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凝血酶信号传导过程中PI3-K与MLCK激酶的作用
本研究比较凝血酶受体活化过程中不同浓度的wortmannin对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物糖蛋白GPIb表达的影响,探讨脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在凝血酶信号传递机制中的作用.分别以凝血酶受体活化肽PAR1-AP(SFLLRN)与PAR4-AP(AYPGKF)诱导血小板活化.检测100 nmol/Lwortmannin(抑制PI3-K)与10 μmol/L wortmannin(抑制MLCK)作用过程中血小板聚集与血小板膜表面糖蛋白GPIb的改变.结果显示:wortmannin作用对两类凝血酶受体诱导血小板活化的过程均有不同程度的影响.100 nmol/L的wortmannin部分抑制PAR1-AP引起的血小板聚集,对PAR4-AP诱导的聚集过程没有影响;10 μmol/L wortmannin 明显抑制两类PAR肽引起的血小板活化,抑制程度达到60%-80%,仅出现少部分聚集.流式细胞仪检测显示,GPIbα的动态分布过程中100 nmol/L wortmannin能部份抑制GPIbα向胞内移动,PARI-AP刺激后5分钟内wortmannin起效明显(1、2、5分钟P<0.05),对PAR4-AP的反应则稍延迟,在2到10分钟有意义(2、5、10分钟P<0.05).10 μmol/L wortmannin对整个PAR活化过程中的GPIbα逆转没有任何影响,只对PAR1刺激过程中GPIbα的恢复起作用,延缓GPIbαa重返血小板膜表面的进程;而PAR4-AP作用后各时间段GPIbα的动态分布不受10 μmol/L wortmannin任何影响.结论:PI3-K与MLCK在凝血酶受体的活化过程中作用不同,PI3-K在GPIbα内转的短暂过程中起着重要作用;而MLCK磷酸化仅仅对PAR1受体介导的GPIbα回复起促进作用.
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心肺复苏大鼠海马神经元磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和磷酸化cAMP应答元件结合蛋白表达的变化及APP17肽的影响
目的 探讨心肺复苏后大鼠海马神经元磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)、磷酸化cAMP应答元件结合蛋白(phosphorylation of cAMP respouse element binding protein,p-CREB)表达的变化,以及APP17肽对它们的影响.方法 实验地点在宣武医院神经变性病学重点实验室.雄性Wistar大鼠21只,随机分3组,每组7只:假手术对照组(A组)、心肺复苏组(B组)、心肺复苏+APP17肽组(C组).自主呼吸循环恢复(return of spontaneous circulation,ROSC)标准为心电图出现正常的QRS波群,心室内压≥60 mmHg,持续10 min以上;夹闭气管制作大鼠心跳呼吸停止模型,行心肺复苏.当大鼠出现ROSC时,复苏组静脉注射生理盐水;APP17肽组静脉注射APP17肽10μg·(300 g)~(-1).对照组行假手术,静脉注射生理盐水.维持生命体征至2 h,断头取脑,行冰冻切片.应用免疫组化法观察3组大鼠复苏2 h后海马神经元PI3K,PKB,p-CREB表达情况;三组中各取1只大鼠于ROSC后2 h,分离海马;应用Western-blot方法测定海马神经元PKB,p-CREB蛋白含量.数据以均数±标准差((x)±s)表示,组间数据用方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 免疫组化法显示:B组PI3K阳性细胞表达为(2.75±1.80),略高于A组(2.53±1.53),差异没有统计学意义;而C组为(5.85±2.83),较B组增加,差异具有统计学意义(P<0.01).B组PKB和p-CREB阳性细胞分别较A组明显减少[(2.45±1.36)vs.(5.22±2.50),(P<0.05);(2.41±1.11)vs.(8.31±3.02),P<0.01];C组PKB和p-CREB阳性细胞分别较B组增高[(9.66±4.32)vs.(2.45±1.36),P<0.01;(14.18±3.96)vs.(2.41±1.11),P<0.01].Western-blot法测定PKB,p-CREB蛋白含量B组较A组明显减少;C组较B组明显增加.结论 心肺复苏大鼠ROSC 2 h海马神经元PKB,p-CREB表达降低,APP17肽能恢复神经元PI3K,PKB,p-CREB的表达,对心肺复苏后海马神经元损伤有保护作用.
