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mTOR信号通路在病毒感染中的作用
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)也称FKBP12-雷帕霉素相关蛋白(FK506 binding protein 12-rapamycin associated protein,FRAP),具有保守的丝/苏氨酸蛋白激酶活性.生长因子、胰岛素及激素等可激活磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),后者产生的3位磷酸化的磷脂酰肌醇作为第二信使参与细胞的信号转导,作用于下游的蛋白激酶B(PKB,也称Akt),并通过系列信号分子的转导而作用于mTOR,调节与细胞生长、增殖、分化、转移和凋亡有关的信号通路.
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AKT/mTOR在胃癌组织中的表达及意义
目的 研究蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)在胃癌组织中的表达水平及与临床病理因素的关系.方法 应用免疫组化染色测定磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)在胃癌(32例)、癌旁组织(20例)中的表达情况.结果 p-AKT在胃癌、癌旁组织中的阳性表达分别为71.9％、25.0％.p-mTOR在胃癌、癌旁组织中的阳性表达分别为62.5％、20.0％.p-AKT、p-mTOR的表达与胃癌组织分化程度、TNM分期存在相关性(P＜0.05),p-AKT、p-mTOR的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤直径大小无相关性(P＞0.05).结论 胃癌组织中p-AKT与p-mTOR蛋白的表达与病理分化程度呈负相关.AKT/mTOR信号通路在大部分胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生发展的重要机制之一.
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癌基因GOLPH3研究进展
高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3),又称Gpp34、GMx33、MIDAs,是近年发现一类参与小泡运输的癌基因,由人染色体5p13基因编码.参与生命中一系列的生理过程,GOLPH3还可充当癌基因促进细胞转化和肿瘤的生长,增强活动的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶调节细胞生长,增殖和存活,与肿瘤的发生有密切关系.本文从GOLPH3的生物学功能及其与肿瘤发生的相关性做一综述.
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自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在 口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 探讨自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义.方法 选取2015年4月~2016年3月我院收治的口腔鳞状细胞癌30例和癌旁组织30例,通过免疫组织化学法检测自噬相关基因Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中的表达及意义.结果?Beclin1、LC3及mTOR在口腔鳞状细胞癌中的表达率相比较癌旁组织中表达率而言,明显更高,组间对比差异显著(P<0.05);Beclin1、LC3及mTOR在高分化鳞状细胞癌组织中的表达率与中低分化鳞癌中的表达率相比,组间对比差异不显著(P>0.05);Beclin1、LC3及mTOR在有淋巴结转移的癌组织中表达率相比较无淋巴结转移的癌组织中的表达率而言,明显更高,组间对比差异显著(P<0.05).结论?Beclin1、mTOR及LC3在在口腔鳞状细胞癌中的表达相比较癌旁组织而言,明显较高,而在有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌组织中的表达相比较无转移组织而言,明显更低.
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mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与结直肠腺癌关系的研究
磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路正逐渐成为科研工作者关注的焦点,它调控肿瘤细胞生长增殖、分化代谢、自吞噬等过程,促进肿瘤的形成.国内外的许多研究中已经证实mTOR与胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、结肠癌等消化系统恶性肿瘤的相关性.4EBP1(eukaryotic translation initi-ation factor 4E binding protein 1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6蛋白激酶1(protein S6 kinase 1,S6K1)是mTOR重要的下游分子,他们调节蛋白质的翻译,在结直肠腺癌的形成过程中起到重要作用,并与预后相关,可作为较为理想的分子靶点和预后指标.
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mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与乳腺癌关系的研究
mTOR信号通路已被确定为几种癌症的致癌因素.癌症生物学的一个主要领域是基因组生物标记的发展它可以测量pi3k-akt-mtor途径的活动水平.PI3K-Akt-mTOR信号通路包含许多信号蛋白,包括Ras,PTEN,PIP,PI3K,AKTand mTOR.作为部分信号通路功能的串联功能是是由生长因子结合在细胞膜上的受体酪氨酸激酶引起的.重要的是PI3K-Akt-mTOR信号通路在癌症细胞的生长,增殖,以及生存有重要的作用,在众多癌症中被过度表达包括乳腺癌,卵巢癌和胰腺癌等.因此开发PI3K抑制剂不仅可以消灭肿瘤的生长,也可以协同其它的标记物治疗和化疗治疗相关的癌症.由于这条信号通路重要,已经有了几种相关基因组的方法来评估细胞系中PI3K-Akt-mTOR信号通路的活性以及原发性患者肿瘤的活动情况.
