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人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究
目的 研究人参总皂苷(TSPG)刺激红系血细胞增殖有关的细胞内信号转导途径.方法 用集落形成实验检测TSPG刺激红系造血祖细胞(BFU-E、CFU-E)增殖的能力;噻唑蓝法(MTT)检测红细胞生成素(Epo)对脐血细胞增殖的影响;Western blotting法检测TSPG刺激脐血细胞24 h后EpoR表达的变化;免疫沉淀法检测TSPG对EpoR介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2和信号传导及转录激活因子5(STAT5)的酪氨酸磷酸化的影响. 结果 1.TSPG10～75 mg/L均能提高脐血细胞形成BFU-E、CFU-E的集落产率,以25 mg/L提高幅度明显;2.以MTT法测定得出Epo 2×103～5×104 IU/L均能促进脐血细胞的增殖,以5×103 IU/L促进增殖效果明显;3.在不同剂量的TSPG刺激下,造血细胞EpoR的表达变化不明显;4.TSPG作用造血细胞24 h后,加入Epo继续刺激0、2、5、30 min,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化均增强.结论 TSPG在促进造血细胞增殖的过程中,对造血细胞EpoR表达的影响不显著,但可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化发挥重要作用.
关键词： 人参总皂苷 红细胞生成素受体 JAK2 信号传导及转录激活因子5 噻唑蓝法 -
慢性肾衰竭大鼠肾移植后骨髓红细胞生成素受体的变化
目的通过观察慢性肾衰竭大鼠肾移植前后骨髓红系祖细胞的红细胞生成素受体(EPOR)的变化及与肾功能和贫血的关系,探讨红细胞生成素受体(EPOR)抑制在肾性贫血中的作用.方法以慢性肾衰竭(CRF)大鼠作为受者行同种异体肾移植术模拟人类肾移植.模型建立后RT-PCR法测定假手术组、CRF组和肾移植后不同时间大鼠骨髓红系祖细胞EPORmRNA表达的变化,Western Blot分析EPOR蛋白质含量变化趋势,同时作EPORmRNA、EPOR蛋白质含量、Scr、Hb之间的相关性分析.结果CRF模型在5/6肾切除后90d时成功,接受肾移植后其血清肌酐和尿素氮迅速下降.CRF时EPORmRNA的表达和EPOR蛋白质含量较正常对照组明显降低,肾移植术后第7d开始二者明显升高,14d时恢复正常.相关性分析显示,EPORmRNA、EPOR蛋白含量、血红蛋白(Hb)均与血清肌酐呈显著性负相关,而EPORmRNA、EPOR蛋白含量与Hb呈显著性正相关.结论大鼠接受肾移植,尿毒症毒素完全清除后EPORmRNA及EPOR蛋白质含量显著增加至正常水平,提示EPOR抑制是引起肾性贫血的重要机理之一.
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红细胞生成刺激素对各类贫血的临床应用
1906年Carnot首先发现了红细胞生成素(EPO).1977年Mitake从再生障碍性贫血患者尿液中分离出EPO并将其纯化搞清了EPO的一级结构,1983年Lin等分离并克隆了人类EPO的基因,随后,红细胞生成素受体(EPO-R)的基因也被成功克隆.随着分子生物学理论及技术的飞跃发展,体外已大量生产出重组人类红细胞生成刺激素(rHuEPO)并于1986年应用于临床.
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免疫相关性全血细胞减少症患者自身抗体IgG对红细胞生成素受体封闭的作用
免疫相关性全血细胞减少症(IRP)是一种因B淋巴细胞功能亢进,产生抗自身造血细胞抗体导致骨髓造血衰竭的自身免疫性疾病[1-2].研究发现,自身抗体主要是通过激活巨噬细胞和(或)溶解补体,吞噬和(或)溶解大量骨髓造血细胞介导骨髓衰竭[3-6].临床研究发现部分IRP患者骨髓幼红细胞上存在EPO受体(EPOR)自身抗体,其EPOR检测水平明显低于正常人和骨髓红系细胞膜自身抗体阴性的IRP患者,且这部分IRP患者在临床治疗过程中应用常规剂量的EPO疗效不佳甚至无效[7],说明自身抗体介导骨髓造血衰竭还存在其他途径.EPOR自身抗体能否直接抑制骨髓造血功能,目前尚无文献报道.为此,我们作了以下研究.
