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难治性癫痫致痫灶EPO-R、JAK2和STAT-5的表达及分析
目的 明确难治性癫痫致痫灶中EPO-R、JAK2和STAT-5的表达情况,并探讨EPO-R/JAK2/STAT-5通路与难治性癫痫致痫灶神经细胞凋亡的关系.方法 收集2016年3月-2017年7月期间于吉林大学第一医院癫痫中心住院并行手术治疗的难治性癫痫患者脑组织24例(试验组)和同期长春市因意外死亡或非自然死亡后按有关法律规定立即进行尸体解剖所取得的对照组脑组织6例,应用免疫组织化学技术,观察上述两组脑组织EPO-R、JAK2和STAT-5的表达差异并进行统计学分析.结果 ①试验组与对照组脑组织中均有EPO-R、JAK2和STAT-5表达,400倍光镜下试验组EPO-R、JAK2和STAT-5的阳性细胞数分别为41.05±2.40、50.21±2.50、60.18±2.84;对照组分别为23.00±0.49、27.00±0.88、25.93±0.33.试验组与对照组差异明显,具有统计学意义(P＜0.001);②试验组患者致痫灶病理及超微结构变化:在光镜下可见神经元分布不均,不成熟神经元;细胞核呈空泡状,胞质少,深染,胞浆嗜酸小体,神经元变性呈三角形;还可见胶质细胞及小血管增生,嗜神经细胞现象;电镜下致痫灶可见神经细胞变性坏死,核固缩变形,核仁偏位,核膜断裂甚至溶解;星形胶质细胞肿胀,染色质边集,细胞膜水肿扩充;线粒体肿胀透明,部分线粒体空泡化,嵴异常.结论 ①难治性癫痫致痫灶中可见神经细胞凋亡;②难治性癫痫致痫灶中EPO-R、JAK2和STAT-5在神经元细胞及神经胶质细胞表达均较对照组明显增加,EPO-R、JAK2和STAT-5的高表达与癫痫病程及发作频率无相关性;③EPO-R/JAK2/STAT-5通路可能参与了癫痫发作后内源性EPO保护神经细胞的病理生理过程.
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鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响
目的:观察鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响.方法:30只雄性Wistar大鼠按照1∶4比例随机分为对照组和实验组.实验组大鼠先用四氯化碳诱导成肝纤维化模型,再按照1∶1比例随机分为模型组和观察组,应用D氨基半乳糖进行急性攻击,建立慢加急性肝衰竭大鼠模型.观察组在急性攻击前7d予以鲜生地黄连续灌胃.各组大鼠分别在急性攻击后24 h取材,检测血清内毒素、白细胞介素-6含量及肝脏组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA的表达.结果:模型组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达低于对照组和观察组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组与对照组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠血清内毒素显著高于对照组和观察组,差异有统计学意义(P＜0.01);观察组与对照组比较,大鼠血清内毒素表达差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠血清白细胞介素-6高于对照组和观察组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:鲜生地黄能够降低肠道内毒素的吸收,促进JAK2/STAT3通路活化,但是介导物质可能并不是IL6,相关机制需要进一步完善.
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当归多糖协同Epo对造血干/祖细胞JAK2/STAT5信号传导通路的影响
目的:探讨当归多糖(APS)对捌控红系血细胞增殖分化有关的细胞内JAK2/STAT5信号传导通路的影响,阐述当归多糖促进血细胞发生的可能机制.方法:分离纯化胎儿脐带血单个核细胞,在常规体外培养体系加入APS(200 mg·L~(-1))作用细胞24 h,促红细胞生成素(Epo)分别刺激0,2,5,30 min,免疫细胞化学与激光共聚焦显微镜观察细胞STAT5的表达;Western-blotting增强化学发光法检测细胞JAK2与浆和核中STAT5的表达.结果:APS协同Epo对STAT5的表达影响显著,对照组与APS组在4个时间点STAT5的表达水平有显著差异,JAK2、细胞浆和核中STAT5表达较对照组显著增加,且在Epo刺激5 min时表达强.结论:APS能协同Epo促进造血细胞增殖分化,其机制与影响细胞内的JAK2/STAT5信号传导通路有关.
