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氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响
选用氧氟沙星(OFLX)和叠氮胸苷(AZT)单独投入及与IFN并用,观察其抗病毒活性结果如下: 1 材料和方法 1.1 病毒和细胞所用黄病毒为乙型脑炎病毒JEV的JaGAr-01株。细胞是人肝癌细胞株HepG2。细胞培养所用培养液为DMEM加10%胎牛血清(FCS)。 1.2 感染病毒病毒感染剂量为l0 m.o.i(multiplicityinfection),37℃吸附60min,在5%CO2孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中,24h后采取培养上清液,测定病毒的含量。 1.3 病毒滴定用空斑形成方法。将含有病毒的培养上清液按比例稀释,在24孔培养板内单层培养的仓鼠肾细胞株BHK上,添加0.6%的甲基纤维素液和含有1%FCS的MEM培养液,3d后用甲醇固定,l%结晶紫染色,计算空斑数。
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还原型谷胱甘肽对肺泡巨噬细胞凋亡的影响
肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage, AM)是肺部防御病原微生物和肺损伤的第一道防线,AM凋亡的异常可影响肺免疫防御的完整性。中性粒细胞(PMN)肺内聚集是导致肺损伤的重要因素,PMN释放介质对AM有一定的影响。我们采用体外培养细胞方法原代培养大鼠AM,分离并激活PMN,收集上清液与AM共同孵育,观察AM的形态变化,测定培养上清液中LDH和NO的释放情况,并以原位凋亡检测法和免疫组化测定Fas等反映AM凋亡的变化,以期研究还原型谷胱甘肽(R-GSH)对AM凋亡的影响。
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IL-12对慢性乙型肝炎患者TH1/TH2类细胞应答作用与血清HBV DNA含量相关性研究
为观察慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量是否影响IL-12对TH1/TH2类细胞的调节作用,我们选择50例慢性乙型肝炎患者,分别与PHA,HBcAg、HBeAg单独或联合IL-12培养其外周血单个核细胞,ELISA法检测培养上清液细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,结合血清HBV DNA含量进行分析比较,探讨血清HBV DNA含量对IL-12诱导TH1/TH2类细胞应答效应的影响.
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卵巢癌细胞株来源的外来体的抗原性初步研究
外来体(Exosomes)是一种直径30~90nm的膜性囊泡,初在网织红细胞中被观察到并命名,后来发现多数细胞可分泌此囊泡,如血小板、B淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、树突状细胞(DC)、肥大细胞和一些肿瘤细胞.本研究培养了5种卵巢癌细胞系,试图从培养上清液中分离出外来体,经过免疫电镜和Western blot鉴定其是否携带有肿瘤细胞的特异性抗原,为外来体用于卵巢癌主动免疫治疗提供理论基础.
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脐血单个核细胞表达IL-12、IFN-γ及其mRNA的观察
白细胞介素12(IL-12)的主要作用是促进TH1细胞和自然杀伤细胞(NK)产生γ-干扰素(IFN-γ),介导细胞免疫.脐血单个核细胞(CBMC)产生 IL-12的能力鲜见报道.重组 IL-12(rIL-12)在体外能促进新生儿CD4+T细胞产生IFN-γ [1].本文用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测8例CBMC体外表达IL-12p40 mRNA和IFN-γ mRNA的能力;用ELISA法测定8例CBMC培养上清液IFN-γ水平,并观察 rIL-12对CBMC IFN-γ及其mRNA表达的影响.
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成骨细胞培养上清液对大鼠糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用
目的:研究成骨细胞培养上清液对糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用.方法:36只糖皮质激素性骨质疏松症大鼠随机分为成骨细胞培养上清液组(A组)、原始培养液组(B组)和对照组(C组),每组12只.A组每周2次肌肉注射成骨细胞培养上清液,每次0.5ml/kg;B组每周2次肌肉注射原始培养液0.5ml/kg;C组每周2次肌肉注射生理盐水,每次0.5ml/kg.8周后对各组大鼠的第3腰椎行骨密度测量及左股骨组织形态计量学分析.结果:A组第3腰椎骨密度值明显高于B组(P<0.01)和C组(P<0.01),B组和C组之间无显著性差异(P>0.05).左股骨组织形态计量学分析结果显示:A组的骨体积、类骨质表面、类骨质宽度和成骨表面均比B组(P<0.01)和C组显著增高(P<0.01).骨吸收表面三者之间无显著性差异(P>0.05).结论:成骨细胞培养上清液可有效治疗糖皮质激素性骨质疏松症.
