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真性红细胞增多症患者JAK2、CALR、MPL基因突变分析
目的 探讨真性红细胞增多症患者JAK2、CALR、MPL基因突变分析.方法 选取2011年2月至2017年10月山西省中西医结合医院肿瘤血液科和山西省医科大学第二附属医院血液科收治的87例真性红细胞增多症患者作为病理组,另外选取山西省中西医结合医院肿瘤血液科30例正常体检者作为健康组,采用PCR技术检测两组中JAK2、CALR、MPL基因突变情况,并对其一般临床资料及血常规检查结果进行分析.结果 病理组JAK2 V617F突变阳性患者占58.6% ,健康组占6.7%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理组 JAK2 12 号外显子突变阳性患者占24.1%,健康组占6.7%,两组比较差异有统计学意义(P <0.05);病理组 MPL 突变阳性患者占18.4%,健康组占3.3%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理组 CALR突变阳性患者占19.5%,健康组占3.3%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).将患者按 JAK2 V617 突变组、JAK2 12号外显子突变组、MPL突变组、CALR突变组、及JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性进行分组,比较结果显示,各组之间男女比例、年龄及白细胞计数差异无统计学意义(P>0.05).血红蛋白及血小板在JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性组与JAK2 V617突变组、MPL突变组、CALR突变组之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血小板在JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性组与JAK2 12号外显子突变组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而血红蛋白浓度在组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 JAK2、CALR、MPL基因突变检测对于真性红细胞增多症患者的诊断和预后预测有重要的意义,值得进一步临床推广应用.
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Mpl相互作用蛋白RACK1的筛选与鉴定
目的:筛选新的血小板生成素(TPO)受体胞内区相互作用蛋白并确定相互作用.方法:以TPO受体胞内区为诱饵蛋白,进行酵母双杂交文库的筛选,RT-PCR扩增筛选到的基因并克隆到相应载体上,Western印迹方法检测其在不同组织与细胞内的表达;进行哺乳动物细胞内双杂交、免疫共沉淀、激光共聚焦实验确证相互作用.结果:从酵母双杂交文库筛选到RACK1基因,检测到其在不同组织与细胞内表达都很丰富,哺乳动物细胞内双杂交、免疫共沉淀证明RACK1同TPO受体Mpl的胞内区存在相互作用,而细胞内共定位实验证明两者在哺乳动物细胞内存在共定位现象,即两蛋白的相互作用可能具有生理意义.结论:筛选到的RACK1蛋白同TPO受体Mpl的胞内区存在相互作用.
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HPLC-ELSD法测定BLP25脂质体疫苗中MPL的含量
目的 建立测定BLP25脂质体疫苗中免疫佐剂MPL含量的方法.方法 采用HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)法.色谱柱为孔径300A的WP Octadecyl C18柱；采用三元梯度洗脱；Alltech 2000型ELSD检测器的漂移管温度为80℃,载气流速为2.6 L·min-1.结果 所建方法能将MPL与脂质体中的其他成分完全分离；在48.6～486μg·mL-1浓度范围内,MPL校正曲线(1gA～1gC)的线性相关系数(r)为0.9998;平均加样回收率为100.0％(n=3×3)；连续进样、平行配制溶液、不同操作人员、不同实验室测定结果的相对标准偏差(RSD)分别为0.8％(n=6)、1.3％(n=3)、1.7％(n=2)和2.8％(n=3).结论 该HPLC-ELSD方法的专属性、线性、准确度、精密度和重现性均符合方法学要求,适宜于BLP25脂质体疫苗中MPL的含量测定.
关键词： BLP25脂质体疫苗 MPL 含量测定 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 -
慢性骨髓增殖性肿瘤患者MPL基因突变研究
慢性骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)是多能造血干细胞异常增殖导致的血液系统恶性肿瘤[1-2].国外研究表明,MPN患者存在高频率JAK2基因突变JAK2V617F[3-6].我们已报道JAK2V617F突变在我国MPN患者中普遍存在[7].
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Mpl与绿色荧光蛋白融合基因的真核载体构建及表达
目的:探索Mpl与绿色荧光蛋白GFP基因共同转粢哺乳动物细胞NIH3T3的方法.方法:采用PCR方法将GFP基因与Mpl基因构建融合荧光蛋白的真核表达载体,用脂质体介导转染NIH3T3细胞和筛选稳定细胞系,使用荧光显微镜方法和Westernblotting检测转染效果.结果:利用PCR方法有效扩增了Mpl基因,构建了融合荧光蛋白的真核表达载体,序列分析表明所构建的含Mpl基因的质粒与设计相同,使用荧光显微镜方法和Western blotting检测Mpl融合绿色荧光蛋白表达载体成功转染NIH3T3细胞.结论:成功构建了Mpl荧光表达载体,融合基因可以在NIH3T3细胞中稳定表达,为进一步研究Mpl的生物学活性及其与hNUDC蛋白相互作用提供了重要的理论依据.
