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小鼠同种异基因骨髓腔内骨髓移植促进早期造血功能重建
目的 探讨同种异基因骨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对小鼠早期造血功能重建的影响.方法 将BALB/c小鼠骨髓单个核细胞(BMNCs)分别用胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(IV)两种方法移植入经致死量~(60)Coγ射线辐照后的60只C57BL/6小鼠.受鼠随机分为3组:骨髓腔内注射高和低剂量组(IBM1和IBM2组)、尾静脉注射组(IV组),每组20只.在骨髓移植后1、3、6和9 d分别计数各组受鼠胫骨骨髓腔内有核细胞总数,并用流式细胞术检测供体植入水平(供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞数).结果 于移植后6 d,IBM1组和IBM2组注射侧胫骨骨髓腔内有核细胞总数、供体来源有核细胞总数、供体来源髓系细胞总数均明显高于IV组(P<0.05或P<0.01).结论 IBM-BMT较IV-BMT更能促进同种异基因骨髓移植后的早期造血功能重建.
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异基因骨髓移植中巨细胞病毒的临床检测
在异基因骨髓移植中,巨细胞病毒(CMV)感染常可引起致命危险及移植失败,因而探索早期准确检测CMV感染的有效实验手段至关重要.本文介绍了传统的CMV的培养法及近年来发展起来的抗原检测方法和分子生物学方法.
关键词： 异基因骨髓移植 巨细胞病毒 抗原检测 PP65抗原血症检测 -
干细胞移植治疗神经遗传疾病中HLA配合的几率分析
为了探讨干细胞移植(Stem Cell Transplantation)对神经系统中预后不良的单基因遗传性疾病之一DMD(假肥大型肌营养不良症)的临床可行性,采用PCR反向序列特异性寡核苷酸杂交技术(polymerase chain reactionreverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)对30例DMD患者进行HLA-ABDR基因分型,并与广东省脐血干细胞库668份和中国造血干细胞捐献者库34 910份分别进行HLA-ABDR基因频率比较和无关供者干细胞的配合性分析.结果表明:DMD疾病组的HLA基因呈正态遗传,DMD患者HLA基因表达与广东健康人群无统计学上显著差异;DMD患者中1/4寻找到合适用于移植的干细胞,其中在广东脐血库寻找到≥5个HLA-ABDR基因配合的几率为50%,在中国造血干细胞库寻找到6个HLA-ABDR基因配合的几率为26%.结论:对DMD患者进行非亲缘异基因脐带血/外周血移植治疗具有HLA配合供者高选择几率的可行性基础;干细胞移植不仅将使致死性神经肌肉疾病患者获得临床症状改善,并且为难治性神经系统疾病受益于干细胞移植治疗打造技术平台.
关键词： 假肥大型肌营养不良症 脐血 异基因骨髓移植 HLA基因 -
骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响
为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响,以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型,对其进行allo-BMT的同时,静脉输注体外培养的供鼠BMMSC,同时设立单纯allo-BMT对照组.记录受鼠存活时间;观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化;用流式细胞术检测受鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的差异;采用性染色体检查检测嵌合状况.结果显示:BMMSC推迟aGVHD发生的时间;降低CD4+T细胞的同时增加CD8+T细胞的数量;明显延长受鼠allo-BMT后的生存时间.结论:BMMSC与allo-BMT联合进行具有一定的GVL效应;BMMSC能抑制allo-BMT后aGVHD的发生,但同时具有一定的GVL效应.
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TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病
为了探讨转化生长因子β(TGF-β)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/c小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型.BABL/c受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β实验组.TGF-β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β1(1 μg/kg).结果显示:TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组(p＜0.01),TGF-β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组.移植后7天TGF-β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高,但远低于移植对照组;TGF-β实验组血清IL-10浓度明显高于移植对照组.结论:TGF-β能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的aGVHD发生,提高移植后存活率.TGF-β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌,同时促进了Th2类细胞因子IL-10的表达,降低aGVHD的发生.
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化学修饰物甲氧基聚乙二醇对异基因骨髓移植影响的研究
为了探讨经甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰的骨髓移植物对异基因移植并发症--移植物抗宿主病(GVHD)的影响,将BALB/cH-2d小鼠经60Coγ线8.0 Gy照射后随机分3组.A组经尾静脉注射RPMI 1640,B组注射615H-2k小鼠的骨髓及脾细胞混合悬液,C组注射等量的mPEG修饰后的骨髓及脾细胞混悬液.通过小鼠外观的观察、存活率和存活时间的测定及组织病理检查研究GVHD程度,通过染色体检查研究植入情况.研究结果表明:B组出现脱毛等表现较C组早,程度重,重症病例多(P≤0.05).B组死亡小鼠30天存活率20%,平均存活时间为12.1±2.4天,C组为50%,平均存活时间为16.1±2.9天(P≤0.05);B组出现Ⅲ度GVHD比例为59%,C组为20%(P=0.050),B组和C组的异基因骨髓成功植入.结论:mPEG修饰的骨髓移植物可减轻GVHD程度,有望延长生存时间,提高生存率.