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人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究
目的 研究人参总皂苷(TSPG)刺激红系血细胞增殖有关的细胞内信号转导途径.方法 用集落形成实验检测TSPG刺激红系造血祖细胞(BFU-E、CFU-E)增殖的能力;噻唑蓝法(MTT)检测红细胞生成素(Epo)对脐血细胞增殖的影响;Western blotting法检测TSPG刺激脐血细胞24 h后EpoR表达的变化;免疫沉淀法检测TSPG对EpoR介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2和信号传导及转录激活因子5(STAT5)的酪氨酸磷酸化的影响. 结果 1.TSPG10～75 mg/L均能提高脐血细胞形成BFU-E、CFU-E的集落产率,以25 mg/L提高幅度明显;2.以MTT法测定得出Epo 2×103～5×104 IU/L均能促进脐血细胞的增殖,以5×103 IU/L促进增殖效果明显;3.在不同剂量的TSPG刺激下,造血细胞EpoR的表达变化不明显;4.TSPG作用造血细胞24 h后,加入Epo继续刺激0、2、5、30 min,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化均增强.结论 TSPG在促进造血细胞增殖的过程中,对造血细胞EpoR表达的影响不显著,但可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化发挥重要作用.
关键词： 人参总皂苷 红细胞生成素受体 JAK2 信号传导及转录激活因子5 噻唑蓝法 -
应用MALDI-TOF质谱技术检测多发性骨髓瘤Jak2基因单核苷酸多态性
本研究探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)检测多发性骨髓瘤(MM)jak2基因的单核苷酸多态性(SNP)的实用性.用PCR扩增出含jak2基因2个SNP(CA28T和C643T)位点的DNA片段作为模板,产物纯化后利用MALDI-TOE MS检测5例MM和5例健康对照者样本的jak2基因多态性.结果表明:C428T和C643T位点基因型在多发性骨髓瘤病例与健康对照组的分布无差异,均为T/T纯合子.结论:本实验建立的基于MALDI-TOF MS与引物延伸技术检测jak2基因多态性的方法是一个快速、准确和可靠的检测方法.
关键词： JAK2 多性骨髓瘤 MALDI-TOF MS 单核苷酸多态性 -
曲古抑素A通过JAK/STAT信号通路对脑缺血-再灌注损伤的影响
目的 研究曲古抑素A (trichostatin-A,TSA)是否可以作用于JAK激酶/信号转导和转录激活因子(Janus kinase/Signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路对大鼠的脑缺血-再灌注损伤的影响.方法 36只健康雄性SD大鼠随机(随机数字法)分成3组(n=12):假手术组、缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组、TSA处理组,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,其中假手术组不进行线栓栓塞,TSA组栓塞前20min通过阴茎静脉注射TSA 0.05 mg/kg.3组制模成功后再灌注24 h,按照Longa 5分法进行大鼠神经功能缺损评定,脑切片TTC染色,ipp 6.0软件计算脑梗死体积百分比；每组随机取6只(n=6) Elisa检测JAK2蛋白的表达,其余6只(n=6)用于检测p-JAK2蛋白的表达.使用方差分析及非参数分析统计所得数据.结果 3组均有少量JAK2表达,组间差异无统计学意义(P=0.266)；与I/R组相比,TSA处理组神经学损伤评分降低(P =0.019),脑梗死体积缩小(P＜0.01),p-JAK2表达减少(P =0.009),组间差异有统计学意义.结论 TSA可一定程度地减轻脑缺血-再灌注损伤,发挥脑保护作用,这可能与TSA抑制p-JAK2介导的JAK/STAT信号通路有关.
