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细胞自噬在砷暴露所致肺损伤中的作用
目的 探讨细胞自噬在砷暴露所致大鼠肺损伤中的作用.方法 24只无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组,砷暴露低(10μg/L)、中(100 μg/L)、高(1 000μg/L)剂量组,砷暴露组通过自由饮用含NaAsO2的水进行染毒,对照组自由饮用不含NaAsO2的水,染毒28 d后统一处死.ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的含量.Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白NBR1、p62、LC3Ⅱ表达量.结果 砷暴露组大鼠BALF中促炎因子TNF-a、IL6、IL8表达量显著高于对照组(P＜0.05),且100μg/L组的IL-6高;砷暴露1 000 μg/L组的抑炎因子IL-10含量显著低于对照组(P＜0.05);与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中p62、NBR1的表达量增加(P＜0.05),且存在剂量-反应关系;与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中LC3Ⅱ蛋白表达量显著下降(P＜0.05),且存在剂量-反应关系.结论 砷暴露所致大鼠肺损伤中,细胞自噬被抑制时会加重大鼠肺部的炎症损伤,当NaAsO2暴露浓度达到100 μg/L时,会对大鼠肺组织造成明显的损伤.
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电针"委中"在大鼠腰多裂肌损伤修复过程中对自噬相关蛋白Beclin1、p62的影响
目的 观察电针"委中"对大鼠腰多裂肌损伤后肌肉再生修复过程中自噬相关蛋白Beclin1、p62表达的动态变化.方法 将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针委中组,每组24只.每组再随机分为1天、3天、7天三个时间点.模型组和电针委中组麻醉后于双侧L4-5多裂肌注射0.5%布比卡因溶液制造多裂肌损伤模型,空白组不做处理,造模后电针委中组进行每日一次的电针委中治疗,模型组不进行针刺干预,3组分别于治疗后的1天、3天、7天同步取材.通过免疫组化法和Western Blotting法观察多裂肌中Beclin1、p62表达含量的动态变化.结果 1天、3天、7天模型组的Beclin1表达含量均高于空白组(P<0.01),3天、7天电针委中组的Beclin1表达含量高于模型组(P<0.05);3天、7天模型组p62表达含量低于空白组(P<0.05);1天、3天、7天电针委中组p62表达低于模型组(P<0.05).结论 电针委中穴可促进自噬蛋白Beclin1的表达上调,提高自噬水平,促进p62蛋白的分解,有利于骨骼肌损伤后的修复.
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津力达颗粒联合通心络胶囊对2型糖尿病大鼠胰腺组织自噬的影响
目的:观察中药复方津力达颗粒联合通心络胶囊对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠胰岛β细胞超微结构损伤情况、胰岛β细胞功能及胰腺组织自噬相关蛋白Beclin-1,Atg7,p62表达的影响.方法:采用高脂喂养结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 30 mg· kg-1ip建立T2DM大鼠模型,15只雄性SD大鼠设为正常组正常饲料喂养,75只雄性SD大鼠高脂饲料喂养6周后STZ腹腔注射,根据血糖随机分为:模型组,津力达组(JLD),通心络胶囊组(TXL),联合用药组(JT),吡格列酮组(PLZ),JLD组于模型成功后给予津力达颗粒(3.0 g·kg-1·d-1),TXL组于模型成功后给予通心络胶囊(0.4 g·kg-1·d-1),JT组于模型成功后给予津力达颗粒(3.0 g·kg-1·d-1)加通心络胶囊(0.4 g·kg-1·d-1),PLZ组于模型成功后给予吡格列酮(10 mg·kg-1·d-1),连续ig6周后,检测空腹血糖及血清胰岛素以计算胰岛β细胞功能指数,电镜观察各组大鼠胰岛β细胞超微结构;Western blot方法检测胰腺组织Beclin-1,Atg7,p62蛋白的表达变化.结果:与正常组相比较,模型组大鼠胰岛β细胞损伤减轻,胰岛β细胞功能指数明显降低,胰腺组织Beclin-1,Atg7蛋白表达明显减少,p62蛋白表达明显增加(P＜0.01);与模型组比较,各给药组大鼠胰岛功能指数升高,Beclin-1,Atg7表达升高,p62蛋白表达减少(P＜0.01),与JLD,TXL组比较,JT组Beclin-1,Atg7表达升高,p62蛋白表达减少(P＜0.05).结论:津力达颗粒联合通心络胶囊可以提高胰岛β细胞功能指数,其作用可能与促进胰岛自噬有关,而维持胰腺组织自噬水平可能是延缓糖尿病进展的有效措施.
