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MAGE-3抗原冲击外周血单个核细胞诱导抗肿瘤免疫应答
MAGE-3基因的表达产物是一种肿瘤排斥抗原,在抗肿瘤免疫治疗中可作为靶抗原.本实验以原核表达GST-MAGE-3融合蛋白,体外观察MAGE-3蛋白抗原冲击外周血单个核细胞(Peripharal blood mononuclear cells,PBMCs),能否诱导特异性的抗肿瘤免疫应答.
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卡介菌多糖核酸和地塞米松对口腔扁平苔藓TH1/TH2细胞因子的调节作用
口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)是T淋巴细胞介导的免疫反应,其主要病理变化为固有层大量的T淋巴细胞呈带状浸润[1].卡介菌多糖核酸 (Bacillus Calmette-Guerin polysaccharide nucleic acid, BCG PSN)是从卡介菌中经热酚法提取的一种具有免疫调节功能的免疫调节剂,对慢性支气管炎、哮喘等疾病有较好的疗效.本研究拟通过观察BCG PSN和地塞米松对OLP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)IFN-γ和IL-4的调节作用,探讨OLP患者的TH1/TH2免疫应答模式及BCG PSN和糖皮质激素对OLP患者TH1/TH2细胞因子的影响,为临床应用提供依据.
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CPG-ODN介导活化的人免疫细胞体外抗乙型肝炎病毒作用
目的:探讨CpG-ODN活化的人外周血单个核细胞(PBMC)体外对HBV复制和表达的抑制作用.方法:CpG-ODN体外刺激PBMC,ELISA测培养液IFN-α及IFN-γ的分泌;将CpG-ODN介导活化的PBMC与HepG2.2.15细胞按一定比例共孵育1d、2d和3d后,ELISA检测培养上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,荧光定量PCR检测HepG2.2.15细胞内HBV DNA和HBV mRNA的含量;并以MTT和酶学检测活化的PBMC对HepG2.2.15细胞的杀伤作用.结果:CpG-ODN有效诱导PBMC分泌IFN-α和IFN-γ;CpG-ODN本身虽不能直接抑制HBV的复制,但由CpGODN介导活化的PBMC却能显著减少HepG2.2.15细胞对HBsAg、HBeAg的分泌,同时对HBV DNA和HBV mRNA的抑制作用亦明显增强;CpG-ODN介导活化的PBMC对HepG2.2.15的杀伤作用增强.结论:CpG-ODN可通过活化机体免疫细胞,而具有明显的抗HBV复制和表达作用.
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IFN治疗慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞HCV的变化
目的:应用荧光定量反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)及免疫组化技术研究慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)丙型肝炎病毒感染并评价干扰素对外周血单个核细胞中HCV的作用.方法:20例慢性丙型病毒性肝炎患者血浆、PBMC中的HCV RNA含量应用荧光定量RT-PCR检测,应用免疫组化技术检测HCV NS3在PBMC中的表达;荧光定量RT-PCR法检测8例血浆及PBMC均阳性患者接受α-2b干扰素治疗;对照组6例血浆及PBMC荧光定量RT-PCR法检测均阳性,未用干扰素治疗.比较治疗前后用药组与对照组血浆及PBMC中HCV RNA载量变化.应用双侧Wilcoxon秩和检验(wilcoxon 2-sample test),确切概率法(fisher'sexacttest)进行数据分析.结果:20例中荧光定量RT-PCR检出血浆15例、PBMC9例阳性;免疫组化法检出7例PBMC阳性.应用确切概率法分析PBMC感染HCV RNA与血浆中病毒水平无相关性(P=0.319).8例患者接受干扰素治疗后其血浆及PBMC中HCV RNA载量均下降,与治疗前相比有显著性差异(aP=0.0 017,bP=0.0 059);与对照组相比治疗后差异有显著性(cP=0.0 042,dP=0.0 155).结论:PB MC是丙型肝炎病毒肝外复制并表达的场所.PBMC感染HCV RNA病毒载量与血浆病毒水平无关.干扰素对PBMC感染的HCVRNA有清除作用.
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转导单链免疫毒素基因的PBMCs对人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤活性
目的:用携带分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因(sFv-TNF-α)的重组逆转录病毒感染人外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMCs),使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv-TNF-α融合蛋白,观察转导的PBMCs对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用.方法:用感染生重组病毒产生细胞C22(PA317/PST)产生的病毒上清转导人PBMCs,采用PCR和RT-PCR方法对转导的PBMCs(PBMCs/PST)进行DNA和mRNA水平的分析.PBMCs/PST与SMMC-7721共培养,MTT法检测PBMCs/PST表达产物对肝癌细胞的体外杀伤活性.结果:PCR及RT-PCR结果显示PBMCs/PST中扩增出外源目的基因对应的电泳条带.MTT法检测结果,分泌型抗肝癌单链免疫毒素对体外培养肝癌细胞SMMC-7721的杀伤率为(38.2±6.7)%.结论:分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因可以在PBMCs中整合并稳定表达,其分泌的表达产物对 SMMC-7721具有一定的体外杀伤作用.