关键词: 成骨细胞 培养上清液 骨质疏松症 地塞米松 骨组织形态计量学分析 -
幽门螺杆菌相关胃炎患者IL-8的表达研究
目的:探讨(Helicobacter pylori,H pylori)相关胃炎患者IL-8的表达及其作用.方法:用RIA法测定慢性胃炎患者Hpylori阳性(n=11)与Hplori阴性(n=10)外周血和胃窦黏膜培养上清液中IL-8含量.结果:H pylori阳性者外周血和原位胃窦黏膜的IL-8含量明显高于阴性者(P<0.01);血IL-8对H pylori阳性的诊断效率为66.7%,原位胃窦黏膜IL-8对H pylori阳性的诊断效率为81.0%.结论:血清和原位胃窦黏膜中的IL-8含量增高与H pylori感染者胃黏膜损伤有关.
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内毒素致肝损害中库普弗细胞的作用及大承气汤的调节
目的:探讨库普弗细胞(KC)在内毒素脂多糖(LPS)所致肝细胞(HC)损伤中的作用并观察中药大承气汤的调节作用.方法:以胶原酶体内循环灌注结合体外胰蛋白酶加皿内消化方法分离高纯度的HC和KC,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)掺入法测定HC的DNA合成及KC和LPS对HC的影响并观察中药大承气汤的调节作用.结果:低剂量的LPS能使HC的DNA合成轻度增加,到1mg/L时出现明显增加,但LPS剂量再加大,则出现DNA合成的抑制.LPS刺激不能使HC产生TNF;但能刺激KC分泌TNF,且随着刺激浓度增加,KC分泌TNF增加.在没有LPS存在下,KC对HC无明显影响;LPS对与KC混合培养的HC的DNA合成呈现明显的抑制性作用,而且随着LPS浓度加大,这种抑制作用愈加明显.当HC培养液中LPS量逐渐升高时,上清液中谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)含量亦随之升高,细胞内酶逸出增多;当LPS浓度达到1000μg/mL的高浓度时,可见ALT和LDH不仅不见增高,反而明显减少.精制中药大承气汤能明显逆转HC DNA合成的受抑状态.LPS能激活肝KC释放TNFa,大承气汤对KC释放TNF有明显抑制作用,减低HC培养上清液中ALT和LDH含量,减少酶的逸出.结论:内毒素LPS对单独培养HC的DNA的合成呈双相影响;LPS对HC功能具有直接损伤作用.LPS可刺激肝脏的KC释放TNF,加剧LPS所致HC功能损伤.中药大承气汤能对KC功能进行正确调控,对HC功能具有双重保护作用.