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人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系.方法 将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1).每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响.酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量.实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率.结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P＜0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05)；人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用；该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关.
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温肾益精降浊法对慢性肾衰竭红细胞生成素受体基因表达的影响
目的:探讨温肾益精降浊药治疗肾性贫血(RA)药效学机制及中医辩证施治规律.方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型组、中西药结合治疗组、西药治疗组、中药治疗组,采用腺嘌呤给大鼠灌胃7周建立肾衰竭模型,用相应药物治疗4周,观察各组大鼠用药后血中红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(HCT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、促红细胞生成素(EPO),以及促红细胞生成素受体(EPOR mRNA)表达量等指标变化.结果:温肾益精降浊法中药能够改善BUN、Scr,提高EPO含量,使EPOR mRNA表达明显增强.结论:温肾益精降浊法中药通过提高骨髓有核细胞EPOR mRNA表达量,增强慢性肾衰竭(CRF)时骨髓对内源性EPO反应性,达到抗RA的目的.
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人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导
背景:研究证实多数造血生长因子通过JAKs-STATs途径转导信号,调节血细胞的增殖与分化.人参总皂苷能够促进早期的造血干/祖细胞向红系细胞分化,具有类似造血生长因子的功效,在红系血细胞发生中造血细胞膜表面红细胞生成素受体起着关键性的作用.目的:通过红细胞生成素及其受体介导的JAK2/STAT5信号转导途径,分析人参总皂苷定向诱导红系血细胞发生的分子机制.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-05/2008-10在在重庆医科大学基础医学研究所、组织胚胎学教研室完成.材料:脐血细胞来源于正常足月妊娠产妇分娩脐带血,由重庆医科大学第一附属医院提供.人参总皂苷由重庆中药研究所惠赠,纯度95%以上,添加MI-1640培养液配成1g/L的工作液.方法:①集落形成实验:取5×106L-1脐血单个核细胞,添加含马血清的RPMI-1640培养液,10,25,50,75,100 mg/L人参总皂苷组分别加入对应终浓度的人参总皂苷,并设立空白对照组.在96孔板上培养,0.2 mL/孔,14 d计数早期红系祖细胞,6 d计数晚期红系祖细胞.②取脐血单个核细胞悬液100 μL(5×108L-1),进行MTT检测.③分别将0,25,50,100 mg/L人参总皂苷与脐血造血细胞1×109L-1共培养24 h,进行Western blot检测.④取脐血造血细胞1×109L-1,对照组加入含体积分数为10%马血清的RPMI-1640培养液,人参总皂苷组在常规培养体系中加入终浓度25 mg/L人参总皂苷.分别用5 U/mL红细胞生成素诱导0,2,5,30min后终止反应,进行免疫沉淀检测.主要观察指标:人参总皂苷刺激红系造血祖细胞增殖的能力,红细胞生成素对脐血细胞增殖的影响,人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响,JAK2、STAT5蛋白酪氨酸磷酸化情况.结果:10～75 mg/L人参总皂苷均能提高脐血细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率,以25 mg/L提高幅度为明显.2～50 U/mL红细胞生成素均能促进脐血细胞的增殖,以5 U/mL促进增殖效果为明显.0～100 mg/L人参总皂苷作用脐血细胞24 h后,红细胞生成素受体的表达无明显变化.人参总皂苷作用造血细胞24 h后,加入红细胞生成素继续刺激0～30 min,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化程度均明显增强.结论:人参总皂苷在促进造血细胞增殖的过程中,尽管对造血细胞红细胞生成素受体的表达无明显影响,但可能通过在红细胞生成素受体介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化程度发挥作用.
