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自噬在顺铂诱导食管癌TE1细胞死亡中的作用
目的 观察顺铂联合自噬特异性增强剂beclin1和特异性抑制剂3-MA对食管癌细胞增殖抑制的影响,探讨自噬在顺铂诱导的食管癌TE1细胞死亡中的作用.方法 MTT法检测空白对照组、顺铂组、顺铂分别联合beclin1和3-MA组对食管癌TE1细胞增殖抑制作用的影响;Western blot法检测顺铂对食管癌TEl各组细胞中bcelin1蛋白表达的影响;MDC荧光染色检测各组细胞内自噬囊泡数量的变化;流式细胞仪检测各组细胞中细胞周期和凋亡的改变.结果 MTT检测各组细胞的增殖抑制率分别为:1.06％,31.59％,18.93％,51.44％.DDP组能有效抑制TE1细胞的增殖.与单独使用DDP组相比,beclin1+ DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显降低(P＜0.01);3-MA+ DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显增高(P＜0.01);Western blot检测各组细胞中beclin1蛋白表达量分别为0.319±0.029,1.175±0.06,1.537±0.076,0.91±0.047(P ＜0.01);荧光显微镜观察beclin1+ DDP组中MDC标记的自噬荧光强度高,细胞质内出现了明显的绿色荧光;FCM检测细胞周期分布结果显示,各组细胞中G0/G1期细胞比例分别为(44.82±0.437)％,(56.25±0.624)％,(27.553±0.085)％,(66.48±0.638)％;各组细胞中S期细胞比例分别为(34.85±0.235)％,(24.417±0.607)％,(51.8±0.721)％,(19.167±0.666)％.各组细胞的凋亡率分别为(1.237±0.015)％,(4.813±0.025)％,(1.32±0.01)％,(6.117±0.035)％(P＜0.01).结论 顺铂可以诱导食管癌TE1细胞自噬和凋亡;反应性的自噬活性增强可能与顺铂耐药的形成有关,自噬水平的下调可能增加了食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,提示监测及调控肿瘤细胞的自噬水平可能为逆转食管癌顺铂耐药提供新的思路.
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沙利度胺对食管癌TE1细胞DNA合成抑制作用和辐射敏感性的影响
目的 探讨不同浓度沙利度胺联合X线照射对食管癌TE1细胞放射敏感性的影响.方法 采用细胞划痕实验检测沙利度胺对细胞浸润转移能力的影响,H3-TdR掺入法研究沙利度胺单用及联合X射线对TE1细胞DNA合成抑制作用,用克隆形成法研究对TE1细胞辐射敏感性的影响.结果 沙利度胺对食管癌TE1细胞的浸润转移能力、DNA合成、克隆形成均有明显的抑制作用,并随药物浓度的升高而增强.TE1细胞的D0、Dq、SF2值随着沙利度胺浓度的增加而减小:沙利度胺100 μg/ml时放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.4±0.2和1.5±O.1;150μg/ml时的放射增敏比分别为1.4±0.2和1.8±0.2.结论 沙利度胺能够抑制TE1细胞的浸润转移、DNA合成能力,显著提高TE1细胞的辐射敏感性.
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沙利度胺联合RNAi沉默VEGF基因对食管癌细胞增殖的影响
目的 研究沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi沉默VEGF-C基因的方法对食管癌细胞体外增殖的影响.方法 以VEGF为靶点,利用siRNA设计原则,设计VEGF-siRNA,构建慢病毒载体pCDH - VEGF - shRNA,并包装好病毒稳定转染到食管癌细胞株TE1中,RT - PCR及Western Blot检测VEGF的表达情况,采用四甲摹偶氮唑蓝(MTT)法检测沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi沉默VEGF基因对TE1细胞的增殖抑制作用.结果慢病毒载体pCDH - VEGF - shRNA构建成功并包装出高滴度的慢病毒颗粒,转染TE1细胞后,RNAi组的VEGF的表达明显下降,MTT结果显示沙利度胺及RNAi都可抑制TE1细胞的增殖,但沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi抑制TE1增殖的效果更明显.结论沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi可明显抑制食管癌细胞株TE1中VEGF的表达,在抑制TE1细胞的增殖中起重要作用.
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ciRS-7在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞TE1生物学特性的影响
目的:探讨环状RNA (circRNA) ciRS-7在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及对ESCC细胞株增殖、迁移和侵袭的影响.方法:选取河北医科大学第四医院2016年5月至2017年4月收治的60例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织,通过qRT-PCR检测ciRS-7的表达水平.过表达或者敲低ciRS-7后,采用CCK-8法检测ESCC细胞株TE1的增殖情况,同时采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化.后通过动物实验在体内进行验证.结果:ciRS-7在ESCC组织中高表达,且表达水平与病理分级和淋巴结转移有关(均P＜0.05).过表达ciRS-7后,ESCC细胞株TE1的增殖、迁移和侵袭能力显著升高(均P＜0.05);沉默ciRS-7后,TE1细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P＜0.05).动物实验结果显示,转染ciRS-7表达质粒组裸鼠的肿瘤体积和质量均明显高于空载体组(均P＜0.05).免疫组化检测结果表明,转染ciRS-7表达质粒组裸鼠的肿瘤组织中增殖相关抗原(ki67、PCNA)、转移相关抗原(MMP2、MMP9)表达明显高于空载体组(均P＜0.05).结论:ciRS-7在食管癌组织中表达上调,并且会增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示ciRS-7可以作为诊断和治疗食管鳞状细胞癌的潜在作用靶点.
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食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响
目的 探讨Beclin1在食管鳞状细胞癌(esophagus squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及意义,分析其过表达对人ESCC细胞株TE1体外生长活性的影响.方法 分别采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏膜组织中Beclin1蛋白及mRNA的表达;利用基因转染、RT-PCR及Western blot法观察外源性Beclin1过表达对ESCC细胞株TE1的影响;MTT法分析外源性Beclin1过表达对TE1细胞增殖的影响;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡;在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬.结果 免疫组化染色结果示,在ESCC中Beclin1蛋白的阳性率为29.82%(17/57),明显低于癌旁正常食管黏膜组织100%(57/57)(P＜0.00),Beclin1蛋白的表达与ESCC患者的分化程度(χ2=6.158,P=0.046)、淋巴结转移(χ2=5.664,P=0.017)有关;与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关;RT-PCR检测结果示,在ESCC中Beclin1 mRNA的表达量(0.168±0.038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织(0.280±0.052)(P＜0.00).pCMV6-Entry-Beclin1脂质体法转染TE1细胞后,在mRNA和蛋白水平Beclin1的表达均高于TE1PE组及TE1组.在TE1细胞中过表达Beclin1后可抑制肿瘤细胞的体外生长,抑制率为57.21%.FCM检测pCMV6-Entry-Beclin1转染后G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制;凋亡率为5.91%,高于TE1PE组和TE1组(P＜0.05).在荧光显微镜下见TE1Beclin1组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加.结论 自噬相关基因Beclin1 mRNA及蛋白在ESCC中表达下调,自噬活性的降低可能与ESCC的发生、发展及侵袭转移有关;Beclin1过表达可抑制人ESCC细胞株TE1的增殖,并诱导其自噬和凋亡,利用自噬基因Beclin1对ESCC基因治疗也许具有可行性.