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特异性p38 MAPK抑制剂SB203580对乳鼠小脑颗粒神经元的保护作用
目的研究p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)选择性抑制剂SB203580对乳鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.方法 SD乳鼠小脑颗粒神经元培养,琼脂糖凝胶电泳,SAPK/JNK分析试剂盒作激酶分析.结果 PI-3-K的特异性抑制剂LY294002诱导小脑颗粒神经元凋亡,但SB203580通过抑制细胞凋亡而促进小脑颗粒神经元的存活,且有浓度依赖性.LY294002诱导凋亡的颗粒神经元中c-Jun的表达量和磷酸化水平均升高,JNK被激活.但是,当小脑颗粒神经元生长在含SB203580的高钾培养基中,c-Jun的表达量、磷酸化水平和JNK的活性都明显的降低.结论 SB203580通过抑制JNK的活性,降低c-Jun的表达和磷酸化水平,对小脑颗粒神经元产生保护作用.
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PI3 K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究
磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现. 随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为 PI3K/AKT/GSK-3β信号通路.该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨.
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PI3 K/Akt信号通路在哮喘气道重塑中的研究进展
哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,长期的慢性炎症刺激可以导致气道结构改变,形成气道重塑.气道重塑可以导致气道痉挛的可逆性减弱或丧失,表现为对支气管扩张剂不敏感或持续性通气障碍,脱离变应原后气道仍呈高反应性,肺功能指标持续性降低,甚至对糖皮质激素不敏感,在气道重塑的基础上再继发感染可导致病情的迅速恶化,因此在治疗慢性炎症的同时需要预防气道重塑.许多临床试验研究提示阻断磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路可以通过多种机制抑制小鼠气道重塑.了解这些机制有利于进一步研究哮喘的临床治疗.
关键词： 哮喘 气道重塑 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B -
EGCG调节PI3K/AKT信号通路保护肾功能的机制研究
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用.方法 48只雄性SD大鼠随机分为三组,每组16只.Control组给予正常饮食,DN组采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg腹腔注射建立DN模型,EGCG组给予EGCG 50 mg/kg每天灌胃治疗,同DN组大鼠予以相同体积生理盐水.分别在6周和12周处死大鼠各半,收集血清和肾脏,采用ELISA、RT-qPCR和Western blot等方法检测相关因子.结果 与Control组比较,DN组血清中肾功能指标、炎症因子以及血脂水平升高(P＜0.05),EGCG治疗6周后,与DN组比较,EGCG组上述指标下降(P＜0.05);与Control组比较,DN组大鼠血清中抗氧化因子含量降低(P＜0.05),治疗6周后,与DN组比较,EGCG组上述指标升高(P＜ 0.05);与Control组比较,DN组大鼠肾脏组织中p-PI3K和p-AKT的蛋白表达下调(P＜0.05),治疗6周后,与DN组比较,EGCG组p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平上调(P＜0.05),治疗12周后上述指标进一步改善.结论 EGCG可通过减少体内炎症反应与脂质沉积,改善肾功能、增加抗氧化能力以及抗细胞凋亡等途径治疗DN大鼠肾脏损伤.
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海参磷脂型二十碳五烯酸降血糖作用机制的研究
目的 研究海参磷脂型二十碳五烯酸(EPA-PC)对糖尿病大鼠的降血糖作用机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病大鼠模型,灌胃不同剂量磷脂型二十碳五烯酸(25和75mg/kg bw,以二十碳五烯酸含量计)60d.实验结束后,检测糖尿病大鼠空腹血糖和空腹血清胰岛素水平,采用Western blotting法检测大鼠腓肠肌和附睾脂肪组织中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4蛋白表达.结果 海参EPA-PC能显著地降低糖尿病大鼠空腹血糖,增加血清胰岛素含量(P＜0.05,P＜0.01),促进骨骼肌和脂肪组织中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4蛋白的表达(P＜0.01,P＜0.05).结论 海参EPA-PC通过上调胰岛素介导的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路发挥降血糖作用.