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JAK2 V617F点突变的研究进展及其与ETS2 mRNA表达的相关性
慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)是一组造血干细胞克隆性疾病,在骨髓细胞普遍增生的基础上,某一个系列细胞增生尤其突出,呈持续不断的过度增殖.世界卫生组织(WHO)新关于 cMPDs 分类包括如下7 类:慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、嗜酸细胞性白血病(CEL)和高嗜酸细胞综合征(HES)、真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(IMF)、原发性血小板增多症(ET)和 CMPD(不能分类型)[1].
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真性红细胞增多症患者JAK2、CALR、MPL基因突变分析
目的 探讨真性红细胞增多症患者JAK2、CALR、MPL基因突变分析.方法 选取2011年2月至2017年10月山西省中西医结合医院肿瘤血液科和山西省医科大学第二附属医院血液科收治的87例真性红细胞增多症患者作为病理组,另外选取山西省中西医结合医院肿瘤血液科30例正常体检者作为健康组,采用PCR技术检测两组中JAK2、CALR、MPL基因突变情况,并对其一般临床资料及血常规检查结果进行分析.结果 病理组JAK2 V617F突变阳性患者占58.6% ,健康组占6.7%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理组 JAK2 12 号外显子突变阳性患者占24.1%,健康组占6.7%,两组比较差异有统计学意义(P <0.05);病理组 MPL 突变阳性患者占18.4%,健康组占3.3%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理组 CALR突变阳性患者占19.5%,健康组占3.3%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).将患者按 JAK2 V617 突变组、JAK2 12号外显子突变组、MPL突变组、CALR突变组、及JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性进行分组,比较结果显示,各组之间男女比例、年龄及白细胞计数差异无统计学意义(P>0.05).血红蛋白及血小板在JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性组与JAK2 V617突变组、MPL突变组、CALR突变组之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血小板在JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性组与JAK2 12号外显子突变组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而血红蛋白浓度在组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 JAK2、CALR、MPL基因突变检测对于真性红细胞增多症患者的诊断和预后预测有重要的意义,值得进一步临床推广应用.
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骨髓增殖性疾病137例患者JAK2基因突变的研究
目的 探讨信号分子JAK2基因突变--JAK2V617F在骨髓增殖性疾病(MPD)患者中的发生情况及诊断价值.方法 采用等位基因特异性PCR方法及序列测定,检测137例MPD患者骨髓及外周血单个核细胞JAK2基因第12号外显子,研究JAK2V617F的发生情况,并结合细胞遗传学及分子生物学等检查结果分析其诊断价值.结果 137例MPD患者共检出90例JAK2V617F阳性,总阳性率65.7%;其中真性红细胞增多症(PV)57例,阳性率73.7%(42/57);原发性血小板增多症(ET)68例,阳性率58.8%(40/68);特发性骨髓纤维化(IMF)12例,阳性率66.7%(8/12);PV及ET患者突变型平均年龄高于野生型(P＜0.05).115例进行过染色体检查,其中7例存在核型异常,突变型5例,阳性率为71.4%(5/7);染色体核型正常者108例,突变型74例,阳性率68.5%;两组差异无统计学意义.结论 MPD患者中JAK2V617F发生率较高,其发生与年龄相关,突变型平均年龄高于野生型.
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伴JAK2 V617F阳性慢性中性粒细胞白血病一例
患者男,54岁,因“左上腹包块10余天”入院.10余天前无意发现左上腹包块,伴左上腹坠胀感、乏力、消瘦、多汗,无腹痛及大便性状改变,无黄疸、低热,无出血及骨骼疼痛表现,为进一步诊治收入我科.患者7个月前曾于当地医院体检示WBC 13×109/L,无发热,未予以重视.10年前诊断为“肺结核”,规则抗结核治疗后痊愈.否认毒物、射线接触史.个人、婚育及家族史无特殊.体检:体温36.0℃,心率72次/min,呼吸20次/min,血压125/80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),体重51 kg,神志清楚,查体合作.全身皮肤、黏膜无黄染及出血点,浅表淋巴结未触及肿大.胸骨无压痛,心肺无异常,腹平软,无压痛,肝脏未扪及,墨菲征阴性,移动性浊音阴性;巨脾,脾脏Ⅰ线12 cm,Ⅱ线16 cm,Ⅲ线+2.5 cm,质韧,无触痛.双肾区无叩痛,双下肢未见水肿.
