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非吞噬细胞氧化酶4在转化生长因子-β诱导A549细胞迁移中的作用
目的 探讨非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在转化生长因子β(TGF-β)诱导A549细胞迁移中的作用.方法 实验分组:TGF-β(刺激)组,空白对照组,二甲苯基碘(DPI,NOX4抑制剂)组,TGF-β+ DPI组,二甲基亚砜(DMSO)(溶剂对照)组.流式细胞仪检测ROS表达;Western blot检测NOX4、snail、E-cadherin蛋白表达;划痕实验检测A549细胞迁移能力.结果 经Quantity One软件定量后,TGF-β组NOX4表达为:1.80±0.07,TGF-β+ DPI组为0.49±0.03(F=327.071,P＜0.001);上皮间质转化相关蛋白:TGF-β组snail蛋白为9.0±0.6,TGF-β+DPI组为1.8±0.3(F=119.097,P＜0.001);TGF-β组E-cadherin蛋白为0.5±0.1,TGF-β+ DPI组为3.3±0.3(F =71.063,P ＜0.001);以上结果表明DPI可以抑制A549细胞NOX4表达且可以抑制其EMT进程.TGF-β+ DPI组与TGF-β组比较,划痕愈合率降低(F=33.899,P＜0.001);表明DPI可以抑制A549细胞的迁移.结论 DPI抑制NOX4的表达后,TGF-β诱导的A549细胞迁移被抑制,并且与TGF-β诱导的上皮间质转化进程有关.
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乳腺浸润性导管癌上皮间质转化相关蛋白表达与临床病理特征和预后的关系
目的:分析上皮间质转化的相关蛋白表达与乳腺浸润性导管癌的临床病理特征和预后的关系.方法:选取我院2014年3月至2015年3月诊治的乳腺浸润性导管癌患者55例为研究对象,采用免疫组织化学检测法分析患者癌组织与正常乳腺组织中相关蛋白的表达,主要有Vimentin蛋白、E-cadherin蛋白和MMP2蛋白,研究蛋白表达与预后的关系.结果:乳腺癌中Vimentin蛋白表达阳性率高于正常组织;E-cadherin蛋白表达阳性率低于正常乳腺组织;MMP2蛋白表达阳性率高于正常乳腺组织.结论:检测乳腺浸润性导管癌中的相关蛋白表达能够对乳腺癌进行病理分级,改善患者治疗效果,有较高的临床意义.
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邻苯二甲酸单丁酯对小鼠睾丸间质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)对小鼠睾丸间质瘤细胞(MLTC-1)上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达及细胞迁移、侵袭能力的影响.方法 选择0、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mol/L浓度的MBP分别处理MLTC-1细胞24 h和48 h后,收集处理后细胞.采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活性,Western blot检测EMT相关蛋白波形蛋白、E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和Snail的表达,划痕实验及Transwell细胞侵袭实验探讨MBP对MLTC-1细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 使用10-7、10-6mol/L的MBP对MLTC-1细胞染毒时,波形蛋白、转录因子Snail、N-钙黏着蛋白表达上调[相对表达量分别为(1.56±0.07)比(1.78±0.08)、(1.22±0.06)比(1.44±0.07)、(1.33±0.11)比(2.19±0.06),P值均<0.001];E-钙黏着蛋白的相对表达量分别为(0.66±0.09)比(0.47±0.06),表达下调(P<0.001).划痕实验显示,分别以0、10-7、10-6mol/L MBP染毒24 h后,细胞划痕愈合能力明显提高,愈合率分别为(6.64± 2.07)%、(15.61±2.83)%、(39.91±0.33)%,P值均<0.001.Transwell实验显示,使用0、10-7、10-6mol/L浓度的MBP染毒后,各组穿过Matrigel胶的细胞数与对照组相比明显增加,24 h侵袭细胞数(32.67±3.51)、(57.67±2.52)、(82.67±6.51)个/每3个视野,P值均<0.001.结论 MBP影响了MLTC-1细胞EMT相关蛋白的表达,促进了MLTC-1细胞的迁移和侵袭.
