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MAPK信号通路介导CT-1促进大鼠心肌细胞存活
目的 探讨心脏营养素-1(CT-1)对培养乳鼠心肌细胞存活的促进作用以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号传导途径在CT-1促进心肌细胞存活中的作用.方法 差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞,MTT比色法测定各孔细胞存活率.结果 无血清DMEM培养心肌细胞24 h后,加入4个剂量组CT-1(10-10～10-7 mol/L),呈明显剂量依赖性增加MTT计数;培养基中加入CT-1(10-8 mol/L),1、2、3和4 d MTT计数呈明显的时间依赖性增加;预先用MAPK抑制剂PD098059(5×10-5 mol/L),再加入CT-1,心肌细胞存活率明显低于单纯CT-1组,而单纯用PD098059则无明显影响;预先用PKC激动剂PMA(10-5 mol/L),再加入CT-1,MTT计数明显增加;先用PD098059,再加入PMA和CT-1,MTT计数明显降低,而先用PKC抑制剂Calphostin C(Cal)再加CT-1,MTT计数也明显降低.结论 CT-1增加心肌细胞存活率的效应是由MAPK信号分子介导实现的;该效应的胞内信号传导通路可能是先激活PKC信号分子,然后再激活MAPK信号分子.
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丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用
目的 主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用.方法 先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38 MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4 h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平.结果 LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达.MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达.结论 MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路.
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MAPK/ERK1与STAT3在脂多糖诱导的腺性膀胱炎动物模型中的表达
目的 研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)成员之一ERK1与信号转导子与转录激活子3(STAT3)在内毒素脂多糖(LPS)诱导的大鼠腺性膀胱炎动物模型中的表达.方法 成年雌性SD大鼠24只,建立腺性膀胱炎动物模型,免疫组织化学染色检测上皮组织中ERK1及STAT3的表达,用RT-PCR技术及Western blotting检测ERK1及STAT3基因及蛋白表达量的变化.结果 LPS可显著激活膀胱上皮细胞中ERK1及STAT3的表达,两种基因在转录水平上的相对表达量分别为1.99±0.12和1.71±0.08.结论 MAPK/ERK1及STAT3信号通路参与了LPS诱导的大鼠腺性膀胱炎的病理过程.
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抑制NHE1和p38 MAPK通路增加白血病细胞对伊马替尼的敏感性
本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病(CML)患者细胞的BCR/ABL下游分子网络.对CML患者原代白血病细胞或K562/DOX,K562/G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白(Pgp)基因及蛋白表达,药物在细胞内蓄积.考察细胞酸化后原代白血病细胞ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平的变化.结果表明:细胞酸化后进展期患者细胞内药物蓄积增加,对伊马替尼的敏感性增强.随着细胞内pH的降低,进展期CML患者的细胞内p38MAPK磷酸化水平呈下降趋势,ERK1/2磷酸化水平3 min时升高、30 min后下降.特异性p38 MAPK抑制剂SB203580可与NHE1抑制剂卡立泊来德协同下调Pgp蛋白的表达.结论:抑制NHE1活性能够显著降低耐药细胞中Pgp表达,增加CML疾病进展期患者细胞中罗丹明123及阿霉素的累积,增加细胞对伊马替尼的敏感性,p38 MAPK信号传导通路参与其中.
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大黄对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原激活蛋白激酶活性的影响
目的 研究大黄对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织中丝裂原激活蛋白激酶(NAPK)家族中的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-J un氨基末端激酶(,JINK)和p38mAPK活性的影响,探讨大黄治疗SAP的机制. 方法 由南京大学动物中心提供100只SD大鼠,采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型.将大鼠随机分为假手术组(n=33)、SAP组(n=33)、大黄治疗组(n=34),大黄治疗组在制成SAP模型后予10%大黄汤剂灌胃,剂量为2 ml/100g;制模后1、3 6 12 h时点分别处死相应大鼠,取血及胰腺组织.用Western blot检测各组大鼠胰腺组织中MAPK活性,RT-PCR方法检测胰腺组织中TNF-αa、IL-6的mRNA的变化.所有数据用SPSS 13.0统计软件进行统计,组间比较用q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义. 结果 与假手术组相比,SAP组胰腺组织中MAPK活性明显增强(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P值均<0.01).大黄治疗后各时间点胰腺组织中MAPK活性与SAP组相比均明显下降(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P<0.01).与假手术组相比,SAP组胰腺组织中TNF-α、IL-6 mRNA水平明显增加(两组1h,3 h,6 h,12 h TNF-αmRNA和IL-6 mRNA比较,P<0.01);大黄治疗组与SAP组相比,TNF-α、IL-6 mR-NA水平均明显降低(P均<0.01). 结论 大黄治疗SAP的机制可能是通过抑制MAPK激活而减轻SAP的炎症反应.