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CMPN基因突变及其机制与生物学意义的探讨
目的:分析JAK2基因突变阳性的慢性骨髓增殖性疾病(myeloproliferative neoplaspsms,CMPN)患者多种细胞因子受体和关键蛋白的表达变化,探讨其可能的发病机制.方法:采用Taqman-MGB探针联合RT-PCR法从50例CMPN患者中筛选出JAK2V617F突变阳性患者,计算突变率,并对突变结果进行测序分析.实时荧光定量PCR检测真性红细胞增多症(polycythernia vera,V)患者、原发性血小板增多症(essential thrombocytosisET)患者和原发性骨髓纤维化(idiopathic myelofibrosis,MF)患者骨髓中G-CSFR、EPOR和TPOR mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PV患者、ET患者和IMF患者骨髓中PI-3K、P-AKT和AKT总蛋白的表达.结果:PV、ET和IMF患者的突变率分别为75.0％(15/20)、46.7％(7/15)和26.7％(4/15).与健康志愿者相比,PV、ET和IMF患者骨髓中G-CSFR mRNA相对表达水平分别增加了263.16％、276.32％和247.37％,EPOR mRNA表达量分别增加了213.95％、220.93％和218.61％,TPOR mRNA表达量分别增加了172.55％、176.47％和182.35％.PI-3K蛋白表达水平分别增加了115.79％、92.11％和100.00％,P-AKT蛋白表达水平分别增加了226.09％、243.48％和200.00％,差异均有统计学意义,P＜0.05；总AKT蛋白水平各组之间比较差异无统计学意义,P＞0.05.结论:JAK2V617F点突变存在于大多数CMPN中,此突变可能通过介导EPOR、TPOR和G-CSFR在内的多种细胞因子的信号转导,激活PI-3K/AKT信号转导通路,进而促进细胞增殖,抑制细胞凋亡参与CMPD的发病机制.
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慢性淋巴细胞白血病合并真性红细胞增多症一例JAK2V617F突变研究
1 病例报告患者男,85岁.因"体检发现血细胞增多2个月余"于2010-02-06入住杭州市第一人民医院血液科.患者体检时发现白细胞(white blood cell,WBC)20.4×109 L-1,中性粒细胞(neutrophil,NE)30％,淋巴细胞(lymphocyte,LYM) 64.5％,血红蛋白(hemo-globin,Hb) 184 g/L,血小板(platelet,PLT) 400×109 L-1,无发热、盗汗、消瘦和腹胀等不适,近期未服糖皮质激素等特殊药物.既往高血压病4年,前列腺肥大3年,否认冠心病和慢性支气管炎等心肺疾病史.入院查体未发现明显阳性体征.入院后查血常规示,WBC 20.0×109 L-1,NE7.8×109 L-1,LYM 11.2×109 L-1,Hb 179 g/L,RBC 6.01×109 L 1,PLT483×109L-1,网织红细胞0.74％.骨髓常规如图1所示,有核细胞增生活跃,粒红比例3.2∶1,淋巴细胞占52％,以成熟淋巴细胞为主.JAK2V617F突变型阳性、Bcr/Abl融合基因阴性,促红细胞生成素5.56 mIU/mL(正常参考值3.70～29.50 mIU/mL),ZAP70阴性,免疫球蛋白重链重排阴性,荧光原位杂交法检测p53阴性,胸部CT、腹部CT及浅表淋巴结B超提示肝脾形态正常,未发现异常增大淋巴结.