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抗肝癌单链免疫毒素基因修饰的PBMCs在动物体内的抑瘤作用
目的:用携带分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因(sFv-TNF-α)的重组逆转录病毒感染人外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMCs),使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv-TNF-α融合蛋白,观察转导的PBMCs/PST静脉注射后对荷肝癌裸鼠的抑瘤作用.方法:分离正常人PBMCs并用PHA和IL-2进行体外刺激培养,用感染性重组病毒产生细胞C22(PA317/PST)产生的病毒上清转导后,经尾静脉输入荷肝癌裸鼠体内,注射细胞数为每只1×106(0.2 mL),每5 d注射1次,共注射3次.定期观察记录肿瘤生长情况,注射3次后处死,取出瘤组织称质量、记录,进行统计学处理,并制备石蜡切片进行常规HE染色及免疫组化染色观察.结果:实验组肿瘤生长速率为(20.8±4.9)mg/d,对照组为(28.5±6.7)mg/d,经t检验,P<0.05.结论:经重组逆转录病毒转导的PBMCs/PST在课鼠体内对人肝癌细胞系SMMC-7721移植瘤具有一定的生长抑制作用.
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博尔纳病病毒感染和帕金森病
博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)是非溶细胞性嗜神经病毒,能感染多种动物并引起中枢神经系统功能障碍为特征的博尔纳病(Borna disease, BD)[1].我们在进行中国人神经精神疾病与BDV感染关系的研究中,在7例帕金森病(PD)患者周围血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC )中检出BDV P24基因片段1例.现初步报道,并探讨BDV感染与PD发病的可能关系.
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不同抗原刺激对哮喘儿童外周血单个核细胞表达CD19、CD80和分泌细胞因子的影响
我们对哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)予以卡介苗(BCG)、含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)、对照寡脱氧核苷酸(对照ODN)和尘螨(Dp)刺激后,检测PBMC分泌细胞因子和表达CD19、CD80的情况,探讨CD80在哮喘发病中的作用和免疫调节剂对它的影响.
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热性惊厥患儿外周血单个核细胞间黏附分子1和淋巴细胞功能相关抗原1的表达及临床意义
在各类小儿惊厥中,热性惊厥(FS)约占30%[1],患病率为2%~5%,呈明显的年龄依赖性,多发生于3个月~6岁的儿童.近年来认为免疫网络调控异常是FS发病机制之一.
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脑梗死患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达
应用酶联免疫吸附(ELISA)法和定量聚合酶链反应(PCR)技术,观察脑梗死患者不同期血浆巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的浓度和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)MIF mRNA的表达水平,探讨MIF在脑梗死病理过程中的变化.
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Objectives TO investigate the effect of advanced glycosylation end products (AGEs) on the activity of protein kinese C (PKC) in human peripheral bloodmononuclear Cells (PBMC) and to observe whether aminoguanidine (AG) can influence the effect of AGEs.Methods After PBMC were isoiated from human peripheral blood and incubated with different concentrations of AGEs-BSA for various periods, total PKC activity in PBMC was determined by measuring the incorporation of 32P from [γ-32P] ATP=into a special substrate using Prornega PKC assay kit.Results AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC from 83.43±6.57 pmol/min/mg protein to 116.8±13.82 pmol/min/mg protein with a peak at 15 min.AGEs-BSA also increased the total PKC activity in a concentration-dependent manner from 83.1±6.4 pmol/min/mg protein(control) to 119.1±13.3 pmol/min/mg protein (control vs AGEs-BSA 400 mg/L, P<0.01). Furthermore, AGEs-BSA induced an elevation of PKC activity in a glycosylating time-related manner,from 80.9±8.2 (control) to 118.3±11.5 pmol/min/mg protein (glycasytation for 12 wk, P<0.01). The total PKC activity stimulated by AGEs-BSA pretreated with AG (100, 200 mg/L) was markedly lower than that of AGEs-BSA group not pretreated with AG ( P<0.05, P<0.01).Conclusions AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC in a concentration and incubation time dependent manner. The ability of AGEs-B.SA to stimulate PKC activity was markedly decreased by pretreatment of AGEs-BSA with AG.
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口腔扁平苔藓Th细胞亚群功能状态的初探
口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种常见的口腔粘膜的慢性炎症性疾病,为T淋巴细胞介导的免疫反应[1],CD4+辅助性T细胞(T helper cell, Th)在OLP的发病机制中起着重要的作用[2].本研究通过观察OLP患者外周血Th细胞亚群CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+表达的变化,检测OLP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在植物血凝素刺激下培养上清液中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量及培养细胞中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达水平,探讨OLP患者Th细胞亚群的功能状态.
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浓缩自体骨髓移植治疗非创伤性股骨头坏死的围手术期护理
非创伤性股骨头坏死(non-traumatic osteonecrosis of the femoral head,NONFH)多发生于中青年,疾病的进展常导致髋关节功能障碍.采用髓心减压植入含有高浓度自体骨髓血单个核细胞(bone-morrow mononuclear cells,BMMCs)的浓缩自体骨髓对治疗ONFH可能会有一定益处.我科自2005年4月至今采用此技术治疗ONFH患者数百例,本文对其中105例进行分析、总结,将围手术期护理体会报告如下.
