首页 > 文献资料
-
甲氧基聚乙二醇修饰人红细胞血型抗原的研究
红细胞输注是输血医学的主体,化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)与红细胞膜共价结合后,可遮蔽红细胞表面血型抗原,使红细胞血型抗原呈阴性,即形成通用型红细胞,对临床输血具有重要意义.研究了mPEG修饰对红细胞血型抗原、膜流动性的影响;红细胞被修饰程度;mPEG与红细胞结合的稳定性;mPEG在体内的代谢情况.结果表明,mPEG能遮蔽红细胞上的血型抗原;mPEG与红细胞结合稳定;mPEG修饰红细胞的比率随浓度增高而增大;mPEG在小鼠体内24 h后基本被代谢,且在体内无蓄积.mPEG修饰的红细胞为解决临床急用稀有血型和配型困难(如自身溶血性贫血,AIHA)等问题提供了有意义的参考.
-
异种输血--猕猴受输猪红细胞的初步研究
本研究的目的是改造猪红细胞(pRBC)表面抗原,使之与灵长类动物相容,以探讨异种输血的可能性.结合使用α半乳糖苷酶(AGL)酶解和甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰改造猪红细胞表面异种抗原,并输注给猕猴,观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性;使用免疫抑制剂(蛇毒因子CVF和地塞米松)延长pRBC在猕猴体内的存活时间;建立失血性贫血猕猴模型,观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性.结果表明:AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原(α-Gal抗原),减弱其与猕猴血清的凝集反应,酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容.异种输血试验表明,双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时,使用免疫抑制剂后,可延长至40小时;pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38%,在输注pRBC的8小时内,失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平.结论:改造后的pRBC可安全地输注给猕猴,改善失血猕猴的贫血症状,提示用猪红细胞进行异种输血是可能的.
-
甲氧基聚乙二醇修饰改造RhD(+)血型的初步研究
Rh血型与ABO血型一样是重要的血型系统,Rh血型不符会引起严重的输血反应及新生儿溶血病.中国人群中RhD阴性血型的比例仅为0.2%-0.5%,将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞在临床输血中有重要的意义.本研究用4种不同端基的甲氧基聚乙二醇(mPEG),修饰A型、B型、AB型和O型的RhD(+)红细胞,比较4种mPEG衍生物对RhD抗原的修饰效果.同时观察mPEG修饰对红细胞形态、结构和功能的影响.结果表明,mPEG-BTC(苯并三唑端基PEG)较其他3种PEG的修饰效果好,在1mmol/L时可以有效地遮蔽红细胞表面RhD抗原,而对红细胞形态、渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶、胆固醇、ATP、2,3-DPG含量以及变形性无影响.结论:初步实现了将RhD(+)红细胞修饰改造成RhD(-)红细胞的目的.
-
化学修饰物甲氧基聚乙二醇对异基因骨髓移植影响的研究
为了探讨经甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰的骨髓移植物对异基因移植并发症--移植物抗宿主病(GVHD)的影响,将BALB/cH-2d小鼠经60Coγ线8.0 Gy照射后随机分3组.A组经尾静脉注射RPMI 1640,B组注射615H-2k小鼠的骨髓及脾细胞混合悬液,C组注射等量的mPEG修饰后的骨髓及脾细胞混悬液.通过小鼠外观的观察、存活率和存活时间的测定及组织病理检查研究GVHD程度,通过染色体检查研究植入情况.研究结果表明:B组出现脱毛等表现较C组早,程度重,重症病例多(P≤0.05).B组死亡小鼠30天存活率20%,平均存活时间为12.1±2.4天,C组为50%,平均存活时间为16.1±2.9天(P≤0.05);B组出现Ⅲ度GVHD比例为59%,C组为20%(P=0.050),B组和C组的异基因骨髓成功植入.结论:mPEG修饰的骨髓移植物可减轻GVHD程度,有望延长生存时间,提高生存率.
-
甲氧基聚乙二醇体外修饰移植物细胞对单倍体相合小鼠造血干细胞移植后GVHD的影响
本研究探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰移植物细胞对小鼠单倍体相合干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.取经mPEG修饰及未修饰的成年CB6小鼠脾细胞悬液注入BALB/c新生幼鼠的腹腔(5×106脾细胞/只),以脾增大指标判断新生BALB/c小鼠注射单倍体相合供鼠脾细胞后的GVHD反应;取经mPEG修饰及未修饰的成年BALB/c小鼠骨髓及脾细胞混合悬液(BMS)尾静脉注入接受致死量γ射线照射后的成年BALB/c小鼠(2×105个BMS/只),注射后第8天取受鼠脾脏,计数脾结节数.结果表明:修饰组脾指数1(SI1)较未修饰组减低,修饰组脾指数2(SI2)值＜1.3,未修饰组SI2值＞1.3,提示接受mPEG修饰的单倍体相合脾细胞输注后,修饰组GVHD程度较未修饰组轻;未修饰组与修饰组相比较,脾结节形成的数量差异无显著性意义(p＞0.05),说明mPEG修饰不影响造血干祖细胞的活性.结论:mPEG修饰移植物可减轻小鼠单倍体相合干细胞移植后的GVHD,而不影响干祖细胞活性.
