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丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用
目的 主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用.方法 先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38 MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4 h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平.结果 LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达.MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达.结论 MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路.
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慢性重型肝炎患者血清LBP和BPI的水平及其临床意义
慢性重型乙型肝炎(简称慢重肝)患者由于肝细胞功能受损及门体分流的存在,来自肠道的革兰氏阴性杆菌内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)易进入体循环,而产生肠源性内毒素血症(Intestinal endotoxemia,IETM)[1].近年研究表明,血清中内毒素结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)、杀菌性/通透性增加蛋白(Bactericidal/Permeability-increasing protein,BPI)影响并调节LPS的生物活性[2].我们测定了24例慢重肝患者血清LBP和BPI的水平,旨在探讨其在慢重肝IETM中的作用.
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内毒素致肝损害中库普弗细胞的作用及大承气汤的调节
目的:探讨库普弗细胞(KC)在内毒素脂多糖(LPS)所致肝细胞(HC)损伤中的作用并观察中药大承气汤的调节作用.方法:以胶原酶体内循环灌注结合体外胰蛋白酶加皿内消化方法分离高纯度的HC和KC,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)掺入法测定HC的DNA合成及KC和LPS对HC的影响并观察中药大承气汤的调节作用.结果:低剂量的LPS能使HC的DNA合成轻度增加,到1mg/L时出现明显增加,但LPS剂量再加大,则出现DNA合成的抑制.LPS刺激不能使HC产生TNF;但能刺激KC分泌TNF,且随着刺激浓度增加,KC分泌TNF增加.在没有LPS存在下,KC对HC无明显影响;LPS对与KC混合培养的HC的DNA合成呈现明显的抑制性作用,而且随着LPS浓度加大,这种抑制作用愈加明显.当HC培养液中LPS量逐渐升高时,上清液中谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)含量亦随之升高,细胞内酶逸出增多;当LPS浓度达到1000μg/mL的高浓度时,可见ALT和LDH不仅不见增高,反而明显减少.精制中药大承气汤能明显逆转HC DNA合成的受抑状态.LPS能激活肝KC释放TNFa,大承气汤对KC释放TNF有明显抑制作用,减低HC培养上清液中ALT和LDH含量,减少酶的逸出.结论:内毒素LPS对单独培养HC的DNA的合成呈双相影响;LPS对HC功能具有直接损伤作用.LPS可刺激肝脏的KC释放TNF,加剧LPS所致HC功能损伤.中药大承气汤能对KC功能进行正确调控,对HC功能具有双重保护作用.
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内毒素肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体A表达水平及其作用
脓毒血症为急性肺损伤(ALI)常见病因[1].内毒素脂多糖(LPS)与巨噬细胞的结合是机体受到LPS刺激后的初始反应.目前认为,单核/巨噬细胞表面存在多种 LPS受体,如CD14、toll样受体、β2白细胞整合素(CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD11c/CD18)、清道夫受体A(SR-A)等[2,3].LPS与SR-A的结合被认为可能是单核巨噬细胞非炎性清除LPS的一条重要的途径[4].我们以内毒素肺损伤小鼠模型来观察肺泡巨噬细胞(AM)SR-A表达及其作用.
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内毒素介导脐血炎性介质和粒细胞生长的改变
新生儿免疫系统不成熟,易并发细菌感染,由感染性疾病引起的新生儿死亡仍是围产期死亡的首要因素[1].本实验通过探讨内毒素脂多糖(lipopolysacchride,LPS)刺激脐血产生炎性介质及其对粒细胞生长的影响作用,阐明新生儿感染免疫损害的机制.
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地塞米松对内毒素诱导的新生鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响
近年来研究表明,大肠杆菌内毒素脂多糖(LPS)可以刺激成年大鼠肝脏产生大量一氧化氮(NO)造成肝损伤.在新生儿败血症中,血中 NO也有明显升高,但败血症造成肝损伤的同时,是否有肝组织内NO的升高,尚无人报告.一氧化氮合酶(NOS)是合成NO的惟一限速酶.本研究LPS诱导肝组织NO的改变和iNOS mRNA表达,以及地塞米松(Dex)对其的抑制作用,以探讨新生儿感染时肝损伤的发病机理.