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MAPK信号通路抑制剂对内皮素-1诱导牙周膜细胞分泌白介素-6的影响
目的:研究丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号途径对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导牙周膜细胞分泌白介素-6(interleukin-6,IL-6)的调控作用,为探讨ET-1在牙周炎发病机制中的作用奠定基础.方法:体外培养牙周膜细胞,于加ET-1处理前30min分别向培养基中加入ERK通路抑制剂PD98059(10μM),JNK通路抑制剂SP600125(10μM),p38α通路抑制剂SB203580(10μM).再加入100nM ET-1,以未作任何处理的牙周膜细胞为空白对照.刺激12h后提取细胞培养上清液和细胞裂解物,采用实时定量PCR及ELISA检测各组牙周膜细胞IL-6基因及蛋白表达的改变.结果:与对照组相比,ET-1对牙周膜细胞IL-6 mRNA(1.3615±0.0137)及蛋白(352.1252±6.7851 ng/ml)分泌具有显著促进作用,PD98059和SB203580可抑制ET-1对牙周膜细胞IL-6 mRNA及蛋白表达的促进效应,但SP600125的抑制作用不明显.结论:ET-1可激活多条MAPKs信号通路调控牙周膜细胞IL-6的表达.
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黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系
目的:研究黄色素(SY)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及机制.方法:以培养的家兔VSMC为材料,用细胞计数和32P-参入法,观察SY对VSMC的增殖及3种蛋白激酶活性.结果:SY抑制VSMC的增殖,且呈剂量和时间依赖性,1.0 mg·mL-1作用强,抑制率为54.6%; SY抑制VSMC的DNA合成,1.0 mg·mL-1作用2 d,抑制率为80.2%;在一定浓度范围内,随着SY浓度的升高,VSMC中3种蛋白激酶(TPK,PKC及MAPK)活性下降.结论:SY对VSMC的增殖有抑制作用,可能是通过抑制TPK和PKC依赖的MAPK信号传导途径而发挥作用.
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丝裂原激活蛋白激酶信号通路抑制剂对高糖培养视网膜微血管内皮细胞的影响
目的 研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂对高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMECs)的作用.方法 体外培养RMECs,将细胞分为5组:空白组、模型组、SB203580 ( p38抑制剂)组、U0126 (胞外调节蛋白激酶抑制剂)组和SP600125(应激活化蛋白激酶抑制剂)组,各抑制剂组加入相应抑制剂10 μmol· L-1预孵育1 h后,除空白组外,其他4组高糖处理24 h.以免疫荧光实验检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达分布,用实时荧光定量-聚合酶链式反应及免疫印迹法检测PPAR-γmRNA与蛋白的表达水平,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位( MMP).结果 空白组、模型组、SB203580组、U0126组和SP600125组的PPAR-γmRNA表达量比值分别为1.00 ±0.01,0.79 ±0.06,1.01 ±0.04,1.19 ±0.11 和0.73 ±0.12;这5组MMP分别为0.40 ±0.02,0.22 ±0.01,0.41 ±0.01,0.45 ±0.01 和0.21 ±0.01.模型组与空白组比较,上述指标均显著降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);SB203580组和U0126组与模型组比较,上述指标均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);SP600125组与模型组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05);抑制剂组中, U0126 组的上述指标升高显著,差异均有统计学意义(均P＜0.05). PPAR-γ的蛋白水平变化与mRNA水平变化一致.结论 在高糖环境中,抑制剂U0126可上调RMECs的PPAR-γ表达并减轻其线粒体损伤.
