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安颤灵对帕金森病模型旋转行为及UPS功能影响的研究
目的 探讨中药安颤灵对帕金森病(PD)大鼠模犁泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能的影响.方法 采用lactacystin立体定向注射人大鼠左侧黑质致密部和黑质纹状体通路,建立PD大鼠模型.经行为测试造模成功的PD模型大鼠27只,随机分为模删组与中药组,每组10只,同时另取10只脑内注射牛理盐水未出现旋转行为的大鼠作为正常对照组.正常对照组和模型组用牛理盐水灌胃,中药组同时间等体积安颤灵灌胃,共5 W.给药后第1、3、5周分别行阿朴吗啡(APO)诱导,观察记录其旋转行为及其他异常行为.给药结束后每组随机取6只大鼠行免疫组织化学检测,观察各组α-突触核蛋白(α-synuclein)、泛素(ubiquitin)蛋白表达.结果 中药组对APO诱导的旋转行为有明显抑制作用,与模型组相比较,其旋转圈数明显减少(P<0.01).与模型组相比,中药组α-synu-clein与硫磺素S、ubiquitin与硫磺素S荧光舣标染色阳性均较弱.结论 安颤灵可改善PD大鼠旋转行为及UPS的功能.
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苦参碱对多发性骨髓瘤细胞凋亡及泛素蛋白酶体通路的影响
目的 观察苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株凋亡的影响及可能作用机制.方法 以不同浓度的苦参碱(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml)作用于人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226和U266,另设蛋白酶体抑制剂MG132为阳性对照.采用MTT法测定苦参碱对两种细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测两种细胞的早期凋亡水平,Western-blot法检测两细胞株泛素(Ub)、20S核心颗粒(pAb)以及NF-κB信号通路相关蛋白(p-NF-κB p65B、IκBα、p-IκBα、IKKα)表达变化. 结果 在同等浓度苦参碱作用下,两细胞株细胞在48h的增殖抑制率较本浓度24h时明显增加(P＜0.05或P＜0.01).随着苦参碱浓度的递增,各细胞株的凋亡率均逐渐增加(P＜0.05或P＜0.01).随着苦参碱作用浓度的递增,RPMI 8226细胞Ub水平明显上调,同时pAb呈进行性下降;而U266细胞Ub表达无明显变化,但pAb水平同样表达下降.苦参碱能明显抑制两细胞株胞核内p-NF-κB p65B以及胞浆内p-IκBα蛋白表达水平,上调RPMI 8226胞浆内IκBα表达,且以浓度为2.0 mg/ml时作用明显(P＜0.05或P＜0.01). 结论 苦参碱能促进多发性骨髓瘤细胞的凋亡,并且有一定的浓度时间依赖性,其中的关键因素可能是苦参碱具有抑制蛋白酶体活性的作用.
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泛素与EB病毒核抗原1融合基因的DNA免疫研究
构建了EB病毒核抗原1(EBNA1)基因的表达质粒pCI-EBNA1和泛素(ubiquitin,Ub)与EBNA1融合基因的表达质粒pCI-Ub-EBNA1.间接免疫荧光和Western blot分析表明,两重组质粒转染HeLa细胞后均能瞬时表达.两种质粒DNA肌肉注射免疫Balb/C小鼠后,分别检测小鼠血清抗EBNA1的抗体和特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,比较单基因与融合基因DNA免疫所诱生免疫应答的强度.结果显示:二者诱生抗体的效率无明显差别,但泛素的融合使得针对EBNA1的特异性CTL反应明显增强.
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蛋白酶体抑制剂ALLN促进α-synuclein转染SH-SY5Y细胞内包涵体形成
目的研究蛋白酶体功能障碍在帕金森病发病机制中的作用.方法采用蛋白酶体抑制剂ALLN(N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)处理α-synuclein转染的体外培养SH-SY5Y细胞.HE染色和免疫荧光细胞化学检测转基因表达产物在细胞内的积聚,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果α-synuclein可在细胞内自发蓄积形成包涵体,ALLN可明显促进包涵体形成;该包涵体呈α-synuclein免疫反应阳性而泛素免疫反应阴性;含有包涵体的细胞可同时表现为TUNEL反应阳性.结论蛋白酶体功能障碍可能在帕金森病发病过程中发挥重要作用.