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胃黏膜保护剂预防幽门螺杆菌培养上清液所致小鼠胃黏膜损伤
目的:研究产毒幽门螺杆菌(Hp ylori)的浓缩培养上清液(CCS)对小鼠胃黏膜的致病作用及胃黏膜保护剂硫糖铝和三九胃泰对CCS所致小鼠胃黏膜损伤的保护作用.方法:56只健康♂ Balb/c小鼠随机分成7组:生理盐水组(Ⅰ组)、单纯损伤组(Ⅱ A组、Ⅱ B组)、硫糖铝保护组(Ⅲ A组、Ⅲ B组)、三九胃泰保护组(Ⅳ A组、Ⅳ B组),其中A组为小剂量毒素组,B组为大剂量毒素组.分别用硫糖铝和三九胃泰提前给小鼠灌胃,其后用不同剂量的产毒Hpylori菌株(NCTCll637)的CCS灌胃致急性胃黏膜损伤,然后在显微镜及电镜下观察胃黏膜组织学改变,分别测定各组胃黏膜损伤积分(EDS),以评价胃黏膜损伤程度及药物的预防保护效果.结果:产毒Hpylori的CCS可以对小鼠胃黏膜产生明显的损害,包括空泡变性、腺体排列紊乱以及糜烂、溃疡形成,但炎症反应不明显.在超微结构水平,Hpylori的CCS引起细胞间隙增宽、空泡变性、细胞质肿胀、线粒体及内质网扩张、微绒毛排列紊乱及脱落、吞噬溶酶体增多等改变.小剂量毒素引起的损害不如大剂量毒素引起的损害严重.Ⅰ,ⅡA,ⅡB,ⅢA,ⅢB,ⅣA,ⅣB各组的胃黏膜损伤积分依次为1.13±0.35,2.25±0.46,3.63±0.52,1.25±0.46,1.75±0.71,1.50±0.53,1.63±0.74;单纯损伤组(ⅡA,ⅡB)与生理盐水组(Ⅰ组)比较,胃黏膜损伤明显(P<0.01);硫糖铝保护组(ⅢA,ⅢB)、三九胃泰保护组(Ⅳ A,ⅣB)与单纯损伤组(ⅡA,ⅡB)比较,不论小剂量毒素组,还是大剂量毒素组,胃黏膜损伤程度均减轻,损伤积分均明显下降(P<0.05).结论:H pylori的细胞毒素对鼠胃黏膜上皮细胞损害起重要作用,但并不引起明显的炎症反应;胃黏膜保护剂硫糖铝和三九胃泰对不同浓度Hp pylori培养上清液所致的小鼠胃黏膜损伤有明显的预防和保护作用.
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肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响
目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞,同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验,肝细胞培养组(对照组),肝细胞用RPMI1640、胰岛素10-7mol/L、100 mL/L FBS及地塞米松10-8 mol/L配成细胞悬液,2 mL放入9 cm2培养瓶中连续培养15 d(37℃50mL/LCO2).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×107/L的储脂细胞2 mL先加入培养瓶中,培养条件及培养液同肝细胞培养组,培养48 h后弃上清后将肝细胞2×108/L 2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10 d行细胞组织学及组织化学检测,包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落,核固缩,胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好,肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩,胞质破碎分解,糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状,胞质饱满,糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.
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CPG-ODN介导活化的人免疫细胞体外抗乙型肝炎病毒作用
目的:探讨CpG-ODN活化的人外周血单个核细胞(PBMC)体外对HBV复制和表达的抑制作用.方法:CpG-ODN体外刺激PBMC,ELISA测培养液IFN-α及IFN-γ的分泌;将CpG-ODN介导活化的PBMC与HepG2.2.15细胞按一定比例共孵育1d、2d和3d后,ELISA检测培养上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,荧光定量PCR检测HepG2.2.15细胞内HBV DNA和HBV mRNA的含量;并以MTT和酶学检测活化的PBMC对HepG2.2.15细胞的杀伤作用.结果:CpG-ODN有效诱导PBMC分泌IFN-α和IFN-γ;CpG-ODN本身虽不能直接抑制HBV的复制,但由CpGODN介导活化的PBMC却能显著减少HepG2.2.15细胞对HBsAg、HBeAg的分泌,同时对HBV DNA和HBV mRNA的抑制作用亦明显增强;CpG-ODN介导活化的PBMC对HepG2.2.15的杀伤作用增强.结论:CpG-ODN可通过活化机体免疫细胞,而具有明显的抗HBV复制和表达作用.