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脑缺血灌注损伤的相关细胞通路调节研究进展
脑缺血灌注损伤主要指缺血脑组织恢复血液灌注后，脑组织损伤加重的病理现象。涉及缺血再灌注损伤后的相关细胞分子通路十分广泛，如 NF-κB 通路、酸敏感离子通路、超极化激活环核苷酸门控阳离子通路、丝裂原激活蛋白激酶通路、基质金属蛋白酶通路和水通道蛋白通路等，其主要参与再灌注损伤机制包括基于炎症、凋亡相关通路调节机制；基于钙离子作用相关通路调节机制；基于细胞凋亡通路调节机制以及脑水肿变化的通路机制。本文拟总结主要参与脑缺血再灌注损伤后的细胞分子通路及其作用机制，为进一步了解再灌注损伤机制提供参考。
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TPL2激酶与炎症性肠病发病的关系
TPL2(tumor progression locus 2)为一种激酶,虽然初是作为一种致癌基因被发现,但其在机体的炎症反应中也起重要作用.TPL2激酶可通过丝裂原激活蛋白激酶信号转导通路,介导多种细胞因子的信号转导,影响炎症反应和免疫过程的多个环节,参与多种炎症性相关疾病的发生.炎症性肠病(IBD)作为一种以肠道慢性炎症反应为特征的免疫性疾病,目前尚未有治愈药物.近年来,随着对IBD发病机制研究的不断深入,越来越多的相关发病因子、小分子抑制剂的研发备受关注.TPL2激酶通过其在炎症反应过程的作用,参与IBD的发病.未来,TPL2激酶可能成为IBD治疗药物研究的潜在靶点.
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转化生长因子β的丝裂原激活蛋白激酶通路与组织器官纤维化
转化生长因子β(transforming growth fator-β,TGF-β)是一类具有多种生物学活性的细胞因子,其超家族是一类结构相关的多肽类调控蛋白,由多种细胞产生.
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镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠MAPK影响的研究
目的:研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)血压影响,以及对心血管MAPK/ERK通路中的丝裂原激活蛋白激酶(MAPK,Mitogen-activated protein kinase)蛋白和MAPK mRNA表达的影响.方法:24周龄自发性高血压大鼠(SHR),雄性,50只,模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组10只,同源雄性WKY大鼠10只作为对照组,灌胃给药5周后,测量大鼠尾部血压,Western Blot方法测定心血管MAPK p38蛋白表达,用Real-Time RT-PCR(Real-Time Quantitative RT-PCR)方法测定大鼠MAPK mRNA基因表达.结果:镇肝熄风汤中药中剂量、高剂量组和复方罗布麻组与模型组比较,血压明显下降(P＜0.01);镇肝熄风汤中药中剂量、高剂量组与对照组比较,MAPK p38蛋白表达无明显变化(P＞0.05);镇肝熄风汤高剂量组与对照组比较,MAPK mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论:镇肝熄风汤有明显降压的作用,镇肝熄风汤中剂量组、高剂量组中的MAPK 38p蛋白表达和MAPK mRNA表达明显升高,促进血管内皮细胞的活性.
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丝裂原激活蛋白激酶相关疾病及其药物的研究进展
丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)是保证人体功能正常运行的重要物质,它在细胞增殖、分化、凋亡、应激反应、炎症反应、免疫防御等过程中发挥着重要作用,MAPK异常可导致多种疾病(癌症、炎症、神经性疾病、糖尿病和高血压等)的发生.本文对丝裂原激活蛋白激酶异常导致的相关疾病、治疗药物以及作用机制方面的研究进展进行综述.
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肺气虚模型大鼠介导TNF-α-MAPK信号途径对肾AQP2表达的影响
目的:通过观测肺气虚大鼠血浆中肿瘤坏死因子( TNF-α)含量,肾组织水通道蛋白2(AQP2),丝裂原激活蛋白激酶( p38MAPK)和核因子-κB (NF-κBp65)表达的变化,探讨中医藏象中肺与肾在水液代谢之间关系的现代科学内涵.方法:将SPF级健康雄性Wistar大鼠20只随机分为正常组和模型组,采用ELISA法检测血浆TNF-α含量、Western法检测肾组织AQP2、免疫组化法检测肾组织p38MAPK和NF-κ B p65表达变化.结果:与正常组比较,模型组血浆中TNF-α含量升高,肾组织AQP2、p38MAPK和NF-κ B p65表达上调(P＜0.01).结论:肺气虚状态下肾组织AQP2表达变化可能是通过TNF-α -MAPK信号转导途径实现的.
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阿尔茨海默病与信号转导异常的研究进展
近年来,国内外对于阿尔茨海默病和信号转导异常的研究甚多,该研究引起了各国学者的广泛关注,本文主要从腺苷酸环化酶系统、磷脂酰肌醇信使系统以及丝裂原激活蛋白激酶途径所涉及的传导蛋白(酶)等方面对阿尔茨海默病和信号转导异常的研究进展作一.