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真性红细胞增多症和原发性血小板增多症JAK2 V617F基因纯合突变克隆分析
目的 定量检测并分析JAK2 V617F突变等位基因在真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)和原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)中的分布情况.方法 分别建立位点特异性PCR和荧光实时定量PCR检测JAK2 V617F突变的方法,对40例PV、31例ET标本和对照标本(急性白血病和正常人标本各40例)进行检测,统计分析2种方法的突变检出率、突变等位基因比例在2种疾病中的差异及其与年龄、性别的相关性.结果 位点特异性PCR法和荧光实时定量PCR法在PV患者中检测阳性率分别为87.5%和92.5%,在ET患者中检测阳性率分别为51.6%和64.5%,在急性白血病和正常对照标本中均未检测到突变.突变阳性的PV患者突变型等位基因比例为0.436±0.261,其中携带纯合突变者占PV患者总数的40.54%.突变阳性的ET患者中突变型等位基因比例为0.216±0.207,其中携带纯合突变者占ET患者总数的10%.统计分析表明在PV和ET患者中突变型等位基因比例和患者性别无关(P值分别为0.342和0.154).突变阳性的PV和ET患者中突变等位基因比例和年龄无相关性(PV:r=0.161,P=0.342;ET:r=0.331,P=0.154).结论 PV患者较ET患者携带更多突变的等位基因,PV患者携带纯合突变的比例是ET患者的4倍.采用较高灵敏度的检测方法有助于提高JAK2 V617F突变的检出率.
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JAK2 V617F突变与真性红细胞增多症的研究进展
真性红细胞增多症（PV）的发病与JAK2基因突变着密切关系。该突变通过过度激活JAK-STAT信号通路，诱导PV发生。目前，JAK2基因突变已经成为诊断PV的重要条件，JAK2抑制剂在临床前试验中初见成效，进入早期临床试验。该文就近年来JAK2 V617F基因突变在PV临床诊断及靶向治疗方面的进展及存在问题进行综述。
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依达拉奉对大鼠肝脏移植缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3信号通路的影响
目的 探讨依达拉奉对大鼠肝脏移植缺血再灌注损伤后细胞凋亡及JAK2, STAT3表达的影响.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、生理盐水干预组、依达拉奉干预组,采用Kamada's袖套法建立大鼠原位肝移植模型.干预组于新肝开放前分别鼠尾静脉注射依达拉奉3 mg/kg或等量生理盐水,于24 h后RT-PCR及免疫组织化学方法检测JAK2, STAT3表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究肝细胞凋亡的变化.结果 与生理盐水干预组相比,依达拉奉干预组 JAK2, STAT3表达明显减少(P<0.05);凋亡细胞也减少(P<0.05).结论 依达拉奉尚能通过抑制与炎性细胞因子及氧化应激有密切关系的JAK2/STAT3信号转导通路显著减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤后组织损伤.
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等位基因不平衡在骨髓增殖性肿瘤中的研究进展
在过去的5年间,一些研究已经提出了被称为经典骨髓增生性肿瘤(MPNs)的发病机制遗传学见解,首先是JAK2V617F基因突变的发现,然后是JAK2外显子12和MPLW515突变,这些发现修正了对这一疾病的理解、诊断和治疗.这些突变是导致这一疾病的致癌事件,然而,它们不能解释这些疾病发生的异质性.遗传缺陷在大约40%原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化疾病中仍未确定.另外,体遗传因素对MPNs表型同样重要,像目前提出的TET2、ASXL1和CBL基因突变.此外,JAK2基因多态性已经提出与MPNs相关.目前仍需要更深入地研究MPNs致癌的作用机制.
