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自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在 口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 探讨自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义.方法 选取2015年4月~2016年3月我院收治的口腔鳞状细胞癌30例和癌旁组织30例,通过免疫组织化学法检测自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中的表达及意义.结果?Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌中的表达率相比较癌旁组织中表达率而言,明显更高,组间对比差异显著(P<0.05);Beclin1、LC3及mTOR在高分化鳞状细胞癌组织中的表达率与中低分化鳞癌中的表达率相比,组间对比差异不显著(P>0.05);Beclin1、LC3及mTOR在有淋巴结转移的癌组织中表达率相比较无淋巴结转移的癌组织中的表达率而言,明显更高,组间对比差异显著(P<0.05).结论?Beclin1、mTOR及LC3在在口腔鳞状细胞癌中的表达相比较癌旁组织而言,明显较高,而在有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌组织中的表达相比较无转移组织而言,明显更低.
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筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经Beclin1和LC3的影响
目的 探讨筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经组织自噬相关蛋白Beclin1和LC3的影响.方法 STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照(NC)组、糖尿病模型(DM)组和筋脉通治疗(JMT)组.灌胃治疗16周后,Western blot法检测Beclin1、LC3蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测Beclin1-mRNA和LC3-mRNA的转录.结果 与NC组比较,DM组大鼠坐骨神经Beclin1、LC3蛋白表达和Beclin1-mRNA、LC3-mRNA的转录水平均明显降低(P＜0.01);JMT组大鼠坐骨神经Beclin1、LC3蛋白和Beclin1-mRNA的转录均较DM组升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 筋脉通可纠正糖尿病大鼠坐骨神经组织的自噬异常.
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电针"委中"在大鼠腰多裂肌损伤修复过程中对自噬相关蛋白Beclin1、p62的影响
目的 观察电针"委中"对大鼠腰多裂肌损伤后肌肉再生修复过程中自噬相关蛋白Beclin1、p62表达的动态变化.方法 将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针委中组,每组24只.每组再随机分为1天、3天、7天三个时间点.模型组和电针委中组麻醉后于双侧L4-5多裂肌注射0.5%布比卡因溶液制造多裂肌损伤模型,空白组不做处理,造模后电针委中组进行每日一次的电针委中治疗,模型组不进行针刺干预,3组分别于治疗后的1天、3天、7天同步取材.通过免疫组化法和Western Blotting法观察多裂肌中Beclin1、p62表达含量的动态变化.结果 1天、3天、7天模型组的Beclin1表达含量均高于空白组(P<0.01),3天、7天电针委中组的Beclin1表达含量高于模型组(P<0.05);3天、7天模型组p62表达含量低于空白组(P<0.05);1天、3天、7天电针委中组p62表达低于模型组(P<0.05).结论 电针委中穴可促进自噬蛋白Beclin1的表达上调,提高自噬水平,促进p62蛋白的分解,有利于骨骼肌损伤后的修复.
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乐胃饮对胃癌前病变大鼠模型自噬基因Beclin1的影响
目的:观察乐胃饮对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜中自噬体及其相关基因Beclin1的影响.方法:将60只雄性Wistar大鼠分为正常组,模型组,维酶素组,乐胃饮低、中、高剂量组,采用2％水杨酸钠灌胃、饥饱失常以及自由饮用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)溶液等综合因素诱发PLGC模型.给药28d后,利用透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞自噬体,通过RT-PCR检测自噬基因Beclin1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,乐胃饮各剂量组胃黏膜Beclin1 mRNA表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01),电镜可观察到自噬体.结论:乐胃饮可能通过提高Beclin1的表达,增强PLGC胃黏膜自噬而降低癌变的可能性.