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树突状细胞体内外对肝癌细胞的抑制作用
目的:研究树突状细胞对肝癌等肿瘤细胞的直接作用.方法:用rhGM-CSF和rhIL-4从健康人外周血诱导树突状细胞,用ELISA和MTT法分别检测DC培养上清液中IL-12和TNF水平,用MTT法检测DC对肝癌细胞SMMC-7 721、QGY-7703、HEPG-2、Alexander,胃癌细胞SGC-7901,慢性髓原性白血病细胞K562、Burkitt's淋巴瘤细胞Raji和正常人二倍体细胞的抑制作用,同时用流式细胞术检测DC表面FasL的表达,后用DC进行人肝癌裸鼠皮下抑制瘤的抑制试验.结果:诱导7 d的DC对4种肝癌细胞和胃癌细胞均有不同程度抑制作用,随着效靶比的增加,DC对肝癌细胞和胃癌细胞的抑制作用逐渐增加;DC预防人肝癌裸鼠皮下移植瘤,其抑制率为97%.结论:DC进入机体后也可以非特异性抑制方式发挥抑癌作用,本研究丰富和拓展了肝癌DC疫苗的内容,为今后肝癌DC疫苗的研究奠定了基础.
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白细胞介素10对小鼠哮喘模型气道炎症作用的研究
白细胞介素(IL)10是一种具有广泛免疫抑制活性的细胞因子,主要由Th2细胞分泌.目前IL-10能否用于支气管哮喘治疗存在较多争议,我们的研究旨在探讨IL-10对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导的小鼠哮喘模型气道炎症是否有抑制作用.材料与方法雌性清洁级Balb/c小鼠30只,体重14~17 g(第一军医大学实验动物中心),分为三组,每组10只小鼠.对照组(A组):致敏和激发均用无病毒的Hep-2细胞株培养上清液.气道炎症组(B组):用灭活的RSV病毒为抗原,致敏后激发;IL-10治疗组(C组):同B组予RSV致敏后激发,RSV激发前1 h气道内滴入重组小鼠IL-10 (rmIL-10).Balb/c小鼠饲养在无RSV抗原条件下,采用2次致敏,1次激发建立小鼠气道炎症模型. 第1天皮下注射0.1 ml含6.25×105 PFU紫外线灭活的RSV(广州呼吸疾病研究所病毒室)及20 μg 氢氧化铝的生理盐水混悬液,第8天重复注射,第21天B组经乙醚麻醉后用0.1 ml 含6.25×105 PFU RSV的生理盐水,小鼠鼻腔内缓慢滴入激发小鼠气道炎症;A组:滴入0.1 ml等量未加病毒培养的Hep-2细胞悬液;C组:RSV激发前1 h鼻腔内滴入0.1 ml含200 ng rmIL-10(美国R&D公司)的生理盐水.
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慢性支气管炎、哮喘患者Th1/Th2类细胞因子失衡及地塞米松、结核菌素多糖核酸对其影响
近年来,辅助T淋巴细胞Th1/Th2在呼吸系统疾病中的作用受到较多重视.我们的试验通过测定外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4) 水平来间接反映Th1/Th2细胞的活性,探讨慢性支气管炎(慢支)及哮喘中Th1/Th2亚群的失衡情况,并观察地塞米松(DXM)、结核菌素多糖核酸(BCGPNS)对其活性的影响.
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活菌卡介苗对支气管哮喘小鼠白细胞介素-17和辅助性T淋巴细胞17的影响
支气管哮喘(以下简称哮喘)是严重威胁人类健康的一种慢性疾病,其发病机制复杂,迄今尚未完全明确.随着研究的深入,人们发现单纯用Th1/Th2失衡理论不足以解释哮喘发病的免疫学机制,尤其是发现调节性T细胞和Th17与自身免疫病和哮喘等慢性炎症的发生密切相关.Lee等[1]发现,在实验性自身免疫性脑脊髓炎等动物模型中,活菌卡介苗接种能抑制Th17所致的炎症反应.也有研究发现,IL-17与气道高反应性密切相关,且卡介苗接种组和结核菌培养上清液接种组小鼠血清IL-17水平远远低于正常组和哮喘组[2].本研究通过观察卡介苗干预对哮喘小鼠IL-17分泌及Th17的影响,探讨其可能的作用机制,从而为哮喘防治提供一些参考.
