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不同剂量的阿托伐他汀对ACS患者血浆OX40L水平的影响
目的:验证OX40L在冠心病患者及正常对照血浆中的变化,探讨不同剂量阿托伐他汀早期干预治疗对急性冠脉综合征(ACS)患者血浆炎症指标OX40L水平的影响.方法:急性冠脉综合征60例,稳定型心绞痛20例(SA),非冠心病患者20例(C).分别测定以上各组患者入院时的血浆OX40L水平.将ACS患者随机分成阿托伐他汀10mg/日组(A组)和40mg/日组(B组),疗程均7～10天,第8天测定两组ACS患者血浆OX40L的水平.结果:ACS组血浆OX40L水平高于正常组(P＜0.05),略高于SA组,差异无统计学意义.阿托伐他汀治疗1周后A、B两组血浆OX40L水平有所下降,A组患者血浆OX40L治疗前后差异无统计学意义,B组OX40L治疗前后有统计学意义.将A、B两组治疗前后的变化值进行比较,OX40L降低幅度有差别,且差别有统计学意义(P＜0.05),B组较A组作用更明显.结论:ACS患者血浆OX40L水平增高,早期阿托伐他汀治疗可降低ACS患者OX40L水平,且不同剂量阿托伐他汀对于OX40L会产生不同的影响,40mg/日抗炎作用强于10mg/日,ACS患者早期应用大剂量的他汀类强化治疗可能使患者获益更大.
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新血府逐瘀软胶囊对冠心病血瘀征象及OX40L、hs-CRP影响的临床研究
目的 探讨新血府逐瘀软胶囊对冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)患者血瘀征象及血清OX40L(OX40L)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响.方法 将80例CHD患者随机分为治疗组和对照组,每组40例.对照组予以常规西药治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用新血府逐瘀软胶囊治疗,两组均用药3个月,观察两组治疗前后血瘀征象并检测血清OX40L 、hs-CRP水平.结果 两组治疗后血瘀征象均较前改善,治疗组总有效率为80.6%,明显高于对照组(P＜0.05).两组治疗后hs-CRP、OX40L水平均较治疗前降低(P＜0.01),且治疗组治疗后OX40L及hs-CRP水平均低于对照组(P＜0.05).结论 新血府逐瘀软胶囊可以改善冠心病患者血瘀征象,降低外周血OX40L及hs-CRP水平,提示其可能通过降低炎症反应、稳定动脉粥样硬化斑块来降低心血管事件的发生率.
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小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响
目的 鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用.方法 通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化,细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况.体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后,3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-Ⅴ/PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况,ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平.结果 小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达,其蛋白表达率由23%增加为94%;原代小胶质细胞活化后表达OX40L.小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌,抑制了T细胞凋亡.结论 小胶质细胞活化后表达OX40L分子,OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖,抑制其凋亡,从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用.有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制,进一步认识OX40L的表达及功能.
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鼠抗人OX40L功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
目的鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定. 方法以高表达人OX40L分子的转基因细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并以L929/OX40L为阳性抗体筛选细胞,L929/mock为阴性抗体筛选细胞,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和3H-TdR增殖试验等对单抗进行生物学特性的鉴定. 结果成功获得3株持续、稳定分泌鼠抗人OX40L单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为9H10、4C12和1G1.对单抗的生物学功能的研究结果表明,3株单抗均能识别活化B细胞和成熟DC表达的OX40L分子,且能抑制成熟DC对T细胞的促增殖作用,并与阻断型抗人B7-1单抗具有协同作用. 结论获得的3株分泌鼠抗人OX40L功能性单克隆抗体的杂交瘤,所分泌的抗体具有特异性地识别人OX40L分子并能阻断OX40/OX40L共刺激信号及抑制DC对T细胞的激发作用.
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糖皮质激素对活化后小胶质细胞株N9中MHC-Ⅱ和OX40L表达的影响
目的研究糖皮质激素对炎症刺激活化后的小胶质细胞株N9表面分子MHC-Ⅱ和OX40L表达的影响.方法脂多糖(LPS)联合小鼠γ-干扰素刺激N9细胞活化,采用RT-PCR、免疫荧光检测N9活化前后OX40L的表达.糖皮质激素及其受体阻断剂RU-486处理活化的N9细胞后,用流式细胞术(FACS)检测MHC-Ⅱ、OX40L的表达变化.结果 N9活化前OX40L mRNA和蛋白均有组成性表达,活化后MHC-Ⅱ和OX40L表达显著上调(P<0.05),糖皮质激素处理后与活化组比较两分子表达下调(P<0.05),加入RU-486又可使两分子表达上调.结论小胶质细胞N9活化后MHC-Ⅱ、OX40L表达显著升高,而糖皮质激素可通过抑制小胶质细胞MHC-Ⅱ和OX40L表达拮抗小胶质细胞的抗原呈递功能,从而降低由T细胞活化介导的损伤效应.