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内毒素致伤后新生大鼠肺组织病理改变及炎性反应的观察
新生儿肺出血是新生儿期重要的死亡原因之一,其发病机制尚不十分清楚[1].本研究于2001年4月～2001年8月利用内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)制备新生和成年大鼠动物模型,通过对其肺组织病理改变及炎性反应的观察,以阐明LPS引起新生大鼠肺损伤的特点,探讨新生大鼠肺出血的机制.
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内毒素刺激单核细胞培养上清对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响
目的:观察经内毒素脂多糖(LPS)刺激的单核细胞培养上清对人牙髓细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,探讨单核细胞介导下LPS和CD14在人牙髓细胞分化中的作用.方法:采用经具核梭杆菌LPS刺激的单核细胞培养上清作用于体外培养的人牙髓细胞,通过OD值测定,观察单核细胞培养上清对人牙髓成纤维细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.结果:LPS直接刺激人牙髓细胞,牙髓细胞ALP活性明显上升,但LPS刺激的单核细胞培养上清对人牙髓细胞ALP活性有明显的抑制作用.抗CD14抗体在有血清的条件下作用于单核细胞,可以阻断单核细胞介导下LPS对牙髓细胞ALP活性的抑制.结论:单核细胞介导的LPS对牙髓细胞ALP活性有抑制作用,其机制可能依赖CD14.
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内毒素脂多糖对体外血脑屏障模型通透性的影响及其机制研究
感染性脑损伤时血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加在血管源性脑水肿发生发展中起重要作用,因此,阐明感染性脑损伤时BBB通透性改变及其调控机制具有十分重要的临床意义.本研究利用同种属的星型胶质细胞(astrocytes,AS)与脑微血管内皮细胞(bain microvascular endothelial cell,BMEC)共同培养,建立体外BBB模型,探讨BBB紧密连接蛋白和细胞骨架肌动蛋白(actin)在内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BBB通透性增高中的变化及其与Rho/Rho激酶细胞信号转导通路的关系.对这一问题的深入探讨,有助于进一步阐明感染性脑损伤的发病机制,为其临床防治提供新的思路.
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比较肿瘤坏死因子α和内毒素对人脑微血管内皮细胞凝血和纤溶活性的影响
目的:比较肿瘤坏死因子α(TNF-α)和内毒素脂多糖(LPS)对人脑微血管内皮细胞(HBMVECs)凝血和纤溶活性的影响.方法:从人脑组织分离、纯化和培养HBMVECs,通过细胞免疫荧光染色、流式细胞术和电子显微镜对HBMVECs进行鉴定.检测TNF-α和LPS刺激前后HBMVECs凝血纤溶活性变化:一期凝同法检测凝血活性(PCA);酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞组织因子(TF)、血栓调节蛋白(TM)、组织纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的水平.结果:分离、纯化的HBMVECs表达内皮细胞典型的标志分子vWF、CD31,并具有摄取乙酰化低密度脂蛋白的能力.LPS和TNF-α促进HBMVECs的凝血活性,上调PCA和TF的产生.抑制抗凝血活性,下调TM的表达;并明显促进纤溶活性t-PA和PAI-1的表达.通过比较PCA/TM发现,TNF-α对HBMVECs凝血活性的影响明显强于LPS.结论:TNF-α在感染性中枢神经系统疾病中可能是导致脑微血管内皮细胞功能障碍的主要因素之一.
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兔激素性股骨头坏死模型的研究
目的 研究内毒素脂多糖(LPS)+地塞米松注射液诱导兔股骨头坏死的实验效果.方法 取新西兰大白兔36只随机分为模型组(n=21)和对照组(n=15).模型组连续2d每天经耳缘静脉注射内毒素脂多糖10μg/kg,再连续3d每天臀部肌肉注射地塞米松注射液25mg/kg;对照组注射同等剂量的生理盐水.结果 4周后,X线显示:模型组兔关节间隙增宽,密度增大,关节软骨下骨密度增高,股骨头变平,骨小梁模糊,软骨下骨与骨松质界限不清,在股骨头内出现斑块状高密度区域,股骨颈变短粗.双能量X线骨密度测量仪进行股骨头局部骨密度测量,兔股骨头骨密度检测发现模型组股骨头骨密度、骨矿物质含量,均显著低于对照组 (P均<0.05).组织学切片见模型组骨细胞陷窝空疏,脂肪细胞增多,部分血管栓塞,其中存活动物的骨坏死率和骨陷窝率均明显高于对照组(P均<0.05).结论 地塞米松联合脂多糖可有效建立激素性股骨头坏死模型.
