首页 > 文献资料
-
百年传承“酶”好生活
一直以来,酶制剂都与我们的生活息息相关.作为一种蛋白质,酶存在于人体、动植物及微生物中.酶参与生物体的代谢、分解、合成等,促进生物体一切代谢反应.例如,胃里的食物能够转化成被消化吸收的形态,并终转化成能量,是依靠酶的作用.食品用酶制剂是指由动物或植物的可食或非可食部分直接提取,或由传统或通过基因修饰的微生物(包括但不限于细菌、放线菌、真菌菌种)发酵、提取制得,用于食品加工,具有特殊催化功能的生物制品(定义来源于《食品添加剂使用标准》 (GB 2760-2011附录E"食品添加剂功能类别").
-
转基因食品致敏性评价细胞模型研究进展
随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一.目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评价的现状,重点对细胞模型方面的研究进展进行了综述.
-
转基因大豆的PCR-免疫层析筛查方法研究初探
目的 建立转基因大豆的PCR-免疫层析(PCR-ICT)快速筛查新技术. 方法 利用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的筛查标记,根据其序列设计特异性引物和探针,分别用生物素和地高辛标记,用胶体金免疫层析技术检测并鉴定PCR产物. 结果 用新建立的PCR-ICT方法可以检出含0.5%转基因大豆的标准品,对大豆样品的检测结果与琼脂糖凝胶电泳检测结果一致. 结论 PCR-ICT方法通过DNA杂交和金标显色来同时检测、鉴定PCR产物,可以简便、快速地筛查转基因产品.
-
转基因食品胰蛋白酶抑制剂活性的测定
目的 通过测定转基因食品的胰蛋白酶抑制剂活性,为建立转基因食品营养评价标准提供数据.方法 首先通过探讨胰蛋白酶-底物-胰蛋白酶抑制剂的剂量反应关系,建立转基因食品胰蛋白酶抑制剂活性测定的佳反应体系,并以此为基础分析了部分转基因玉米、大豆的胰蛋白酶抑制剂活性及与亲本食品的差别.结果 所检转基因食品胰蛋白酶抑制剂活性大多与亲本食品差别不大,尽管个别产品出现胰蛋白酶抑制剂活性增高或降低现象,但都在可接受范围.结论 在规范检测技术前提下加强对非转基因食品基础数据建设对制定转基因食品营养评价标准十分必要.
-
转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型研究进展
随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一.目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型的研究进展进行了综述.
-
植物源高营养型转基因食品的研究进展
近年来植物源的高营养型转基因食品成为转基因技术研究的热点,旨在为消费者提供更富营养、高生物利用率及低致敏性的营养食品,为人类健康造福.本文对植物源高营养型转基因食品的发展现状、安全性问题进行了综述,并就我国转基因食品的发展进行了展望.
-
基因修饰内皮祖细胞在冠心病治疗中的研究进展
冠心病的发病机制复杂,其中一个重要的发病机制是冠状动脉内皮损伤和修复两者间的平衡受到破坏。目前关于冠心病治疗方法主要包括药物治疗、冠脉搭桥、支架介入等。内皮祖细胞在一定条件下能分化为内皮细胞,参与血管新生。但是内皮祖细胞在人体组织中含量极低,远不够为移植治疗所用。另外,有多项研究显示,年龄大、冠心病、糖尿病、高血压患者的内皮祖细胞相比正常者量更少,且其功能显著下降。近年有许多学者提出通过基因修饰的内皮祖细胞能解决上述问题。下面笔者为基因修饰内皮祖细胞移植治疗的研究予以综述,为临床治疗冠心病提供新思路。
-
VEGF165基因修饰脂肪干细胞对糖尿病大鼠骨缺损的修复研究
目的:探讨采用基因转染大鼠脂肪干细胞构建血管化组织工程的方法对糖尿病骨质疏松性骨缺损的修复效果.方法:选取雄性Wistar大鼠78只,体重180~220 g,其中72只通过化学药物(STZ)诱导法建立糖尿病动物模型,成模大鼠血糖值均≥16.7 mmol/L.将实验动物随机分为5组,正常对照组6只,其他实验组各18只.正常对照组:在正常大鼠骨缺损内植入经VEGF165基因修饰的脂肪干细胞;糖尿病组:单纯糖尿病骨缺损大鼠;生长因子组:在糖尿病大鼠骨缺损内单纯植入VEGF生长因子;干细胞组:在糖尿病大鼠骨缺损内单纯植入脂肪干细胞;实验组:在糖尿病大鼠骨缺损内植入经VEGF165基因修饰的脂肪干细胞.将5×106个VEGF165-ADSCs细胞与凝胶海绵结合后,植入到糖尿病大鼠骨缺损模型中,在植入后第4周时,采用光学显微镜观察缺损修复组织大体形态;采用免疫组化SP法测定骨缺损区修复后局部微血管密度;应用美国IRIS IntrepidⅡXSP电感耦合等离子体发射光谱仪对修复骨痂内钙/磷含量和碱性磷酸酶(ALP)含量测定;统计分析上述测量结果验证VEGF165-ADSCs对糖尿病大鼠骨缺损的修复作用.结果:荧光染色结果显示,VEGF165表达定位于ADSCs的细胞浆,表达率在87%以上;大体组织学观察结果显示:实验组修复区内骨痂生成范围和质量接近正常组,糖尿病组、生长因子组、于细胞组修复效果欠佳.植入后第4周,实验组单位体积的修复组织钙、磷含量和ALP含量明显高于生长因子组、干细胞组(P<0.05),与正常对照组组比较差异无统计学意义(P>0.05);第4周时,实验组修复局部的血管密度低于正常对照组(P<0.05),而显著高于其他组(P<0.05).结论:VEGF165基因修饰的脂肪干细胞在糖尿病大鼠体内具有良好的成骨及成血管作用,有望成为修复糖尿病特定骨质条件下骨缺损的一种有效手段.
