿意在中国进行早期的临床研究.另外,人们根据对病毒性肝炎免疫学发病机理的理解,一些新的免疫疗法如治疗性多肽疫苗、基因疫苗、细胞免疫治疗等也都在积极地研究中.这些都给我国的肝炎患者带来了希望.现就当前慢性病毒性肝炎,主要是慢性乙、丙型肝炎的治疗现状作一简单的评述.
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人乳头瘤病毒11型L1主要衣壳蛋白的B细胞表位多肽作为疫苗的研究
分析了人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,并以此为基础研制表位多肽疫苗.研究中采用Goldkey和PC/Gene软件系统,分析HPV11的L1主要衣壳蛋白的二级结构、抗原性、B细胞表位,并引入氨基酸抗原性指数,综合评估其B细胞优势表位.Fmoc固相合成表位多肽,高效液相层析方法纯化,毛细管电泳分析其纯度.与0.2ml佐剂完全乳化后,按50趣/只的剂量免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价.取免疫小鼠血清,与HPV11 DNA阳性的尖锐湿疣患者的疣体上清液结合,鉴定免疫后小鼠所产生抗体的特异性.发现HPV11的L1主要衣壳蛋白的第426～439位和第487～501位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣的疣体组织上清液呈阳性反应.说明所选这两个肽段为HPV11的L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,但是否具有功能特异性,尚需进一步研究.
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多肽疫苗研究进展
多肽疫苗是新一代疫苗研究的热点之一.与其他类型疫苗相比,多肽疫苗优势在于具有免疫应答能力、安全、反应原性低等.目前有包括抗病毒、抗癌、抗疟及避孕等多种多肽疫苗正在进行各期临床试验.
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以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒多肽疫苗对树突状细胞抗原递呈相关分子表达的影响
目的 探讨包含佐剂Candin和人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)多肽疫苗对树突状细胞(Dendritic cell,DCs)抗原递呈相关分子表达的影响. 方法 取健康人外周血白细胞,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),用磁珠分选系统分选CD14+细胞,经细胞因子rhGM-CSF(1 000 IU/ml)、rhIL-4(1 000 IU/ml)、TNF-α(10 ng/ml)诱导后获得DCs.分别用佐剂Candin(150 μl/ml),HPV16 E7多肽(10 μmol/L),以及包含佐剂Candin(150 μl/ml)和HPV16 E7多肽(10 μmol/L)的疫苗刺激DCs 24 h,以PBS处理的DCs为阴性对照,采用流式细胞术检测DCs表面抗原递呈相关分子CD40、CD80、CD86、HLA-DR的表达. 结果 与阴性对照组比较,佐剂Candin及疫苗(Candin/HPV多肽)均能刺激DCs高表达HLA-DR,差异均具有统计学意义(P＜0.05).佐剂Candin及疫苗(Candin/HPV多肽)均能刺激细胞高表达CD40、CD86,与阴性对照组比较,仅疫苗(Candin/HPV多肽)组结果差异具有统计学意义(P＜0.05).佐剂Candin及疫苗(Candin/HPV多肽)均能增加细胞表达CD80,但差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒多肽疫苗能刺激DCs高表达抗原递呈相关分子.
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以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒多肽治疗疫苗刺激朗格汉斯细胞分泌IL-12的研究
目的 探讨佐剂Candin及包含佐剂Candin和HPV多肽的疫苗对朗格汉斯细胞(langerhans cells,LCs)分泌IL-12的影响. 方法 采用淋巴细胞分离液分离人外周血 PBMCs,采用磁珠分选系统分选CD14+细胞,经细胞因子rhGM-CSF(1 000 IU/ml)、rhIL-4(1 000 IUs)、TGF-β1(10 ng/ml)诱导后获得LCs,采用流式细胞术鉴定.用佐剂Candin(50、100、150 μl/ml)、包含佐剂Candin(50、100、150μl/ml)和HPV16 E6多肽(10 μmol/ml)疫苗刺激LCs 24 h,ELISA法检测IL-12p70水平. 结果 诱导培养7d的细胞高表达LCs特征性的表面分子Langerin.佐剂Candin及HPV多肽疫苗均能不同程度刺激LCs分泌IL-12p70.佐剂Candin刺激LCs分泌IL-12p70高达175 ng/ml,HPV多肽疫苗刺激组高达298 ng/ml.含有Candin 100 μl/ml的HPV多肽疫苗刺激LCs分泌IL 12p70水平较相应剂量的单独佐剂Candin组高. 结论 佐剂Candin及HPV多肽疫苗均能刺激LCs分泌IL-12.HPV多肽疫苗刺激LCs分泌IL-12的能力较单独佐剂Candin更强.