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卵巢癌肿瘤血管形成的研究进展
肿瘤血管形成是指新生血管在肿瘤内或向肿瘤内生长的过程。肿瘤生长离不开血管形成,肿瘤血管形成在肿瘤治疗中的作用日益受到关注。目前,已有多种抑制肿瘤血管形成的药物进入Ⅰ~Ⅲ期临床试验,并取得了良好的效果。现将卵巢癌肿瘤血管形成的研究进展作一综述。 一、卵巢癌肿瘤血管形成的研究概况 卵巢癌是女性生殖道肿瘤中死亡率高的疾病,其转移多以种植及淋巴途径为主,少见血行转移,但多年来,研究者们一直试图了解肿瘤血管形成在卵巢癌中的确切价值。 Weidner等[1]提出,肿瘤微血管密度(MVD)能较好地反映血管形成活性。Ishiwata等[2]在研究中发现,HTOA、HUOA、HTBOA等10种卵巢癌细胞株均有程度不等的促血管形成活性,其培养上清液能刺激内皮细胞增殖。Hollingsworth等[3]以CD34作血管形成标记物研究了43例卵巢癌患者后认为,MVD与卵巢癌预后密切相关,高MVD患者的疾病缓解率及生存率均低于低MVD者。
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乙肝病毒相关性肾炎外周血单个核细胞因子的变化及其对大鼠蛋白尿的影响
乙型肝炎(简称乙肝)病毒相关性膜性肾炎(HBV-MN)是儿童继发性肾病综合征的常见病因之一,临床上多表现为肾病综合征或肾病样蛋白尿.其蛋白尿形成机制尚未明确.我们测定了HBV-MN外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液的细胞因子变化,并将其注入大鼠尾静脉,以观察对大鼠尿蛋白排泄的影响.
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HLA-G在人类早期胚胎中的表达及应用价值
人类白细胞抗原(HLA)G能表达于人类胚胎滋养层细胞,并参与妊娠期免疫调控. HLA-G可通过调节细胞因子释放来诱导免疫耐受性的产生,调控滋养层细胞的侵入能力并且促使子宫螺旋动脉血管的重塑,促进胚胎成功着床和维持妊娠. HLA-G在人类卵母细胞及早期胚胎2 细胞至囊胚阶段均有表达,并与胚胎分化程度相关;分泌可溶性HLA-G的胚胎在体外受精-胚胎移植中的临床妊娠率和种植率较高,胚胎培养上清液中可检测到HLA-G,含量受检测方法、灵敏度等因素影响;HLA-G结合形态学评分可更好地预测胚胎发育潜能,有望成为胚胎质量评估的可靠生化指标.
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细胞间粘附分子-1与肝癌诊断及预后
细胞间粘附分子-1(ICAM-1)是由19号染色体基因组编码的一种单链跨膜糖蛋白,属粘附分子免疫球蛋白超家族(IgSF)成员之一,由5个Ig样功能区组成,其分子量为80~110KD,可随分布细胞种类的不同而有差异,这种差异主要是因为该分子的糖基化程度不同所致.ICAM-1分布于多种细胞表面,即组织中细胞膜表面ICAM-1,炎性细胞因子如IL-1、IFN-r、TNF-α等可调节其表达.近年来发现正常人血清中存在循环ICAM-1(cICAM-1),有肿瘤细胞株培养上清液中的ICAM-1又称为可溶性ICAM-1(sICAM-1).本文就ICAM-1与肝癌的诊断、治疗、预后间关系作一综述.
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口腔扁平苔藓Th细胞亚群功能状态的初探
口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种常见的口腔粘膜的慢性炎症性疾病,为T淋巴细胞介导的免疫反应[1],CD4+辅助性T细胞(T helper cell, Th)在OLP的发病机制中起着重要的作用[2].本研究通过观察OLP患者外周血Th细胞亚群CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+表达的变化,检测OLP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在植物血凝素刺激下培养上清液中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量及培养细胞中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达水平,探讨OLP患者Th细胞亚群的功能状态.