-
异硫氰酸荧光素掺入法测定mPEG修饰的红细胞半寿期
目的:为甲氧基聚乙二醇(mPEG)包裹改造红细胞制备通用型血实验提供一种简便、可靠、安全无污染的红细胞半寿期测定方法.方法:用异硫氰酸荧光素(FITC)标记、mPEG包裹小鼠红细胞,然后回输到小鼠体内,用流式细胞仪测荧光标记的细胞百分含量,计算红细胞半寿期.结果:mPEG包裹对红细胞膜上异硫氰酸荧光素荧光强度的检测没有影响,异硫氰酸荧光素的衰减也不会影响红细胞半寿期的测定.低剂量的mPEG包裹不影响红细胞的寿命,而高剂量的mPEG包裹会对红细胞产生损伤,使其寿命明显缩短.结论:此方法简便,易操作,安全无污染,是一种可行的测定红细胞半寿期的方法.
-
血小板经不同活性基团mPEG修饰后功能变化的研究
目的:观察血小板经不同mPEG修饰后功能变化情况,并分析其原因.方法:分别用mPEG-BTC、mPEG-SPA对血小板进行化学修饰;流式法检测修饰前后血小板CD62P荧光强度变化;并对血小板的聚集、黏附及释放功能进行检测.结果:经mPEG-BTC、mPEG-SPA修饰后,血小板CD62P表达率由修饰前的(12.77±2.87)%分别降至0和(4.12±1.28)%;聚集能力由修饰前的(1.43±0.74)%分别升至(3.86±1.21)%和(3.84±1.12)%;黏附能力由修饰前的(30.2±5.59)%分别升至(45.5±2.72)%和(45.2±3.99)%;而血小板Ca2+释放能力修饰前后差异无统计学意义.结论:使用mPEG-SPA对血小板进行化学修饰可影响血小板的功能,是一种较为理想的修饰剂.
-
甲氧基聚乙二醇修饰几种红细胞稀有血型抗原的初步研究
目的:研究用甲氧基聚乙二醇(methoxy polyethylene glycol, mPEG)修饰红细胞稀有血型抗原,为制备通用型血寻找可能的途径.方法:用3种具有不同端基的mPEG修饰红细胞,观察其对红细胞表面4种稀有血型抗原的修饰效果及对红细胞结构、功能和存活期的影响.结果:实验表明,在1.0 mmol/L时mPEG-BTC(苯并三唑碳酸酯端基PEG)就可以使红细胞表面Jka,Jkb,k和P1抗原性消失,而对红细胞形态、渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶、胆固醇、ATP、2,3-DPG含量、变形性以及存活期无影响,其他2种mPEG对红细胞修饰效果不好.结论:mPEG-BTC可有效遮蔽红细胞表面的稀有血型抗原,对其结构、功能及存活期无影响,本实验为mPEG包裹法制备通用型血提供了有力的实验证据.
-
移植物化学修饰与阻断 OX40-OX40L途径预防异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病的研究
目的 观察甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(mPEG-SPA)与抗OX40L单抗预处理移植物对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其机制.方法 供、受鼠的脾淋巴细胞体外混合培养,加入抗OX40L单抗孵育培养后,再用mPEG-SPA化学修饰,与C57BL/6供鼠骨髓细胞混合后移植给经致死量全身照射的BALB/c受鼠.同时设相应的对照组.观察移植后受鼠aGVHD的临床表现、病理学改变、存活时间及生存率等,检测移植鼠T淋巴细胞亚群,细胞因子的变化及异基因嵌合体.结果 ①单纯骨髓移植对照组小鼠均出现aGVHD临床表现,17 d内全部死于aGVHD,存活时间为(12.1±5.5)d;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠一般状态较好,部分出现aGVHD表现,且较单纯骨髓移植对照组症状轻,皮肤、肝脏、小肠病理表现均较单纯骨髓移植对照组明显减轻,mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠存活时间分别为(36.2±24.9)、(32.0±24.8)和(44.3±23.2)d,均较单纯骨髓移植对照组明显延长(P＜0.05),其中抗OX40L mPEG-SPA联合预处理组小鼠平均存活时间长(P＜0.05),mPEG-SPA单独预处理组和抗OX40L单独预处理组牛存率分别为50.0%、41.7%,明显高于单纯骨髓移植组,OX40L mPEGSPA联合预处理组生存率高,为66.7%.②移植后对照组小鼠血清IFN-γ浓度升高,在+10～+15d时达高峰;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组降低,+10 d时降至低,OX40LmPEG-SPA联合预处理组降低明显(P＜0.01).移植后对照组IL4、IL-10浓度轻度降低,而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组均明显升高(P＜0.05),+10～+15 d达高峰,以联合组升高明显(P＜0.01).③mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组+60 d时异基因嵌合率为95%～100%,证实为完全供者型植入.结论 mPEG-SPA与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,协同抑制T细胞的增殖活性,促进Th0细胞向Th2细胞分化,从而明显减轻小鼠骨髓移植中aGVHD的发生.
