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酪氨酸蛋白激酶抑制剂的抗生育效应及研究进展
酪氨酸蛋白激酶(PTKs)是一组酶系,是在正常和异常增殖过程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成员.多种生长因子受体都有PTKs活性.PTKs途径的激活属于与细胞的生长、增殖和分化有关的信号途径.目前,PTKs抑制剂主要用于抗肿瘤.本文阐述PTKs抑制剂通过三种途径:(1)干扰胚泡与子宫内膜的相互识别及相互作用;(2)干扰激素导致子宫内膜不能接受胚泡着床;(3)通过免疫抑制和诱导细胞凋亡造成对胚胎排斥而产生抗生育效应.
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膜联蛋白1与疾病的关系
膜联蛋白-1(Annexin1)是一种钙离子介导的磷脂结合特性的蛋白质,是表皮生长因子受体激酶和酪氨酸蛋白激酶的底物,主要位于胞浆,但在特定的条件刺激下也可重新分布[1],这个37kDa的蛋白质在糖皮质激素(GC)的诱导下可参与抑制花生四烯酸和磷酯酶A2(PLA2)的合成,多项动物试验表明,Annexin1是GC介导的抗炎反应的重要介质,对中性粒细胞和单核细胞迁移都有强大的抑制效应[2],从20世纪70年代以来的研究发现,Annexin1与纤维化、肿瘤等疾病有密切关系.
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针灸对效应靶器官细胞跨膜信号转导影响的研究进展
目前有关针刺对效应靶细胞跨膜信号转导通路及机制的研究涉及多个层次和多个靶点,如:(1)针刺对G蛋白耦联的效应器酶-第二信使物质-蛋白激酶的影响;(2)针刺通过激活各种生长因子等启动酪氨酸蛋白激酶和非受体酪氨酸激活的胞内信号转导途径;(3)针灸激活配体作用于核内受体引起靶基因核转录因子转导途径等.本文收集近年来针灸对跨膜信号转导过程影响的研究文献,从针灸的镇痛效应、对脑及脊髓神经细胞损伤修复和重塑的影响、抗炎免疫、抑制肿瘤、对内脏器官调节等过程中相关靶细胞内信号转导蛋白质磷酸化及转录因子活性改变方面进行综述,旨在从多靶点、多途径、多层次揭示针灸对效应靶细胞调节作用的原理.
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酪氨酸蛋白激酶依赖性大鼠基底外侧杏仁核的长时程增强
目的 比较不同时间间隔的两串θ频率波刺激在大鼠离体脑片基底外侧杏仁核(BLA)长时程增强(LTP)形成中的作用,并探讨BLA的LTP是否为酪氨酸蛋白激酶(TPK)依赖性.方法 制备杏仁核脑片,刺激外囊记录BLA场电位,应用两串θ频率波刺激诱导LTP,每串θ频率波刺激为20个(频率5Hz)短时间高频串脉冲(5个脉冲,频率为100Hz),通过改变两串θ频率波的刺激间隔,分析不同参数诱导的LTP是否存在差异,并在灌流的人工脑脊液中加入TPK抑制剂genistein,观察其对杏仁核I胛的影响.结果 间隔10s的两串θ频率波未能在BLA诱导出LTP;增大串刺激间隔为10min或30min,均可观察到记录的场电位(f-EPSPs)明显增大,增强的场电位持续时间超过30min,串间隔为10min的参数诱导的LTP明显;两串θ频率波刺激诱导的LTP可被TPK抑制剂genistein所阻断.结论 串间隔为10min的两串θ频率波刺激(TBS)是BLA诱导LTP的较好参数;杏仁核的LTP可能涉及TPK的激活.
