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转FL基因基质细胞对脐血造血干细胞的作用
造血干细胞不足,限制了造血干细胞移植在临床的应用.我们曾探讨了持续稳定表达人FL(FLT3配体)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子)的转基因基质细胞系对CD34+细胞具有扩增作用[1],而在CD34+细胞中只有CD34+、CD38-细胞才可使造血功能重建.本实验拟通过已建立的持续稳定表达人FL转基因基质细胞系,进一步探讨FL基因修饰的骨髓基质细胞对人脐血造血干细胞的体外扩增作用.
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脐带血造血干细胞移植在临床上的应用研究
1988年,法国Gluckman等采用脐带血移植治疗先天性再生障碍性贫血患儿以来,脐带血作为造血干细胞(HSCs)代用品治疗血液病备受人们关注[1].脐带血造血干细胞(umbilical cord blood hematopoietic stem cells,UCB-HSCs)移植成功,带动和拓展了脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和非常小类胚胎干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSEL-SCs)移植的建立和应用.本文着重论述UCB-HSCs、UC-MSCs和VSEL-SCs移植在临床上的应用.
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儿童非血缘脐血造血干细胞移植1例——护理难点及对策
患儿女性,4岁.因"确诊为急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML)5个月,拟行脐血造血干细胞移植(umbilical cord blood stem cell transplantation, CBSCT)" 于 2009-10-22入本院.病史采集:5个月前因面色苍白伴血常规异常,于本院确诊为AML[由骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)转化].经正规化疗5个月后,骨髓达完全缓解(complete remission,CR).患儿为B型血,既往有输注PLT无效史.入院查体:体重为15 kg,体表面积(body surface area,BSA)为0.6 m2.入院后行CBSCT前各项检查,均未见明显异常.
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不同方式刺激脐血树突状细胞对细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞杀伤活性的影响
目前对造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)后残留肿瘤细胞的清除需通过过继免疫治疗等手段来解决.通过特定细胞因子联合扩增脐血中细胞因子诱导杀伤(cytokine-induced killer,CIK) 细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞,可增强脐血移植(UCBT)后的移植物抗白血病(graft-versus-leukemia,GVL)效应.树突状细胞(dendritic cells ,DC)在免疫应答的诱导中具有独特地位,为了探讨DC以何种方法作用于免疫效应细胞能对免疫杀伤细胞达到更有效的刺激效果,本实验研究了脐血来源的DC以不同的刺激方式作用于同一来源的脐血CIK、NK细胞,探讨对其杀伤活性的影响.
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异基因脐血造血干细胞移植
脐血是指胎儿娩出并断脐后保留在脐带和胎盘近胎儿一侧血管内的血液.脐血中富含造血干细胞,脐血造血干细胞则以其独特的生物学特性、资源优势以及临床适应证的广泛性等弥补了骨髓移植(BMT)和外周造血干细胞移植的不足.脐血造血干细胞移植(CBSCT)正日益受到人们的重视,已成为近几年来造血干细胞移植领域的重大进展之一.
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脐血干细胞移植治疗肝炎肝硬化病人的护理
重症肝病是临床常见的危重症,且目前缺乏有效的治疗手段,病死率高.其病理基础是肝细胞的大量坏死导致肝功能的衰竭.仅靠内科保守治疗病人的病死率达70%.由此,重症肝病的替代治疗是临床治疗的重点和关键手段.而干细胞是指能自我复制更新并产生特化细胞的未成熟细胞,在特定条件下,可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官[1].
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干细胞在肾脏疾病中的研究进展
干细胞(stem cell)是一类具有自我更新、多系分化和高度增殖功能的细胞.随着对干细胞研究的逐渐深入,人们利用SC可塑性大、体外扩增能力强、易于转染外源基因等优点,开始将干细胞应用于治疗急性及慢性肾病的研究.目前相关研究涉及到的干细胞大致可以分为胚胎干细胞、成体肾干细胞和非肾脏来源的成体干细胞,其中包含了研究多广泛的间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),例如骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)、脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UMSC)、脂肪源(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSC)等多种类型干细胞.干细胞疗法及其机制的深入研究,为干细胞再生医学应用于肾脏疾病治疗提供了具有良好前景的治疗策略.