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再灌注期不同时间电针对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Bcl-2、Beclin1表达的影响
目的:比较再灌注期不同时间电针心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1及其抑制凋亡因子Bcl-2的表达量,探讨电针保护缺血再灌注损伤心肌的自噬相关机制.方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、即时电针干预组(RA组)、0.5 h电针干预组(RB组)、1h电针干预组(RC组)和2h电针干预组(RD组),每组12只.除假手术组外,其余各组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支30 min后松开进行再灌注制备MIRI模型.假手术组不结扎,仅开胸用线穿过冠状动脉左前降支;模型组仅造模,不予其他处理;不同时间电针干预组选取双侧“内关”穴,分别于再灌注即时、0.5 h、1h、2h开始电针,各20 min.采用EvansBlue-TTC双染法观察各组大鼠心肌梗死面积,ELISA法检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,Westemblot法检测心肌组织Bcl-2、Beclin1蛋白表达.结果:与模型组相比,RB、RC、RD组心肌梗死面积百分比均减少(均P＜ 0.05),其中RB组较RC、RD组更为显著(均P＜ 0.05);与假手术组比较,模型组再灌注期的CK-MB含量与Beclin1表达均有显著升高,Bcl-2表达明显降低(均P＜ 0.01);与模型组相比,RA、RB、RC、RD组再灌注期的CK-MB含量与Beclin1表达均下降(P＜ 0.05,P＜ 0.01),Bcl-2的表达均有升高(均P＜ 0.01);与RA组比较,RB、RC组的CK-MB出现下降(均P＜ 0.05),Bcl-2上升(均P＜ 0.01),而与RD组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05),其中RB组较RC组Bcl-2蛋白表达显著(P＜ 0.05);各电针组Beclin1比较,仅RB组较RA组出现下降(P＜ 0.05),其余各组间差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论:再灌注期不同时间电针均可减少MIRI大鼠心肌梗死面积,其中以再灌注0.5 h进行电针干预效果为显著;该心肌保护效应可能是通过提高Bcl-2表达、降低Beclin1表达以抑制再灌注期的过度自噬而实现的.
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银杏内酯B对阿尔茨海默病大鼠海马Synapsin-1、Beclin1和LC3表达的影响
目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)大鼠海马Synapsin-1、Beclin1和LC3的影响.方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、银杏内酯B低剂量组、中剂量组和高剂量组,采用Morris水迷宫检测学习记忆,透射电镜观察自噬,免疫组织化学分析海马Synapsin-1、Beclin1和LC3阳性神经元光密度值,荧光定量PCR检测海马Synapsin-1、Beclin1和LC3-Ⅱ的mRNA水平.结果:中、高剂量银杏内酯B可缩短AD大鼠逃避潜伏期,增加穿越平台次数,减少自噬体,提高海马组织Synapsin-1,降低Beclin1 mRNA和蛋白表达,同时下调LC3-ⅡmRNA水平.结论:银杏内酯B可改善AD大鼠学习记忆能力,可能与海马突触相关蛋白Synapsin-1上调、自噬相关基因Beclin1和LC3水平下降有关.
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PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义
目的 考察PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症的表达和临床意义.方法 采用免疫组化法测定40例子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜和20例正常对照的PTEN与Beclin1表达水平.并考察不同病理资料与两者表达水平关联.结果 正常对照、在位内膜、异位内膜三者的PTEN与Beclin1表达水平均逐渐下降(P＜0.05).其中PTEN在正常对照、在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05).但Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).Beclin1在在位内膜和异位内膜的增生期、分泌期表达均无显著差异(P＞0.05),却在正常对照中具有显著差异(P＜0.05),同时Ⅲ-Ⅳ期表达率低于Ⅰ-Ⅱ期患者(P＜0.05).PTEN与Beclin1在子宫内膜异位症组织中表达水平正相关.结论 PTEN与Beclin1的低表达与子宫内膜异位症的发生和发展相关,但其具体作用机制值得进一步深入研究.
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Beclin1和Atg5在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨自噬相关基因Beclin1和Atg5在不同卵巢组织中的表达情况及其临床意义.方法 免疫组化和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤以及上皮性卵巢癌组织的Beclin1和Atg5的mRNA和蛋白的表达情况,分析3组间的差异.结果 正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤中Beclin1和Atg5的mRNA和蛋白表达明显高于上皮性卵巢癌组织(P＜0.05).结论 Beclin1和Atg5在上皮性卵巢癌组织中的表达下降,上皮性卵巢癌发生、发展可能与自噬相关基因Beclin1和Atg5白噬活性的抑制有关.