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埋线预处理对缺血再灌注损伤ZDF大鼠心肌ATG9A及p62蛋白表达的影响
目的:以自噬相关蛋白9A(ATG9A)及p62为关键点,探讨埋线预处理防治心肌缺血再灌注损伤的作用机制.方法:ZDF大鼠随机分为:正常组、模型组、缺血预处理组和埋线预处理组.以推管法制备缺血再灌注损伤模型.电镜观察心肌组织超微结构;测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性变化;Western blot法检测ATG9A及p62蛋白表达的水平.结果:电镜下,缺血预处理组及埋线预处理组自噬泡数量较模型组明显增多,心肌超微结构损伤较轻;与模型组比较,缺血预处理组和埋线预处理组血清LDH、CK-MB值均明显下降(P＜0.01),心肌ATG9A蛋白表达显著上升(P＜0.01),p62蛋白水平下降(P＜0.01).结论:埋线预处理可能通过上调心肌中ATG9A、下调p62的表达水平激活自噬,从而有效对抗缺血再灌注损伤.
关键词： 埋线预处理 缺血再灌注损伤 自噬相关基因/蛋白9A p62 自噬 -
Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义
目的 探讨上皮性卵巢癌中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达及临床意义.方法 选取2011年6月-2013年3月我院手术切除并经病理学检查确诊的上皮性卵巢癌标本50例为实验组,同期手术切除正常卵巢组织20例作为对照,通过免疫组织化学SP法,检测标本中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的阳性表达率分别为46.00％(23/50)和42.00％ (21/50),低于正常卵巢组织的95.00％(19/20)和85.00％(17/20);而P62蛋白的阳性表达率为72.00％(36/50),高于正常卵巢组织的10.00％(2/20),差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的表达与FIGO分期、病理分级具有相关性(P＜0.05),而P62蛋白的表达与FIGO分期具有相关性(P＜0.05).Beclin 1蛋白和LC3-Ⅱ蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关(P＜0.01),P62蛋白的表达与Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白均呈负相关(P＜0.01).结论 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ和P62蛋白的异常表达,可导致自噬体形成减少和自噬功能减弱;可能与卵巢癌的发生、发展和预后不良有关.
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酒精诱导嗜铬细胞瘤细胞自噬及其与P62作用的关系
目的 采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系.方法 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响;间接免疫荧光法检测细胞自噬标志性蛋白LC3和P62的变化;高内涵活细胞成像系统检测细胞LC3荧光强度;透射电镜检测细胞自噬的超微结构;Western blotting方法检测P62蛋白量的表达.结果 50～800mmol/L浓度酒精对PC12细胞的增殖有显著的抑制作用,呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞自噬标志性蛋白LC3在细胞核周围密度增高,并与P62形成点状聚集共定位,其中在200mmol/L浓度酒精作用2h,PC12细胞LC3自噬荧光强度高;透射电镜也观察到酒精作用的PC12细胞质中自噬体和自噬溶酶体.Western blotting结果显示,不同浓度酒精处理PC12细胞2h,P62蛋白表达量显著增加(P＜0.01);用200mmol/L浓度酒精处理PC12细胞,P62蛋白表达在2h达到高值.结论 酒精诱导PC12细胞的自噬作用,P62蛋白参与自噬调控过程.
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胎儿性RNA结合蛋白p62在肝细胞癌中表达的意义
目的探讨表达p62的肝癌组织的病理形态学特点,以及p62与癌细胞增殖和转移等生物学特性的关系.方法用免疫组织化学方法检测40例原发性肝细胞肝癌p62和Ki-67的表达.结果 p62阳性率是67.5%(27/40),其中p62强阳性表达的12例中9例为肝癌病理学分级为Ⅲ级的病例.p62表达强阳性的癌组织往往间质有大量的纤维组织或有大片坏死癌细胞,其增殖活性也高,Ki-67标记指数为28.3%±15.1%,与p62表达阴性组(7.5%±9.8%)比较,差异具有显著性意义(t=3.087,P=0.005);5例有肺转移或腹腔淋巴结转移的病例,其中3例p62表达强阳性.结论 p62的表达与癌细胞的增殖和转移有一定的关系,和间质纤维组织较多的微环境有关.