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mTOR信号通路在马桑内酯点燃大鼠难治性癫痫模型中的作用
目的 探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在马桑内酯点燃Sprague-Dawley大鼠难治性癫痫模型中的作用.方法 选取60只8～10周SD大鼠为研究对象,随机分为实验组(n=50)和对照组(n=10).实验组给予马桑内酯1.75 mg/kg肌注,1次/84h,给药间期达到5次以上5级发作即纳入点燃组;对照组同时给予等体积生理盐水.取大鼠脑组织,采用免疫组织化学检测两组P-S6的蛋白表达水平,计数阳性细胞数,并行统计学分析.结果 实验组共点燃大鼠40只,点燃率为80％.对照组CA1区和CA2区仅有少量星形胶质细胞表达P-S6,神经元少有表达;点燃组CA1和CA3区有大量P-S6高表达细胞,且主要集中在星形胶质细胞,神经元阳性细胞数也增加,点燃组CA1和CA3区阳性细胞数均高于对照组阳性细胞数,差异有统计学意义(P＜0.001).在海马DG区,对照组仅有少量颗粒细胞表达P-S6,而点燃组颗粒细胞及神经元阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义(t=12.816,P＜0.001).结论 mTOR信号通路活化可能与马桑内酯点燃SD大鼠难治性癫痫模型密切相关.
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通过p53/AMPK信号通路研究归术益坤方对多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的影响
目的:研究归术益坤方治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的作用机制.方法:通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,以丙酸睾丸酮(TP)、自噬诱导剂C2-神经酰胺作用颗粒细胞24h,建立大鼠PCOS颗粒细胞的自噬模型;实验分为空白组,模型组,归术益坤方低、中、高剂量组及自噬阻断剂3MA组.通过Western blot法检测各组颗粒细胞中LC3Ⅱ、p53、p-mTOR、p-AMPK的表达.结果:与空白组比较,模型组LC3Ⅱ的表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,归术益坤方高、中、低剂量组表达降低(P＜0.01).与空白组比较,模型组p53、p-mTOR显著降低(p＜0.01),p-AMPK升高(P＜0.01);与模型组比较,高剂量归术益坤方可以上调p53和p-mTOR的表达(P＜0.01,P＜0.05);高、中剂量归术益坤方可下调p-AMPK的表达(P＜0.01).结论:归术益坤方可以通过调控p53/AMPK信号通路来抑制自噬,这可能是归术益坤方治疗PCOS的新机制.
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电针对衰老大鼠骨骼肌mTOR及磷酸化mTOR(ser2448)蛋白表达的影响
目的:探讨电针对衰老大鼠骨骼肌mTOR和磷酸化mTOR(ser2448)蛋白表达的影响,为针灸治疗衰老性骨骼肌萎缩提供实验依据.方法:将27只SD大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组9只.注射D-半乳糖建立衰老模型.电针组电针“足三里”“阳陵泉”,连续波,频率20-30Hz,强度1mA,每次15min,每周5次,连续7周.取腓肠肌进行肌肉重量比较,采用Western blot方法检测mTOR和mTOR(ser2448)蛋白的表达.结果:与对照组比较,模型组腓肠肌重量明显减轻(P＜0.01),而电针组与模型组比较,腓肠肌重量增加,但差异无统计学意义.mTOR和磷酸化mTOR(ser2448)的表达模型组较对照组明显下调(P＜0.01),而电针组较模型组表达上调(P＜0.01).结论:电针可促进mTOR和磷酸化mTOR(ser2448)的表达,对骨骼肌衰老发挥治疗作用.