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G-CSF预处理供者的HLA相合同胞异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病研究
为了评价供者应用G-CSF的骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病的临床疗效,用HLA相合的、混合淋巴细胞培养阴性的同胞供者骨髓,对单一病种慢性粒细胞白血病行移植治疗.供者应用G-CSF 250微克/天,连用7天后供髓的32例为研究组,对照组18例常规采髓移植,在预处理方案,GVHD预防和支持治疗方法相同的情况下,比较研究组和对照组移植后在加速造血重建,降低GVHD发生和延长无病生存的疗效.移植结果显示,供者应用G-CSF在慢性粒细胞白血病移植中造血重建加速,中性粒细胞＞0.5×109/L和血小板＞20×109/L的中位天数分别是第15(10-22)天和第17.5(13-28)天,对照组是第21和24天(P＜0.01),研究组发生急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD2例(6.3%),对照组5例(27.8%),通过比较,两组差异有显著性(P＜0.05),慢性GVHD发生分别是24%和33.3%(P＞0.05).研究组移植相关死亡、复发和无病生存与对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论:使用G-CSF动员供者的HLA相合的异基因骨髓移植,造血重建加快和重度急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD减轻,有可能提高CML移植的无病生存率.
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异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复
探讨用逆转录病毒载体转入IL-3和IL-6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用.用逆转录病毒载体(含小鼠IL-3 cDNA,人IL-6 cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6.供体小鼠BALB/c(H-2d)骨髓去除骨髓中T细胞,受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死量照射后,输入去除T细胞的供体骨髓(1×107/鼠)的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL-3/IL-6(5×105/鼠).在骨髓移植后20和40天,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM数.结果:异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL-3/IL-6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC数明显恢复,骨髓中有核细胞数,CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM明显增加.基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建.结论:基质细胞转入细胞因子IL-3或IL-6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建,联合转导IL-3和IL-6有协同作用.
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G-CSF预处理供者单倍体相合骨髓移植加用CD25 单克隆抗体预防急性GVHD的临床研究
探索单倍体相合未去T细胞骨髓移植应用CD25单克隆抗体预防急性移植物抗宿主病(GVHD)的疗效.在1999年2月至2001年11月期间,对28例白血病病人进行HLA 2-3个位点不合骨髓移植,其中2000年11月前完成的不使用CD25单抗的15例为对照组,此后完成的13例为本方案组,两组供者均接受粒细胞集落刺激因子(G-CSF,Lenograstim)250μg/d,皮下注射,连用7天后采髓;环孢菌素A,氨甲蝶呤,抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯(MMF)联合用于GVHD预防.研究组病例在移植前2 小时和移植后第4天加用CD25单克隆抗体(Basiliximab)进一步预防GVHD;并对两组移植后植入,GVHD发生和无病存活情况进行比较.结果表明,28例患者移植后均植入成功,植入直接证据的检测证实完全供者造血,两组造血重建时间比较无显著性差异(P＞0.05);未用抗体的对照组急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD发生率33.3%,本方案组加用CD25单克隆抗体,无1例发生急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD,两组之间差异有显著性(P＜0.05);慢性GVHD发生均为局限性,两组的差异无显著性(P＞0.05).对照组中位随访26(15-36)月,活存9/15例,本方案组中位随访8(3-15)月,活存12/13例,Kaplsn-Meier存活曲线分析与对数秩检验,本方案组1年无病生存率明显高于对照组(P＜0.05).结论:单倍体相合骨髓移植加用CD25单克隆抗体有利于急性重度GVHD的预防,显著提高单倍体相合骨髓移植无病生存率.