-
血小板经mPEG-SPA化学修饰后体外功能特性研究
血小板输血在生理性止血、血小板减少性疾病的治疗中起重要作用[1] ,但多次输注血小板患者可产生新的血小板抗体,造成血小板输注无效.采用线性高分子化合物甲氧基聚乙二醇-丙酸-琥珀酸亚胺(mPEG-SPA)可有效遮蔽血小板表面抗原,避开体内抗体的攻击,制备通用血小板,解决临床由免疫因素引起的血小板配型困难[2].
-
移植物化学修饰减轻小鼠半相合骨髓移植后的急性移植物抗宿主病
背景:甲氧基聚乙二醇是一种无免疫原性的兼性聚合分子,可以共价结合方式修饰各种蛋白质,减少其免疫原性.因此,在进行半相合造血干细胞移植时,若能用甲氧基聚乙二醇对移植物的T细胞进行化学修饰,阻断其激活的途径,就可能减轻移植物抗宿主病反应,提高移植成功率.目的:构建小鼠半相合骨髓移植模型,观察甲氧基聚乙二醇修饰移植物对小鼠H2半相合骨髓移植后移植物抗宿主病的影响.设计、时间及地点:随机化配对设计实验,于2003-03/11在解放军总医院医学动物实验中心和小儿内科实验室完成.材料:纳入20只8～10周龄雄性近交系BALB/cH-2d小鼠作为供鼠,60只8-10周龄杂交获得的雌性CB6 F1代".m小鼠作为受鼠.甲氧基聚乙二醇为美国Sigma公司产品.方法:常规制备供鼠骨髓及脾细胞混合悬液.受鼠行总剂量8.0 GY60Co γ射线全身均匀照射,照射后随机分为3组,每组20只.照射对照组每只受鼠经尾静脉输入RPMI-1640培养摹基0.5 mL,单纯移植组照射后12 h内经尾静脉输入未处理的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5 mL,修饰移植组照射后12 h内经尾静脉输入甲氧基聚乙二醇修饰的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL.主要观察指标:移植后观察动物存活率、急性移植物抗宿主病理表现及存活小鼠的染色体核型.结果:照射对照组小鼠均在2周内死亡;修饰移植组小鼠30 d存活率显著高于单纯移植组(75%,40%,x2=5.01,P=0.025).取死亡小鼠的爪垫皮肤、肝及小肠肠管作病理组织学检查,修饰移植组急性移植物抗宿主病病理表现减轻,Thomas病理分级轻于单纯移植组.移植后75 d应片j染色体C带显色法检测存活受鼠的嵌合体,证实为完全供者型植入.结论:甲氧基聚乙二醇修饰移植物可明显减轻急性移植物抗宿主病,提高半相合骨髓移植存活率.