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人脐血间充质干细胞生物学特性、分化潜能与临床应用的研究进展
关于干细胞的描述始于19世纪末,随着生命科学的进步,干细胞研究和应用领域得以不断拓宽和深入。所谓干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞,能够产生至少一种类型、高度分化的子代细胞。干细胞按其发生学来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞,成体干细胞是指已分化组织中的未分化细胞,包括造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等。我国对成体干细胞的研究甚多,尤其是对间充质干细胞( Mesenchymal stem cell,MSCs)的研究。 MSCs主要存在于骨髓、外周血、胎盘、脐带、脐血、成人膝关节的滑膜中,胎儿、成人和老年人的骨骼肌和皮肤结缔组织中也均含有MSCs [1]。脐血作为干细胞的来源和应用已被广泛接受,近年来,人脐血间充质干细胞( Umbilical cord blood mesenchymal stem cells , UBMSCs )以其来源丰富和生物学特性,成为倍受关注的成体干细胞。
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人脐带血间充质干细胞的富集与表型鉴定
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有自我更新和分化为具有骨、软骨、神经元和脂肪细胞表型细胞的能力.目前,骨髓源MSC仍是MSC的主要来源,但因其取材属侵袭性,且伴随年龄的增长骨髓MSC其数目和增殖分化能力均大大降低,使得利用骨髓源MSC的可能性受到制约[1].近年来的研究表明,除已知的人骨髓、软骨、脂肪组织中存在MSC外,脐带血(umbilical cord blood,UCB)中也存在MSC[2].由于UCB的采集不会对新生儿造成任何伤害,所含细胞成熟度低,也无伦理上的争议,因而被认为是替代骨髓细胞的理想选择.目前,已有从人UCB分离造血干细胞的成熟方法,但尚无富集UCB-MSC的适宜方案可循.本研究旨在探寻从UCB中分离MSC的适宜方法,并对分离的UCB-MSC细胞进行表型分析、鉴定,为下一步UCB-MSC的分化潜能和临床应用研究奠定基础.
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脐血干细胞移植在儿童疾病中的应用前景
骨髓造血干细胞移植(BMT)是近年来各国应用较为广泛的医治血液系统疾病的方法.BMT可分为自体和异体造血干细胞移植两种,由于种种原因均开展得很局限.一般无血缘关系的人群中,HLA配型一致的机率是1~2万分之一,再加之对骨髓移植的偏见使多数人不愿接受HLA配型检测,因此,干细胞的来源成为干细胞移植的一大难题. 脐血干细胞(umbilical cord blood stem cell,UCBC),取自来源广泛的脐血,富含CD34+细胞.CD34+细胞是具多系分化潜能的造血前体细胞,可能与细胞与细胞间的粘附及造血相关基因的表达有关.随胎龄增长,CD34+细胞表达比例显著下降,妊娠13周时CD34+细胞占11.1%,足月时仅占1.0%.所需造血干细胞低数量随供体与受体间HLA相容性、病人抗HLA敏感性及年龄等因素而变化.人脐血CD34+ Thy+Lin-细胞被当作原始的干细胞,每104个低密度单核细胞(LDMNC)中有一个干细胞.脐血中还包括早期和定向造血祖细胞,是成人外周血10倍,含CFU-GM(粒单系集落形成单位)、BFU-E(红系爆式集落形成单位)、CFU-L(淋巴系集落形成单位)、CFU-Meg(巨核系集落形成单位)和CFU-Mix(混合系集落形成单位).BMT时重建体内造血所需造血干细胞数量尚未确定.成人同种异基因骨髓移植少需CD34+细胞≥2×105/kg,而1份脐血通常含(20~50)×104个干细胞.粒单集落形成细胞(GM-CFCs)为(1~10)×103/kg,而脐血GM-CFCs在(2~2.5)×106.每例脐血采集量约50ml~200ml,就可移植成功1个50kg体重的成人,因此1份脐血对于1名一般儿童已经足够.