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非小细胞肺癌组织及胸水中EGFR基因TKD结构域突变的临床病理研究
目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR基因酪氨酸蛋白激酶结构域(TKD)18～21外显子突变情况;比较常见突变( 19号外显子的缺失突变及21号外显子错义突变-L858R)和非常见突变患者的临床病理改变.方法 从91例NSCLC组织及胸水标本中提取基因组DNA;巢式PCR方法扩增EGFR基因18～21外显子;应用PCR-LIS-SSCP及直接测序方法检测EGFR基因18～21外显子突变情况;对存在常见及非常见突变患者的组织病理、酪氨酸蛋白激酶小分子抑制剂(TKIs)的治疗反应和预后等的临床病理改变进行分析.结果 91例NSCLC患者中27例存在EGFR基因TKD突变,其中常见突变19例,突变率为20.9%(19/91);非常见突变8例(其中4例为20号外显子的短片段插入突变),突变率为8.8%(8/91).两组患者组织学类型均为腺癌,且对TKIs治疗均有较好反应.2例非常见突变患者化疗时出现肺间质纤维化(ILD).结论 NSCLC患者EGFR基因TKD存在多种非常见突变;具有非常见突变的患者可能存在独特的临床病理改变.
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Genistein和PD98059对aFGF及bFGF诱导的CCL229细胞增生的抑制作用
目的:探讨酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Genistein和细胞外信号调节激酶(ERK)激酶MEK抑制剂PD98059对酸性及碱性成纤维细胞生长因子(aFGF,bFGF)诱导的人大肠癌细胞株CCL229细胞增生的抑制作用.方法:以不同浓度的aFGF或bFGF刺激CCL229细胞,再对由aFGF或bFGF引起增生的细胞施加不同浓度的Genistein或PD98059,通过MTT比色法,观察Genistein及PD98059对细胞增生的抑制作用.结果:aFGF和bFGF均可使该细胞株增生比明显增加,而Genistein和PD98059均可使该细胞株增生比明显下降,其程度均随浓度增高而增强,且Genistein的抑制作用强于PD98059.结论:该细胞株中aFGF及bFGF受体有TPK活性,Genistein对aFGF及bFGF引起的细胞增生具有抑制作用,且aFGF及bFGF可能通过激活TPK受体从而激活Ras-Raf-ERK信号传导途径来调控CCL229细胞增生,PD98059可有效阻滞此传导途径.
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游离脂肪酸对人红细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响
肥胖是2型糖尿病(T2DM)发病的危险因素之一[1,2].肥胖人群中高水平的血游离脂肪酸(FFA)可能是T2DM的重要致病因素[3].本研究从细胞信号传导入手,探讨FFA对红细胞膜胰岛素受体(InsR)酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性的影响.
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胰岛素对人成骨细胞胰岛素受体底物-2的作用
胰岛素受体底物(IRS)是胰岛素受体、胰岛素样生长因子-1受体酪氨酸蛋白激酶的主要底物[1].IRS-2在糖尿病的发生和发展中起着一定作用,它调节胰岛β细胞数目及功能[2].IRS-2还是骨代谢的调节因子,在胰岛素、胰岛素样生长因子-1等骨代谢因子的信号传递中起重要作用,IRS-2在骨形成方面起着主导作用[3,4].胰岛素绝对缺乏的1型糖尿病可发生骨质疏松,但其机制尚未完全阐明.本实验通过研究胰岛素对人成骨细胞IRS-2蛋白及磷酸化的影响来探讨其发病机制.
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小分子干扰RNA诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究
表皮生长因子受体2(HER-2)是HER-2原癌基因编码的一种酪氨酸蛋白激酶,研究表明,过度表达的HER-2基因通过激活ras等信号分子,导致细胞过度增殖和恶性变,抑制细胞凋亡,与肿瘤的恶性程度和转移能力密切相关[1].已有研究证明,30％的卵巢上皮性癌(卵巢癌)存在HER-2基因的高表达.RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物进化过程中保留的一种防御机制,可以介导互补基因的靶向性降解[2].本研究拟应用RNAi技术,合成针对HER-2基因的特异性小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA),转染卵巢癌细胞株SKOV3细胞,探索siRNA诱导卵巢癌细胞凋亡的机制.