关键词： α-synuclein 泛素 蛋白酶体 凋亡 帕金森病 -
泛素及其类似物的蛋白质组学研究进展
作为蛋白质的翻译后修饰,泛素及其类似物(ubiquitin-like modifiers,Ubls)对底物的修饰被认为是真核细胞内一种重要的调节机制.根据以往的研究表明,泛素/ubls与各种各样的底物蛋白形成共价结合以后,通过介导蛋白质降解、改变蛋白质的细胞定位、改变蛋白质的酶活性、改变蛋白质之间的相互作用等影响这些底物的功能与活性.可以想象,通过影响成百上千的不同底物蛋白,泛素和Ubls在各个细胞生理活动中都发挥着重要的调节作用.运用蛋白质组学的方法对泛素/Ubls进行研究,可以发现更多新的泛素和ubls的底物,帮助人们从整体水平上了解泛素/Ubls这个复杂的修饰系统.而利用质谱技术精确的鉴定泛素/Ubls在底物上的修饰位点则为进一步研究修饰发生的分子机制,以及对底物蛋白功能的影响提供了明确的线索和方向.到目前为止,已有越来越多的科学家们对泛素/Ubls修饰的蛋白质组学感兴趣并致力于这方面的研究,取得了很大进展.本文对泛素及Ubls的蛋白质组学研究进展进行了归纳和总结.
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Skp2和p27kip1与肿瘤间关系的研究进展
目的:探讨Skp2和p27kip1与恶性肿瘤发生、发展的关系.方法:查阅相关中外文献,分析Skp2和p27kip1的生物学特性和功能以及与常见恶性肿瘤的关系.结果:Skp2通过泛素蛋白酶体途径降解磷酸化的p27kip1,促使细胞由G1期进入S期, 导致肿瘤的发生.结论:Skp2-p27kip1可能代表一种致癌通路,其与肿瘤的关系正受到越来越多的重视.
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泛素-蛋白酶体途径的组成及其生物学作用
泛素-蛋白酶体途径是近20年来发现的一种高效蛋白分解途径,其生物学作用非常广泛.本文简要介绍泛素-蛋白酶体途径的组成、作用机制、泛素-蛋白酶体途径与骨骼肌蛋白降解、抗原提呈、细胞周期调节、转录因子代谢、临床疾病间的关系,以及在药物开发和临床治疗中的意义.
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神经变性疾病相关蛋白质在老年尸检脑组织中的表达
目的 探讨老龄脑组织神经变性疾病相关蛋白质异常沉积与脑功能障碍间的关系.方法 对2005年1月至2006年12月解放军总医院尸检老龄脑组织进行beta-amyloid(Aβ)、tau、α-synuclein和泛素免疫组织化学染色,采用the Consortium to Establish a Registry for Alzheimer's Disease (CREAD)方法半定量观察Aβ阳性核心斑,Braak方法对tau阳性神经原纤维缠结(NFT)和α-synuclein阳性路易小体进行分级,分析其与认知功能及运动功能障碍之间的关系.结果 该院连续尸检的年龄在78至95岁16例脑组织中,发现Aβ阳性核心斑13例,相当于CREAD稀少2例、中度2例、重度9例.Aβ阳性脑淀粉样血管变性8例,其中轻度6例,中、重度2例;tau阳性NFT 12例,其中Braak分期Ⅰ～Ⅱ期6例、Ⅲ～Ⅳ期4例、Ⅴ～Ⅵ期2例;CREAD重度Aβ阳性核心斑,同时并存新皮质大量tau/泛素阳性神经炎斑以及tau阳性NFT Braak分期Ⅳ期以上的5例病例,临床均存在认知功能障碍;另外4例CREAD重度Aβ阳性核心斑病例中,1例合并脑干α-synuclein阳性路易小体,临床存在中度认知功能障碍,其余3例均未出现认知功能障碍;α-synuclein阳性路易小体病4例,临床上均存在不同程度帕金森样运动功能障碍症状;泛素阳性结构13例,见于神经炎斑、NFT、路易小体等结构.结论 Aβ蛋白沉积是正常脑老化及认知功能障碍患者的脑组织重要标志性蛋白之一;CREAD重度Aβ阳性核心斑同时并存BraakⅣ期以上tau阳性NFT与阿尔茨海默病认知功能障碍密切相关;脑干大量α-synuclein阳性路易小体提示患者临床上可能存在帕金森样运动障碍症状;老龄脑组织常见泛素阳性表达,但缺乏疾病特异性.