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供体TReg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和造血重建的影响
本研究探讨供体CD4+ CD25+ 调控T细胞(regulatory T cell,TReg)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)和造血重建的影响.建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,体外磁珠分离纯化供鼠外周血CD4+ CD25+ TReg细胞,接授移植的小鼠随机分为3组,在移植骨髓后6-8小时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+ CD25-T细胞和RPMI 1640培养液(空白对照).以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期及白细胞(WBC)、血小板(Plt)的重建为观察指标并进行组间比较.结果显示:TReg阳性细胞移植组,TReg阴性细胞移植组和空白对照组小鼠WBC＞1.0×109/L的时间分别为(8.14±3.26)天、(17.62±5.71)天、(19.81±6.77)天;Plt＞20.0×109/L的时间分别为(5.29±1.34)天、(8.97±3.44)天、(9.52±3.92)天,TReg阳性细胞移植组WBC和Plt恢复时间比TReg阴性组与空白对照组快(P＜0.05).3组小鼠在移植后15天GVHD评分为(1.33±0.58)、(1.80±0.27)、(1.93±0.45),TReg阳性细胞移植组小鼠与TReg阴性细胞移植组、空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).移植后(25-30天)的TReg阳性细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期TReg阴性细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻.3组小鼠移植后平均存活时间分别为(41.45±17.88)天、(18.75±14.39)天和(25.67±16.84)天,TReg阳性细胞移植组小鼠平均存活时间较TReg阴性细胞、空白对照组小鼠延长(P＜0.05).结论:小鼠allo-BMT后输注供体TReg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存期,促进造血重建.
关键词： 异基因骨髓移植 CD4+CD25+调控T细胞 移植物抗宿主病 造血重建 -
异基因骨髓移植后嵌合状态的研究进展
骨髓移植是许多血液系统疾病和免疫缺陷性疾病的有效治疗措施,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入状况即嵌合状态的形成有关.由于造血干细胞输入量、供者和受者T细胞量、预处理方案以及移植时患者病情等因素的影响,可以形成不同形式的嵌合状态.如果受者的骨髓或外周血中完全是供者的细胞,则形成完全的供者嵌合状态(CC);当检测到供者和受者两种细胞成分时,则为混合嵌合状态(MC).不同形式的嵌合状态,以及嵌合状态形式的不同演变趋势,其临床意义各不相同.检测嵌合状态的方法有多种,包括微卫星检测、染色体核型分析、血型转换、红细胞抗原、限制性片段长度多态性、可变数目串联重复序列以及现在常用的PCR法.本文从上述几个方面对嵌合状态研究的进展进行了综述.
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供者淋巴细胞输注治疗异基因骨髓移植后血液恶性肿瘤复发的研究进展
异基因骨髓移植因复发危险性高而在临床应用上受到限制.原供者淋巴细胞输注(donor1ymphocyte infusion,DLI)能有效地再次诱导一些异基因骨髓移植后的慢性粒细胞白血病(CML)等复发患者的长期缓解.输注的异基因T细胞被患者抗原呈递细胞呈递的白血病特异性抗原激活,在细胞因子和共刺激分子辅助下产生移植物抗白血病效应,从而特异性地清除肿瘤细胞.移植物抗宿主病和骨髓抑制为DLI常见并发症,选择性T细胞输注和含干细胞输注能为DLI技术带来广阔的应用前景.
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高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究
本研究探讨高压氧(HBO)在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制.给受致死量照射的C57BL/6受鼠注入供鼠BALB/c骨髓与脾淋巴细胞的混合液,分别给与高压氧、环孢素A、氨甲堞呤处理.用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ CD11a+、CD4+ CD18+、CD8+ CD11a+、CD8+ CD18+ 的表达,用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达.结果表明:HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO和CsA+MTX可明显降低脾组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ CD11a+、CD4+ CD18+、CD8+ CD11a+、CD8+ CD18+的表达(P＜0.05);HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组(P＜0.05),但高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA+MTX组(p＜0.05).结论:高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤,其抗aGVHD的作用机制与调节促炎/抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关.
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间充质干细胞在组织再生和免疫调节治疗中的应用
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一群存在于骨髓、脂肪、骨实质、胎盘及骨骼肌等多种组织中的干细胞,具有向骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化的功能[1].也有资料表明,MSC分化能力接近于胚胎干细胞,可分化为肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、神经元样细胞和肝细胞[2-5].体外实验证实,MSC本身并不引起异体淋巴细胞活化,但可抑制由丝裂原或异体淋巴细胞激活的T、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞的增殖[6-8],抑制树突状细胞的发育与成熟[9].因此,MSC在造血干细胞移植、器官移植、骨和软骨组织修复、心肌梗死和肝脏损伤的治疗中具有潜在的应用价值,某些治疗措施已经进入临床试验阶段.目前,美国FDA已经批准的有关MSC治疗的临床试验包括:(1)异体MSC静脉输注治疗异基因骨髓移植中的移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD);(2)自体MSC静脉输注治疗Crohn病;(3)自体MSC局部应用治疗牙周疾病;(4)异体MSC静脉输注治疗心肌梗死;(5)异体MSC修复半月板;(6)粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员MSC治疗心肌梗死等.在国内,多家单位已经将自体或异体MSC试用于临床,以预防或治疗GVHD、心肌梗死、骨或软骨缺损和股骨头坏死等[10-13].然而,有关MSC临床应用的一些基本问题尚不清楚,盲目开展临床试验是不妥当的.本文就相关问题进行综述和讨论.