关键词： 电针 骨骼肌衰老 mTOR 磷酸化mTOR(ser2448) -
益气养阴方对CD34+CD38-KG1a白血病干细胞活性的影响
目的:探讨益气养阴方对CD34+CD38-KG1a白血病干细胞活性的影响.方法:从KG1a细胞株中分选出CD34+CD38-KG1a干细胞,采用CCK-8法检测益气养阴方及联合注射用盐酸柔红霉素(DNR)对KG1a干细胞的抑制率;流式细胞术检测益气养阴方干预KG1a干细胞后各组细胞周期及凋亡比例;RT-PCR法检测益气养阴方干预KG1a于细胞后各组PTEN、mTORmRNA的表达量.结果:经过免疫磁珠分选后CD34+CD38-KG1a细胞比例为(97.20±2.53)％.益气养阴方+DNR组48、72h抑制率明显增高(P＜0.05),益气养阴方组抑制率未见增高.益气养阴方组和益气养阴方+DNR组GdG1期比例明显降低,GJM期比例明显增高(P＜0.05).益气养阴方组凋亡细胞比例增高,但死亡细胞未见增高,益气养阴方+DNR组的凋亡和死亡细胞均明显增高(P＜0.05).益气养阴方组、益气养阴方+DNR组PTEN mRNA表达增高(P＜0.05),但益气养阴方+DNR组mTOR mRNA表达较其他3组均明显下降(P＜0.05).结论:益气养阴方对KG1a干细胞不具有直接抑制作用,但可促进DNR对KG1a干细胞的抑制作用,其机制可能是益气养阴方通过活化PTEN基因负调控PI3K/Akt信号通路,从而影响KG1a干细胞的细胞周期和凋亡.
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毓麟珠对早发性卵巢功能不全模型小鼠卵巢形态、卵泡发育及mTOR信号通路的影响
目的 观察毓麟珠对早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢功能、卵泡发育及mTOR通路的影响,探讨其作用机制.方法 以小鼠透明带3 (Zp3)为抗原,皮下多点注射BALB/c雌性小鼠建立免疫性POI模型.实验分为空白组、模型组、阳性药组和毓麟珠低、中、高剂量,各给药组给予相应药物.HE染色观察小鼠卵巢形态及卵泡,ELISA检测小鼠血清激素水平,Western blot检测卵巢组织AKT、mTOR的蛋白表达,PCR检测mTOR下游相关Rheb、S6kl、4E-BP1的mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠卵巢明显缩小,卵泡数量明显减少,血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)明显升高,抗苗勒氏管激素(AMH)、雌二醇(E2)明显下降,Rheb、S6k1、4E-BP1 mRNA和AKT、mTOR蛋白相对表达量明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01);与模型组比较,各给药组小鼠卵巢增大,卵泡数量增加,血清FSH、LH均下降,AMH、E2均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);小鼠卵巢mTOR蛋白表达及其下游相关Rheb、S6k1、4E-BP1 mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 毓麟珠治疗POI机制可能与调节mTOR信号通路相关因子基因和蛋白表达水平有关,通过促进卵泡发育,改善卵巢功能.
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补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响
探讨补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响.BALB/C裸鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组和补中益气汤高剂量+顺铂组(高联组)、补中益气汤中剂量+顺铂组(中联组)、补中益气汤低剂量+顺铂组(低联组),培养A549/DDP细胞(浓度为5×106个/mL),接种于各组,观察各组成瘤情况.给予相应治疗,14 d后取瘤组织固定、切片,免疫组织化学方法、Real-time PCR方法检测各组裸鼠移植瘤中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR蛋白和mRNA的表达水平.结果显示补中益气汤联合顺铂可降低移植瘤体积,中联组和高联组的抑瘤率与顺铂组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与荷瘤对照组比较,中联组和高联组Bad,NF-κB,Survivin,mTOR的蛋白和mRNA的表达明显减少(P＜0.05),caspase-9的蛋白和mRNA在中联组和高联组的表达逐渐增多,与荷瘤对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Bad,NF-κB,caspase-9的mRNA,中联组和高联组与顺铂组、低联组、荷瘤对照组比较有统计学意义(P＜0.05),低联组、顺铂组、荷瘤对照组两两比较,无统计学差异,各因子蛋白和mRNA的表达中联组和高联组比较,无统计学意义.结果表明补中益气汤与顺铂联合作用可抑制A549/DDP移植瘤的生长,补中益气汤抑制A549/DDP移植瘤的作用可能是通过调节Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR,促进细胞凋亡实现的.