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肿节风对小型猪放射性肺损伤后上皮间质转化的抑制作用
目的:本研究主要探讨了肿节风对小型猪经右胸单次照射后上皮间质转化(EMT)的抑制作用及其分子机制.方法:雄性小型猪随机分为对照组、单照组和药照组,单照组和药照组行右胸单次15 Gy照射,对照组不予照射.药照组于照射前一周予肿节风配方颗粒溶液,对照组和单照组予等量生理盐水.照射后不同时间点分别从三组随机取5头小型猪采集右肺组织,行免疫印迹检测肺表面活性蛋白A(SP-A)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、vimentin和E-cadherin的蛋白表达;免疫荧光双染观察α-SMA和SP-A的共表达.结果:在照射后不同时间点,单照组中α-SMA和vimentin蛋白表达较对照组明显升高;而SP-A和E-cadherin蛋白表达却呈下降趋势,药照组中,上述4个观察指标的蛋白表达则介于二者之间,且4个不同时间点,三组之间两两比较,差异均具有统计学意义.单照组和药照组在激光共聚焦显微镜下均观察到了肺泡Ⅱ型上皮细胞出现α-SMA和SP-A共染,对照组则没有此现象.结论:肿节风可能通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞发生EMT来减少胶原纤维的产生,进而减慢放射性肺纤维化的进展.
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南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响＊
目的：结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的作用及分子机制。方法：取对数生长期HepG2细胞，除对照组外，分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160滋g·mL-1培养，采用Western Blotting法检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平；斑马鱼胚胎，于受精后48 h开始给药，正常组给予E3缓冲液，DMSO组为含1% DMSO的E3缓冲液，南蛇藤组各药物浓度分别为10、20、40、80、160滋g·mL-1；给药24 h后，以Western Blotting法检测mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组相比，南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量，降低vimentin和mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论：南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT ，其分子机制可能与mTOR信号通路相关，mTOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。
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纳米雄黄抑制人乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的机制探讨
目的:观察纳米雄黄对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,不同浓度纳米雄黄溶液干预,并设立对照组,免疫组化实验检测各组细胞E-cad、HIF-1α表达情况,RT-PCR检测SnailmRNA表达情况.结果:各纳米雄黄组E-cad表达阳性率均明显高于对照组(P＜0.01),而HIF-1α表达阳性率均低于对照组(P＜0.01);对照组、纳米雄黄低、中、高剂量组、阿霉素组的SnailmRNA相对表达量依次为(52.16±3.87)、(30.10±2.48)、(47.08±3.45)、(41.42±4.35)、(36.07±2.45).结论:纳米雄黄可通过上调E-cad表达、下调HIF-1α及Snail mRNA表达逆转乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化发挥抗肿瘤转移作用.
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臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响
目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响.方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮.MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力.Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达.结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P<0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P<0.05).采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P<0.05).并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P<0.05),上调P-GSK-3β表达(P<0.05).臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显.结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路.臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用.
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软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制
目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移.本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA和蛋白的表达.结果:①MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖.②transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg· L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P＜0.05).③Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关.
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胃肠安对人胃癌SGC-7901细胞TGF-β1诱导上皮间质转化作用
目的:观察胃肠安对人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化的影响.方法:接种SGC-7901细胞贴壁后,按5μg·L-加入转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)建立人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化模型.同时,胃肠安组按1 000 mg·L-1加入胃肠安药液,继培5d后,显微镜观察细胞形态,Western blot检测上皮、间质标记基因E-cad,N -cad,vimentin蛋白与相关激酶蛋白激酶B (Protein kinase B,PKB或AKT)、转录因子Twist,Snail蛋白表达情况.结果:较空白组,加入TGF-β1后,SGC-7901细胞发生上皮间质转化,细胞形态拉长变窄且细胞间连接更疏松,上皮标记基因E-cad蛋白相对表达量降低0.241；间质标记基因N-cad,vimentin蛋白相对表达量分别升高0.225,0.371.较模型组,胃肠安作用后,SGC-7901细胞大部仍成卵石状不典型上皮细胞形态,仅少数细胞出现间质细胞形态,上皮标记基因E-cad蛋白相对表达量升高0.210；间质标记基因N-cad,vimentin蛋白相对表达量分别降低0.119,0.124；相关通路AKT表达及磷酸化,转录因子Twist,Snail蛋白相对表达量分别降低0.248,0 085,0 402,0.382.结论:胃肠安可抑制人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化,可能与抑制AKT表达及磷酸化,下调转录因子Twist,Snail蛋白相关.