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OX40/OX40L与疾病
OX40/OX40L是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,参与T细胞的活化、增殖和迁移,以及生发中心的形成和树突状细胞的分化成熟.在介导肿瘤免疫应答和自身免疫疾病的发生、发展中具有重要作用.OX40只表达于活化的T细胞表面,且主要是CD4 +T细胞.OX40+T细胞是抗原特异性T细胞,集中于淋巴组织的T细胞区和外周的炎性位点,非炎性相关组织及外周血中很少出现,有很强的区域特异性.OX40L能协同刺激T细胞的活化,促进B细胞产生高效价抗体和类别转化,介导OX40+T细胞向炎症部位浸润.
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OX40对CD4记忆T细胞的调节
CD4记忆T细胞在保护机体免受病毒、细菌、寄生虫等物质感染中起十分重要的作用,并与自身免疫反应、变态反应等有关异常的免疫反应相关理解免疫记忆反应有效的控制机制对于疫苗的设计以及调控异常免疫反应有着重要的意义.近年来,肿瘤坏死因子受体超家族成员-OX40(CD134),作为一共刺激分子对于维持CD4+T细胞的活化、增值、存活起到关键性作用.本文对此研究进展作以综述.
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移植物化学修饰与阻断 OX40-OX40L途径预防异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病的研究
目的 观察甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(mPEG-SPA)与抗OX40L单抗预处理移植物对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其机制.方法 供、受鼠的脾淋巴细胞体外混合培养,加入抗OX40L单抗孵育培养后,再用mPEG-SPA化学修饰,与C57BL/6供鼠骨髓细胞混合后移植给经致死量全身照射的BALB/c受鼠.同时设相应的对照组.观察移植后受鼠aGVHD的临床表现、病理学改变、存活时间及生存率等,检测移植鼠T淋巴细胞亚群,细胞因子的变化及异基因嵌合体.结果 ①单纯骨髓移植对照组小鼠均出现aGVHD临床表现,17 d内全部死于aGVHD,存活时间为(12.1±5.5)d;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠一般状态较好,部分出现aGVHD表现,且较单纯骨髓移植对照组症状轻,皮肤、肝脏、小肠病理表现均较单纯骨髓移植对照组明显减轻,mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠存活时间分别为(36.2±24.9)、(32.0±24.8)和(44.3±23.2)d,均较单纯骨髓移植对照组明显延长(P＜0.05),其中抗OX40L mPEG-SPA联合预处理组小鼠平均存活时间长(P＜0.05),mPEG-SPA单独预处理组和抗OX40L单独预处理组牛存率分别为50.0%、41.7%,明显高于单纯骨髓移植组,OX40L mPEGSPA联合预处理组生存率高,为66.7%.②移植后对照组小鼠血清IFN-γ浓度升高,在+10～+15d时达高峰;而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组降低,+10 d时降至低,OX40LmPEG-SPA联合预处理组降低明显(P＜0.01).移植后对照组IL4、IL-10浓度轻度降低,而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组均明显升高(P＜0.05),+10～+15 d达高峰,以联合组升高明显(P＜0.01).③mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组+60 d时异基因嵌合率为95%～100%,证实为完全供者型植入.结论 mPEG-SPA与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,协同抑制T细胞的增殖活性,促进Th0细胞向Th2细胞分化,从而明显减轻小鼠骨髓移植中aGVHD的发生.
