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膜联蛋白1与疾病的关系
膜联蛋白-1(Annexin1)是一种钙离子介导的磷脂结合特性的蛋白质,是表皮生长因子受体激酶和酪氨酸蛋白激酶的底物,主要位于胞浆,但在特定的条件刺激下也可重新分布[1],这个37kDa的蛋白质在糖皮质激素(GC)的诱导下可参与抑制花生四烯酸和磷酯酶A2(PLA2)的合成,多项动物试验表明,Annexin1是GC介导的抗炎反应的重要介质,对中性粒细胞和单核细胞迁移都有强大的抑制效应[2],从20世纪70年代以来的研究发现,Annexin1与纤维化、肿瘤等疾病有密切关系.
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不同免疫策略获得c-erbB2单克隆抗体及其结合特性的比较
人类c-erbB2/HER2原癌基因属于EGFR家族.将c-erbB2真核表达载体转染NIH3T3细胞,可赋予该细胞以恶性表型[1];1998年由鼠源抗erbB2抗体人源化改造而来的Herceptin(商品名)已被美国FDA批准用以治疗c-erbB2高表达的转移乳腺癌,并已获得较好的临床治疗效果[2].本工作采用不同免疫策略获得了数株c-erbB2单抗,并对其与靶分子的结合特性进行了比较分析,提出了相对更易获得能与天然erbB2结合的抗体制备策略,可供后续工作参考.
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胃癌相关抗原模拟表位的筛选及鉴定
噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具,已受到广泛重视,并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”,这些配体不一定和天然配体完全相同,但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此,在抗原表位-抗体的识别研究中,可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位,这些表位既可以是线性表位,也可以是模拟的构象性表位。
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HIV-1分离培养的关键技术及其影响因素
艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)分离培养是艾滋病(AIDS)相关研究的关键基础技术之一,研究HIV生物学表型、中和抗体结合特性、表型耐药性、药物筛选等都需要在体外拿到稳定复制的HIV病毒株.HIV分离培养也是确诊HIV感染的手段之一[1,2],是判定母婴传播、鉴别可疑结果的重要依据.因此,建立稳定成熟的HIV分离培养方法,优化各种影响因素,提高分离率,对于提高HIV感染的实验室诊断水平,开展各种HIV生物学表型研究具有重要的意义.
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Annexin A2蛋白在妇科恶性肿瘤中的研究进展
膜联蛋白A2(Annexin A2)是Annexins超家族中A亚家族重要成员,具有钙离子介导的磷脂结合特性.Annexin A2在生物膜的形成、胞吞和胞吐、成骨细胞的形成和骨的重吸收、DNA合成、细胞增殖及分化等方面起着重要调节作用.近年来的研究表明Annexin A2的表达失调与肿瘤的发生发展密切相关,资料显示它可能在肿瘤的发生发展、侵袭、转移机制的形成过程中扮演重要角色.深入研究Annexin A2蛋白将为肿瘤的诊断和治疗提供新思路.
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大鼠重组EPO结合蛋白的表达纯化及活性鉴定
EPO是调控骨髓红系造血的关键因子,其与红系祖细胞表面的特异受体EPO-R结合引发胞内信号机制,防止细胞凋亡并促进其增殖和分化[1].EPO-R胞外域是与EPO发生结合的受体区段,又称为EPO结合蛋白(EBP).迄今,采用基因工程方法制备的EBP主要被应用于受体-配体结合特性及物理结构研究[2-4],其在治疗EPO反应性增生失调如红白血病和红细胞增多症中的可能性探讨尚未见报道.我们依据EPO-R与EPO结合的化学计量特性设计了串联融合的双体结合蛋白,采用原核系统进行表达,对其体内外结合活性进行了鉴定.
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p185胞外区及其亚区在大肠埃希菌中的表达及与单抗的结合特性分析
目的 旨在获得p185胞外区及其亚区基因在原核系统中表达的多肽,并分析其与单抗结合特性.方法 以pGEX-4T-1为载体,克隆p185胞外区及其亚区基因,并在原核系统中表达,经变性、复性后,以亲和层析法获得纯化的多肽.进一步通过ELISA方法分析了这些多肽与抗p185单抗A18的结合特性.结果 研究获得原核系统表达的p185胞外区及其亚区多肽,GST-E3和GST-E34与单抗A18具有特异结合活性.结论 原核系统表达的p185胞外区及其亚区多肽是可行的,初步确定为与单抗结合的亚区多肽,为进一步研究单抗识别的表位及其抑瘤机制奠定基础.
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精神分裂症患者抗脑抗体的标记与定位研究
近年来,一些学者提出精神分裂症发病机理的自身免疫假说,陆续报道在患者体液中存在抗脑组织抗体,认为这种抗脑抗体可能与精神分裂症中枢神经系统免疫病理损害密切相关[1,2].为确认此抗脑抗体对脑组织的免疫结合特性及在脑组织中的定位,我们应用微波-免疫组化技术对精神分裂症患者脑脊液中IgG与同种异体的患者组织如脑、心、肝、脾、肾组织抗原的免疫结合特性及在脑的额上回,海马回,扣带回,乳头体,基底节,中脑,桥脑,小脑等的组织定位进行了组织、细胞学的免疫学标记研究,报告如下.
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角质细胞生长因子抗大鼠肝纤维化的实验研究
角质细胞生长因子(KGF)是具有肝素结合特性、并能调节皮肤表皮角质细胞增殖和分化的功能蛋白,属于成纤维细胞生长因子家族[1],正常人体中有KGF-Ⅰ和KGF-Ⅱ.本实验所用新型人角质细胞生长因子是KGF-Ⅰ型经基因工程改造,应用大肠杆菌重组表达技术制备而成.本实验拟用新型KGF预防大鼠肝纤维化,为临床治疗肝硬化寻求更好的方法.