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艾塞那肽对HepG2细胞糖异生的影响及机制探讨
目的 研究艾塞那肽(Exenatide)对HepG2细胞糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)的影响,并探讨其作用机制.方法 将对数生长期HepG2细胞随机分9组,胰岛素组、胰升糖素肽-1(GLP-1)组、艾塞那肽组、GLP-1+胰岛素组、艾塞那肽+胰岛素组、LY294002(一种磷脂酰肌醇-3-激酶阻断剂)组、GLP-1 +LY294002组、艾塞那肽+LY294002组和对照组,每组10个样本.采用免疫印迹法(Western bloting)检测各组G6Pase蛋白表达水平.结果 与对照组(0.191±0.056)比较,胰岛素组(0.070±0.015)、GLP-1组(0.068±0.013)、艾塞那肽组(0.067±0.008)、GLP-1+胰岛素组(0.031±0.003)、艾塞那肽+胰岛素组(0.030±0.002)G6Pase表达量均减少,差异均有统计学意义(t值分别为3.34、3.40、3.29、3.57和4.01,P＜0.05);与胰岛素组比较,GLP-1+胰岛素组、艾塞那肽+胰岛素组G6Pase表达量均减少,差异均有统计学意义(t值分别为2.45、2.52,P＜0.05).与GLP-1组比,GLP-1 +LY294002组G6Pase的蛋白表达量(0.120±0.032)增加,差异有统计学意义(t=2.12,P＜0.05);与艾塞那肽组比,艾塞那肽+LY294002组G6Pase的蛋白表达量(0.127±0.022)增加,差异有统计学意义(t=2.23,P＜0.05).结论 艾塞那肽能抑制HepG2细胞G6Pase的合成.艾塞那肽抑制HepG2细胞糖异生的作用可能部分通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶通路完成.
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TGF-β与细胞内信号通路的交互作用在肿瘤研究中的进展
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路在肿瘤发生发展过程中发挥双向调节作用.TGF-β能够抑制上皮细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,发挥抑制肿瘤的作用,因此上皮细胞失去对TGF-β抑制增殖的反应是肿瘤发生过程中的标志性事件.随着肿瘤进展,TGF-β能够促进肿瘤细胞侵袭、转移、耐药以及维持肿瘤干细胞潜能.目前,TGF-β的上述作用转变与其细胞内多条信号通路的交互作用有关,这种交互作用既能减弱或解除TGF-β的增殖抑制和促凋亡作用,又能增强其促进肿瘤进展和恶化的功能.本文主要针对TGF-β在肿瘤进展中与多条细胞内信号通路交互联系的分子机制,以及交互作用对肿瘤发生发展的影响进行综述.
关键词： 转化生长因子β 上皮间质转化 信号通路 表皮生长因子受体 磷脂酰肌醇-3-激酶 -
ERK2和PI3K蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义
[目的]测定细胞外信号调节激酶2(extracellular singnal-regulated kinase,ERK2)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌及癌前病变中的表达,探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的作用和相互关系.[方法]良恶性子宫内膜石蜡标本共66例,其中子宫内膜腺癌43例,非典型增生子宫内膜12例,正常增生期子宫内膜11例.采用免疫组织化学方法(S-P法)检测ERK2和PI3K蛋白的表达,采用SPSS11.5软件系统进行数据分析.[结果]PI3K与ERK2蛋白在增生期子宫内膜细胞中均以阴性表达为主,PI3K蛋白在子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌的阳性率分别为33.3％、81.4％,其中Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌阳性率分别为78.9％、90％;ERK2蛋白在子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌的阳性率分别为33.3％、65.1％,其中Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌阳性率分别为60.6％、80％,两者在增生期子官内膜、子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌中的表达差异显著(P＜0.05),而在子宫内膜癌不同手术病理分期间差异不显著(P＞0.05).[结论]ERK2和PI3K的表达与子宫内膜癌发生发展关系密切,且两者表达呈正相关(γ=0.3651).