关键词： Beclin1 Atg5 卵巢肿瘤 免疫组化 反转录-聚合酶链反应 -
高浓度葡萄糖通过下调自噬增加体外培养雪旺细胞的凋亡
目的 观察高浓度葡萄糖对雪旺细胞自噬活性的影响以及自噬对高糖条件下雪旺细胞增殖活性及凋亡的影响.方法 体外培养RSC96细胞,Western blot和免疫荧光法检测beclinl和caspase-3蛋白表达,MTT检测细胞增殖活性.结果 高浓度葡萄糖组RSC96细胞beclin1的表达减少(P＜0.05),细胞增殖活性降低(P ＜0.05,P＜0.01).自噬被抑制后加剧了高糖对细胞增殖活性的削弱作用(P＜0.01),同时增加了高糖促进caspase-3的活化作用(P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖通过下调自噬活性增加细胞凋亡.
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Beclin1与自噬及肿瘤的关系
细胞自噬控制着细胞内蛋白质和细胞器的降解,对于细胞生长及维持稳态发挥着重要作用.自噬的调节是一个复杂过程,这其中涉及到许多分子的调控.Beclin1是酵母自噬基因Atg6 / Vps30的同系物,也是哺乳动物参与自噬的特异性基因,它通过对自噬的调节,在肿瘤的发生、发展中起着重要作用.Beclin1对自噬和肿瘤的调节不是孤立的,相反,它能与多种分子相互作用,形成不同复合体而发挥作用.越来越多的研究不断揭示出Beclin1新的作用机制,本文将对Beclin1的研究进展做一综述.
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自噬在顺铂诱导食管癌TE1细胞死亡中的作用
目的 观察顺铂联合自噬特异性增强剂beclin1和特异性抑制剂3-MA对食管癌细胞增殖抑制的影响,探讨自噬在顺铂诱导的食管癌TE1细胞死亡中的作用.方法 MTT法检测空白对照组、顺铂组、顺铂分别联合beclin1和3-MA组对食管癌TE1细胞增殖抑制作用的影响;Western blot法检测顺铂对食管癌TEl各组细胞中bcelin1蛋白表达的影响;MDC荧光染色检测各组细胞内自噬囊泡数量的变化;流式细胞仪检测各组细胞中细胞周期和凋亡的改变.结果 MTT检测各组细胞的增殖抑制率分别为:1.06％,31.59％,18.93％,51.44％.DDP组能有效抑制TE1细胞的增殖.与单独使用DDP组相比,beclin1+ DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显降低(P＜0.01);3-MA+ DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显增高(P＜0.01);Western blot检测各组细胞中beclin1蛋白表达量分别为0.319±0.029,1.175±0.06,1.537±0.076,0.91±0.047(P ＜0.01);荧光显微镜观察beclin1+ DDP组中MDC标记的自噬荧光强度高,细胞质内出现了明显的绿色荧光;FCM检测细胞周期分布结果显示,各组细胞中G0/G1期细胞比例分别为(44.82±0.437)％,(56.25±0.624)％,(27.553±0.085)％,(66.48±0.638)％;各组细胞中S期细胞比例分别为(34.85±0.235)％,(24.417±0.607)％,(51.8±0.721)％,(19.167±0.666)％.各组细胞的凋亡率分别为(1.237±0.015)％,(4.813±0.025)％,(1.32±0.01)％,(6.117±0.035)％(P＜0.01).结论 顺铂可以诱导食管癌TE1细胞自噬和凋亡;反应性的自噬活性增强可能与顺铂耐药的形成有关,自噬水平的下调可能增加了食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,提示监测及调控肿瘤细胞的自噬水平可能为逆转食管癌顺铂耐药提供新的思路.