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Klotho与自噬在脓毒症急性肾损伤小鼠中的表达趋势
目的 研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系.方法 选用清洁级健康雄性Balb/c小鼠,用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture,CLP)建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型,分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠(n=12只);假手术组(Sham) (n=6)1 d处死,正常组(Normal)(n=6)同时处死.留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和PAS染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Western blot和免疫组化检测肾组织Klotho蛋白、LC3蛋白和P62蛋白的表达以及分布.SPSS 23.0软件采用独立样本资料的t检验进行统计学分析.结果 CLP术后Scr和BUN明显升高,1d肘达高峰,分别为(165.64 ±20.56) μmol/L和(45.51 ±4.05) mmol/L;HE和PAS染色显示肾小管刷状缘上皮细胞脱落,基底膜暴露,间质炎症细胞浸润,电镜显示肾脏可见自噬小体和吞噬泡.与Sham组相比,Klotho蛋白浓度从3h开始逐渐变淡,至1d时达低值(t=51.851,P＜0.01),2d时有所恢复,然后逐渐转浓;LC3-Ⅱ呈相反的变化趋势,从3h开始逐渐增浓,至1d时达峰值(t=-22.676,P＜0.01),2d时有所下降,然后逐渐变淡,而P62(=6.43,P=0.002)作为自噬的相关蛋白与LC3-Ⅱ反应相反,表明自噬的激活作用,在1d这个时间点显著.免疫组化显示Klotho蛋白和LC3-Ⅱ蛋白主要分布于肾小管胞浆内.CLP术后1d,Klohto蛋白明显减弱(t=-8.371,P＜0.01),LC3-Ⅱ蛋白明显增浓(t=4.995,P=0.001).结论 脓毒症急性肾损伤是Klotho减少,自噬增强的一个过程,Klotho和自噬的表达具有一定的时间依赖性.
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p62与NF-κB介导的凋亡通路在大鼠急性胸段脊柱脊髓损伤中的机制
目的 观察p62、核因子κB(NF-κB)以及caspase-3在大鼠脊髓损伤中的表达,并探讨相关机制.方法 60只大鼠随机分为假手术组和实验组,实验组大鼠采用Allen法制作脊髓损伤模型,分别于24 h、48 h和72 h进行神经功能评分,以及通过Western blot法检测不同时间段p62和NF-κB蛋白表达,Elisa法检测不同时间段caspase-3蛋白水平.结果 脊髓损伤后大鼠BBB评分显著降低,并随造模时间的延长而上升(P<0.05),Western blot法显示脊髓损伤后p62和NF-κB蛋白水平明显提高,而随时间的延长p62和NF-κB蛋白表达下降(P<0.05),Elisa法显示脊髓损伤后caspase-3活性明显提高,而随时间的延长caspase-3蛋白活性得到显著下降(P<0.05).结论 脊髓损伤可激活p62与NF-κB介导的凋亡通路,并对损伤脊髓的细胞凋亡起着重要的调控作用.