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可调控表达IL-2基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建
目的探讨可调控表达IL-2基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用. 方法构建四环素诱导的表达小鼠IL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞PT67,感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),构建可诱导表达IL-2基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet-on-IL-2.受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死剂量照射后,输入供体BALB/c(H-2d)骨髓细胞1×107/只(去除T细胞),同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet-on-IL-2 5×105/只.灌服多西环素(Dox)诱导IL-2表达.于骨髓移植(BMT)后30d、60d检测小鼠脾细胞对ConA的反应强度,空斑形成细胞(PFC)数和迟发型超敏反应(DTH),脾细胞中T辅助细胞前体频数(HTLp)及移植后小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+的比值,评价BMT后免疫功能的恢复情况. 结果成功建立四环素诱导IL-2基因表达的基因工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet-on-IL-2.异基因BMT、联合输注QXMSC1tet-on-IL-2能显著提高BMT小鼠脾细胞对ConA的反应,增加脾脏淋巴细胞HTLp及PFC数目,并使DTH反应增强,改善小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+的比值. 结论共输注可调控表达IL-2基因的骨髓基质细胞可促进异基因移植小鼠免疫功能重建.
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异基因骨髓移植患者并发间质性肺炎的防治和护理
异基因骨髓移植(allo-BMT)是指将他人骨髓移植至患者体内,以重建造血和免疫功能.这是目前治疗白血病有效的方法之一.
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非血缘异基因骨髓移植救治多次复发并截瘫白血病1例的护理
骨髓移植(BMT)是目前治疗恶性血液病和部分实体瘤的先进的疗法之一[1].我院于2001年11月采用组织相容性抗原(HLA)完全相合,由台湾慈济骨髓捐赠中心提供的无血缘关系供者骨髓移植(URD-BMT)救治多次复发并截瘫的急性粒细胞白血病1例,获得成功.现将其护理体会报告如下.
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家庭护理干预改善异基因骨髓移植患者预后的效果评价
目的分析家庭护理干预对异基因骨髓移植患者预后的影响.方法将52例康复期异基因骨髓移植患者随机分为2组,干预组(26例)执行计划周密的家庭护理干预,对照组(26例)未实施干预,比较2组严重感染发生情况、日常生活能力量表(ADL)、白血病复发率、慢性移植物抗宿主病(GVHD)发生率.结果干预组患者较对照组的严重感染发生率低,生活质量提高,白血病复发率,GVHD发生率低,均有显著性差异(P＜0.05).结论家庭护理干预可显著改善异基因骨髓移植患者预后.
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1例异基因骨髓移植合并巨细胞病毒感染的护理体会
巨细胞病毒(CMV)是疱疹病毒的一种,骨髓移植(BMT)常合并巨细胞病毒感染,其死亡率极高.现将我院1例allo-BMT合并CMV感染的护理体会介绍如下.1病历简介患者男,37岁,诊断为慢性粒细胞性白血病,接受HLA相合ABO血型不合的无关供者骨髓进行移植.预处理方案为BuCy,移植前患者及供者血清IgG检测均为(+),血清IgM检测均为(-).移植后42天取患者尿液进行CMV抗原检测为(+),临床表现:发热,体温37.7℃～38.4℃;呼吸困难,24～30次/分;咳嗽,咯少量白色粘稠痰;进行性低氧血症.提示患者有活动性CMV感染,立即给药,采用赛美维10 mg/(kg@d)静脉滴注,持续15天后患者的病情明显好转,停止用药.骨髓移植后67天,患者的实验室检查Hb 90 g/L.WBC 2.03×109/L,PLT 23×109/L,愉快出院.
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骨髓移植后并发免疫介导性中枢神经系统脱髓鞘一例
男性,32岁,以"头晕,呕吐14天,口角右偏伴视物模糊5天"为主诉入院.入院前2周出现头晕、呕吐,为胃内容物,伴走路左倾,左侧肢体力弱,口角右偏,视物模糊.4年前因慢性粒细胞白血病行同胞异基因骨髓移植,口服免疫抑制剂:环孢素A及强的松等药,入院前3个月完全停药.查体:神情,吐字不清,记忆力、计算力减退,命名障碍,左侧失用.左眼闭合力弱,左侧偏盲,左眼外展露白1毫米.左侧额纹浅,口角右偏,左上肢肌力Ⅵ级,左下肢肌力近端Ⅳ级,远端Ⅲ级,左侧膝腱反射大于右侧,左上肢共济失调,闭目明显.左侧偏身痛觉、深感觉减退.双侧病理反射(-).