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脐血造血干/祖细胞体外扩增研究进展
1988年,Gluck man 首次运用脐血移植(cord blood transplantation , CBT)治疗1例Fanconi 患者并获得成功,揭开了脐血研究的新篇章.在过去20余年中,较多学者进行了脐血基础与临床的研究,取得了较多进展.单份脐血中细胞数较少限制了它在临床的广泛应用,而体外对脐血造血干/祖细胞(cord blood hematopoietic stem and progenitor cells,CB HSPCs)进行扩增是解决这一问题的主要手段.现就这一方面加以综述.
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“DC细胞工厂”--脐带血CD34+造血干细胞来源的DC的大量制备
背景:树突状细胞(Dendritic Cell,DC)充当着免疫系统中的“警察”角色,它能够识别体内异常抗原信息并通过激活初始T细胞而诱导特异性的免疫应答。以DC为基础制备的肿瘤疫苗能有效的构筑抗肿瘤免疫屏障,因此DC被认为是充满前景的免疫治疗工具。作为原料细胞,大量成熟,功能均一的DC 细胞是制备DC疫苗的必须条件,而临床上广泛应用的DC细胞来自于自体外周血,数量在106~108之间,无法充分满足临床应用。因此,探索新的大量制备DC的方法成为临床上迫切的需求。目的:本实验旨在探索新的由CD34+造血干细胞大量诱导DC细胞生成的方法,并通过体外实验证实这种CD34-DC肿瘤疫苗相比外周血单核细胞来源的DC疫苗(PBMC-DC)具有类似的或者更好的诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:分离脐带血CD34+造血干细胞并利用GM-CSF/SCF进行连续30 d的扩增培养,期间通过贴壁持续收获DC。外周血单核细胞诱导的DC作为对照。对比两种来源的DC形态,表型和包括抗原吞噬,混合淋巴增殖,细胞因子分泌,趋化能力的功能特征。分别将其制备成肿瘤DC疫苗,并对比体外诱导的CTL IFN-γ分泌能力和针对肿瘤靶细胞的细胞毒性。结果:1) GM-CSF/SCF细胞因子组合连续培养CD34+细胞30 d后,共收获~1010总细胞量和~109的DC。与PBMC-DC相比,具有类似的形态特征;2)成熟状态时, CD34-DC与PBMC-DC具有类似的细胞表型(CD80, CD83,CD86,HLA-DR),而未成熟时CD34-DC表型好于PBMC-DC,尤其是CD80表达较早上调;3)无论是新鲜的还是冻存后复苏的,CD34-DC和PMBC-DC在GM-CSF/IL-4培养的第5天吞噬功能强,是抗原负载的佳时间窗;4)鸡尾酒式细胞因子作用下, CD34-DC较PBMC-DC具有更强的IL-12p70和IL-10的分泌能力,且前者诱导的CTL IFN-γ分泌水平更高,同时5)其表现出了更强的细胞毒作用;6)正常健康孕妇脐带血中CD34+造血干细胞具有稳定的增殖和向DC分化的潜能。结论:我们建立了一套由脐带血造血干细胞诱导大量DC生成的方法并称之为“DC工厂”。由其制备的DC抗肿瘤疫苗是将来能够用于临床的充满前景的免疫刺激剂。
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造血干细胞和单核细胞来源的树突状细胞在形态、表型及功能的对照实验研究
背景:来自外周血单核细胞的自体DC疫苗作为一种很有前途的抗肿瘤免疫疗法,其面临的局限性包括细胞数量不足和功能缺陷。CD34+造血干细胞则是另一个理想的DC来源,已经有多种扩增CD34-DC的方法报道,都可以得到大量的细胞数和各种功能不同的DC。目的:本实验旨在探讨脐带血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞(CD34-DC)与外周血单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DC)在细胞形态、细胞表型、诱导生成的CTL细胞毒性方面的差异,并探讨不同来源的DC超微结构的变化与其抗原处理与抗原提呈功能之间的相关性,以期制备功能更加强大的DC疫苗。