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p62蛋白的自身免疫反应及其在结肠癌中的表达研究
目的 探讨肿瘤相关抗原p62的自身免疫反应及其在结肠癌中的表达,评估其在结肠癌早期诊断、恶性程度及预后评估中的应用价值.方法 收集64例结肠癌患者、42例结肠腺瘤患者和30例正常对照者的结肠组织及血清标本,采用免疫组化方法检测受检者p62蛋白的表达情况；用ELISA和western blotting方法对血清中p62抗体进行检测;血清抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)采用间接免疫荧光方法检测.结果 三组患者血清中p62抗体阳性率差异有统计学意义(x2=0.291,P=0.003),结肠癌患者血清p62抗体的阳性率为23.4％,明显高于结肠腺瘤组(4.8％)和正常对照组(2.9％),且差异均有统计学意义(P均＜ 0.01)；不同结肠组织中p62阳性率差异有统计学意义(x2=0.695,P=0.000),64例结肠癌组织标本中有48例(75.0％)出现p62阳性表达,均高于结肠腺瘤组织(14.3％)和正常对照组织(0.0％),且差异均有统计学意义(P均＜ 0.01)；三组患者血清中ANA阳性率差异有统计学意义(x2=0.629,P=0.000),ANA在结肠癌组中的阳性率为82.8％,明显高于结肠腺瘤组(21.4％)和正常对照组(17.6％),且差异均有统计学意义(P均＜ 0.01).其中结肠癌组ANA阳性核型以胞核为主47.2％ (25/53),其次是核仁型24.5％(13/53)和胞浆型28.3％(15/53),其核仁和胞浆核型比例均高于对照组和结肠腺瘤组.结论 抗p62抗体和ANA的联合检测对于结肠癌的早期诊断、疾病预防和监测具有重要意义.
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两种不同神经病理性疼痛模型中自噬的改变
目的:通过观察坐骨神经压迫模型CCI(chronic constriction injury,CCI)和脊神经结扎SNL(spinal nerve ligation,SNL)两种经典的神经病理性疼痛模型中自噬特异性蛋白表达,探讨两种神经病理性疼痛中自噬的改变.方法:雄性SD大鼠(200~250 g)分为CCI假手术组(sC组),CCI组(C组),CCI+腹腔注射生理盐水组(C+V组),CCI+腹腔注射氯喹组(C+C组),SNL假手术组(sS组),SNL组(S组),SNL+腹腔注射生理盐水组(S+V组),SNL+腹腔注射氯喹组(S+C组).各组术前以及术后1、3、5、7天进行疼痛行为学测试.在术后7天sC组、C组取脊髓L4~6,sS组、S组取脊髓L4~5进行LC3、p62蛋白质免疫印迹检测.C+C组、C+V组、S+C组、S+V组检测LC3表达水平.结果:CCI模型和SNL模型产生明显的神经病理性疼痛行为学改变,注射氯喹导致机械痛阈降低;CCI模型中LC3-II、p62与假手术组相比升高;SNL模型与相应假手术组相比LC3-II升高,p62升高.C+C组和对照组相比LC3升高,S+C组与相应的对照组相比LC3升高.结论:不同神经病理性疼痛模型中自噬发生的改变不尽相同,并且抑制自噬可以增加神经病理性疼痛.增强自噬可以成为神经病理性疼痛治疗方法.
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自噬相关基因在小鼠急性胰腺炎中的表达及其意义
目的 检测小鼠急性胰腺炎(AP)胰腺组织中自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)的表达,并探讨其意义.方法 20只小鼠随机分为AP组和对照组.采用腹腔内注射20％L-精氨酸溶液(4 g/kg体重)2次、间隔1h的方法制备AP模型;对照组腹腔注射等容积生理盐水.24 h后观察两组小鼠胰腺组织的病理改变,采用蛋白质印迹法检测小鼠胰腺组织LC3、p62和LAMP-2蛋白的表达.结果 对照组小鼠胰腺组织未见明显病理改变;AP组小鼠胰腺腺泡水肿,腺泡结构破坏、消失,叶间隔、小叶间隔及腺泡间隔显著增宽,腺泡细胞呈不同程度变性坏死.AP组胰腺组织水肿、出血、坏死和炎症评分分别为(3.13±0.50)、(2.83 ±0.32)、(3.25±0.46)、(3.16±0.47)分,对照组的4项评分均为0分,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).AP组胰腺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及p62、LAMP-2蛋白表达量分别为1.16 ±0.08、0.94 ±0.04、0.35 ±0.04;对照组分别为0.24±0.02、0.34±0.03、0.95±0.03.AP组胰腺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、p62蛋白表达显著高于对照组,LAMP-2蛋白表达显著低于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).结论 腹腔注射L-精氨酸诱导AP后小鼠胰腺组织出现自噬受损,这可能与AP时胰腺组织LAMP-2蛋白表达下降有关.