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MAPKs信号通路在动脉粥样硬化发生发展中的调控作用
丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路是生物体内重要的信号传导通路,其主要参与调控细胞的增殖、生长、分化、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程.MAPKs信号通路在多种心血管疾病的病理过程中起着重要调控作用.动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)所致的各种急重症严重危害人类的健康,发病率呈逐年上升的趋势,但是动脉粥样硬化发生发展的分子机制尚不完全清楚.近年来,MAPKs信号通路在动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)的发生发展中的作用已成为是研究的热点.
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糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞丝裂原激活蛋白激酶表达的影响
目的:探讨糖基化终产物(AGEs))对人单核细胞源树突状细胞(MDCs)丝裂原激活蛋白激酶表达的影响,探索AGEs在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用.方法:免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)(100 ng·mL-1)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)(50 ng·mL-1)的RPMI1640培养,使其分化为MDCs,用200 /μg·mL-1 AGE-BSA 干预DCs 0,10,20,30,40 min,采用 Western-Blot,检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPK),即磷酸化Erk、磷酸化Jnk、磷酸化P38 MAPK的表达.结果:AGE-BSA刺激磷酸化Erk、磷酸化Jnk、磷酸化p38 MAPK的表达,20 min达到高峰,30 min后开始下降,并且Jnk抑制剂SP600125明显抑制了AGE-BSA促进的糖基化终产物受体(RAGE)的表达,结论:AGEs能够激活MAPK信号途径,其中Jnk信号途径与RAGE的表达有关,这可能是AGEs通过树突状细胞促进动脉粥样硬化炎症免疫反应发生的重要机制之一.
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晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞ERM蛋白磷酸化的机制
采用免疫荧光细胞化学和Western印迹法,探讨晚期糖基化终产物(AGE)对人脐静脉内皮细胞的ERM(ezrin/radixint/moesin)蛋白磷酸化水平和定位的影响及其机制.AGE以时间和剂量依赖性地增加ERM蛋白磷酸化水平(均P<0.05),并促进其转位至胞浆内.AGE通过与其受体结合刺激ERM蛋白的磷酸化,Rho激酶及p38丝裂原活化蛋白激酶通路参与了此过程.
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嗜酸性乳酸杆菌对幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞株GES-1炎性反应及凋亡的影响
幽门螺杆菌(Hp)粘附胃上皮细胞后发生细胞骨架重组、酪氨酸磷酸化,激活核因子(NF)-_kB和(或)丝裂原激活蛋白激酶(MAPK),诱导炎性细胞因子生成,进而造成炎性损伤.本实验探讨乳酸杆菌在Hp诱导GES-1细胞p38MAPK、NF-_kB活化中的调控和影响,探讨乳酸杆菌抑制Hp诱导GES-1细胞的炎性反应及其对细胞凋亡影响的可能机制.
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一氧化碳对脑死亡供体肺脏丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响
目的 评价吸入一氧化碳(CO)对脑死亡诱发肺损伤的影响,探讨其作用与丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的关系.方法 成年雄性Wistar大鼠24只,随机均分为三组,每组8只.假手术组(SH组)仅吸入40％ O2 150 min,模型组(BD组)和研究组(CO组)在确认脑死亡前均吸人40％ O2,脑死亡后再分别吸入40％ O2和40％ O2+0.025％ CO 120 min.分别于脑死亡前后行动脉血气分析.实验结束测定肺脏静态压力-容积(P-V)曲线,计算肺组织湿/干重比(W/D),检测肺脏组织病理变化,并记录肺组织损伤评分(LIS).使用Western blot方法检测肺脏组织中p38、细胞外信号调节激酶(ERK)和c-jun N末端蛋白激酶(JNK)的蛋白表达.结果 与SH组比较,BD组和CO组动脉血PaO2/FiO2、BE和pH值明显降低,P-V曲线降低(P＜0.05),肺组织W/D和LIS评分升高(P＜0.05).与BD组比较,CO组血气指标和P-V曲线升高(P＜0.05),LIS评分降低(P＜0.05).与SH组比较,BD组磷酸化p38(p-p38)、磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达显著升高(P＜0.05).与BD组比较,CO组p-p38蛋白表达进一步增强(P＜0.05),p-ERK蛋白表达下降(P＜0.05),但p-JNK未见明显变化.结论 吸入0.025％ CO对大鼠脑死亡致肺损伤有保护效应,可能与调节MAPK信号系统p38和ERK蛋白表达有关.