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增殖性糖尿病视网膜病变患者视网膜前膜中促红细胞生成素受体表达及临床意义
目的 检测促红细胞生成素受体(EpoR)在增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者和非糖尿病患者视网膜前膜中的表达差异,并探讨EpoR表达水平与PDR术后视力预后的关系.方法 临床对照实验研究.收集2011年6月至2012年8月于天津市眼科医院行玻璃体切割手术并剥除视网膜前膜的PDR患者24只眼,为PDR组,并收集同期行相同手术的视网膜静脉阻塞(RVO)患者12只眼作为对照组.采用免疫组织化学染色法检测术中剥除的两组视网膜前膜上EpoR的表达情况,并结合临床及病理学资料对EpoR在PDR发病机制中的作用进行分析.采用t检验对两组视网膜前膜中EpoR表达量的差异进行比较,Pearson相关系数分析EpoR表达量与PDR患者术后佳矫正视力之间的相关性.结果 EpoR在PDR组和对照组的表达分别为(0.0167±0.0070)、(0.0119±0.0030),且差异有统计学意义(t =2.907,P=0.006).EpoR表达水平与PDR术后矫正视力有关联(r=0.514,P=0.010),视力提高组EpoR的平均累积光密度值低于视力非提高组.结论 EpoR在PDR视网膜前膜中表达增高,Epo-EpoR途径可能在PDR发病机制中起重要作用,且EpoR在视网膜前膜表达的升高可能影响PDR视力的预后.
关键词： 增殖性糖尿病视网膜病变 红细胞生成素受体 视网膜前膜 作用机制 视力预后 -
红细胞生成素在肾脏病中作用的研究进展
红细胞生成素(EPO)是一种多功能性细胞因子,其主要作用为调控骨髓中红细胞的产生,促进红系祖细胞增殖、分化为成熟红细胞,临床上主要用于治疗贫血.近年来的实验研究显示,EPO对非造血组织、器官具有保护功能,特别是肾脏.本文对近年来关于EPO非造血作用的相关研究进行综述.
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人参总皂苷对K562细胞红细胞生成素受体表达的影响
目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562细胞)红细胞生成素受体(EpoR)表达的影响.方法:采用流式细胞仪检测TSPG作用前后的K562细胞膜EpoR阳性率的变化;免疫细胞化学检测TSPG作用前后K562细胞EpoR表达的变化;以免疫印迹法检测TSPG处理前后K562细胞全细胞、细胞膜和细胞质中EpoR含量的变化.结果:K562细胞膜表达EpoR蛋白的阳性率随TSPG剂量的增加而显著下降;免疫细胞化学染色可见对照组K562细胞胞膜着色深,胞质浅淡,核/质比例大;经TSPG 200 mg/L作用72 h后,K562细胞胞膜着色明显变浅,胞质着色明显加深且丰富,核/质比例明显降低;不同剂量的TSPG作用K562细胞72 h后,全细胞总蛋白中的EpoR的表达无明显差异,经200 mg/L TSPG诱导后的K562细胞膜中EpoR蛋白表达下降,而TSPG(100、200、300、400 mg/L)诱导K562细胞72 h后,胞质EpoR蛋白表达增强,且随着剂量的加大更加明显.结论:TSPG能使K562细胞的EpoR位置重塑,为研究TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制提供了依据.