-
肿瘤过继性细胞免疫治疗的研究进展
过继性免疫细胞能调节并增加肿瘤患者的免疫功能,有效克服肿瘤免疫逃逸机制.细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、自然杀伤细胞(NK)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、树突状细胞(DC)、T细胞受体修饰的T细胞(TCR-T)和嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)分别以不同的机制直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞,达到治疗肿瘤的目的.
-
转FL基因基质细胞对脐血造血干细胞的作用
造血干细胞不足,限制了造血干细胞移植在临床的应用.我们曾探讨了持续稳定表达人FL(FLT3配体)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子)的转基因基质细胞系对CD34+细胞具有扩增作用[1],而在CD34+细胞中只有CD34+、CD38-细胞才可使造血功能重建.本实验拟通过已建立的持续稳定表达人FL转基因基质细胞系,进一步探讨FL基因修饰的骨髓基质细胞对人脐血造血干细胞的体外扩增作用.
-
NT-3基因修饰施万细胞与神经干细胞联合移植治疗全横断脊髓损伤的实验研究
为探索一种治疗急性脊髓损伤的新策略,本实验先用核荧光标记培养的神经干细胞(NSCs);再用含神经营养素-3基因的腺病毒(AdvNT-3)感染培养的施万细胞(SCs),简称NT-3-SCs.然后建立大鼠全横断脊髓损伤模型,向损伤处分别移植NSCs、SCs+NSCs和NT-3-SCs+NSCs.所有动物存活60d后,进行爬网格测验和BBB评分.接着在脊髓横断处远端组织内注射荧光金(FG),动物再存活7d.在处死动物前检测皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质体感诱发电位(CSEP).
-
小鼠基因修饰基本原理及其在医学研究中的应用——2007年诺贝尔生理学或医学奖及其相关工作介绍
2007年10月8日,瑞典皇家卡罗琳医学研究院诺贝尔生理学或医学奖评审委员会宣布,美国科学家Mario R.Capecchi、Oliver Smithies和英国科学家Martin J.Evans在"涉及使用胚胎干细胞进行小鼠特定基因修饰方面的一系列突破性发现"[1]而获得2007年度诺贝尔生理学或医学奖(图1).
-
腺相关病毒介导血小板源性生长因子-B基因转染心肌细胞的研究
目的 探讨9型腺相关病毒介导血小板源性生长因子-B(PDGF-B)基因转染修饰大鼠心肌细胞的可行性、安全性及其抗凋亡功能.方法 将携带PDGF-B基因的9型腺相关病毒(rAAV9-PDGF-B)转染大鼠心肌细胞(H9C2),收集经转染后不同时间点(1、3、5、14、21、28 d)心肌细胞,提取蛋白质进行Western印迹测定,观察PDGF-B表达情况.细胞免疫荧光法检测rAAV9的转染效率,AlamarBlue法对rAAV9-PDGF-B转染心肌细胞进行安全性评估,并通过双氧水(H2O2)诱导凋亡,检测高表达PDGF-B的心肌细胞的凋亡相关蛋白及Tunel阳性率.结果 rAAV9-PDGF-B转染心肌细胞后第3天开始,PDGF-B表达上调,随后表达逐渐增强,到第5天蛋白持续平稳表达,持续表达至28 d.转染后第5天,表达PDGF-B的心肌细胞约为78.6%.不同时间点的心肌细胞的还原比率均接近于1.0.双氧水诱导凋亡后,可下调高表达PDGF-B心肌细胞的Bax及Tunel阳性率,同时上调Bcl-2及P-Akt的表达,与PDGF-B蛋白抗凋亡组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 rAAV9-PDGF-B能成功转染大鼠心肌细胞,使心肌细胞持续高表达PDGF-B达28 d以上,对心肌细胞无明显不良反应.高表达PDGF-B的心肌细胞同样具有抗凋亡的功能.