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抗KDR胞外Ⅲ区单抗抑制血管内皮细胞增殖的研究
目的研制能够封闭血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR的单克隆抗体,探讨其体外抑制VEGF165诱导的生物学活性.方法以原核表达的KDR胞外Ⅲ区融合蛋白免疫Balb/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体,采用ELISA和FACS方法鉴定其抗原结合特异性,采用免疫沉淀和[3H]-TdR掺入的方法分析该单克隆抗体阻断VEGF165刺激内皮细胞表面KDR酪氨酸激酶受体磷酸化, 抑制VEGF165诱导内皮细胞增殖的活性.结果抗KDR胞外Ⅲ区单抗Ycom1D3不仅能与可溶性KDR结合,亦可与细胞表面表达的KDR结合,并可竞争性抑制VEGF165与可溶性KDR的相互作用,阻断VEGF165刺激内皮细胞表面KDR酪氨酸激酶受体磷酸化,显著抑制由VEGF165诱导脐静脉内皮细胞的增殖.结论抗KDR胞外Ⅲ区单抗 Ycom1D3可通过封闭KDR而抑制VEGF活性,在肿瘤及其他血管新生疾病治疗中具有潜在的应用前景.
关键词： 血管内皮生长因子受体 肿瘤 酪氨酸蛋白激酶 单克隆抗体 -
干扰素α对口腔鳞状细胞癌细胞JAK-信号转导子和转录激活子-细胞因子信号抑制因子信号通路基因表达的影响
目的 以3种不同癌变程度的口腔细胞为工具,观察在干扰素α(IFN-α)作用下,JAK-信号转导子和转录激活子(STAT)-细胞因子信号抑制因子(SOCS)信号分子的表达变化,为深入理解口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞免疫逃逸的机制提供研究基础.方法 常规培养NOK、DOK、KB细胞.空白组加入完全培养液,二甲基亚砜(DMSO)对照组加入含有0.1％ DMSO的完全培养液,实验组设10、100、500U/ml三个不同浓度组,每孔分别加入含不同浓度IFN-α的完全培养液,JAK抑制剂干预组在加入IFN-α前1h加入JAK抑制剂CP-690550 100 μmol/L.细胞培养24 h后检测.进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot实验.结果 采用RT-PCR法检测显示:JAK1和JAK2在NOK细胞均有少量表达,IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的JAK1和JAK2表达无影响,差异无统计学意义(P＞0.05).100和500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的JAK1和JAK2表达增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05).CP-690550能有效减低DOK和KB细胞的JAK1表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05),而对JAK2表达无作用.采用Western blot法检测显示:STAT1、STAT3和pSTAT3(Tyr705)在对照组均有表达,pSTAT1(Tyr701)在对照组无表达;IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的STAT1、STAT3和pSTAT3(Tyr705)表达无影响,差异无统计学意义(P＞0.05).100、500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的pSTAT3(Tyr705)表达增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05);而对pSTAT1(Tyr701)的表达无影响.CP-690550能有效减低DOK和KB细胞的pSTAT3(Tyr705)表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05).采用Western blot法检测显示,SOCS1和SOCS3在对照组均有表达;IFN-α和CP-690550对NOK细胞组的SOCS1和SOCS3表达无影响,差异无统计学意义(P＞0.05).100 U/ml和500 U/ml的IFN-α能刺激DOK和KB细胞的SOCS1表达增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05);而对SOCS3的表达无影响.CP-690550能有效减低DOK和KB细胞的SOCS1表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-α激活DOK和KB细胞JAK1和JAK2的表达,以JAK1激活为主;IFN-α通过激活DOK和KB细胞JAK1和JAK2的表达促进STAT3在Tyr705位点磷酸化;IFN-α通过促进STAT3磷酸化进一步促进SOCS1的表达,发挥对IFN-α作用的抑制作用,减少细胞凋亡.