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泛素C-末端水解酶-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中的表达
肿瘤转移机制及防治已成为当今肿瘤研究领域的热点.高淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)、低淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-P)是由大连医科大学病理教研室自行建立的肿瘤转移机制实验模型.它们是一对高度同源的来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆,经615小鼠局部皮下注射后,特异地向引流淋巴结转移.
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脓毒症呼吸肌蛋白降解代谢的变化
目的探讨脓毒症早期呼吸肌蛋白降解代谢变化的规律及机制.方法45只雄性Wistar大鼠随机分为烫伤组(B组)、脓毒症组(S组)及对照组(C组).B组大鼠使用沸水致背部30%总体表面积Ⅲ度烫伤,S组大鼠以同样方法烫伤后,立即腹腔注射内毒素(6 mg/kg)制成烧伤脓毒症动物模型.分别于伤后2 h和6 h,采用高效液相-荧光法检测胸大肌、肋间肌和膈肌内三甲基组氨酸(3-MH)的含量,Northern杂交检测泛素、蛋白酶体C2亚基mRNA表达的变化.结果S组伤后2 h和6 h三处肌肉组织内3-MH的含量较B组和C组均显著升高(P<0.05),B组伤后2 h胸大肌和肋间肌内3-MH的含量较C组显著升高(P<0.05),伤后6 h三处肌肉组织内3-MH的含量均较C组显著升高(P<0.01).S组伤后2 h和6h三处肌肉组织内泛素mRNA和蛋白酶体C2亚基mRNA表达较B组和C组均显著增强(P<0.01),B组伤后2 h和6 h三处肌肉组织内泛素和蛋白酶体C2亚基mRNA表达较C组均显著增强(P<0.05).结论严重烫伤特别是合并内毒素攻击后早期,呼吸肌细胞泛素-蛋白酶体途径活性呈现持续增强现象,肌纤维蛋白降解率也显著增加.这对于进一步从蛋白降解角度探讨烧伤脓毒症时呼吸肌功能异常的机制有参考意义.
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督脉灸对衰老模型大鼠骨骼肌泛素蛋白酶体途径的影响
目的 探讨督脉灸改善骨骼肌衰老的泛素蛋白酶体途径机制.方法 Sprague-Dawley大鼠30只随机分为空白组、模型组和督脉灸组各10只.模型组和督脉灸组每天颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg/kg,共6周,空白组皮下注射等量生理盐水.随后督脉灸组艾灸大椎穴至腰俞穴之间督脉,每天20 min,共20 d.剥离双侧竖脊肌,Western blotting检测泛素、肌环指蛋白1(MuRF1)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx)蛋白水平.结果 与空白组相比,模型组泛素、MuRF1、MAFbxD-半乳糖蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,督脉灸组泛素、MuRF1和MAFbx蛋白表达下降(P<0.05).结论 督脉灸可通过对泛素蛋白酶体途径的调控,减少蛋白降解,延缓骨骼肌萎缩.