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mTOR/Akt/FoxO3信号通路在人参皂苷Rg1抗PC-12细胞OGD损伤的作用
目的:研究人参皂苷Rg1对PC-12细胞缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用,并初步探讨与mTOR/Akt调控FoxO3核浆穿梭相关的可能的分子机制.方法:建立OGD损伤PC-12细胞模型,MTT 法检测OGD对PC-12细胞存活率.人参皂苷Rg110,20,40 μmol·L-1预处理PC-12细胞24h,加OGD损伤,MTT 检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测mTOR,p-Aktser473,p-Aktthr308,Akt,p-FoxO3,细胞核、细胞质FoxO3和总FoxO3蛋白表达.结果:OGD作用4～24h显著抑制PC-12细胞增殖,呈时间依赖性.Rg1(20,40 μmol·L-1)预处理24h可显著增加细胞存活率,减少LDH释放,增加SOD活力和降低MDA含量.Rg1可抑制由OGD引起的rmTOR,p-Aktser473表达降低.OGD 6 h可减少FoxO3磷酸化,并促进细胞质FoxO3进入细胞核;预处理Rg1增加FoxO3磷酸化,促进FoxO3进入细胞质.提示Rg1可经由调控mTOR/Akt/FoxO3信号通路抑制PC-12细胞损伤.结论:人参皂苷Rg1可抑制OGD引起PC-12细胞损伤,作用机制可能与激活mTOR/Akt信号通路调控FoxO3核质穿梭密切相关.
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mTOR、S6K1在双胍类降糖药物改善2型糖尿病中的作用研究
目的 探讨mTOR、S6K1在双胍类降糖药物改善2型糖尿病中的作用和意义.方法 选取本院2015年3月至2017年3月收治的100例糖尿病患者,随机分为观察一组和观察二组,观察一组患者给予常规胰岛素治疗,观察二组患者在此基础上接受二甲双胍治疗3个月.选取同期健康体检者50例为对照组.治疗前后分别检测受试者血清中mTOR、S6K1信号通路的水平变化.结果 与对照组相比,观察一组和观察二组患者体内mTOR和S6K1水平显著升高,IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著上升,差异具有统计学意义(P＜0.05).观察一组和观察二组患者与治疗前相比,治疗后mTOR、S6K1、IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与观察一组患者治疗后相比,观察二组患者二甲双胍治疗后,血清mTOR、S6K1、IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).患者血液mTOR和S6K1与其使用二甲双胍治疗的疗效存在显著的负相关关系,Person相关系数为负值,P＜0.01.结论 双胍类降糖药物可以明显改善糖尿病患者的临床症状;mTOR、S6K1信号通路在糖尿病患者的疾病发展和临床治疗中发挥重要的作用.
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PTEN/Akt/mTOR通路增加K562/ADM细胞化疗敏感性
目的 探讨K562/ADM细胞系中PTEN/Akt/mTOR信号通路对不同化疗药物敏感性的影响.方法 K562/ADM细胞分为未转染组、转染野生型PTEN组(Ad-PTEN-GFP)、转染空载体组(Ad-GFP),并与不同浓度雷帕霉素或三氧化二砷( As2 03)联合作用.通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR检测PTEN、mTOR、BCL-2及BAXmRNA水平,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平.结果 野生型PTEN对K562/ADM细胞大增殖抑制率为32.3％,与未转染组及Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组mTOR mRNA和p-Akt蛋白明显减低；雷帕霉素与As2 03联合应用后细胞增殖明显受抑,凋亡率(28.61％±1.46％)明显高于单药作用组(P＜0.05),BCL-2 mRNA表达降低,BAX mRNA表达增加,以联合干预组为明显.结论 PTEN/Akt/mTOR信号传导通路能够增加K562/ADM细胞对雷帕霉素及As2 03的敏感性.