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大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质化的影响
目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10 μg·L-1转化生长因子-β1(TGF-β1),10 μg·L-1TGF-β1+5 mg·L-1大蒜素,5 mg·L-1大蒜素处理PANC-1细胞,另设空白组,镜下观察细胞形态学改变.细胞划痕实验检测大蒜素是否能降低胰腺癌细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学法及免疫印迹法(Western blot)检测各组钙黏附蛋白-E(E-cadherin),波纹蛋白(Vimentin)的表达变化.结果:TGF-β1能够刺激PANC-1细胞发生典型的EMT形态变化,并伴有E-cadherin表达的上调及Vimentin的下调.划痕实验表明大蒜素能降低胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力.免疫荧光细胞化学法及Western blot结果显示,与空白组及TGF-β1组比较,大蒜素组的E-cadherin 表达明显上调(P＜0.05),Vimentin明显下调(P＜0.05),这表明大蒜素具有抑制PANC-1细胞产生EMT的效应.结论:大蒜素可抑制胰腺癌细胞发生EMT,进而可能在抑制肿瘤浸润与转移过程中发挥重要作用.
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桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的结肠癌细胞LoVo上皮间质转化
目的:探讨桂皮醛对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其与磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路的关系.方法:通过TGF-β1诱导结肠癌细胞株LoVo发生上皮间质转化,使用桂皮醛(0,20,40,80 mg·L-1)干预由TGF-β1诱导的LoVo细胞的增殖,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测桂皮醛对TGF-β1诱导的细胞增殖能力的影响.转移小室(transwell)侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及PI3 K/Akt信号通路关键蛋白的表达.采用PI3K/Akt抑制剂LY290004来验证桂皮醛通过PI3 K/A kt信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT.结果:与空白组比较,桂皮醛能有效抑制TGF-β1诱导的增殖及侵袭能力(P＜0.01),显著增加E-cadherin的表达,抑制N-cadherin,Vimentin及TGF-β1刺激的p-Akt和p85的表达(P＜0.01);同时通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活逆转TGF-β1诱导的EMT (P＜0.01).结论:桂皮醛可通过调节PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的结肠癌细胞LoVo的上皮间质转化,降低其侵袭能力.
关键词： 桂皮醛 结肠癌 上皮间质转化 磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B 转化生长因子-β1 -
健脾化瘀法方药对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转化的影响
目的:探讨健脾化瘀方对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响.方法:分别以不同浓度(20％,高浓度组;10％,低浓度组)健脾化瘀法中药含药血清及空白对照血清(空白对照组)培养肝癌细胞MHCC97-H,qPCR检测细胞Smad7、Snail、Zeb1、Zeb2 mRNA水平,Western blot检测Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平.划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力.结果:高浓度组Smad7 mRNA水平高于空白对照组(P＜0.05),Snail、Zeb2 mRNA水平低于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,高浓度组48h的Snail、N-cadherin蛋白表达量明显降低,Smad7、E-cadherin蛋白表达量明显升高(P＜0.05).低浓度组48h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P＜0.05).划痕法结果显示,与空白对照组比较,高、低浓度组肝癌细胞的划痕愈合较慢(P＜0.05,P＜0.01).Transwell显示,与空白对照组比较,高、低浓度组MHCC97-H细胞的迁移受抑制(P＜0.05).结论:健脾化瘀法中药能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与上调Smad7蛋白含量及抑制上皮间质转化有关.
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论脾虚是结直肠癌能量代谢障碍与上皮间质转化的关键病机
脾虚证是结直肠癌常见的临床证候.脾失健运呼吸链功能障碍导致低氧状态和HIF-1α表达增高,肥人脾虚产生的慢性炎症及释放细胞因子促进糖酵解,可能是结直肠癌能量代谢障碍,即瓦博格效应的主要原因.脾虚通过低氧诱导因子1α介导的能量代谢障碍促进上皮间质转化,健脾益气中药通过健脾化痰改善结直肠肿瘤细胞的慢性炎症和能量代谢障碍,从而调控肿瘤微环境,抑制EMT,改善结直肠肿瘤的生长和转移.
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健脾消癌方对转化生长因子-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响
目的 观察健脾消癌方对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响,探讨其防治结直肠癌的可能机制.方法 体外培养结直肠癌细胞SW620.CCK-8法和Transwell小室实验测定细胞增殖、侵袭及迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin和Vimentin的基因和蛋白表达.结果 健脾消癌方药物血清能抑制SW620细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;与空白组比较,TGF-β1诱导组细胞E-cadherin表达水平下降,Vimentin表达水平升高(P<0.05);与TGF-β1诱导组比较,健脾消癌方+TGF-β1组细胞E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平下降(P<0.05).结论 健脾消癌方可通过调控TGF-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化过程,抑制结肠癌的生长、侵袭和迁移能力,达到防止结直肠癌复发和转移的目的.