关键词： 子宫内膜癌 细胞外信号调节激酶2 磷脂酰肌醇-3-激酶 免疫组织化学 -
PI3K/Akt信号通路在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠60只,体重250～ 280 g,采用随机数字表法分为5组(n=12):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、浅低温组(H组)、浅低温+溶剂对照组(DM组)和浅低温+PI3K抑制剂LY294002组(LY组).除S组外,其余各组采用改良Pulsinelli四血管阻断法建立全脑缺血再灌注损伤模型,H组采用鼻咽腔降温法降低海马温度至33℃时夹闭双侧颈总动脉15 min复灌,期间维持海马温度32.5～ 33.5℃1h,DM组和LY组于左侧脑室缓慢注射DMSO 5μl或LY294002 5μl,20 min后处理同H组.于再灌注8h时,每组随机取6只大鼠,采用免疫组化法测定海马CA1区磷酸化FoxO3a(pFoxO3a)、Bcl-2及Bax蛋白表达水平,计算Bcl/Bax比值;余6只大鼠,采用Western blot法检测海马磷酸化Akt(p-Akt)表达水平.结果 与S组比较,I/R组、H组和DM组p-Akt、pFoxO3a、Bax蛋白表达上调,H组和DM组Bcl-2蛋白表达下调、Bcl-2/Bax比值升高,I/R组和LY组Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);与I/R组比较,H组和DM组p-Akt、pFoxO3a、Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05);与H组和DM组比较,LY组p-Akt、pFoxO3a和Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05).结论 PI3K/Akt信号通路参与了头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤的过程.
关键词： 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 低温 人工 再灌注损伤 脑 -
细胞自噬的分子调控机制研究进展
细胞自噬是目前生物医学广泛研究的热点之一,它是一种由溶酶体介导的细胞内成分自我降解的过程,是真核生物中一种普遍的生命现象.在真核细胞中,自噬处在一个较低的水平上,起到持家的作用,例如降解胞内受损的细胞器及无功能蛋白,以此作为细胞内能量的来源,维持细胞内环境的稳态.自噬的上调出现在外部坏境的改变,如饥饿、激素失衡和氧化应激等,或者是内部需求的增加,如去除蛋白质聚集体等情况[1-2].越来越多的证据表明,自噬与心脏病、癌症和许多神经退行性疾病有关.据Hundeshagen等[3]报道,地高辛在治疗心衰的过程中可明显激活自噬;但在永久性大脑中动脉栓塞模型中,自噬过度激活可诱导细胞发生死亡,加重脑损伤[4].自噬在疾病中的作用比较复杂,因此,明确自噬的发生机制,有助于诱导自噬在疾病的发生发展过程中发挥保护作用.为此,本文对细胞自噬的过程及其分子调控机制进行阐述.
关键词： 细胞自噬 雷帕霉素靶蛋白 磷脂酰肌醇-3-激酶 Beclin1 -
PI3K信号通路抑制剂在人乳腺癌细胞侵袭的作用及可能机制
目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路抑制剂在人乳腺癌细胞侵袭中的作用及可能机制.方法 体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞,利用Transwell小室建立体外侵袭模型.阴性对照组为24孔板下室加入不含细胞的空白无血清培养基,对照组和实验组为下室内加入含10％胎牛血清的培养基.然后在实验组Transwell上室加入抑制浓度为10μM的PI3K信号通路抑制剂LY294002,观察MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化情况.同时利用Western blot方法检测ICAM-1的表达情况以及利用明胶酶谱分析基质金属铁蛋白酶-2及9(MMP-2/9)的活性改变.结果 LY294002处理后侵袭的MDA-MB-231细胞数量明显减少,同时ICAM-1的表达水平、MMP-2及MMP-9的活性受到显著抑制.结论 PI3K信号通路抑制剂抑制乳腺癌细胞侵袭可能与降低粘附分子ICAM-1表达及MMP-2和9活性相关.
关键词： 乳腺癌 侵袭 ICAM-1 基质金属铁蛋白酶 磷脂酰肌醇-3-激酶 -
神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨
背景:前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化.目的:进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径.方法:分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Western blot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达.结果与结论:神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率.神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5 mRNA的表达上调作用.Western blot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组.提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化.