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99Tcm-octreotide体外受体结合法及其结合特性研究
直接标记法制备99Tcm-octreotide 已获得成功[1],但标记过程的化学处理有可能影响受体结合特性,因此,笔者进行了体外细胞膜放射受体分析研究,以便为临床受体显像提供实验依据。 一、材料与方法 1.膜受体结合方法学研究。99Tcm-octreotide纯化后放化纯为93.8%,放射性比活度649 TBq/mol[1],采用Wistar大鼠脑皮质细胞膜进行体外受体结合分析,其制备方法参照文献[2],有改进。细胞膜蛋白质质量浓度为0.32 g/L。按照体外放射受体分析的一般流程,首先进行大结合活性测定,取定量99Tcm-octreotide 5×10-7 mol/L,细胞膜量逐级增加,直到过量,进行结合反应,以滤膜放射性总结合TB(放射性计数)与加入99 Tcm-octreotide量T(放射性计数)的比值得大结合率,即为99Tcm-octreotide的大结合活性。其次以大结合率为标准,分别改变反应体系中温度、保温时间、细胞膜和标记肽用量、分离条件等相关因素,按照受体分析流程进行分离和测定,以确定细胞膜受体结合反应的佳条件。后通过观察同一细胞膜在同一次结合实验中的变异系数CV1(n=5组)和同一细胞膜在不同天进行结合实验的变异系数CV2(n=5次),研究佳结合反应条件的可重复性。非特异性结合(NSB)包括细胞膜组织本身的NSB(采用竞争抑制曲线法)和实验材料(滤膜、试管等)的NSB。 2.受体结合特性研究。①饱和实验:TB组测定,在系列试管中依次加入细胞膜60 μL,标记肽(1~10)×10-7 mol/L,级差1×10-7 mol/L。NSB组测定,在系列试管中除上述试剂外,每管还须加入octreotide 2 μg,使细胞膜受体特异性结合受到充分抑制。两组试管均用含0.5% BSA Tris缓冲液补足至200 μL,25 ℃保温90 min,快速通过滤膜终止结合反应,测滤膜放射性即为TB或NSB,后求得亲和常数KD和受体大结合容量Bmax。②竞争抑制实验:在系列试管中依次加入细胞膜60 μL,标记肽5×10-7 mol/L, 非标记肽量10-12~10-5mol/L,级差10-1 mol/L,在相同反应条件下结合并终止反应。③对照物99Tcm-oxytocin体外结合实验:参照上述方法进行。
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禽流感与人类健康
流感是第一个实行全球性监测的传染病,对人和畜禽的危害十分巨大.动物流感尤其是禽流感与人类流感及人健康的关系非常密切.传统的观点认为,人不具有与禽流感病毒相结合的细胞受体,因此,禽流感病毒也就难于完成其感染发病的过程,不能直接在人体内进行有效的复制.只有其经过哺乳动物中间宿主适应后,改变其宿主细胞受体结合特性后,方能感染人类并致发病.
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大鼠液压颅脑损伤后脑突触质膜腺苷A1受体的变化
我们采用放射性配体受体结合测定法,观察大鼠脑外伤后不同时间双侧大脑皮层和海马突触质膜腺苷A1受体结合特性的变化,探讨腺苷对中枢神经保护作用中的受体机制.
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银杏内酯B对光化学诱导树鼩脑缺血时神经PAF受体结合特性的影响
目的:观察光化学反应后24 h中心区、半暗区PAF受体结合特性,探讨血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂-银杏内酯B(ginkgolide, GB)对脑缺血时神经元的保护机制.
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化学合成的Ac-SDKP类似物FAM-Aca-SDKP与HSC-T6细胞表面结合特征分析
目的 利用化学合成N-乙酰基-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(Ac-SDKP)类似物FAM-Aca-SDKP,探讨Ac-SDKP与肝星状细胞株(HSC-T6细胞)的结合及其结合的基本物理特征.方法 化学合成携带绿色荧光的Ac-SDKP类似物短肽[5-FAM]-酪氨酸-氨基己酸-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(FAM-Aca-SDKP),实时定量PCR检测其对HSC胶原分泌影响验证其生物学效应与Ac-SDKP一致性,采用荧光显微镜观察FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合,采用流式细胞术检测FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合的时间-浓度效应.据资料不同采用t检验或秩和检验进行统计学分析.结果 不同浓度的Ac-SDKP及FAM-Aca-SDKP与HSC-T6孵育24 h后,均观察到HSC-T6表达Ⅰ型前胶原增加,而作用时间为0.5h时,Ac-SDKP和FAM-Aca-SDKP导致Ⅰ型胶原表达分别下降30% ~ 50%;FAM-Aca-SDKP与HSC-T6共孵育后,在荧光显微镜下观察到细胞表面出现显著绿色荧光,给予Ac-SDKP竞争抑制可显著减少细胞表面的荧光强度;流式细胞术检测显示,在FAM-Aca-SDKP浓度为0 ~ 50 μ mol/L时,荧光阳性细胞率从0快速上升至约12%,而在浓度为50 ~ 100μ mol/L,阳性细胞率仅从约12%上升至约14%,并且给予Ac-SDKP共孵育可显著降低阳性细胞百分率;FAM-Aca-SDKP阳性细胞数在孵育45 min达到高峰,随后逐渐降低. 结论 FAM-Aca-SDKP可结合于HSC-T6细胞表面,表现出竞争性抑制、可饱和、时间-浓度效应等配体-受体结合特征.