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促红细胞生成素及其受体在慢性环孢素A肾毒性大鼠肾组织中的表达
目的 探讨慢性环孢素A (CsA)能否导致贫血,以及促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在慢性CsA肾毒性大鼠肾组织中的表达变化.方法 SD大鼠给予CsA 15 mg/(kg·d)皮下注射4周建立慢性CsA肾毒性模型(CsA毒性组),对照组1 mL/(kg·d)皮下注射橄榄油.采用全自动生化分析仪检测两组大鼠的肾功能,血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)水平,三色(Masson Trichrome)染色确定肾小管间质纤维化程度;免疫组织化学染色和蛋白质印迹法分别检测肾组织EPO及EPOR蛋白的表达;TUNEL染色和电子显微镜观察细胞凋亡.结果 与对照组相比,CsA毒性组大鼠肾功能低下,肾小管间质发生纤维化,凋亡细胞增多(P＜0.01);同时CsA毒性组大鼠有贫血发生,表现为Hb和Hct水平的下降(P＜0.01).免疫组织化学染色和蛋白质印迹分析结果表明,EPO在CsA毒性组肾组织中的表达减少,而EPOR的表达增加(P＜0.01).直线相关分析提示,EPO蛋白表达与肾小管间质纤维化(r=-0.729,P＜0.001)和TUNEL阳性细胞数(r=-0.841,P＜0.001)呈负相关.结论 慢性CsA肾毒性大鼠肾组织中EPO蛋白表达减少,从而导致贫血;CsA诱导肾小管上皮细胞凋亡与EPO蛋白表达减少有关.
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红细胞生成素的研究进展
一向认为,红细胞生成素(EPO)的主要作用是通过与造血前体细胞表面的EPO受体(EPO receptor, EPOR)结合,调节红系祖细胞增殖、成熟、分化, 因而广泛用于各种贫血治疗和围手术期减少术中、术后异体输血.
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人脑胶质瘤组织促红细胞生成素受体的表达及其与新生血管的关系
目的 观察人脑胶质瘤组织促红细胞生成素受体(EPOR)的表达,探讨EPOR与病理分级及新生血管的关系.方法 应用组织芯片技术检测152例脑胶质瘤及20例正常脑组织中EPOR及CD105的表达；应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测21例脑胶质瘤及6例正常脑组织中EPOR mRNA的表达.结果 64例(42.1％)胶质瘤EPOR表达阳性,2例(10％)正常脑组织表达阳性,差异有统计学意义(x2=7.7038,P＜0.01) EPOR表达强度与病理分级呈正相关(rs=0.3151,P＜O.01).EPOR高表达组(艹、(卅))的CD105计数高于低表达组(－、+,P＜0.05).胶质瘤组EPOR mRNA表达与正常组差异无统计学意义.结论 人脑胶质瘤组织EPOR的表达在翻译水平上调且与病理级别及新生血管呈正相关.在转录水平未出现上调.
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EPO/EPOR及其信号转导机制研究进展
红细胞生成素(erythropoietin,EPO) 和红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)是调节红系祖细胞增殖、分化和生存所必需的关键细胞因子.近年来,国内外研究进一步发现,EPOR不仅存在于幼红细胞,在其它细胞也有发现,EPO和EPOR的作用更为广泛.本文对EPO/EPOR及其细胞内外一系列信号转导机制进行综述.
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红细胞生成素及受体在脑肿瘤中的表达
红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是调节红细胞生成的细胞因子,近年来研究发现,多种非红细胞生成组织表达红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR),提示EPO具有多种生物活性,有可能成为抗肿瘤细胞增殖治疗及抗血管生成治疗的靶点.Epo在各种肿瘤中的作用逐渐成为研究的热点,尤其近年脑肿瘤的研究渐多,现将EPO及受体在脑肿瘤中的表达进行综述.
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肾移植前后骨髓红细胞生成素受体基因表达的临床研究
目的研究尿毒症肾性贫血患者肾移植前后骨髓红细胞生成素受体(erythropoietin receptor, EPOR)mRNA的表达变化及其与肾功能、贫血状态的关系.方法 58例同种异体肾移植患者,按术后肾功能恢复情况分为立即肾功能恢复(immediate graft function, IGF)组49例、缓慢肾功能恢复(slow graft function, SGF)组5例、延迟肾功能恢复(delayed graft function, DGF)组4例,5例发生红细胞增多症受者同时被另外列为肾移植后红细胞增多症(post-transplant erythropoiesis, PTE)组.用RT-PCR方法检测所有患者术前、术后10、30、90 d骨髓EPOR mRNA的表达,并与血清肌酐(serum creatinine, SCr)和血红蛋白(hemoglobin, Hb)水平进行相关性分析.结果各组EPOR mRNA的表达术前显著下降,术后逐渐升高,PTE组升高快,DGF组升高慢,且与SCr呈负相关,与Hb呈正相关.结论 EPOR mRNA表达显著下降在肾性贫血的发病机制中起重要作用,成功的肾移植可增加其表达,从而改善及纠正患者的贫血状态.