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过敏性支气管哮喘免疫发病机制的新研究进展
过敏性支气管哮喘(简称哮喘)是一种由不同的辅助性T细胞亚型决定的慢性气道炎症性疾病.既往认为“Th2哮喘假说”是过敏性哮喘的主要发病机制,而越来越多的研究表明,除了Th2之外其他辅助性T细胞也参与了哮喘的发病机制,尤其是Th1和Th17细胞对于气道中性粒细胞型炎症的发展至关重要.抑制这些免疫细胞也许为过敏性哮喘的有效治疗提供了方向.
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窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响研究
目的 动物实验观察窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响,探讨牙髓组织在LPS刺激后的信号转导途径.方法 在8头小型猪磨牙和前磨牙上制备不同深度窝洞,窝洞分为牙釉质深层组、牙本质浅层组、牙本质深层组.封入一定量的内毒素,分另q于术后3天、7天、14天、28天处死动物取牙.采用免疫组织化学染色的方法,观察小型猪磨牙和前磨牙窝洞内封入内毒素后牙髓组织中TLR4的表达和分布.结果 小型猪正常牙髓中未见TLR4阳性细胞.内毒素实验组随着窝洞深度增加,TLR4阳性细胞数增加.在深窝洞组3a窝洞下方牙髓组织中TLR4阳性细胞多为中性粒细胞表达,其他实验组多为单核细胞表达.结论 牙髓组织中TLR4的表达提示内毒素通过牙本质渗透至牙髓,通过LPS信号受体TLR4在牙髓组织的炎症发展过程中发挥作用.
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激素性股骨头坏死模型：不同构建技术分析
背景：良好的股骨头坏死动物模型的建立，有助于研究股骨头坏死的发病机制，为股骨头坏死的预防和治疗提供理论依据。
目的：研究内毒素脂多糖联合地塞米松注射液诱导兔股骨头坏死的实验效果。
方法：新西兰大白兔36只随机分为模型组21只和对照组15只。模型组连续2 d每日经耳缘静脉注射内毒素脂多糖10μg/kg，再连续3 d，每日肌肉注射地塞米松注射液25 mg/kg；对照组注射同等剂量的生理盐水。
结果与结论：模型组4周后X射线显示兔关节间隙增宽，密度增大，关节软骨下骨密度增高，股骨头变平，骨小梁模糊，软骨下骨与骨松质界限不清，在股骨头内出现斑块状高密度区域，股骨颈变短粗。双能量X射线骨密度测量仪进行股骨头局部骨密度测量，兔股骨头骨密度检测发现模型组股骨头骨密度、骨矿物质含量均显著低于对照组(P<0.05)。组织学切片见模型组骨细胞陷窝空疏，脂肪细胞增多，部分血管栓塞，其中存活动物的骨坏死率和骨陷窝率均明显高于对照组。证实地塞米松联合脂多糖可有效建立激素性股骨头坏死模型。 -
川芎嗪对内毒素脂多糖诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其机制
目的:探讨川芎嗪对内毒素脂多糖(LPS)诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其调控机制.方法:利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,随机分为正常对照组、川芎嗪对照组、LPS干预组和川芎嗪治疗组.采用γ计数仪检测125I-BSA通透量观察体外血脑屏障模型通透性的改变,Western印迹法检测紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)表达量的变化.结果:LPS使体外血脑屏障模型对125I-BSA的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1蛋白表达下降,川芎嗪治疗组能明显拮抗LPS的上述作用.结论:川芎嗪对LPS诱导的体外血脑屏障通透性增高具有保护作用,其机制与它能影响血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达有关.
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胸腺肽-α1在重型肝炎合并自发性腹膜炎的应用
自发性细菌性腹膜炎(SBP)是慢性重型肝炎常见并发症之一,也是引起慢性重型肝炎临床死亡的重要原因之一.SBP多为革兰氏阴性条件致病菌,可大量释放内毒素脂多糖(LPS),同时重型肝炎时肠源性LPS生成和摄取增多,肝清除LPS功能减退,因此极易发生内毒素血症,内毒素可直接损害肝细胞,并可通过刺激TNF-α等细胞因子加重肝炎的病理改变,使重症肝炎治疗失败.