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JAK2、CALR及MPL基因突变检测对BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤的诊断价值
目的 探究JAK2、CALR及MPL突变对BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)的诊断价值.方法 对171例外周血细胞计数异常且临床表现疑似MPNs的患者进行回顾性分析,其中106例BCR-ABL阴性MPN患者作为病例组,65例非BCR-ABL阴性MPN患者作为对照组,分析JAK2、CALR及MPL突变检测诊断BCR-ABL阴性MPN患者的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率情况.结果 ①与对照组相比,病例组JAK2、CALR及MPL突变总的阳性率明显升高(P＜0.01);相比于单独检测,当3种基因突变联合检测时灵敏度、阴性预测值及符合率分别提高至84.9％、79.2％、88.3％,特异度为93.9％,Kappa值为0.76;②选取病例组中经典的BCR-ABL阴性MPN患者为对象,以WHO诊断标准作为参考,基因突变检测、骨髓病理诊断与WHO诊断标准一致的符合率分别为85.1％、90.1％,两种方法比较符合率差异无统计学意义;而基因突变检测与骨髓病理之间的诊断符合率为75.2％ (P ＞0.05).结论 3种基因联合检测比单独检测对BCR-ABL阴性MPN诊断的灵敏度、符合率升高,同时可保持一定特异度;3种基因突变联合检测与骨髓病理对诊断经典的BCR-ABL阴性MPN的准确率存在高度一致性.
关键词： BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤 JAK2 CALR MPL -
原发性血小板增多症、真性红细胞增多症和骨髓纤维化:目前的处理和靶向治疗
近发现JAK2和/或MPL突变对真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)的诊断和治疗产生着重大影响.例如,JAK2突变目前认为是诊断PV的必要条件,WHO分类系统近修订的PV、ET和PMF诊断标准中包括JAK2和MPL(血小板生成素受体)突变作为克隆性标记.从治疗学的观点,JAK-STAT信号途径现已确定为研发骨髓增殖性新生物治疗新药的合理靶途径.本文简述ET、PV和PMF目前的处理,并复习抗JAK2小分子药物临床前和临床活性的有关资料.
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132例BCR-ABL融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤患者JAK2、CALR及MPL基因突变的临床分析
目的:探讨 BCR-ABL融合基因阴性的骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)患者JAK2、CALR及MPL基因突变情况及临床特征.方法:选取132例BCR-ABL融合基因阴性的MPN患者,其中真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)27例,原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)97例,原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis,PMF)8例.骨髓抽提DNA,荧光定量PCR检测JAK2、CALR及MPL基因突变情况并分析临床特征,JAK2基因包含 JAK2V617F、JAK2 N542＿E543del、E543＿D544del和 JAK2 K539L1/L2;CALR基因包含CALR L367fs*46和CALR K385fs*47,MPL基因包含MPL W515K/A/L/R1/R2/S和MPL S505N.结果:在132例BCR-ABL融合基因阴性的MPN患者中,仅有JAK2V617F、MPL W515K/A/L/R1/R2/S、CALR L367fs*46和 CALR K385fs*47突变,突变率分别为48.48%(64/132)、0.76%(1/132)、10.61%(14/132)和6.06%(8/132),并且这几种突变不同时出现.PV中仅有JAK2V617F突变,突变 率为74.07%(20/27),ET中JAK2V617F、CALR L367fs*46和CALR K385fs*47突变率分别为42.27%(41/97)、13.40%(13/97)、8.25%(8/97),PMF中 JAK2V617F、CALR L367fs*46和MPL W515K/A/L/R1/R2/S突变率分别为37.50%(3/8)、12.50%(1/8)和12.50%(1/8).在PV患者中,JAK2V617F突变阳性患者的白细胞(white blood cell,WBC)显著高于阴性患者(P＜0.05).在ET患者中,JAK2V617F突变阳性患者的血红蛋白(hemoglobin,Hb)显著高于阴性患者(P＜0.05),CALR突变阳性患者的血小板(platelet,PLT)显著高于阴性患者(P＜0.05).结论:基因检测为MPN的诊断及预后能提供更加方便、准确地依据,为相关的治疗提供更多的帮助.
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首诊为急性缺血性脑卒中患者的骨髓增殖性肿瘤相关基因突变研究
目的 分析首诊为急性缺血性脑卒中(AIS)患者的骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关JAK2、MPL和CALR基因突变发生情况.方法 收集378例AIS患者的外周血标本和临床资料.用等位基因特异性PCR和Sanger基因测序法检测患者基因组DNA中JAK2 V617F、JAK2 Exon12、MPL Exon10和CALR Exon9基因突变,并分析突变阳性患者的病史、临床资料、外周血细胞分类计数以及其他辅助检查结果.结果 共检测到5例(1.3％)患者JAK2 V617F突变阳性,1例(0.3％)CALR基因突变阳性,总阳性率为1.6％.其中2例JAK2 V617F突变阳性患者的外周血血红蛋白水平达到MPN的诊断标准.结论 约1.6％的首诊为AIS的患者可检测到JAK2 V617F或CALR突变,这部分患者可能处于MPN的早期阶段.