-
IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞数量和功能的影响
目的探讨IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞(Mφ)数量和功能的影响.方法应用腺病毒载体介导的小鼠IL-2基因(Ad-mIL-2)修饰CT26小鼠结肠腺癌细胞(CT26-mIL-2)后皮下接种小鼠,计数小鼠腹腔Mφ的数量,观察其吞噬功能,混合淋巴细胞反应法(MLR)测定其抗原提呈能力,MTT法检测其杀伤活性.结果 mIL-2基因修饰的CT26细胞(CT26-mIL-2细胞)皮下接种后,小鼠腹腔Mφ数量显著增加,吞噬能力明显增强,抗原提呈能力提高,并具有较强的杀伤活性.结论 CT26-mIL-2细胞分泌的IL-2能有效地激活Mφ,这可能是CT26-mIL-2细胞体内致瘤性下降的原因之一.
-
一种高效生产流感疫苗的新方法
由于在流感疫苗制造过程中,流感病毒需要在鸡蛋中生长,因此一旦出现流感大规模流行,鸡蛋供应量的不足以及烦琐的制造工艺将极大地限制疫苗的产量.目前科学家正在寻找新的疫苗制造方式.2007年4月12日发表在Journal of the American Medical Association上的一项研究表明,流感疫苗的大规模生产可以不使用鸡蛋,而通过使用昆虫卵实现.新的方法将病毒疫苗的生产带出了传统模式.与以往在鸡蛋中生产病毒,随后将已灭活的病毒注入人体的方式不同,这一新的策略仅仅使用病毒的一种蛋白,而非整个病毒.位于康涅狄格州的蛋白科学公司(Protein Sciences Corporation)的一个生物技术小组对流感病毒进行了基因修饰,使其可以感染毛虫卵,并产生红细胞凝集素,一种可以引起人体免疫系统产生抗体的病毒包被蛋白.与使用鸡蛋相比,这一方法的工作量大幅下降;此外由于疫苗生产工序的简化,该公司计划在每支疫苗中使用3倍于现行流感疫苗含量的红细胞凝集素(135 μg),以期获得更好的保护效果.
-
白细胞介素10基因修饰的树突状细胞对免疫炎症性心肌损伤的作用研究
心肌炎和特发性扩张型心肌病是以心室扩大伴收缩功能障碍为特征的原因不明性心肌疾病,是年轻患者发生心力衰竭、心律失常及猝死的主要原因.实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis,EAM)是模拟心肌炎和心肌病等免疫炎症性心肌损伤的模型.如何诱导抗原特异性耐受是EAM研究的热点.我们将pcDNA3-IL-10真核表达质粒转染大鼠未成熟DC(immature DC,iDC),观察其对EAM的治疗作用并探讨其可能机制.
-
人乳头瘤病毒16型E7基因修饰小鼠骨髓树突状细胞诱导的细胞免疫应答
利用人乳头瘤病毒16型E7(HPV16-E7)基因修饰小鼠骨髓树突状细胞(DC),探讨其修饰的DC是否能使机体产生特异性的免疫反应,为以DC为基础的主动性免疫基因治疗提供实验依据.
-
人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究
目的研究人白细胞介素4(IL-4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制. 方法以逆转录病毒为载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞.台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL-4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc 表达的变化.流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p53、bcl-2的蛋白表达. 结果 (1) 人IL-4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0/G1期阻滞,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc表达降低(P<0.001).细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化;(2) 较空载体修饰及野生型HepG2细胞,IL-4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征,流式细胞仪亦检测到18.5%±4.7%的凋亡细胞;(3) 人IL-4基因修饰增加p53而抑制bcl-2表达(P<0.05). 结论人IL-4 基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化,诱导凋亡细胞可能与上调p53蛋白及抑制bcl-2蛋白表达有关.
-
TCR基因修饰T细胞研究进展
过继细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACT)是将对抗原特异识别的细胞经体外扩增后输注入患者体内,使其被动获得特异性识别抗原能力的一种免疫疗法.该疗法在白血病、转移性黑色素瘤[1-2]、移植相关的恶性肿瘤、巨细胞病毒感染、EB病毒感染[3]等疾病中已取得了鼓舞人心的治疗效果.
-
HBV抗原基因修饰树突状细胞疫苗体外抗HBV的研究
慢性乙型肝炎产生免疫耐受的原因之一是患者体内抗原提呈细胞不正常,尤其是树突状细胞(DCs)数量减少和功能存在缺陷,不能将抗原信号有效提呈给机体的免疫系统而发挥免疫清除效应.本研究利用整合HBV基因组的HepG2 22.1.5为细胞模型,通过携带编码HBV抗原基因的重组腺病毒载体的介导,探讨腺病毒介导的HBV抗原基因修饰的DCs能否诱导产生特异性抗感染免疫反应,为慢性乙型肝炎的治疗探索一种新的免疫治疗措施.