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原发性干燥综合征患者外周血OX40、OX40 L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达及临床意义
目的 研究原发性干燥综合征(primary sjogren's syndrome,PSS)患者外周血OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达水平及临床意义.方法 选择本院2012年3月—2015年3月收治的50例PSS患者(观察组),再根据疾病活动情况及病情程度分为活动期亚组(30例)、非活动期亚组(20例)和单系统亚组(29例)、多系统亚组(21例).选择同期我院行体检健康者50例作为对照组.两组均行免疫荧光标记、流式细胞术检测外周静脉血OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达情况;比较所有纳入研究者间OX40、OX40L、PD-1、PD-L1及SPD-1的表达情况,并记录观察组患者治疗前后上述指标的表达情况.结果 观察组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+、CD4+PD-1+和CD4+PD-1+及SPD-1表达均高于对照组,CD14+PD-L1+表达低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).对观察组亚组进行分析,活动期亚组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+、CD4+PD-1+及SPD-1表达显著高于非活动期亚组(P<0.05或P<0.01);单系统亚组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+及SPD-1表达明显低于多系统亚组(P<0.05或P<0.01).治疗前观察组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+和CD4+PD-1+表达显著高于治疗后(P<0.05);CD8+PD-1+、CD14+PD-L1+及SPD-1表达治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 PSS患者外周静脉血中OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的异常表达,和疾病活动情况、组织损害情况有关联,可作为了解病情活动度和严重程度的检测指标.
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早期强化阿托伐他汀治疗对不稳定型心绞痛患者PCI术后sOX40L及冠脉事件的影响
目的 探讨强化阿托伐他汀治疗对不稳定性心绞痛(UA)患者经皮冠脉介入治疗( PCI)术后可溶性OX40L(sOX40L)及冠脉事件的影响.方法 选取因UA入院,并行PCI且随访至入院后180 d患者286例,收集患者一般资料及测定入院及随访180 d后血浆sOX40L水平,PCI前分别给予10mg po qn、40mg po qn阿托伐他汀或安慰剂治疗,记录患者冠脉事件.结果 应用强化阿托伐他汀治疗后患者sOX40L水平较常规剂量组或对照组sOX40L降低明显,冠脉事件发生率低,冠脉事件率与sOX40L降低水平呈正相关.结论强化阿托伐他汀治疗可显著降低sOX40L水平,进而减少冠脉事件发生.
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急性冠脉综合征患者OX40L与再缺血事件的关系
目的 探讨非ST段抬高性急性冠脉综合征(ACS)患者外周血淋巴细胞表达OX40L及血浆可溶性OX40L(sOX40L)水平与再发缺血事件的关系.方法 选取336例非ST段抬高性ACS住院患者,收集患者基线资料及180 d内发生急性心肌梗死(AMI)及因ACS再住院情况,对患者入院时血淋巴细胞表达OX40L、血浆sOX40L水平、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平进行检测；分析OX40L在淋巴细胞上的表达、血浆OX40L水平与再发缺血事件的关系并与CRP与预后的关系比较.结果 外周血淋巴细胞OX40L高表达水平者随访30d(P＜0.05)、高hs-CRP水平者30 d(P＜0.05)水平者再缺血事件发生率高.Logistic回归分析显示:年龄(OR:2.37,95％CI 1.10 ～4.81,P＜0.05)、血糖水平(OR:2.46,95％CI 1.16～4.92,P＜ 0.05)、淋巴细胞OX40L表达水平(OR:4.20,95％CI 2.41 ～7.09,P＜0.05)、血清hs-CRP(3.46,95％CI 1.39～7.82,P＜0.05)为随访30 d内再缺血事件发生的独立预测因素.结论 ACS患者急性期淋巴细胞OX40L表达、血清sOX40L水平可预测近期再缺血事件.
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OX40L在C57BL/6与BALB/c小鼠组织的差异性表达及分析
背景:有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感.OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异?目的:分析0X40L在BALB/c和C57BU6小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织的表达差异.方法:取C57BL/6和BALB/c小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织,以Trizol提取总RNA, RIPA Buffer提取组织总蛋白.采用RT-PCR和Westem Blot方法检测两种品系小鼠心脏、脑、肾脏、脾脏和骨骼肌的OX40LmRNA和蛋白的表达.OX40L在两种品系小鼠不同器官间的表达差异.结果与结论:RT-PCR结果显示,C57BL/6小鼠心脏OX40LmRNA表达显著高于BALB/c小鼠(P＜0.05),脾脏OX40LmRNA表达明显低于BALB/c小鼠(P＜0.05),两种品系小鼠大脑、肾脏及骨骼肌OX40LmRNA表达差异无显著性意义;Western Blot结果显示,两种品系小鼠OX40L的蛋白表达均在心脏高;C57BL/6小鼠心、脑及肾OX40L蛋白表达均显著高于BALB/c小鼠(P＜0.05),两种品系小鼠骨骼肌和脾脏OX40L蛋白表达差异无显著性意义.两个品系小鼠OX40L mRNA的表达水平与蛋白表达水平不完全一致.C57BL/6小鼠心脏中OX40L mRNA转录水平较BALB/c高,但在脾脏中表达量较后者低;C57BL/6小鼠心脏、大脑和肾脏OX40L蛋白水平均较BALB/c小鼠高;两种品系小鼠之间的表达差异提示OX40L可能与C57BL/6小鼠易感动脉粥样硬化有关.