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盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞分泌IL-6的影响
目的 研究盐酸小檗碱对体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)分泌白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 自离体牙分离牙周膜组织,体外培养人PDLCs.经免疫组化鉴定后的人PDLCs首先根据细胞培养液中是否含有脂多糖(LPS,50 μg/mL)分为LPS组和NLPS组,然后两组再依据培养液中盐酸小檗碱的终浓度(0、0.010、0.020、0.030 g/L)分为LPS和NLPS空白对照组、LPS1和NLPS1组、LPS2和NLPS2组以及LPS3和NLPS3组.应用酶联免疫分析法分别测定各组细胞培养上清中IL-6的含量,并进行统计学分析和比较.结果 与其他相应LPS组和NLPS组比较,LPS3组和NLPS3组细胞培养上清中IL-6含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);而LPS3组较NLPS3组细胞培养上清中IL-6含量的降低更为明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 高浓度盐酸小檗碱(0.030 g/L)抑制体外培养PDLCs分泌IL-6,当以LPS作为刺激因子时抑制作用则更加明显,并在一定范围内呈浓度依赖性.
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内毒素脂多糖促进人牙髓成纤维细胞凋亡及其对caspase-3活性的影响
目的 观察内毒素脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)对体外培养的人牙髓成纤维细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的影响.方法 不同浓度(0 μg、100 μg、200 μg、400 μg/mL)的LPS作用细胞,采用噻唑蓝比色法检测LPS对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;化学比色法检测细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化.结果 不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P＜0.01),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;Hoechst33258荧光染色显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的LPS作用细胞48 h,细胞的凋亡率分别为9.2%,23.8%,31.4%;caspase-3活性检测显示,其活性呈剂量依赖性增高,LPS浓度达到400 μg/mL时,其活性为对照组的3.4倍.结论 LPS可显著地抑制人牙髓成纤维细胞增殖、诱导细胞凋亡、升高caspase-3活性,并呈明显的量效关系.
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防己黄芪汤对LPS作用下大鼠肝星状细胞增殖的影响
目的:观察防己黄芪汤对内毒素脂多糖(LPS)作用下大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:将大鼠TSC-T6细胞株置DMEM中,37℃5%CO2条件下培养传代后分为空白组、内毒素脂多糖组、防己黄芪汤大、中、小剂量组.除空白组外,其他各组培养液中均加入终浓度1EIU/ml LPS,防己黄芪汤大、中、小剂量组终浓度分别为10、5、2.5mg生药/mL.连续5天以MTT法检测HSC-T6的吸光度变化;采用ELISA法检测培养48小时后HSC-T6 的TIMP-1、MMP-2和TGF-β1的水平.结果:与LPS组比较,防己黄芪汤能明显促进MMP-2分泌,抑制TIMP-1、TGF-β1分泌,有效抑制大鼠HSC-T6增殖,大剂量防己黄芪汤抑制作用尤为明显(P<0.01).结论:防己黄芪汤能有效抑制大鼠HSC增殖,促进MMP-2合成,抑制TIMP-1、TGF-β1合成,这可能是防己黄芪汤抗内毒素干预型肝纤维化的机制之一.
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提高激素性股骨头坏死兔模型动物存活率的实验研究
目的 应用内毒素脂多糖(LPS)联合甲基强的松龙(MPS)建立兔股骨头坏死模型,探讨提高兔存活率的方法.方法 将64只新西兰大白兔随机等分为4组:模型组(A组)、庆大霉素组(B组)、庆大霉素+泮托拉唑组(C组)和对照组(D组),每组各16只.A组、B组和C组兔建立股骨头坏死模型:单次经耳缘静脉注射LPS(10 μg/kg);24 h后于臀肌注射MPS(20 mg/kg),共3次,注射间隔24h.D组臀肌注射同等剂量的生理盐水作为对照.B组和C组于后1次注射MPS后连续7d以4×104 U/d臀肌注射庆大霉素注射液,C组同时连续7d以40 mg/d臀肌注射泮托拉唑注射液.结果 造模期间A组、B组和C组分别有8只、5只和2只动物死亡,A、B组动物死亡原因主要为呕吐、腹泻、消化道出血等,C组动物死亡原因不明.4组动物的死亡数量差异有统计学意义(P＜0.05);后一次注射MPS 6周后,3组动物存活率分别为50.0％、68.6％、87.5％.实验期间D组未出现动物死亡.A组、B组和C组存活下来的动物经组织病理学观察均显示造模成功.结论 在建立兔激素性股骨头坏死模型期间的同时,应用庆大霉素预防感染和泮托拉唑护胃,可以显著提高实验动物的存活率.