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有氧康复运动疗法对冠脉成形术后患者血清超氧化物歧化酶活性及泛素水平影响的临床研究
目的:探讨有氧康复疗法对冠心病冠脉成形术(PCI)后患者血清超氧化物歧化酶活性、泛素水平及炎性因子(NF-κb)的影响.方法:选择96例冠心病接受PCI患者.分为有氧康复运动组(治疗组)48例和单纯PCI对照组48例.6、12个月后均采用了Bruce方案亚极量分级运动试验进行康复评定,并测定血清超氧化物歧化酶SOD活性、NF-κb及泛素水平的表达,彩色多普勒超声探测肱动脉内皮功能.12个月后行冠脉造影术判定相关血管的动脉粥样硬化进展情况.结果:随访12个月后,①与对照组比较,治疗组患者的血清SOD活性显著升高(178±19μl vs 163±21μl,P＜0.01)、单核细胞NF-κb mRNA表达(0.79±0.7 vs 1.38±0.8)及泛素水平(3.7±1.8ng/ml vs 6.3±1.9,P＜0.01)显著降低；②运动试验评定:治疗组运动时间(16.3±1.5min vs 13.6±1.7min,P＜0.01)、运动耐量(17.1±1.5METs vs 14.7±1.8METs,P＜0.01)均显著高于对照组,自感用力度分级(9.3±0.6 vs 12.2±1.9,P＜0.01)显著低于对照组；③治疗组内皮依赖性舒张功能指标血流介导的血管舒张功能(FMD)较对照组明显改善(8.3％±1.9％vs 6.0％±1.7％,P＜0.01).结论:冠心病PCI后患者经有氧康复运动治疗可提高血清SOD活性,使泛素水平明显下调,降低NF-1cb的表达,并能改善血管内皮功能,有助于减缓动脉粥样硬化的进展.
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胃癌患者肌肉组织中泛素表达与营养状况和预后的关系
目的 研究胃癌患者肌肉组织中泛素(Ub)表达与患者营养状况和预后的关系.方法 采用逆转录PCR、Western blot检测102例胃癌和53例腹腔良性疾病患者腹直肌中Ub mRNA和蛋白的表达.结果 胃癌患者腹直肌中Ub mRNA表达较腹腔良性疾病患者明显升高(4.10±1.04比3.17±0.32,t=7.386,P=0.000);胃癌患者腹直肌中Ub蛋白表达较腹腔良性疾病患者明显升高(0.151±0.058比0.084±0.046,t=7.275,P=0.000);胃癌患者腹直肌中Ub mRNA表达升高与患者体质量丢失、体质量指数、营养预后指数、血清白蛋白及血红蛋白水平的下降有关(x2分别为11.780、6.557、11.849、15.742、8.360,P分别为0.001、0.010、0.001、0.000、0.004);胃癌患者腹直肌中UbmRNA表达升高与患者的性别、年龄、肿瘤大小和Borrmann分型无关(x2分别为0.038、1.978、0.486、1.483,P分别为0.774、0.160、0.486、0.223),而与胃癌病理类型、淋巴结转移及TNM分期有关(x2分别为11.260、9.362、20.517,P分别为0.004、0.002、0.000).胃癌患者腹直肌中UbmRNA的表达水平与患者的生存率有关(x2=5.775,P=0.016).结论 胃癌患者腹直肌中Ub mRNA和蛋白表达较非肿瘤患者明显升高,且Ub mRNA表达升高与患者的营养状况和预后有关,Ub可能在癌性恶液质的发展过程中起重要作用.
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联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
目的 构建含有泛素(ubiquitin , Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0 . 7和GcS0 . 7重组腺病毒. 方法 通过PCR扩增获得Ub基因, 分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7和pShuttle-pCAG-GcS0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体, 得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-Ub-GnS0.7和rAd-pCAG-Ub-GcS0.7,使用Pac Ⅰ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)检测表达产物. 结果 限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确. IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达. 结论 成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7和GcS0.7重组腺病毒, 为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础.