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稳定型心绞痛患者经皮冠状动脉介入治疗后血浆OX40L水平与预后的关系
目的 观察稳定型心绞痛患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后血浆OX40L水平的变化趋势,并探讨其与患者预后的关系.方法 选取稳定型心绞痛患者200例,均行PCI,测定术前及术后不同时间点血浆OX40L的浓度,观察血浆OX40L浓度的变化趋势.对所有患者进行18个月的随访,随访终点为不良心血管事件.结果 患者PCI术后血浆OX40L浓度较术前明显升高(P＜0.05),术后24 h达峰值.185例患者随访成功,其中发生不良心血管事件(事件组)患者39例(21.08％),无心血管事件(无事件组)患者146例(78.92％).事件组血浆OX40L峰值水平高于无事件组[分别为(37.51±6.17)和(30.95±3.81)pg/mL],差异有统计学意义(P＜0.05).logistic回归分析显示,OX40L峰值与患者随访期间发生不良心血管事件密切相关(P＜0.05).结论 PCI术增加稳定型心绞痛患者OX40L的表达,峰值水平对术后18个月不良心血管事件有良好预测价值.
关键词： OX40L 稳定型心绞痛 经皮冠状动脉介入治疗 预后 -
人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究
目的:克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应.方法:运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GST-sOX40L,Western blot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响.结果:构建了GST-sOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性:促进T细胞生长、增殖以及IL-2的分泌.结论:成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础.
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氧化型低密度脂蛋白的内皮损伤作用及其对人脐静脉内皮细胞中OX40L表达的影响
目的 观察氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)的内皮损伤作用及其对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中OX40L表达的影响.方法 采用CCK-8法检测不同浓度ox-LDL(50、100和150 mg/L)对HUVEC增殖活力的影响；流式细胞术检测100 mg/L ox-LDL处理的HUVEC细胞周期及凋亡率的变化；Western blot法检测不同浓度ox-LDL(50、100和150 mg/L)处理的HUVEC中OX40L蛋白的表达水平；免疫荧光及激光共聚焦检测100 mg/L ox-LDL处理的HUVEC中OX40L蛋白的定位,均设加入等量培养基的HUVEC作为对照组.结果 与对照组相比,随着ox-LDL浓度的升高,HUVEC的增殖活力明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01)；ox-LDL 100 mg/L组细胞被阻滞在S期,凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05)；与对照组相比,随着ox-LDL浓度的升高,HUVEC中OX40L的表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);ox-LDL100mg/L组HUVEC表达OX40L的荧光明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01),且OX40L蛋白定位于细胞膜及细胞质上.结论 ox-LDL对HUVEC具有明显的损伤作用,可促进HUVEC中OX40L的表达,影响OX40/OX40L炎症信号通路.
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OX40在免疫耐受中的调节作用
T细胞的激活不仅需要T细胞受体与靶细胞表面的抗原肽-主要组织相容性复合物特异性结合产生的第一信号,还需要共刺激分子传导的第二信号.OX40就是共刺激分子之一,其与配体OX40L的相互作用对维持T细胞活化后的进一步扩增、存活、分化为效应细胞及记忆性T细胞具有重要作用.阻断这一信号通路对增强免疫耐受,治疗移植排斥反应具有重要价值.近年来OX40在免疫耐受中对不同类型T细胞的调节作用及其在器官移植及移植物抗宿主病中应用的研究备受瞩目.