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血液系统恶性肿瘤多肽类疫苗的研究进展
近年来血液系统恶性肿瘤的治疗有了显著进展,但由于微小残留病灶(MRD)的存在,复发仍是亟待解决的主要问题.肿瘤多肽疫苗是有望克服MRD的免疫疗法之一.本文重点介绍血液系统恶性肿瘤中WT1、RHAMM、BCR-ABL、PR1多肽疫苗的新临床试验结果,PRAME、Survivin等多肽的特异性免疫反应新进展,及不规则肽疫苗、新型免疫佐剂、结合肽疫苗、Ad-tWT1疫苗等增强疫苗免疫治疗效应的新措施及其应用前景.
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Eps8抗原HLA-A*0201限制性CTL表位的预测和鉴定
目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A* 0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础.方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-Ⅰ类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A* 0201限制性CTL表位,通过肽/MHC分子结合力及肽/MHC分子复合物稳定性实验初步验证预测结果,利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immuospot assay,ELISPOT)方法检测候选表位刺激健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC)分泌IFN-γ的能力,以及LDH细胞毒实验验证其体外杀伤肿瘤细胞的功能,后在HLA-A* 0201/Kb转基因小鼠中检测候选表位的体内免疫功能.结果:通过在线生物学软件筛选得到4个候选表位.结合力实验结果显示,p360-368具有高结合力,p101-109、p276-284具有中等结合力.稳定性实验结果显示,该3个表位的DC50均大于8h.LDH细胞毒实验中p101-109、p276-284、p360-368都能诱导产生特异性CTL,对靶细胞具有显著的杀伤效应,还能提高效应细胞分泌IFN-γ的水平.在HLA-A* 0201/Kb转基因小鼠体内免疫功能检测中同样证实该Eps8抗原表位能产生强烈的免疫应答.结论:天然表位p101-109、p276-284、p360-368可能是Eps8抗原HLA-A* 0201限制性CTL表位.
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APL提高H2-D~b限制性天然CTL表位HPV-16E7_(49-57)免疫效应
HPV-16E7_(49-57)是H2-D~b限制性免疫显性CTL表位,是治疗HPV-16相关病变的理想靶标,研制HPV-16多肽疫苗可以参考表位为基础.但天然表位HPV-16E7_(49-57),的肿瘤免疫效果并不理想.对表位进行氨基酸置换修饰,筛选出免疫原性强的修饰多肽配体(APL),对构建HPV-16多肽疫苗有重要的意义.
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HPV L2多肽疫苗的作用机制及其研究进展
早在20世纪70年代,人们就发现人乳头瘤病毒(HPV)感染可以引起人体不同部位的疣状病变,进一步的研究发现,HPV可以通过微小损伤侵入机体表皮和黏膜上皮,潜伏于上皮基底细胞,时机成熟进入角质形成细胞进行增殖,引起皮肤乳头瘤样损害.根据HPV致癌性的不同,可将其分为低危型和高危型.其中,高危型HPV感染与食管癌、喉癌、舌癌等恶性肿瘤的发生有关,尤其是与宫颈癌发生的关系尤为密切[1].