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尿毒症毒素对大鼠培养骨髓细胞红细胞生成素受体的影响
目的通过观察尿毒症毒素对骨髓红系祖细胞红细胞生成素受体(EPOR)的影响,探讨EPOR抑制在尿毒症肾性贫血发生发展中的作用.方法对大鼠骨髓红系祖细胞进行培养,观察尿毒症的小分子毒素尿素、肌酐、尿酸、精脒,中分子物质(MMS),大分子毒素甲状旁腺激素(PTH)在不同浓度时红系祖细胞克隆形成单位(CFU-E)的生长情况,并用RT-PCR法测定其EPOR mRNA表达,Western Blot分析EPOR蛋白质含量.结果尿素、肌酐、尿酸和PTH对CFU-E的生长有抑制作用,精脒和MMS在较低浓度时即对CFU-E的生长具有显著的抑制作用;小分子毒素、MMS对EPORmRNA表达和EPOR蛋白质含量具有普遍的抑制作用.结论尿毒症毒素可抑制离体大鼠红系祖细胞CFU-E的生长和其EPOR表达,其中精脒和MMS显著抑制CFU-E生长,是引起肾性贫血的重要原因之一.
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磷脂酰肌醇-3激酶信号途径在红细胞生成过程中的作用
红细胞生成素(Epo)是调节红细胞生成的重要细胞因子.磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号途径是Epo通过结合红细胞生成素受体(EpoR)介导的胞内信号途径之一,在调节红系造血祖细胞生存、增殖和分化等过程中起重要作用.本文介绍了EpoR介导PI3K激活的途径以及所需要的其他蛋白质分子,PI3K在激活后的下游信号分子及其在调节红细胞生成方面的作用.
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红细胞生成素生物功能及其介导的信号转导
红细胞生成素(erythropoietin,Epo)是肾脏产生的一种糖蛋白类激素,主要调控红系祖细胞的增殖、分化和存活.Epo基因3′端增强子调控缺氧诱导的Epo基因表达,缺氧诱导因子与该增强子结合后可启动Epo基因的表达.红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EpoR)p66为一Ⅰ型跨膜糖蛋白,主要表达于红系祖细胞的CFU-E阶段.蛋白质p85和p100与p66相偶联,参与受体结构的组成.Epo与EpoR结合后可导致后者的同源二聚化,激活与之组成型相结合的Jak2酪氨酸激酶,继而激活Ras/MAPK、3-PI激酶以及STAT等细胞内信号转导通路.
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红细胞生成素及其受体对成骨细胞的作用机制
红细胞生成素(EPO)与其受体(EPOR)结合引发信号转导,调节红细胞的增殖和分化.EPO激活贾纳斯激酶(JAK)及其下游的丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、信号转导子和转录激活子(STAT)等信号传导通路,参与调节原始干细胞发育、细胞完整性、血管再生和神经发育等.EPO具有促进骨髓间质干细胞向成骨细胞分化的作用,促进成骨细胞的骨形成和骨折的愈合,在牵张成骨过程中可加快骨的愈合速度.EPO和EPOR在骨髓间质干细胞或骨髓基质细胞等成骨向分化和成骨细胞中,主要通过JAK-STAT、PI3K-蛋白激酶B、MAPK和核因子-κB等信号转导通路发挥作用,进而促进成骨细胞的骨形,这对于口腔正畸牙移动和颌面外科的牵张成骨等皆有十分重要的临床意义.