方法:取健康成人外周血,采用密度梯度离心法获取单核细胞后诱导生成DC(Mo-DC);取健康足月产孕妇脐带血,采用磁珠分选法分离纯化CD34+造血干细胞,并培养于含粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)/干细胞因子(SCF)的培养基诱导CD34+造血干细胞扩增及DC前体细胞的生成,GM-CSF/白细胞介素-4(IL-4)培养基进一步诱导前体细胞向DC细胞的分化(CD34-DC)。电镜下观察CD34-DC及Mo-DC的形态,比较其细胞突起数量、细胞核大小及内体小泡数量;流式细胞术检测不同培养时间(d1、d3、d5、d7)的CD34-DC及Mo-DC表面分子表达,并给予FITC-OVA257–264冲击,培养24 h后检测其抗原提呈能力;取培养至d5的CD34-DC及Mo-DC均负载CEA蛋白并加入肿瘤坏死因子(TNF-α)制备成CEA特异性的CD34-mDC、Mo-mDC(即DC疫苗),分别体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成,并利用MTS法检测其各自对CEA高表达的肿瘤细胞系Ls174-T的细胞毒性,以检测其激活T细胞的功能。结果:1)经过细胞因子和肿瘤抗原刺激之后的DC,悬浮生长而失去树突状外观,表现为类圆形,细胞膜清晰且光滑。2)与抗原提呈能力密切相关的内体小泡数量在CD34-DC中多于Mo-DC(P<0.05)。3)Mo-DC与CD34-DC经抗原及细胞因子刺激生成的Mo-mDC与CD34-mDC均可成熟(P>0.05)。4)CD34-DC比Mo-DC具有更强的抗原提呈能力(P<0.05)。5)CD34-DC与Mo-DC在刺激同种异体T淋巴细胞的增殖能力方面无差异(P>0.05)。6)CC-CTLs及CM-CTLs都可以杀伤CEA高表达的肿瘤细胞Ls174-T,但CC-CTLs比CM-CTLs有更高的杀伤率(P<0.05)。结论:1)经GM-CSF/SCF培养基可诱导脐带血CD34+造血干细胞扩增及生成DC前体细胞,并在培养d8开始贴壁生长,每3 d可收获一批DC前体细胞,用GM-CSF/IL-4培养基可进一步诱导生成CD34-DC,其表型与Mo-DC无差异。2)脐血造血干细胞来源的CD34-DC具有更强的抗原提呈、促淋巴细胞增殖及诱导激活CTL的能力。3)电镜下树突状突起数量、细胞核大小及内体小泡数量的变化是评估DCs功能差异的微观机制。4)脐带血来源的CD34-DC有望成为制备DC疫苗新的、理想的原料细胞。
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脐带/胎盘血移植和胎盘造血功能的研究进展
脐带血(umbilical cord blood)长期以来被认为是废物而丢弃,KNUDTZON[1]1974年发现脐带血中含有造血干细胞以来,有关学者对其进行了广泛而深入的研究.1988年首例同胞之间脐带血治疗Fanconi贫血[2]获得成功以来脐带血移植逐渐被专家及学者们所推崇并取得了重大进展.据统计,目前全世界已进行了近5 500例脐带血移植[3],已成为某些白血病、淋巴瘤和遗传性造血干细胞痰病治疗的一场革命.本文就脐带血移植和胎盘造血功能的研究进展作一综述.
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混合脐血移植治疗成人重型再生障碍性贫血
重型再生障碍性贫血(SAA)预后差,多在发病1年内死亡.异基因骨髓移植(allo-BMT)是治疗重型再障的佳方法.由于HLA相合骨髓供者来源困难,骨髓移植的临床应用受到限制.1989年Gluckman等[1]首次对1例Fanconis贫血患儿采用脐血移植(UCBT)治疗获得成功,使UCBT成为allo-BMT的一种有效替代手段.1996年1月,我们采用HLA不合的混合脐血移植治疗1例成人重型再障(SAA)获得成功.报告如下:
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新生儿窒息脐血一氧化氮和血糖的测定及其意义
新生儿窒息是围生期小儿死亡和导致伤残的重要原因之一,可致多器官功能损害.新生儿窒息早期血糖的变化已受到广泛重视.目前研究发现,一氧化氮(NO)与血糖变化关系十分密切.本文对30例窒息新生儿脐血NO和血糖进行了检测,并与32例正常新生儿作对照,以探讨NO和血糖在新生儿窒息中的变化及其相互关系与临床意义.