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变异链球菌表面蛋白质抗原真核表达质粒的构建及免疫动物的研究
变异链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是龋病主要致病菌，S.mutans的表面蛋白质抗原PAc是其主要毒力因子之一，参与了唾液介导的S.mutans在牙面的粘附。S.mutans PAc分子的氨基端不仅富集免疫显性T、B细胞表位，而且含有唾液糖蛋白结合区，因此氨基端是理想的表位多肽防龋疫苗选择区。此外，Streptococcus sobrinus（S.sobrinus）的PAg分子与S.mutans PAc分子的氨基端具有保守的B细胞表位，以PAc分子该区段制备的多肽疫苗可激发宿主对S.sobrinus的交叉保护性反应。因而，初次以变异链球菌表面蛋白质抗原PAc氨基端的编码基因构建真核表达质粒，免疫BALB/c小鼠，观察所诱导的体液免疫应答，为基因疫苗防龋的动物实验提供资料。
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胃癌相关抗原模拟表位的筛选及鉴定
噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具，已受到广泛重视，并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”，这些配体不一定和天然配体完全相同，但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此，在抗原表位-抗体的识别研究中，可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位，这些表位既可以是线性表位，也可以是模拟的构象性表位。
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TGF-β1多肽疫苗抗肝纤维化的鉴定
目的 鉴定转化生长因子β1(TGF-β1)的优势抗原表位偶联钥孔戚血蓝素(KLH)蛋白人工合成多肽疫苗对SD大鼠的免疫原性,并探讨对SD大鼠实验性肝纤维化的抑制效应.方法 人工合成TGF-β1优势抗原表位多肽偶联KLH蛋白后,作为多肽疫苗免疫SD大鼠.40只SPF级SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、佐剂对照组、造模组(CCl4诱导)、多肽疫苗组,每组各10只,采用CCl4复合因素诱发大鼠肝纤维化模型.多肽疫苗组动物第1、14、28天连续三次每次腹股沟处及腋窝处多点注射50 μg 0.5ml乳剂(相同体积的弗氏佐剂加合成肽),此后每隔7d免疫一次无任何佐剂的合成肽(50 μg0.5 ml水剂),共免疫10周；造模组及多肽疫苗组自第3周起首次皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液2 ml/kg,以后每周2次背部皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液1.5 ml/kg、30％乙醇6 ml/kg隔日灌胃并给予高脂饮食连续造模8周.正常对照组大鼠同时给予相同剂量的橄榄油溶液皮下注射；佐剂对照组大鼠同期给予注射用水加弗氏佐剂0.5ml乳剂.第10周处死所有大鼠,ELISA检测血清TGF-β1抗体、肝纤维化指标(HA、Ⅳ-C),全自动生化仪检测血清ALT、AST、TBIL、ALB和GLB,碱水解法检测肝脏羟脯氨酸(Hyp)含量,并进行肝脏病理检查.结果 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1抗体,但是与对照组比较没有统计学差异(P＞0.05).多肽疫苗组生化指标ALT、AST、TBIL与造模组比较有统计学差异(P＜0.05),但是血清HA、Ⅳ-C含量及肝脏Hyp含量与造模组相比并没有统计学差异(P＞0.05).HE、VG染色可见多肽疫苗组较造模组肝组织病理变化及纤维化程度无明显差异.结论 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1中和抗体,且可能具有保肝作用,但其干预治疗实验性大鼠肝纤维化的疗效较差,有待进一步研究.
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肿瘤多肽疫苗的研究进展
近年来,随着免疫学的不断发展,肿瘤的免疫疗法已成为当前研究的热点,而多肽疫苗因其化学性质稳定、易于制备、无潜在致癌性等优点,更是受到广泛关注.研究发现,应用免疫佐剂、多抗原分支肽、全长或多表位叠加抗原肽、融合穿膜肽,增加Th表位及联合树突状细胞等方法,可提高免疫原性,增强抗肿瘤作用.多肽疫苗临床治疗一些恶性肿瘤也已取得一定效果,但尚存在免疫原性欠佳、免疫应答、临床疗效不尽一致及受HLA表型限制等问题,还需进一步深入研究解决.