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响
目的 探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬的影响,为进一步阐明Ct致病机制提供实验依据. 方法 PCR扩增Ct pORF5质粒蛋白基因,克隆入PLenO-DCE慢病毒质粒,构建慢病毒重组表达载体.慢病毒重组表达载体经双酶切及测序鉴定后与辅助质粒共转染293T细胞,制备慢病毒.收集慢病毒,再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(PLenO-DCE/pORF5-HeLa).实验同时建立对照细胞株(PLenO-DCE-HeLa).血清饥饿处理两组细胞24 h,Real time PCR和Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Becin1的蛋白和mRNA表达水平,计算LC3-Ⅱ/LC3Ⅰ比率;采用间接免疫荧光检测自噬荧光斑点. 结果 PLenO-DCE/pORF5-HeLa和PLenO-DCE-HeLa细胞饥饿处理后均出现LC3红色荧光斑点,斑点数分别为(97.6±12.1)个/细胞和(34.0±2.6)个/细胞,差异有统计学意义(t=45.36;P＜0.05);饥饿处理后PLenO-DCE-HeLa和PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1的mRNA表达水平均显著高于未处理组,其中PLenO-DCE/pORFS-HeLa细胞中LC3、Beclin1 mRNA的表达水平较未处理组增加3.10倍(t=95.25;P＜0.01)和0.85倍(t=16.56;P＜0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞分别增加1.95倍(t=79.12;P＜0.01)和1.57倍(t=23.95;P＜0.05);PLenO-DCE/pORF5-HeLa经饥饿处理24 h后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beelin1蛋白较未处理组分别增加52.17％和76.00％(t值分别是15.13,57.24;P均＜0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞组分别增加1.05倍(t=35.21;P＜0.05)和4.34倍(t=112.23;P＜0.01). 结论 pORF5质粒蛋白可诱导HeLa细胞自噬,可能在Ct致病过程中发挥重要作用.
关键词： 沙眼衣原体 pORF5质粒蛋白 细胞自噬 微管相关蛋白1轻链3 Beclin1 -
自噬相关基因Beclin1在骨髓增生异常综合征中的表达及其意义
本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞中自噬相关基因Beclin1的表达水平,并探讨其临床意义.收集2009年1月至2012年8月我院收治的40例MDS、14例非恶性贫血及25例急性髓系白血病(AML)骨髓液单个核细胞.采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测这些标本Beclin1 mRNA表达水平情况,Western-blot技术检测该基因蛋白表达水平,并对Beclin1 mRNA表达水平与临床预后进行相关性分析.结果显示:低危MDS及非恶性病贫血组患者Beclin1 mRNA及蛋白表达水平高于急性髓系白血病组(P＜0.01),且MDS患者中Beclin1表达水平与WHO分型预后积分系统(WPSS)呈负相关(r=-0.495).结论:MDS患者Beclin1基因表达水平较AML患者增高且与WPSS评分呈负相关,Beclin1的表达与MDS患者的预后有关.
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自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达检测及其与肿瘤增殖侵袭活性的关系
目的 探讨自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达检测及其与肿瘤增殖侵袭活性的关系.方法 回顾性收集2014年1月至2016年12月间接受手术治疗的原发性宫颈癌患者80例,采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织、癌旁组织中Beclin1蛋白表达情况,根据宫颈癌组织中Beclin1蛋白表达进一步将其分为Beclin1蛋白阳性组、Bec-lin1蛋白阴性组.采用荧光定量PCR法测定宫颈癌组织中增殖、侵袭基因表达量.结果 宫颈癌组织中Beclin1蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05).Beclin1蛋白阴性组宫颈癌组织中增殖基因GBP1 mRNA的表达量低于Bec-lin1蛋白阳性组,STAT3、RPL6、YAP1、EZH2 mRNA的表达量高于Beclin1蛋白阳性组;侵袭基因CXCR7、Sox2、Survivin、Rab11、RbAp48 mRNA的表达量高于Beclin1蛋白阳性组,p27 mRNA表达量低于Beclin1蛋白阳性组(P<0.05).结论 宫颈癌组织中自噬标记蛋白Beclin1阳性表达减少,可直接导致肿瘤细胞增殖侵袭活性增高.