-
人红细胞RhD血型抗原的甲氧基聚乙二醇修饰研究
目的:探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)遮蔽修饰的红细胞RhD血型抗原的有效性和稳定性以及被修饰红细胞结构和功能的变化.方法:用mPEG-SPA修饰RhD血型阳性人红细胞,观测修饰和未修饰红细胞的抗-D凝集反应性、mPEG结合产物稳定性、电镜下细胞形态、变形指数、渗透脆性、自身溶血率、2,3-二磷酸甘油酸含量、膜Na(+),K(+)-ATP酶、乙酰胆碱酯酶活性和胆固醇含量.结果:0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、2.5mmol/L和5.0 mmol/L的mPEG-SPA修饰红细胞与抗D的凝集反应情况依次为50%凝集、可见凝集、无凝集、无凝集、无凝集,在4℃保存14 d和在37℃保存2 d的修饰红细胞与抗-D均无凝集反应,而未修饰红细胞则全凝集.电镜下修饰和未修饰红细胞均为双凹圆盘状形态,细胞大小均一.修饰和未修饰红细胞的各观测指标分别为:2,3-二磷酸甘油酸含量(71.00±12.88)mmol/L和(65.13±13.98)mmol/L,红细胞沉降率(2.75±2.05)mm/h和(8.00±3.82)mm/h,细胞变形指数(0.98±0.18)和(0.98±0.29),自身溶血率(2.27±0.28)%和(1.32±0.32)%,渗透脆性(0.44±0.06)%和(0.44±0.03)%,膜胆固醇含量(0.10±0.03)g/L和(0.10±0.06)g/L,Na+,K(+)-ATP酶活性(4.83±1.27)U/mg和(5.41±1.32)U/mg,乙酰胆碱酯酶活性(27.88±5.09)U/mg和(29.68±4.16)U/mg.修饰红细胞的沉降速率低于未修饰红细胞,自身溶血率高于未修饰红细胞(P<0.05),但是修饰红细胞沉降速率和自身溶血率都在参考值范围.结论:2.0 mmol/L的mPEG-SPA能够有效并且稳定地遮蔽红细胞RhD血型抗原.修饰红细胞具有未修饰红细胞的双凹圆盘状形态、细胞膜结构、变形性和运送氧气能力.
-
血小板经mPEG-SPA化学修饰后的效果研究
目的 观察mPEG-SPA化学修饰血小板表面抗原的修饰效果,及修饰对血小板寿命、血小板凋亡的影响.方法 用mPEG-SPA对血小板进行化学修饰;流式法检测修饰前后血小板CD42a及PS荧光强度变化;体外保存血小板检测其寿命.结果 经mPEG-SPA修饰后,血小板CD42a表达率由修饰前的(13.48±2.92)%降至修饰后的(5.03±1.68)%;血小板死亡率及PS表达率随保存时间延长而升高,但修饰前后差异无统计学意义.结论 mPEG-SPA可有效修饰遮蔽血小板表面抗原,并对血小板寿命、血小板凋亡无显著影响.
-
化学材料修饰红细胞非ABO系统血型抗原的研究
目的考察甲氧基聚乙二醇(mPEG)衍生物与红细胞膜蛋白共价结合,遮蔽红细胞上的非ABO系统的血型抗原的效果.方法选择3种端基的mPEG衍生物(mPEG-BTC、-NHS、-ALD)修饰红细胞,分别观察它们对红细胞抗原性、形态结构及功能的影响.结果携带BTC端基的mPEG遮蔽抗原效果较好,并对红细胞结构、功能、变形性无影响;而且修饰后的红细胞无叠连现象,红细胞沉降率(ESR)有所降低.结论mPEG修饰后的红细胞在解决临床输血中经常遇到的偏型、血型、配型困难等问题具有重要的研究价值.
-
甲氧基聚乙二醇遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的研究
目的观察mPEG对猕猴类人B抗原的修饰效果及mPEG修饰后的红细胞给动物输血的安全性.方法用3mg/ml的mPEG修饰遮蔽猕猴红细胞表面的类人B血型抗原,吸收放散法检测猕猴血型及mPEG对猕猴红细胞血型的修饰结果;红细胞变形仪等检测mPEG修饰对红细胞的变形能力、结构与功能的影响;荧光素标记,自体回输实验检测红细胞存活率;异体回输实验观察修饰后红细胞对受血猴的血液、尿液的影响.结果 mPEG修饰可以遮蔽猕猴类人B抗原的抗原性,不影响所修饰红细胞结构、功能及体内存活;mPEG修饰的类人B型红细胞输给类人A型血的猕猴,未发生输血反应;受血猴的血细胞、血液生化及尿液各项指标与输血前相比,无明显变化.结论 mPEG修饰可遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的抗原性,mPEG修饰红细胞在受血猴体内是安全的.
-
甲氧基聚乙二醇遮蔽红细胞表面抗原制备通用型血液的初步研究
目的:探讨mPEG遮蔽红细胞表面抗原、制备通用型血液的可能性.方法:使用mPEG修饰人红细胞,观察其对红细胞的影响.结果:随着mPEG剂量的增高,红细胞的A、B和D抗原逐步减弱.在一定浓度下mPEG修饰不影响红细胞的形态、结构、功能及变形性,然而高浓度的mPEG修饰可能会使红细胞寿命缩短.结论:尽管还有很多问题需要解决,mPEG修饰法制备通用型血液具有进一步研究的价值.