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结肠癌中自噬相关蛋白Beclin-1和p62的表达及临床意义
目的 探讨自噬相关蛋白Beclin-1、p62在结肠癌中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学法检测2014年1月至2016年12月太原市中心医院普外科85例结肠癌组织及其相应距肿瘤组织6cm以上的85例正常结肠组织中Beclin-1和p62的表达,分析二者和结肠癌临床病理学参数的关系.结果 结肠癌和正常结肠组织中Beclin-1的阳性表达率分别为70.6%(60/85)、41.2%(35/85),p62阳性表达率分别为10.5%(9/85)、23.5%(20/85),Beclin-1在结肠癌中的阳性表达率高于正常结肠组织(χ2=4.547,P=0.033),p62在结肠癌中的阳性表达率低于正常结肠组织(χ2=6.795,P=0.009).Beclin-1在结肠癌中的表达与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.01),p62在结肠癌组织中的表达与各临床病理参数之间无相关性(P>0.05).结论 Beclin-1表达增高和p62表达降低可能与结肠癌的发生发展有关,自噬功能变化在结肠癌变过程中起着一定作用.
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自噬相关基因Beclin1及P62在鼻息肉中的表达及临床意义
目的 检测自噬相关基因Beclin1及P62在鼻息肉组织中的表达,探讨鼻息肉组织的自噬水平在鼻息肉发病机制中的作用及临床意义.方法 收集2014年10月至2015年4月于山东大学齐鲁医院住院行手术治疗的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者的鼻息肉组织50例作为实验组,鼻中隔偏曲患者的正常下鼻甲黏膜组织20例作为对照组.苏木精-伊红(HE)染色观察鼻息肉组织中嗜酸粒细胞浸润;免疫组织化学技术(IHC)检测Beclin1及P62在实验组及对照组中的蛋白表达强度;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组中Beclin1、P62及LC3B mRNA的相对表达水平.以SPSS 20.0软件进行统计学分析.结果 蛋白质水平:Beclin1在鼻息肉组织中的表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(U=-13.36,P ＜0.01);P62的表达则明显升高,差异有统计学意义(U=12.99,P＜0.01).但两者表达与嗜酸粒细胞浸润无明显关联(P值均＞0.05).mRNA水平:Beclin1在鼻息肉组织中的相对表达量为0.46±0.17,低于对照组的1.11±0.47,差异有统计学意义(t=-4.61,P＜0.01);P62在鼻息肉组织中的相对表达量为2.19±0.44,高于对照组的1.05±0.33,差异有统计学意义(=6.16,P＜0,01);LC3B在鼻息肉组织中的相对表达量为0.46±0.11,低于对照组的0.96±0.25,差异有统计学意义(t=-4.61,P＜0.01).结论 鼻息肉较正常下鼻甲黏膜组织中Beclin1的表达明显降低,P62表达明显增高,提示鼻息肉组织自噬水平降低,这可能与鼻息肉的发病机制有关.
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4周低氧运动对营养肥胖型大鼠骨骼肌自噬相关因子时序性变化的影响
目的:探讨在低氧条件下运动对营养肥胖型大鼠腓肠肌自噬相关因子P62、LC3、Beclin-1表达的影响以及低氧运动诱导骨骼肌细胞自噬发生的可能机制.方法:采用高脂饮食诱导SD大鼠建立营养肥胖大鼠模型,选取建模成功的肥胖大鼠随机分为5组,每组10只,分别为对照组(C)、低氧训练1周组(E1)、低氧训练2周组(E2)、低氧训练3周组(E3)和低氧训练4周组(E4).低氧暴露模拟13.6％氧浓度(约为实际海拔3500米氧含量),动物跑台进行训练,速度为20 m/min,坡度为0,每天运动1h,周末休息,分别训练0周、1周、2周、3周、4周.后一次训练结束24 h后处死并采样,采用RT-PCR技术检测模型大鼠腓肠肌P62、LC3、Beclin-1 mRNA以及采用Westent Blot技术检测P62、LC3、Beclin-1蛋白在实验干预前后的变化情况.结果:(1)与C组相比,E1、E2、E3组Beclin-1 mRNA表达量显著升高(P＜0.05);与C组相比,E2组Beclin-1蛋白表达量显著下降(P＜0.05),E4组与E2组相比升高非常显著(P＜0.01),E3组与E2组相比变化不显著,E3组显著低于E4组(P＜0.05).(2)E1组、E2组与C组相比P62 mRNA的相对表达量显著增加(P＜0.05,P＜0.01),E2组与E1组相比显著升高(P＜0.05),E3组P62 mRNA的相对表达量非常显著低于E2组(P＜0.01),E4组非常显著高于C组、E1组和E3组(P＜0.01);E3组肥胖大鼠P62蛋白相对表达量与E2组相比显著升高(P＜0.05).(3)E2、E4组LC3 mRNA相对表达量非常显著高于C组(P＜0.01),E3组与C组相比显著增加(P＜0.05),五组肥胖大鼠LC3蛋白中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ变化均不明显.结论:(1)低氧运动能显著提升自噬基因的相对表达量,在一定程度上促进自噬的发生,但是自噬基因的转录与自噬蛋白质的合成具有不同步性.(2)在低氧训练的前两周骨骼肌的自噬程度出现增加趋势,但是随刺激时间的延长,骨骼肌的自噬程度逐渐降低,可能是机体对低氧刺激逐渐适应的结果.