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Beclin1、Bcl-2在子宫内膜癌中的研究及临床意义
目的：研究Beclin1、Bcl-2在子宫内膜癌中的表达及临床意义，探讨在子宫内膜癌中Beclin1与 Bcl-2的关系。方法应用免疫组织化学检测105例子宫内膜石蜡包埋组织中 Beclin1、Bcl-2的表达， Western blot检测子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中Beclin1、Bcl-2蛋白表达情况。结果免疫组织化学结果表明，在子宫内膜癌癌变过程中Beclin1阳性率逐渐降低和Bcl-2阳性率逐渐升高，在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中，Beclin1阳性表达率分别为80.0%、35.0%、32.3%，Bcl-2阳性表达率分别为25.0%、65.0%、83.1%；在子宫内膜癌中二者阳性率与组织学分级相关（P均＜0.05），与患者年龄、临床分期子宫肌壁浸润深度无关（P均＞0.05）。在65例子宫内膜癌组织中Beclin1和Bcl-2表达呈负相关性（rs＝-0.302，P＝0.014）。Western blot结果表明，在子宫内膜正常组织中Beclin1蛋白表达量（1.047±0.016）高于在子宫内膜癌蛋白表达量（0.132±0.029），在子宫内膜正常组织中Bcl-2蛋白表达量（0.287±0.052）低于子宫内膜癌组织蛋白表达量（1.247±0.163）。结论 Beclin1、Bcl-2均参与调控子宫内膜癌的发生、发展，联合检测Beclin1、Bcl-2对预测子宫内膜癌的发生及子宫内膜癌的早期诊断有重要意义。
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自噬基因ARHI与Beclin1在宫颈癌中的表达及意义
目的：研究宫颈癌组织中自噬基因ARHI与Beclin1蛋白的表达。方法采用免疫组化方法对非宫颈病变12例、宫颈上皮内瘤变（CINⅡ～Ⅲ）15例、宫颈癌50例（无淋巴结转移患者34例，淋巴结转移患者16例）进行试验，检测各组织中ARHI、Beclin1蛋白的表达。结果（1）ARHI与Beclin1在正常宫颈组、宫颈上皮内瘤变组及宫颈癌组中的表达依次下降，分别比较两者的三组间差异，均有统计学意义（P＜0.05）；（2）ARHI的表达与宫颈癌临床分期、分化程度有关，差异有显著性（P＜0.05）；（3）ARHI与Beclin1在宫颈癌组织中的表达具有正相关性（r＝0.387，P＝0.006）。结论随着宫颈病变的加重，ARHI及Beclin1的表达均逐渐降低，且在宫颈癌组织中二者的表达具有正相关性，提示二者可能共同参与了宫颈癌的发生，其表达的下降可能与宫颈病变的进展有关。
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S100A11和自噬基因Beclin1在胃癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨S100A11和自噬基因Beclin1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学超敏两步法(S-P法)分别检测50例胃癌组织、30例胃癌前病变(中、重度非典型增生)和20例慢性非萎缩性胃炎组织中S100A11和Beclin1蛋白的表达.使用病理图像分析仪分析S100A11和Beclin1蛋白表达在3种组织中的阳性信号灰度值.结果:S100A11蛋白在胃癌组织及胃癌前病变组织中表达的灰度值分别为132.9209±5.6490和133.6706±5.8348,两者均明显低于慢性非萎缩性胃炎中的灰度值138.048±3.5902,差异均有统计学意义(P＜0.01),胃癌与胃癌前病变组织中S100A11蛋白表达比较差异无统计学意义；S100A11蛋白的表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05),与肿瘤的部位、大小无关.Beclin1蛋白在胃癌组织中表达的灰度值为140.9705±6.2019,明显高于胃癌前病变(136.711±5.5759)和慢性非萎缩性胃炎(130.8024±2.5363),三者两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；Beclin1的表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05),与肿瘤的部位、大小、浸润深度及TNM分期无关.S100A11和Beclin1在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.156,P＜0.05).结论:S100A11在胃癌组织中高表达,Beclin1在胃癌组织中低表达,S100A11和Beclin1与胃癌的部分生物学行为关系密切,胃癌组织中S100A11和Beclin1的表达呈负相关,提示S100A11和Beclin1在胃组织中的表达失衡,可能是胃癌发生的分子生物学机制之一.