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胸腺基质淋巴细胞生成素、OX40和OX40受体在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中表达的关系
目的 建立小鼠过敏性腹泻模型,检测其大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、OX40、OX40受体(OX40L)的表达和肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4、IFN-γ的水平,分析其之间的关系,探讨TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻中的作用.方法 雌性BALB/c小鼠20只随机分成两组即对照组和实验组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平,取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变,SP免疫组织化学技术检测TSLP、OX40、OX40L的表达.结果 ①HE染色结果显示:实验组比对照组小鼠结肠黏膜组织非特异性炎症反应显著,上皮排列不规则,有大量炎性细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞浸润；②TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中的表达水平高于对照组的表达水平(t=7.07,t =7.81,t =7.79,P均＜0.01)；③Spearman等级相关分析发现TSLP、OX40、0X40L三者间表达强度存在正相关(r=0.889,r=0.932,r=0.943,P均＜0.01),同时三者与肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4水平呈正相关(r=0.891,r =0.936,r=0.886,P均＜0.05),而与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.829,r=-0.881,r=-0.937,P均＜0.05).结论 TSLP、OX40、OX40L三者间表达存在正相关,并诱导了Th1/Th2轴向Th2轴漂移,促进了过敏性腹泻的发生发展.
关键词： 胸腺基质淋巴细胞生成素 OX40 OX40L 过敏性腹泻 Th1/Th2轴 -
OX40/OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏组织中的表达及意义
为了探讨OX40和OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J(简称B6.Fas)狼疮小鼠淋巴细胞上的表达及其在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病机制中可能的作用,本课题采用流式细胞仪检测技术对小鼠脾脏T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析并采用Albustix试纸法检测小鼠24 h尿蛋白量.结果显示,20周龄B6.Fas狼疮小鼠伴有异常升高的蛋白尿(++～+++)、28周龄B6.Fas狼疮小鼠蛋白尿含量进一步升高为++++,12周龄B6.Fas狼疮小鼠及正常小鼠均为≦+.与正常对照小鼠相比,12周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达无显著差异(P＞0.05)；20周、28周龄B6.Fas狼疮小鼠CD4+T细胞上OX40表达水平以及B细胞上OX40L表达水平明显升高(P＜0.05),而CD8+T细胞上OX40表达水平无显著差异(P＞0.05)；并且28周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达水平高于20周龄小鼠(P＜0.05).这表明伴随蛋白尿量的增加,狼疮小鼠脾脏T细胞和B细胞上OX40和OX40L分子表达异常升高,提示OX40/OX40L信号可能与狼疮的发病以及病情发展有一定的相关性.
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Graves病患者外周血OX40和OX40L分子表达的研究
探讨OX40和OX40L分子在Graves病患者外周血T淋巴细胞和单核细胞上的表达及其在Graves病发病机制中的可能作用.采用流式细胞仪检测技术对50例初发Graves病患者和30例健康志愿者外周血T细胞上OX40和单核细胞上OX40I的表达水平进行分析,并对28例治疗前后病人淋巴细胞上OX40/OX40L的表达进行了比较.结果:与正常对照组比,初发Graves病患者外周血CD4+T细胞上OX40表达水平明显升高,而CD8+T细胞上OX40表达水平无显著变化；同时,还检测到单核细胞上OX40L表达水平也明显增加.治疗后,FT3(游离三碘甲腺原氨酸)值恢复至健康对照组表达范围的Graves病患者其CI4+T细胞上OX40和单核细胞上OX40L的表达均显著降低至正常水平；而FT3值仍偏高的患者单核细胞上OX40L的表达降低,但未降至健康对照组表达范围,CD4+T细胞上OX40的表达则无显著变化.Graves病患者外周血T细胞和单核细胞上分别存在OX40和OX40L的异常表达,且与治疗效果密切相关,提示OX40/OX40L信号在T细胞与单核细胞相互作用过程中可能有助于自身反应性T细胞的持续活化,从而参与Graves病的免疫发生发展.
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转染人OX40L细胞株的构建及其对T细胞共刺激作用的研究
为了构建稳定表达人OX40L基因的L929细胞株,初步研究OX40L信号通路对T细胞的共刺激效应.TRIzol一步法抽提人成熟DC总RNA,RT-PCR扩增出OX40L基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72 h后,经Zeocin筛选出稳定表达OX40L分子的L929细胞株;采用3H-TdR掺入实验、细胞凋亡、细胞周期等方法研究OX40L信号对T细胞体外培养的共刺激作用.结果显示,成功地构建了含OX40L基因的重组逆转录病毒载体;经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人OX40L蛋白的L929转基因细胞;OX40L转基因细胞对体外培养的T细胞具有促增殖、活化和抗凋亡的作用;同时,OX40/OX40L信号与CD28/B7信号具有协同作用.