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p62/Nrf2信号途径在细胞保护中的作用
机体内外各种因素导致的氧化应激,破坏细胞内氧化还原平衡,激活或抑制许多信号通路和一些信号介导分子.Keap1-Nrf2-ARE信号通路是机体维持氧化还原平衡和消除有毒有害物质损伤作用的重要通道之一,通过诱导具有细胞保护功能的基因表达,应对氧化应激和有害化学物质的破坏作用.一般认为,维持Nrf2信号通路及其细胞保护作用是预防肿瘤发生的一种方式,但如果控制Nrf2降解的基因突变使Nrf2持续活化也可能促进肿瘤发生,或促进肿瘤细胞对化疗药物产生抵抗作用.自噬过程也与复杂的细胞功能相关,通过降解和去除细胞内有害的蛋白质和受损的细胞器,维持细胞的正常功能.已有研究显示,Keap1-Nrf2-ARE信号通路与自噬通路的相互联系和相互影响是由自噬适配子蛋白p62与Keap1的直接作用完成的.自噬作用失调则以p62依赖的方式增强Nrf2的活性,与多种疾病特别是恶性肿瘤的发病及治疗有关.本文就p62介导的Nrf2通路激活的调控机制及其与神经系统疾病、心血管疾病和恶性肿瘤的关系进行综述.
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补肺汤对肺纤维化中自噬蛋白Cat-D,beclin-1,p62的影响
目的:探讨补肺汤对肺纤维化中自噬蛋白Cat-D,beclin-1,p62的影响.方法:C57小鼠70只,分为7组:假手术组、模型组、补肺汤26.67,13.33和6.67 g·kg-1、地塞米松0.125 mg·kg-1、补肺汤和地塞米松0.125 mg· kg-1± 13.3 g·kg-1,每组10只.假手术组气管内滴注0.9％ NaCl溶液,其余各组气管内滴注博莱霉素.术后2d给药,假手术组给予同体积0.9％ NaCl溶液.d 28取材,HE,Masson染色观察肺组织病理和胶原活性,免疫组化法分析Cat-D,beclin-1,p62蛋白平均光密度值、阳性细胞数和面积,免疫蛋白印迹法检测Cat-D,beclin-1,p62变化.结果:与模型组相比,HE显示补肺汤26.67,13.33和6.67 g·kg-1、地塞米松0.125 mg· kg-、补肺汤和地塞米松0.125 mg·kg-1± 13.3 g·kg-1肺组织中炎性细胞浸润程度有不同程度减轻;Masson染色显示补肺汤26.67,13.33和6.67 g·kg-1、地塞米松0.125 mg·kg-1、补肺汤和地塞米松0.125mg·kg-1 ±13.3g·kg-1肺组织胶原活性不同程度减轻;免疫组化法显示各给药组Cat-D蛋白表达下降;假手术组、补肺汤26.67,13.33和6.67 g·kg-1剂量组beclin-1蛋白表达与模型组比较具有统计学差异.各药物组p62蛋白的平均光密度值与模型组比较无差异.免疫蛋白印迹法显示Cat-D,beclin-1和p62蛋白的表达量有不同程度变化.结论:补肺汤对肺纤维化病理变化和胶原活性有明显影响,并对自噬相关蛋白Cat-D,beclin-1和p62有调节作用.