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化瘀降浊汤对转化生长因子-β1/母系同源物家族信号通路相关蛋白的影响
目的 观察化瘀降浊汤对转化生长因子(TGF)-β1诱导HK-2细胞发生上皮间质转分化(EMT)过程TGF-β/母系同源物家族Smad通路中关键因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Smad3、蜗形蛋白(Snail)的影响,探讨其保护肾功能的作用机制.方法 MTT法测定不同浓度化瘀降浊汤对TGF-β1诱导HK-2的细胞增殖抑制率,计算半数抑制率(IC50).Westem blot和RT-PCR检测E-cadherin、Smad3、Snail蛋白和基因表达,间接免疫荧光检测E-cadherin蛋白表达.结果 化瘀降浊汤在一定浓度范围内抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖,呈现出一定的量效关系,IC50为472.017μg/mL. Westem blot和RT-PCR检测结果显示,化瘀降浊汤中、高剂量组E-cadherin、Smad3、Snail蛋白和mRNA表达与诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);免疫荧光检测结果显示,化瘀降浊汤能促进E-cadherin蛋白表达,与Western blot分析结果一致.结论 化瘀降浊汤可能通过调节HK-2细胞TGF-p/Smad信号途径中的关键蛋白达到抑制甚至逆转肾小管EMT,从而对肾小管间质纤维化起到保护作用.
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北沙参石油醚部位抑制TGF-β1诱导的A549细胞上皮间质转化
探讨北沙参石油醚部位对TGF-β1诱导的肺癌Ⅱ型上皮细胞A549上皮间质转化的抑制作用及其可能机制.以A549细胞为研究对象,采用5μg·L-1 TGF-β1诱导的上皮间质转化模型进行实验.设置空白对照组、模型组、北沙参石油醚组.MTT法检测北沙参石油醚部位对A549细胞存活率的影响;Real-time PCR分析北沙参石油醚部位对诱导后A549细胞ColI,E-cadherin,Vimentin,α-SMA mRNA表达水平的影响.酶联免疫吸附法(ELISA)检测北沙参石油醚部位对诱导后细胞羟脯氨酸(HYP)分泌水平影响.细胞划痕检测北沙参石油醚部位对细胞运动能力的影响.从实验结果可以看出,北沙参石油醚部位能抑制A549细胞生长且呈药物浓度依赖关系.与模型组相比,北沙参石油醚部位能有效抑制上皮间质转化的标志性蛋白Col I,Vimentin,α-SMA基因的表达,促进E-cadherin基因的表达.降低细胞内羟脯氨酸含量,同时降低细胞的运动能力.由此表明,北沙参石油醚部位能有效抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞发生上皮间质转化,是特发性肺纤维化的潜在治疗药物.其机制可能通过调控Col Ⅰ,Vimentin,α-SMA,E-cadherin而实现.
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三七总皂苷对人肺泡上皮细胞间质转化的抑制作用
该研究探讨了三七总皂苷对TGF-β1诱导的A549人肺泡上皮细胞间质转化和细胞外基质分解能力的影响.首先应用MTT法检测三七总皂苷对A549细胞增殖的影响,在12.5 ～200 mg·L-1,未发现三七总皂苷对A549细胞增殖有显著性的影响.接着将A549细胞分组.除正常组外,其余各组细胞应用5 μg· L-1TGF-β1刺激,其中TGF-β1组正常培养,其他刺激组分别用50,100,200 mg·L-1三七总皂苷干预.收集细胞和上清,先后采用圆形度值评估细胞的形态变化,免疫组化法检测特异性蛋白的表达以及酶联免疫吸附法检测MMP-9和TIMP-1的水平.TGF-β1刺激后,与正常组比较,细胞的形态发生变化,圆形度值显著减少(P＜0.01);上皮特征性蛋白E-cad表达显著减少(P＜0.05)而间质特征性蛋白α-SMA和FN的表达显著增加(P＜0.05).与TGF-β1组比较,三七总皂苷干预能显著增加圆形度值、降低α-SMA和FN的表达(P＜0.05,P＜0.01),但对E-cad的表达没有明显的影响.另外,TGF-β1刺激后,细胞分泌MMP-9的能力显著增强(P＜0.05),而TIMP-1的分泌量未见显著变化.与TGF-β1组比较,三七总皂苷增加MMP-9的分泌量(P＜0.05),减少TIMP-1的分泌量(P ＜0.05,P＜0.01).上述结果表明三七总皂苷能抑制肺泡上皮细胞的间质转化,促进细胞外基质分解,具有治疗肺纤维化的应用前景.