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香砂六君丸对肥胖大鼠胃黏膜JAK2/STAT3通路的影响
目的:研究香砂六君丸对肥胖大鼠胃黏膜JAK2和STAT3表达的影响,探讨该方控制肥胖人群罹患胃癌风险的可能性.方法:40只雄性SD大鼠,随机分为对照组、肥胖组(模型组)、香砂六君丸低剂量治疗组(香低组)、香砂六君丸中剂量治疗组(香中组)和香砂六君丸高剂量组治疗组(香高组),每组8只;全自动生化分析仪检测血脂;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;免疫组化法检测胃黏膜磷酸化(p)-JAK2/STAT3表达.结果:与对照组比较,模型组的总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和MDA水平以及p-JAK2、p-STAT3表达均显著增加,但SOD和高密度脂蛋白(HDL)水平以及GSH-px活性均明显下降.与模型组相比,香低、中和高组的TG和LDL水平显著下降,而SOD水平和GSH-px活性明显上升;香中组和香高组MDA水平和p-JAK2、p-STAT3表达均显著下降;香高组HDL水平明显上升.结论:香砂六君丸能够调控血脂,对抗氧化应激,抑制胃黏膜JAK2/STAT3通路,可能具有降低肥胖人群罹患胃癌的作用.
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等位基因特异性聚合酶链反应结合测序对骨髓增殖性疾病JAK2 V617F点突变的研究
目的 研究骨髓增殖性疾病(MPD)患者Janus激酶2(JAK2)V617F点突变,探讨其临床应用意义.方法 应用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)结合测序检测20例慢性粒细胞白血病(CML)、23例真性红细胞增多症(PV)、40例原发性血小板增多症(ET)、8例慢性特发性骨髓纤维化(IMF)、3例高嗜酸粒细胞综合征(HES)患者外周血单个核细胞基因组DNA的JAK2 V617F点突变.结果 74例BCR/ABL阴性MPD患者中共发现38例存在JAK2 V617F突变(51.4%),分别为16例PV,18例ET,3例IMF,1例HES.对所有阳性样本和10例阴性样本进行测序鉴定,二者结果均一致.JAK2 V617F突变阳性ET患者的外周血血红蛋白、红细胞压积和中性粒细胞比例显著高于阴性组.结论 JAK2 V617F突变为BCR/ABL阴性MPD患者主要的分子遗传学异常,对其诊断、分类及探索有效的靶向治疗有重要影响.
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TaqMan-MGB探针检测骨髓增殖性疾病患者JAK2V617F突变
目的 建立实时定量PCR检测骨髓增殖性疾病(MPD)患者JAK2V617F突变的方法.方法 利用TaqMan-MGB探针,检测MPD患者JAK2V617F突变,部分标本用等位基因特异的定性PCR及测序的方法同时进行验证.结果 374份患者和对照的骨髓或外周血标本被用于JAK2V617F突变分析.其中76例PV、115例ET和19例MF患者JAK2V617F突变的检出率分别为70%、51%及58%;65例急性髓性白血病中仅1例为阳性,而38例慢性髓性白血病、30例急性淋巴细胞白血病、8例慢性淋巴细胞白血病、7例非霍奇金淋巴瘤及16例正常供者骨髓细胞中的检出率均为0.结论 JAK2V617F突变在我国MPD患者中是广泛存在的.利用TaqMan-MGB探针进行实时定量PCR的方法可快速、准确地检测JAK2V617F突变.
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JAK2/STAT途径在生长激素信号传递中的作用
生长激素(GH)信号传递的机制尚不十分清楚.近年发现JAK2/STAT途径可能在其信号传递中起着重要的作用:即GH与生长激素受体(GHR)结合后首先活化JAK2,然后在JAK2和GHR的共同作用下,活化STAT,后STAT转移到细胞核内,与其调节基因的启动子内的特殊序列结合,从而激活基因的转录,本文就JAK2/STAT途径的活化机制、激活基因转录的机理及此途径的调节和关闭进行了阐述.