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辛伐他汀抑制大鼠颈总动脉内膜增殖以及泛素、大鼠蛋白酶体第3亚基表达
背景泛素蛋白酶体途径(UPP)参与细胞内80%～90%蛋白质的降解,是细胞功能调节的重要途径之一.泛素(ubiquitin),大鼠蛋白酶体第3亚基(RC3)是UPP发挥功能作用的两个关键环节.目的观察辛伐他汀对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管内膜增生及对泛素(ubiquitin)、大鼠蛋白酶体第3亚基(RC3)表达的影响,探讨其抑制内膜增生的可能机制. 方法 雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8),包括对照组、辛伐他汀低剂量组[0.4 mg/(kg·d)]、中剂量组[4 mg/(kg·d)]、高剂量组[40 mg/(kg·d)],连续灌胃给药28 d.在大鼠颈总动脉球囊损伤模型上,苏木素伊红(HE)染色光镜下观察血管内膜增生情况;应用RT-PCR观察泛素,RC3 mRNA表达情况,免疫组化方法观察泛素蛋白表达情况. 结果 球囊损伤后血管内膜增生明显,辛伐他汀呈剂量依赖性抑制球囊损伤后血管内膜增生和泛素、RC3的表达.高剂量[40 mg/(kg·d)]辛伐他汀抑制作用明显,血管内膜与中膜厚度的比值、泛索mRNA、RC3 mRNA及泛素蛋白表达分别下降了50.2%、63.9%、60.3%和60.5%(P＜0.01). 结论 大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生明显,辛伐他汀呈剂量依赖性地抑制球囊损伤后血管内膜的增生,可能与其抑制泛素、RC3表达有关.
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热休克蛋白60与冠状动脉病变的联系及经皮冠状动脉介入治疗前后的变化
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白(stressprotein),是一组具有重要生理功能、进化上高度保守的蛋白质分子家族,根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP和泛素等.
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泛素在冠心病患者外周血炎性细胞中的表达
目的 通过检测冠心痛患者外周血炎性细胞泛素表达水平,评价泛素与冠心病的相关性.方法 选择经冠状动脉造影确诊的冠心痛患者120例.男性86例,女性34例,平均年龄(60,4±7.8)岁.按临床表现分为稳定性心绞痛组(SAP组)、不稳定性心绞痛组(UAP组)、急性心肌梗死组(AMI组),每组40例.同期选择经冠状动脉造影排除冠心病的40例患者为对照组.用RT-PCR检测法及Western blot方法 检测4组患者外周血单核细胞和淋巴细胞泛素的mRNA和蛋白表达水平.结果 冠心病各组患者外周血泛素mRNA和蛋白表达水平均明显高于时照组(P＜0.05),以对照组泛素的mRNA和蛋白表达水平为参照,SAP组、UAP组、AMI组泛素的mRNA和蛋白表达分别为对照组的1.3、1.4倍;1.8、1.6倍;2.2、1.9倍.随病情加重泛素表达量进一步增加.结论 泛素可能在冠心病发生、发展中起重要作用.
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泛素蛋白酶体系统与心力衰竭
心力衰竭（heart failure ，HF）是由于心脏发生了结构和（或）功能异常，损害了心室的充盈和（或）射血能力而导致的复杂临床综合征，是各种器质性心脏病的终末共同通路。随着医学技术的发展，一些心脏基础疾病如冠心病、高血压等治疗水平有明显提高，但H F的患者却仍以每年200万的速度递增，故其已成为心脏病治疗的后战场。泛素蛋白酶体系统（ubiquitin‐proteasome system ，UPS）是真核细胞内大多数蛋白质的降解通路，该系统的异常会导致许多疾病如肿瘤、神经变性疾病、自身免疫性疾病等的发生。近来研究发现，UPS与HF密切相关，可能参与了 HF的发展一些环节的调控。现就U PS与H F的关系作一综述。
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帕金森病发病机制新进展
近年来，帕金森病相关神经退行性病变发病机制研究领域的进展颇多，其发病机制正被人们逐步破解。我们重点回顾了有可能在未来改变帕金森病治疗方案的相关基础研究。
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泛素在肺气肿小鼠骨骼肌中的表达和意义
目的 探讨泛素在肺气肿小鼠模型骨骼肌中的基因和蛋白水平变化及与骨骼肌细胞凋亡的关系.方法 采用单纯熏香烟法制作肺气肿小鼠模型,运用TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测上述组织泛素的基因及蛋白水平,结果以光度比值和平均光密度值表示.结果 肺气肿小鼠骨骼肌细胞凋亡增加,骨骼肌泛素的基因及蛋白水平分别为0.48±0.02,0.23±0.05,与正常组骨骼肌泛素的基因水平0.17+0.01和蛋白水平0.14±0.01相比,差异均有统计学意义(t=6.223、4.093,均P＜0.05).结论 肺气肿小鼠骨骼肌细胞的凋亡增加可能与泛素表达水平增加有关.