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KISS-1基因表达物对骨肉瘤细胞凋亡和自噬调控机制的研究
目的 该研究就KISS-1基因表达物在骨肉瘤细胞中的凋亡和自噬作用进行比较分析,探讨KISS-1基因表达对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的调控机制.方法 于2016年4月—2017年1月在该院细胞实验室分别向K7M2骨肉瘤细胞培养中分别加入KISS1蛋白Kp(Kisspeptin)或抗Kp蛋白,将其对应分为Kp组和抗Kp蛋白组,并分别与普通培养的K7M2细胞形成的控制组进行比较,待细胞培养24,48、72、96 h后,每组各时间点选取6孔对数生长期的细胞纳入实验观察,MTT观察细胞增殖情况,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用RT-PCR检测细胞培养72 h后凋亡标记物(P53、CytC)及自噬标记物(P62、Beclin1)的mRNA表达水平.结果 细胞培养96 h后,对照组细胞增殖率均数百分比由(0.660±0.075)％变为(1.330±0.214)％,Anti-Kp组细胞增殖率均数百分比由(0.677±0.093)％变为(1.465±0.194)％,而Kp组细胞增殖率均数百分比由(0.530±0.083)％变为(0.328±0.044)％,凋亡率均数百分比由(24.53±3.65)％变为(39.75±8.32)％.Anti-Kp组增殖率显著高于对照组(P<0.05).细胞接种培养72 h后,对照组的P53和CytC的mRNA表达水平均数为(0.213±0.045)和(0.220±0.046),Kp组P53和CytC的mRNA表达量均数为(0.393±0.107)和(0.509±0.145).同时,P62和Beclin1在控制组的mRNA表达量均数为(0.169±0.055)和(0.120±0.043),而在Kp组P62和Beclin1mRNA表达量均数为(0.426±0.120)和(0.357±0.103).P62和Beclin1的mRNA表达水平在Kp组高,Anti-Kp组低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 KISS-1基因表达物具有促进细胞凋亡和自噬来控制骨肉瘤细胞增殖的作用.
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Beclin1和p62在结肠癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨Beclin1和p62在结肠癌组织中和正常结肠黏膜的表达差异以及临床意义.方法 采用免疫组织化学法对42例结肠患者癌组织以及正常黏膜组织中Beclin1以及p62的阳性表达率进行检测.比较不同病理资料中Beclin1以及p62的表达差异,并随访5年生存率,Cox回归分析影响结肠癌患者死亡的危险因素.运用SPSS 20.0统计软件进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 Beclin1在正常肠黏膜中表达阳性率高于癌组织,另外在T1～T2期中的阳性表达率高于T3～T4期的阳性率,以上差异有统计学意义(P＜0.05).p62蛋白在癌组织中表达升高,在正常组织中表达降低,2组间差异有统计学意义(P＜0.05).Cox回归分析显示,对于结肠癌的患者,p62是患者死亡的危险因素,联合使用p62以及Beclin1是预测结肠癌预后的良好指标.结论 结肠癌患者的自噬活性降低,Beclint与CEA的表达水平以及肿瘤的浸润深度有关,联合应用Bedin1以及p62可以较好地预测结肠癌患者的预后.
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丹酚酸B对糖尿病肾病患者肾损害的影响
糖尿病肾病的发生和发展与机体氧化应激反应和细胞的自噬作用相关.丹酚酸B可以通过影响p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的调控机制影响肾脏组织的自噬活性;丹酚酸B可以通过上调Sirt1的水平而增加LC3的活性,促进细胞的自噬作用,及时清除损伤的细胞内成分,从而改善肾损害.该文对国内外关于糖尿病肾病的发生和发展机制、细胞自噬水平那个的调节及丹酚酸的药理作用的研究结果进行综述.
关键词： 糖尿病肾病 丹酚酸B 自噬 p62 微管相关蛋白1轻链3