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保存全血中泛素对人外周血单个核细胞分泌细胞因子的影响
同种异体输血产生的免疫调节不良作用,称为输血相关免疫调节(Transfusion-Related Immunomodulation,TRIM)[1].我们通过体外观察保存全血血浆中泛素对LPS刺激的人外周血单个核细胞(PBMNC)分泌细胞因子的影响,探讨其在TRIM中的作用.
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从单核细胞中分离流行性出血热病毒
自1978年以来,国内外先后以A549细胞和Vero传代细胞从疫区鼠肺和患者血中分离得到病原[1-4].本研究系用Vero细胞从陕西省冬季散发型流行高峰期的流行性出血热(EHF)患者血清和单核白细胞(包括单核细胞和淋巴细胞)中分离得到EHF病毒.
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肝硬化外周血单个核细胞Toll样受体2表达及其基因多态性研究
肝细胞、库普弗细胞等表达多种Toll样受体(Toll-like receptor,TLR),其信号传导通路及基因多态性在多种炎性损伤中起重要作用[1].本研究探讨中国汉族乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)TLR2表达及其基因多态性与肝硬化内毒素血症损伤的关系.
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系统性硬化病患者外周血CD4+T细胞CD40L DNA甲基化研究
[目的]探讨系统性硬化病(SSc)患者外周血CD4+T细胞中CD40L基因调控序列的甲基化状态.[方法]密度梯度离心法分离SSc患者(女16例,男10例)和健康对照组(女15例,男10例)外周血单一核细胞,磁珠分选CD4+T细胞,提取DNA,亚硫酸氢钠处理DNA,巢式PCR扩增CD40L基因调控序列片段(包括启动子和增强子),转化进入大肠杆菌,每个样本挑取8个克隆进行测序.[结果]亚硫酸盐基因组测序结果显示,健康女性CD40L基因调控序列一半为甲基化,一半为去甲基化,女性SSc患者CD40L基因启动子和增强子区域平均甲基化水平均显著低于女性健康对照(P值均< 0.01);男性SSc患者和男性健康对照CD40L基因启动子和增强子区域几乎全部为去甲基化,两组平均甲基化水平差异无统计学意义(P值均>0.05).[结论]女性SSc患者CD4+T细胞中失活的X染色体上CD40L调控序列低甲基化,可能是导致CD40L在女性SSc患者CD4+T细胞中过度表达的原因之一.
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系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Th17相关转录因子RORγt mRNA的表达
目的 探讨Th17细胞在系统性红斑狼疮(SLE)免疫炎症反应中的作用机制.方法 逆转录PCR(RT-PCR)检测12例活动期SLE患者、9例非活动期SLE患者和12例正常人对照PBMC中维A酸相关孤儿核受体γt (RORγt) mRNA表达水平.活动期SLE患者组、非活动期SLE患者组与正常人对照组PBMC中RORγt mRNA表达水平采用近似F检验(Welch方法)和校正的多重比较方法(Dunnett's T3)进行分析.结果 活动期SLE患者、非活动期SLE患者及正常人对照RORγt mRNA表达水平分别为1.06±0.44,0.65±0.25,0.22±0.08,3组之间差异有统计学意义(F=23.286,P< 0.01).其中活动期SLE患者组显著高于非活动期患者组(F=2.453,P<0.05)及正常人对照组(F=6.504,P<0.05),非活动期SLE患者组显著高于正常人对照组(F=3.343,P<0.05).SLE患者RORγt mRNA表达水平和SLEDAI之间存在显著正相关(rp=0.623,P< 0.01).结论 证实SLE患者存在Th17细胞极化现象,拮抗调控Th17细胞分化的关键转录因子RORγt能减轻SLE的免疫炎症反应而达到治疗SLE的目的.
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寻常型白癜风患者外周血单一核细胞、血清及皮肤组织液中巨噬细胞游走抑制因子检测
目的 检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在寻常型白癜风患者外周血单一核细胞(PBMC)、血清及皮肤组织液中的表达,探讨其临床意义.方法 应用实时逆转录PCR及酶联免疫吸附试验检测39例寻常型白癜风患者与31例性别、年龄相匹配的正常人对照者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清、皮肤组织液中MIF的含量.结果 寻常型白癜风患者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清、皮肤组织液中MIF的含量分别为6.70(2.64 ~ 8.65)、32.76(10.67~40.98) μg/L、167.80(107.40 ~ 219.60) μg/L,显著高于正常人对照组(Z值分别为5.895、5.936、4.715,P值均<0.05);进展期白癜风患者分别为7.89(3.89 ~ 9.12)、37.80(29.50 ~ 45.70) μg/L、211.50( 131.70 ~ 248.75) μg/L,显著高于稳定期患者(Z值分别为2.213、2.141、2.100,P值均<0.05).白癜风患者PBMC中MIF mRNA的表达水平及血清中MIF的含量与疾病严重程度评分呈正相关(r值分别为0.486、0.453,P值均<0.05).结论 MIF可能在寻常型白癜风的发病过程中发挥一定作用.