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现代医学对恶性肿瘤转移相关机制的研究进展
恶性肿瘤转移是恶性肿瘤发生和演变过程中危险的阶段,是恶性肿瘤患者死亡的首要原因,临床上,60％以上的恶性肿瘤患者在发现时已经转移.近年来,现代医学对恶性肿瘤转移的机制研究取得突破性进展,从单纯的“解剖和机械”学说向“种子与土壤”学说迈进,再向微环境学说、肿瘤干细胞学说深入,特别是新兴的肿瘤干细胞学说成功解释了恶性肿瘤转移表现的肿瘤遗传异质性、失巢凋亡抗性、肿瘤休眠等现象,为恶性肿瘤转移的治疗提供了更多新的靶点与诊疗思路.
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肺瘤平膏含药血清对巨噬细胞共培养条件下A549细胞EMT相关mRNA及蛋白表达的影响
目的 观察肺瘤平膏含药血清对A549细胞与巨噬细胞共培养条件下上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)相关mRNA及蛋白表达的影响.方法 制备肺瘤平膏含药血清,建立A549细胞与巨噬细胞的共培养体系,将细胞分为A549加空白血清组(A549+NRS组)、共培养加空白血清组(共培养+ NRS组)及共培养加肺瘤平膏含药血清组(共培养+FLP组).采用荧光定量PCR、免疫荧光法比较各组A549细胞EMT相关基因(SNAIL1、SNAIL2、ZEB1、CDH1、CDH2、VIM、TJP1、CLDN1、CTNNB1、FLRT1)及E-cadherin、N-cadherin、ZO-1、Vimentin蛋白表达水平的影响.结果 共培养条件下,A549细胞变为间充质细胞样.加入肺瘤平膏含药血清后,部分A549细胞形态恢复为上皮细胞样.与A549+NRS组比较,共培养+NRS组A549细胞SNAIL1、ZEB1、CTNNB1、FLRT1、CDH2、VIM mRNA表达上调,TJ P1 mRNA表达下调(均P＜0.05);与共培养+NRS组比较,共培养+FLP组SNAIL2、TJP1、CLDN1、CDH1、VIM mRNA表达上调,CTNNB1、FLRT1及CDH2 m RNA表达下调(均P＜0.05).免疫荧光结果显示,E-cadherin表达于细胞膜和胞浆内,以细胞膜为主;N-cadherin表达于细胞膜和胞浆内,以细胞浆为主;Vimentin表达于胞浆内;ZO-1表达于细胞连接处为主,部分细胞膜染色亦呈阳性.与A549+NRS组比较,共培养+NRS组A549细胞E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达上调(P＜0.05);肺瘤平膏含药血清可上调E-cadherin表达,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达(均P＜0.05).结论 肺瘤平膏可抑制共培养条件下A549细胞EMT的形成.
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虎杖苷对TGF-β1诱导的人类肺泡上皮A549细胞EMT的影响
目的 探讨虎杖苷对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人类肺泡上皮A549细胞生长及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的作用机制.方法 体外培养A549细胞,随机分成5组:空白组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别加入普通培养液、含5 ng/mL TGF-β1的培养液、含浓度为50 μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为100 μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为150 μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液进行干预,观察并记录不同时间段细胞形态变化;MTT法检测虎杖苷佳药物浓度;蛋白质印迹法(Western blot)、实时PCR(Real-time PCR)检测上皮标志物E-cad、间质标志物Vimentin蛋白及mRNA表达水平.结果 倒置相差显微镜观察到虎杖苷和TGF-β1干预后A549细胞由原来的鹅卵石状上皮形态转变成梭形,且细胞间隙变大,细胞间的连接变得松散,对照组较为明显,低、中、高剂量组比对照组细胞形态稍饱满;48 h中剂量组虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞EMT抑制作用明显.在虎杖苷和TGF-β1作用下,E-cad蛋白及mRNA表达总体呈下调趋势(P＜0.05),与对照组比较,各药物组E-cad蛋白及mRNA表达下调幅度较小,且48 h比24 h明显.而Vimentin蛋白及mRNA表达总体呈上调趋势,与对照组比较,各药物组Vimentin蛋白及mRNA表达上调的幅度较小,且48 h比24 h明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 虎杖苷能抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程,并存在时间和剂量依赖性,具有抑制肺纤维化的作用.