关键词： 神经调节蛋白1 胚胎干细胞 心肌细胞分化 磷脂酰肌醇-3-激酶 干细胞 -
PI3K和MAPK信号通路通过FOXO1转录因子诱导A549细胞周期的阻滞和凋亡的研究
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK信号通路通过FOXO1转录因子对细胞周期及凋亡的调节及其分子机制.方法 体外培养NSCLC细胞系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及2种抑制剂联合处理细胞之后,采用Western blot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及其下游蛋白Bim、p27kip表达的变化；流式细胞术分析对细胞周期的影响；Annexin-FITC双染方法检测细胞凋亡.结果 Western blot结果显示:与对照组相比,FOXO1的蛋白水平未见明显变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim、p27kip的表达相应增加.与对照组相比,LY294002和UO126均可促进A549细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡.LY294002和UO126联合作用较2种药物单独作用时,A549细胞凋亡明显增加.结论 抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路可共同激活FOXO1转录因子的活性,协同促进细胞周期的阻滞,诱导细胞的凋亡.
关键词： FoxO1 磷脂酰肌醇-3-激酶 丝裂原活化蛋白激酶 肺癌 -
性激素结合球蛋白、胰岛素信号转导蛋白和葡萄糖转运蛋白在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达及相关性分析
目的 研究妊娠期糖尿病(GDM)孕妇胎盘组织中性激素结合球蛋白(SHBG)、胰岛素信号转导蛋白及葡萄糖转运蛋白表达,探讨其在GDM发病过程中的作用.方法 收集足月妊娠且非肥胖(BMI<25 kg/m2)GDM孕妇(GDM组)和同期糖代谢正常(正常组)孕妇胎盘组织各10例,应用Western blotting、实时PCR方法检测2组胎盘组织中SHBG和胰岛素信号转导蛋白(IRS-1、ISR-2、PI3K p85α)和葡萄糖转运蛋白(GLUT-1、GLUT-3、GLUT-4)的表达,各指标进行直线回归依存关系分析.结果 与正常组比较,GDM组胎盘组织中SHBG mRNA、蛋白表达降低(P<0.05);IRS-1蛋白、IRS-2 mRNA表达降低(P<0.05);PI3K p85α和GLUT-1蛋白及其mRNA表达无统计学差异(P>0.05);GLUT-3蛋白,GLUT-4 mRNA、蛋白表达降低(P<0.05).直线回归分析结果显示SHBG mRNA与IRS-2 mRNA、PI3K p85αmRNA、GLUT-4 mRNA的表达呈正相关(均P<0.05);IRS-2 mRNA和GLUT-4 mRNA的表达呈正相关(P<0.01);IRS-1 mRNA和PI3K p85αmRNA、GLUT-3 mRNA的表达呈负相关(P<0.05);IRS-2 mRNA和GLUT-1 mRNA的表达正相关(P<0.01).结论 GDM孕妇胎盘中胰岛素信号转导和葡萄糖转运蛋白存在异常,SHBG可能参与胰岛素信号通路的调节,GDM时胎盘滋养细胞合成和分泌SHBG减少,引起胰岛素信号转导通路相关蛋白表达降低,从而导致胰岛素抵抗及GDM的发生.
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PI-3 K/Akt信号转导通路在神经系统疾病中的研究进展
磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B (PI-3K/Akt)信号转导通路是细胞内重要的信号转导通路，在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能，其中尤为重要的是它对细胞凋亡、存活的调节作用。细胞凋亡参与许多神经系统疾病的发生与发展过程，近年来的研究发现该通路的激活具有一定的神经保护作用，因此针对PI-3K/Akt/GSK3β信号通路内源性神经保护机制的研究，有望为神经系统疾病的治疗提供新的理论依据。
关键词： 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B 信号转导通路 凋亡 神经系统疾病 -
不同浓度红景天苷对Ⅱ型糖尿病大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇-3-激酶及葡萄糖转运蛋白-4表达的影响
目的:观察不同浓度红景天苷对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖、血脂及骨骼肌磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和葡萄糖转运蛋白-4 (GLUT4)表达含量的影响,探讨红景天苷降糖改善胰岛素抵抗的可能机制.方法:采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养方法建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,将建模成功后大鼠随机分为糖尿病模型组(DM),二甲双胍治疗组,红景天苷高、中、低剂量组.按规定药物剂量灌胃12周后测血糖、血脂及胰岛素水平,处死大鼠,取后肢骨骼肌,免疫印迹检测组织中PI3K和GLUT4的表达水平.结果:与对照组比较,DM组大鼠骨骼肌细胞中PI3K和GLUT4表达明显降低;与DM组比较,红景天苷各治疗组骨骼肌细胞中PI3K和GLUT4的表达明显增强.结论:红景天苷可能通过增强大鼠骨骼肌组织细胞中PI3K和GLUT4的表达以改善Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗.