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结核疫苗研究的历史与现状
由于结核病缺乏有效的疫苗保护,发病率持续增高,成为人类传染病中继艾滋病之后的第二大杀手.减毒牛型结核分枝杆菌--卡介苗是目前许多国家批准应用于人体的惟一结核病疫苗[1-2].然而,卡介苗对成人肺结核的保护效率很低,研制新型结核病疫苗迫在眉睫.多种类型的新型疫苗,包括重组卡介苗疫苗、营养缺陷型结核分枝杆菌疫苗、蛋白质多肽疫苗、DNA疫苗、以病毒为载体的结核分枝杆菌亚单位疫苗等被广泛研究.至2005年,已有120种以上的疫苗进行了动物实验研究,至少有5个疫苗已进入Ⅰ期临床试验[3].
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结核分枝杆菌分泌蛋白64基因重组腺病毒疫苗的构建
卡介苗是当前惟一能够应用于人体的结核病疫苗,但对成人肺结核的保护效率很低.DNA、多肽及病毒等亚单位疫苗能够加强卡介苗或重组卡介苗的免疫保护效果,目前被认为是结核病疫苗研究的重要方向之一~([1-2]).同DNA疫苗和多肽疫苗相比,重组活的结核病亚单位疫苗能在体内持续表达MTB特异性抗原,使其具有高效和经济的优势.
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特异性抗髓性白血病多肽疫苗的研制和应用
化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要方法,但是由于受供者来源和年龄的限制,化疗后微小残留病灶的存在使白血病容易复发.对白血病化疗缓解后给予疫苗治疗是消除残留病灶的理想方法.
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未来的丙型肝炎疫苗
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是丙型肝炎的病原体,是导致输血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要致病因子.HCV感染常导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌.HCV在细胞内和动物体内复制能力很差,没有理想的细胞模型和动物模型.丙型肝炎目前尚无疫苗,还有很多病人在等待治疗.研制预防性和治疗性疫苗,以控制HCV 感染有着重要意义.经过几代科技工作者的努力和奉献,丙型肝炎疫苗研究取得了重大进展.用核酸疫苗作首次免疫,用多肽疫苗或树突状细胞疫苗作加强免疫,不但有预防作用,而且有治疗效果.核酸疫苗将为改善人类和动物健康作出巨大贡献.
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壳聚糖季铵盐对戊型肝炎病毒多肽疫苗免疫效果的研究
目的 研究壳聚糖季铵盐(3-氯-2-羟丙基三甲基壳聚糖,HTCC)作为免疫佐剂,对戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)多肽疫苗接种小鼠的免疫增强效果.方法 IPTG诱导重组质粒pET28a-ORF23在大肠杆菌BL21中表达HEV重组蛋白作为多肽疫苗,以3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CTA)作为化学改性剂对壳聚糖进行接枝改性合成水溶性HTCC作为多肽疫苗佐剂.50只雌性BALB/c小鼠随机分为5个免疫组,小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周.ELISA检测3个免疫阶段鼠血清抗HEV-IgG抗体水平;末次免疫5周后,四色流式细胞术检测免疫小鼠全血中CD4+、CD8+、IFN-γ+和IL-4+细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖反应.结果 加HTCC佐剂组的抗HEV-IgG抗体均显著高于不加佐剂组(P＜0.05),其小鼠脾脏T淋巴细胞的蛋白刺激指数显著高于不加佐剂组(P＜0.05).各组间的CD4+细胞百分率无显著差异.加HTCC佐剂组的IFN-γ+细胞百分率显著高于不加佐剂组和两个阴性组(P＜0.05),其IL-4+细胞百分率显著低于不加佐剂组和两个阴性组(P＜0.05).结论 壳聚糖季铵盐对HEV重组多肽疫苗接种小鼠有一定的免疫加强效果.