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酪氨酸蛋白激酶抑制剂和细胞松弛素D对应力下成骨细胞ERK1/2早期变化的调控
目的 观察机械应力下酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂和细胞松弛素D对体外培养的成骨样细胞细胞外信号调节激酶(ERK)1/2早期表达变化的影响.方法 采用四点弯曲细胞力学加载装置系统,对人成骨样细胞进行加力:频率0.5 Hz,加力板变形量4000 μstrain牵张应力作用成骨样细胞(MG-63)5 min时,使细胞发生单轴牵张和压缩应变.运用Western免疫印迹检测不同方向应力应变下TPK抑制剂和细胞松弛素D对ERK1/2表达变化的影响.结果 TPK抑制剂预处理后,牵张应力激活ERK的作用被明显阻断,与单纯张力组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.01);而压缩应力的诱导作用未受影响(P ＞ 0.05);低剂量的细胞松弛素D处理后,压应力的诱导作用被明显阻断,ERK的磷酸化水平甚至低于基态,与单纯压力组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.01),而牵张应力对ERK的激活仅受到一定程度的影响,与单纯张应力组相比差异有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 力学信号可同时激活细胞内的细胞骨架、TPK转导通道,但各自主要激活的部分存在差别,无论是牵张还是压缩,成骨细胞对力学信号的感知和转导都与微丝细胞骨架密切相关,TPK的活化可能是牵张应力引起黏附斑复合物形成后的主要后续反应,压缩应力的主要后续反应与之关系不大.
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黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系
目的:研究黄色素(SY)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及机制.方法:以培养的家兔VSMC为材料,用细胞计数和32P-参入法,观察SY对VSMC的增殖及3种蛋白激酶活性.结果:SY抑制VSMC的增殖,且呈剂量和时间依赖性,1.0 mg·mL-1作用强,抑制率为54.6%; SY抑制VSMC的DNA合成,1.0 mg·mL-1作用2 d,抑制率为80.2%;在一定浓度范围内,随着SY浓度的升高,VSMC中3种蛋白激酶(TPK,PKC及MAPK)活性下降.结论:SY对VSMC的增殖有抑制作用,可能是通过抑制TPK和PKC依赖的MAPK信号传导途径而发挥作用.
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JAK-3激酶及其抑制剂的研究进展
JAK-3激酶(Janus kinase 3)作为酪氨酸蛋白激酶家族成员,在JAK-STAT (Janus kinase-signal transducer and activator of transcription)信号通路中起着非常重要的作用,研究证实JAK-3活性的调控在多种疾病的治疗中起着关键作用,针对该激酶的抑制剂已经有许多相关研究,并有多个JAK-3激酶抑制剂进入临床研究,表现出很好的JAK-3选择性和抑制活性,其中tofacitinib等抑制剂已经通过临床试验,被批准用于类风湿性关节炎的治疗.很多JAK-3抑制剂表现出良好抑制活性的同时,伴有一定的不良反应,有待于改进.本文综述了JAK-3激酶的结构功能以及JAK-3激酶抑制剂的研究进展,为后续研究提供参考.
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芍药总苷对6MV-X射线放射性食管炎模型大鼠的作用研究
目的 研究芍药总苷对6MV-X射线放射性食管炎模型大鼠的影响.方法 取健康雄性Wistar大鼠,用6MV-X射线单次照射建立放射性食管炎模型,空白组大鼠17只不接受射线照射.按照体重将造模成功大鼠随机分为4组,每组17只:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组.模型组和空白组给予0.9％ NaCl 2 mL,tid;对照组给予西药合剂(0.9％ NaCl 250 mL+利多卡因3.2mL+地塞米松1.6 mg+硫酸庆大霉素5.12万单位)2 mL tid;低、高2个剂量实验组分别给予2,6 mg·mL-芍药总苷溶液2 mL,tid,均连续给药8d.用光学显微镜观察食管组织病理变化并评分,用酶联免疫吸附法测定血清Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平,用蛋白质免疫印迹法检测食管组织神经生长因子(NGF)、酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)蛋白、P75蛋白表达水平.结果 给药后,空白组、模型组、对照组和低、高2个剂量实验组食管组织病理变化程度评分分别为0,(4.24±0.58),(2.15±0.26),(1.08±0.15),(0.53±0.07)分,这5组的血清PC Ⅲ水平分别为(40.73±5.24),(90.48±10.38),(71.23±8.72),(58.46±7.66),(49.36±6.12) μg·L-1,这5组的食管组织NGF蛋白表达水平分别为0.54±0.07,1.32±0.18,1.13±0.12,0.84 ±0.11,0.69±0.08,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 芍药总苷能够减轻6MV-X射线放射性食管炎模型大鼠的病理损伤程度,降低血清PCⅢ、TGF-β1水平,防治食管纤维化,其作用可能与降低NGF及其受体TrkA蛋白和P75蛋白的表达水平有关.