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mTOR负调控miR-27a并通过靶向降低GP73抑制人肝癌细胞侵袭
目的 探索mTOR促进肝癌细胞侵袭能力机理.方法 使用q-PCR方法检测miR-27a和GP73表达;将miR-27a的mimic转染GP73高表达的M97H细胞中,并将miR-27a inhibitor转入GP73低表达HepG2细胞中,q-PCR和Western blot观察GP73的表达;使用荧光素酶报告基因系统验证miR-27a在GP73的3UTR区的结合位点;将miR-27a mimic转染GP73高表达的M97H细胞和GP73低表达的HepG2细胞,Transwell实验观察细胞的侵袭.结果 mTOR下调miR-27a,并上调GP73的表达;miR-27a下调GP73的表达,抑制miR-27a则上调GP73;GP73是miR-27a的靶基因;miR-27a显著抑制M97H细胞的侵袭,但对HepG2细胞无抑制效果.结论mTOR负调控的miR-27a靶向GP73抑制肝癌细胞的侵袭.
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亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡
目的 研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用.方法 分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞.用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率；免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用.结果 亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平；AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果；干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗；AMPK和mTOR有直接相互作用.结论 亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡.
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肌肉衰减综合征小鼠腓肠肌Sirt1和mTOR活性的变化
目的 观察肌肉衰减综合征小鼠腓肠肌Sirt1和mTOR活性的变化.方法 将雄性C57BL/6J老年(26月龄)和中年(6月龄)小鼠各16只分别随机分为2组,每组8只(n=8):即中年对照(MC)组、中年后肢悬提(MS)组、老年对照(AC)组及老年后肢悬提(AS)组.老年小鼠后肢悬提( HLS) 2周以建立肌肉衰减综合征小鼠模型,分别用不同的试剂盒和蛋白免疫印迹测定Sirt1和mTOR信号传导通路相关因子及蛋白的表达.结果 1) NAD+含量和NAD+/NADH比率:AC组明显低于MC组(P＜0.01,P＜0.05),HLS组显著少于对照组( P＜0.01,P＜0.05). 2) Sirt1表达:AC组明显高于MC组(P＜0.05),HLS组显著高于对照组(P＜0.05). 3)Sirt1下游底物表达( PGC-1α、FOXO1和P53)、与衰老相关的NAMPT蛋白表达和Sirt1活性:AC组明显低于MC组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),HLS组显著少于对照组(均P＜0.05). 4)磷酸化的mTOR、p70S6K和4E-BP1:AC组明显高于MC组( P＜0.05),HLS组显著少于对照组(P＜0.05).结论 Sirt1和mTOR参与了肌肉衰减综合征小鼠的发病.
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PI3K-AKT-mTOR信号通路在细胞分化中的作用
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及其下游分子AKT、TSC1/2和mTOR所组成的信号通路参与增殖、凋亡等多种细胞功能的调节.近年来发现,这一信号通路与细胞的分化密切相关.细胞分化的异常可以引起多种疾病,肿瘤就是一种分化异常的疾病,而PI3K-AKT-mTOR信号传递通路调节失常在肿瘤中为常见,因此本文旨在综述PI3K-AKT-mTOR信号通路在细胞分化和肿瘤中的作用.
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基于mTOR信号通路的靶向抗肝癌研究进展
mTOR信号通路高表达于肝癌并参与其多种恶性生物学行为,是治疗的潜在靶点,但单一使用mTOR抑制剂能抑制免疫功能,并反馈性激活mTOR上游分子Akt诱导抵抗.mTOR抑制剂联合其他药物能通过协同效应克服上述不足,是抗肝癌治疗的新策略.