关键词： Ⅱ型糖尿病 胰岛素抵抗 磷脂酰肌醇-3-激酶 葡萄糖转运蛋白-4 红景天苷 -
PI3K/Akt/NF-κB通路调控ABCB1/P-gp介导的人结肠癌细胞多药耐药的研究
背景与目的：肿瘤的多药耐药(multidrug resistance，MDR)基因的表达是目前化疗失败的主要原因，磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinases，PI3K)信号通路参与肿瘤多药耐药的发生，但PI3K信号通路与多药耐药的机制尚不明确。本研究旨在探讨PI3K/Akt信号通路及其下游靶点对ATP结合蛋白亚家族1抗体(ATP-binding cassette sub-family B member 1，ABCB1)基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein， P-gp)介导的人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP细胞多药耐药性的调控作用。方法：将PI3K特异性抑制剂LY294002(20μmol/L)处理人结肠癌HCT-116/L-OHP细胞2 h后，用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8，CCK-8)检测细胞对奥沙利铂的敏感性；蛋白质印迹法(Western blot)检测相关耐药蛋白P-gp、肺耐药蛋白(lung resistance-related protein，LRP)、多药耐药相关蛋白-2(multidrug resistance-related-2， MRP-2)以及PI3K/Akt信号通路下游蛋白Akt、p-Akt、IκB、p-IκB的表达变化；CHIP-PCR法检测核转录因子κB(NF-κB)对ABCB1基因启动子的影响。结果：阻断PI3K/Akt信号通路激活后，奥沙利铂对HCT-116/L-OHP细胞的半数抑制浓度(IC50)由(157.48±16.73)μg/mL降至(53.68±3.18)μg/mL，逆转指数为2.93(P<0.01)。HCT-116/L-OHP细胞的p-Akt、p-IκB和P-gp的表达水平明显下降(P<0.01)，Akt、IκB、LRP和MRP-2表达变化不明显。NF-κB能够与ABCB1基因启动子区域结合。结论：阻断PI3K/AKT信号通路可增强人结肠癌HCT-116/L-OHP耐药细胞的药物敏感性，抑制p-Akt和p-IκB的磷酸化表达水平，逆转P-gp介导的肠癌多药耐药。
关键词： 结肠癌 多药耐药 P-糖蛋白 磷脂酰肌醇-3-激酶 核转录因子κB -
NVP-BEZ235对低氧大鼠肺血管管周肥大细胞的影响
目的 评价PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235对低压、低氧诱导的大鼠肺血管管周肥大细胞的分布以及脱颗粒状态的影响.方法 低氧组SD雄性大鼠于低压低氧培养箱(50.5 kPa)内培养,治疗组隔天给予NVP-BEZ235(35 mg/kg)干预,对照组匹配饲养条件并在当地气压常氧环境饲养,21 d后全部动物以5％戊巴比妥钠麻醉后取材.肺组织固定后进行石蜡包埋并行苏木素伊红染色和甲苯胺蓝染色.结果 低氧组大鼠肺血管管周肥大细胞数量较对照组增多,聚集明显.低氧组不同管径的肺血管(<50 μm,50～100 μm,>100 μm)管周的肥大细胞聚集情况及脱颗粒细胞比例较对照组增多,具有统计学差异(P<0.05),而NVP-BEZ235干预组较低氧组肺血管管周肥大细胞数量减少(P<0.05),且能降低管径50～100 μm的肺血管周围低氧组脱颗粒的肥大细胞比例(P=0.000 3).结论 NVP-BEZ235可以抑制低压低氧诱导的大鼠肺血管管周肥大细胞的聚集及中等管径血管管周脱颗粒细胞比例.
关键词： 磷脂酰肌醇-3-激酶 肥大细胞 低氧 肺血管