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蓝莓对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达的影响
目的:观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的影响.方法:60只健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、蓝莓原浆高剂量组、蓝莓原浆中剂量组、蓝莓原浆低剂量组及复方鳖甲软肝片组.除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射无菌猪血清复制大鼠肝纤维化模型.造模同时各蓝莓组给予不同浓度蓝莓原浆(0.25mL/100g、0.5mL/100g、1.0mL/100g)灌胃,复方鳖甲软肝片组用复方鳖甲软肝片灌胃(0.054g/100g),1次/d.12wk处死大鼠,测定血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量,行肝组织病理学检查;Westem blot检测LC3-Ⅱ、Beclin1、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的蛋白水平;实时定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)检测LC3-Ⅱ、Beclinl的mRNA水平.结果:各组大鼠血清ALT、AST水平差异无统计学意义(均P＞0.05).与正常对照组比较,模型组肝纤维化程度明显(P＞0.05),LC3-Ⅱ、Beclin1的mRNA及蛋白表达、Col Ⅰ的蛋白表达明显增高(均P＜0.01).与模型组比较,蓝莓原浆高、中剂量组肝纤维化程度明显减轻(P＜0.05),胶原表达减少;LC3-Ⅱ、Beclin1的mRNA、蛋白表达及Col Ⅰ的蛋白表达明显降低(均P＜0.01).结论:猪血清所致的大鼠免疫性肝纤维化中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1升高,蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预作用可能与下调LC3和Beclin1的基因及蛋白表达,进而抑制自噬有关.
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Beclin1和NF-κB p65在肝癌中的表达及其临床意义
目的:分析自噬基因Beclin1和核因子NF-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)在原发性肝细胞性肝癌(primary human hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义.方法:收集顺德第一人民医院2003-01/2007-12手术切除经病理学证实的HCC50例,肝炎后肝硬化手术切除或活检标本30例,肝炎患者肝脏穿刺组织30例和正常肝组织10例.应用免疫组化S-P法检测肝脏组织中Beclin1和NF-κB p65蛋白的表达.结果:原发性肝细胞性肝癌、肝硬化、肝炎和正常肝组织的BeClin1蛋白阳性表达率分别是78.00%(39/501、26.67%(8/30)、53.33%(16/30)、10.00%(1/10),四者之间的差异有统计学意义(χ2=28.31,P<0.05),且Beclinl在原发性肝细胞性肝癌组织表达明显高于在肝硬化组织,肝炎组织,正常肝组织中的表达(χ2=20.39,5.31,14.41,P<0.05);在肝炎组织表达明显高于在肝硬化组织.正常肝组织中的表达(χ2=4.44,χ2=4.12,P<0.05).原发性肝细胞性肝癌、肝硬化、肝炎和正常肝组织的NF-κB p65蛋白阳性表达率分别是74.00%(37/50)、36.67%(11/30)、30.00%(9/30)、20.00%(2/10),四者之间的差异有统计学意义(χ2=22.00,P<0.05),且NF-κB p65在原发性肝细胞性肝癌组织表达明显高于在肝硬化组织,肝炎组织,正常肝组织中的表达(χ2=10.89,χ2=14.85,χ2=8.44.P<0.05).结论:Beelin1和NF-κB p65在HCC中的表达关系密切,呈正相关;Beclin1和NF-κB p65异常表达与HCC的发展密切相关,在HCC的发展过程中起重要的作用.
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主动脉夹层小鼠血管壁中微管相关蛋白1轻链3、Beclin1及骨桥蛋白的表达及意义
目的 探讨主动脉夹层小鼠血管壁中微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、Beclin1及骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的表达及意义.方法 (1)急性主动脉夹层模型的建立:3周龄FVB小鼠随机分为β-氨基丙腈(β-aminopropionitrilemonofumarate,BAPN)联合人血管紧张素-Ⅱ(Angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)组,单BAPN干预组和对照组,分别予以BAPN口服4周后联合Ang-Ⅱ皮下微泵48 h,单用BAPN 4周口服和正常喂养进行干预.(2) LC3、Beclin1及OPN的检测:采用RT-PCR、免疫组织化学染色法对小鼠主动脉血管壁中自噬相关蛋白LC3、Beclin1及合成型血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)标志蛋白OPN等进行定量和半定量测定.结果 (1)BAPN联合Ang-Ⅱ干预组小鼠夹层发生比例为86.7％,单BAPN组夹层发生比例低于联合组,对照组夹层发生比例为0;(2)急性主动脉夹层小鼠主动脉壁中自噬相关蛋白LC3B、Beclin1及合成型VSMC标志蛋白OPN基因和蛋白含量明显高于正常对照组(P＜0.05),且LC3B、Beclin1及OPN蛋白表达主要定位于血管中层VSMC.结论 BAPN联合Ang-Ⅱ能够成功诱导FVB小鼠发生急性主动脉夹层,且该模型中发生了VSMC表型转化和自噬现象,两者可能具有相关性.