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v-Src蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其活性分析
目的表达高纯度具有激酶活性的Src蛋白,为抗肿瘤药物研究提供蛋白质靶标.方法利用高效表达质粒pGEX-KT克隆v-Src全基因,诱导表达得到的GST-Src融合蛋白经Glutatione Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,采用Western blotting和以polyGlu:Try(4:1)为底物的ELISA法鉴定其免疫原性和酪氨酸激酶活性.结果CST-Src蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,其中包涵体与可溶性蛋白的表达量分别约13.5和2 mg·L-1,纯度分别约98%和85%,比活约1.13和0.62nmol·min-1·mg-1.结论本法表达的GST-Src融合蛋白表达量高、纯化效果好,且具有较高的激酶比活.
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酪氨酸蛋白激酶在预处置中的作用
缺血预处置(ischemia preconditioning, IP)是指预先反复短暂缺血及再灌注提高心肌组织对随后持续缺血的耐受性,其保护作用包括缩小缺血再灌注 (ischemia/reperfusion,I/R)后心肌梗死范围、减少恶性心律失常发生和促进心脏功能恢复等.预处置的诱导方法很多,包括缺血预处置、快速起搏预处置、缺氧预处置、温度预处置、药物预处置等.预处置的保护作用在时间上呈现2个不连续的时相变化,即早期保护(early protection,EP)和延迟保护(delayed protection,DP).
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血管生成素1对炎性反应机制的研究进展
血管生成素(Ang)是一类新发现的促血管生成因子,具有明显的抗炎作用,是促内皮细胞特异的促血管新生因子家族,包括Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4四种分子.其共同的特异性受体为酪氨酸蛋白激酶Tie(包括Tie1和Tie2),Tie1的配体目前还不清楚,Tie2的配体是Ang.其中Ang-1/Tie-2系统在新生血管生成、促进血管成熟与稳定抑制血管渗漏及炎性反应中发挥着重要作用.
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Na+,K+-ATP酶信号转导功能的研究进展
Na+,K+-ATP酶作为一种膜结合蛋白不仅参与钠离子和钾离子的跨膜转运,而且有信号转导功能.作为强心甾类物质的受体,Na+,K+-ATP酶与细胞外的特异性配体结合,继而与细胞内的蛋白相互作用触发细胞内信号转导通路的级联反应,从而参与心肌细胞的分化和增殖、肿瘤细胞的凋亡、前破骨细胞的融合等多种生理、病理过程.该文就Na+,K+-ATP酶信号转导功能的研究进展予以综述.
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子宫内膜癌组织中酪氨酸蛋白激酶的活性研究
目的:通过比较子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中蛋白酪氨酸磷酸化水平的差异,以探讨子宫内膜癌发生过程中酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性改变的意义.方法:应用免疫组化S-P法测定40例子宫内膜癌、17例子宫内膜非典型增生、28例正常子宫内膜组织中磷酸酪氨酸蛋白(P-Tyr)的表达,从而反映3组中TPK活性水平.结果:在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中P-Tyr阳性表达率分别为75.00%47.06%、14.29%,3组间差异有显著性(P＜0.05)且TPK活性存在显著差异:即子宫内膜癌组高于非典型增生组和正常子宫内膜组.子宫内膜癌组织中,中、低分化组P-Tyr表达明显高于高分化组,差异有显著性(P＜0.05).结论:TPK活性异常是引起子宫内膜异常增生的原因,且与子宫内膜癌病理分化程度相关,而与临床分期、浸润程度及淋巴结转移无关.
