首页 > 文献资料
-
人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
目的：制备抗人 OX40单克隆抗体，为进一步研究OX40/OX40L 通路以及针对该通路进行疾病干预、疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法 PCR扩增人 OX40胞外区的基因序列，将其构建到原核表达载体 pET-32a(+)中，利用大肠杆菌表达系统表达OX40胞外区蛋白，经 Ni 柱纯化后获得目的蛋白。以纯化的 OX40胞外区蛋白为免疫原免疫小鼠，采用常规方法进行细胞融合，通过 ELISA 和多次克隆化培养，筛选出分泌特异性鼠抗人 OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot 和免疫荧光检测抗体的效价及特异性。结果成功构建人 OX40原核表达质粒 pET-32a(+)-OX40，并在 BL21(DE3)中诱导表达，经 SDS-PAGE 和 Western blot 鉴定、Ni 柱纯化、透析后获得 OX40胞外区蛋白；以此纯化蛋白为免疫原，成功制备具有较强亲和力的单克隆抗体。结论克隆表达并纯化了人 OX40蛋白，成功制备针对该蛋白的高亲和力单克隆抗体，为进一步研究 OX40/OX40L的生物学功能奠定了实验基础。
-
肿瘤免疫治疗新靶点OX40的研究进展
OX40属于肿瘤坏死因子受体家族,主要表达在活化的淋巴细胞表面.OX40及其配体OX40L是机体免疫应答中重要的协同刺激分子,可改善肿瘤微环境中的免疫抑制作用,增强效应性淋巴细胞杀伤能力,在介导肿瘤免疫应答发生发展中具有重要作用.临床前动物研究显示,OX40靶点激动剂单用或者与其他治疗方式联用均能发挥明显的抗肿瘤作用.目前已有多个OX40靶点激动剂的早期临床研究在开展.本文将从分子生物学特征、作用机制、单药及联合用药等方面综述OX40作为肿瘤免疫治疗新靶点的研究进展.
-
抗人CD134单抗对植物血凝素诱导的外周血单个核细胞穿孔素表达的影响
目的 观察不同浓度抗人CD134单抗对外周血单个核细胞(PBMC)穿孔素表达的影响及时间效应,旨在探讨抗人CD134单抗治疗自身免疫性疾病的可能机制.方法 在植物血凝素诱导下,分别以1 μg/ml、5 μg/ml和10 μg/ml的抗人CD134单抗作用于人PBMC,于6 h、12 h、24 h、48 h用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测穿孔素mRNA表达,流式细胞仪检测穿孔素蛋白表达.结果 不同浓度的CD134单抗作用不同时间后,健康成人PBMC穿孔素mRNA和蛋白的表达均有不同程度的下调,且在24 h达低值.当CD134单抗≤5 μg/ml时,随着单抗浓度的增加,穿孔素mRNA明显下调,其差异有统计学意义,当CD134单抗浓度＞5 μg/ml时,穿孔素mRNA不再下调(P＞0.05);穿孔素蛋白表达也有类似的变化.结论 抗人CD134单抗可以在转录水平和翻译水平上抑制穿孔素的表达,这种作用在24 h达到高峰且会饱和,这可能被用于治疗某些自身免疫性疾病.
-
OX40和SLP-2在食管鳞癌中的表达及其临床意义
目的:研究OX40和SLP-2在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达情况,并探讨OX40和SLP-2与食管鳞癌患者临床病理特性的相关性.方法:(1)应用免疫组织化学法分别检测OX40和SLP-2在94例食管鳞癌癌组织、31例癌旁不典型增生组织及31例正常组织中的表达.应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析.两样本的比较采用四格表资料的x2检验;OX40和SLP-2的相关性采用Spearman等级相关分析.检验水准α=0.05.结果:(1)免疫组织化学结果显示OX40和SLP-2在癌组织(54.3％、50.0％)及癌旁不典型增生组织中(54.8％、25.8％)的表达均明显高于正常组织(3.2％、6.5％)(x2=26.374,20.988,P＜0.05),且OX40和SLP-2的表达与患者TNM分期及有无淋巴结转移相关;(2)OX40与SLP-2的表达具有相关性(r=0.363,P＜0.05).结论:(1)OX40和SLP-2在食管鳞癌组织中高表达,可能参与食管鳞癌的发生发展和转移;(2)OX40和SLP-2的表达具有相关性.
-
OX40对溃疡性结肠炎CD4+T细胞分泌细胞因子功能的影响
目的 研究溃疡性结肠炎(UC)CD4+T细胞表达OX40分子的差异及OX40对CD4+T细胞分泌细胞因子功能的影响.方法 用流式细胞仪测定OX40在不同来源的CD4+T细胞上的表达.用ELISA法测定CD4+T细胞分泌IFNγ、TNFα、IL-4和IL-10的水平.结果 UC病变部位黏膜固有层(LP)的CD4+T细胞表达OX40分子明显高于患者外周血和非病变部位LP-CD4+T细胞(P＜0.01).在体外与抗原呈递细胞(APC)共同培养,病变部位LP-CD4+T细胞分泌IFNγ和TNFα的水平明显高于非病变部位(P值均＜0.01).加入OX40单抗后,病变部位LP-CD4+T细胞分泌IFNγ和TNFα进一步增加(P值均＜0.01).相反,加入OX40配体(OX40L)单抗后病变部位LP-CD4+T细胞分泌IFNγ和TNFα的水平被明显抑制(P值均＜0.01).但OX40或OX40L单抗对非病变部位LP-CD4+T细胞分泌IFNγ、TNFα则无明显影响.另外,UC病变和非病变部位LP-CD4+T细胞分泌IL-4和IL-10的水平无明显的差别.结论 UC肠道病变部位LP-CD4+T细胞表达OX40明显增高.OX40L单抗能抑制病变部位LP-CD4+T细胞分泌促炎性细胞因子.阻断OX40/OX40L的作用可能为UC治疗提供一条新途径.
-
共刺激分子OX40-OX40L相互作用对ApoE-/-小鼠淋巴细胞活化T细胞核因子C1表达的影响
目的 探讨共刺激分子OX40-OX40L相互作用对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠淋巴细胞中活化T细胞核因子C1(NFATc1)表达的影响.方法 采用未经治疗的ApoE-/-小鼠颈动脉粥样斑块模型,取其脾脏淋巴细胞,以不同浓度刺激型OX40抗体或抑制型OX40L抗体体外特异性刺激或阻断OX40-OX40L相互作用,不同时间点收获细胞,分别应用实时荧光定量PCR和流式细胞技术检测小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达.结果 (1)抗OX40抗体特异性刺激OX40-OX40L轴后,小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA及蛋白表达明显上调,anti-OX40浓度为20 μg/ml时刺激作用强,刺激时间24 h佳(P<0.01).(2)抗OX40L抗体特异性阻断OX40-OX40L轴能明显抑制NFATc1 mRNA及蛋白表达,anti-OX40L为20 μg/ml时抑制作用强,抑制时间24 h佳(P<0.001).结论 OX40-OX40L相互作用能调控ApoE-/-小鼠淋巴细胞NFATc1的表达.
关键词： 动脉粥样硬化 OX40 OX40配体 NFATC转录因子类 -
靶向OX40基因的siRNA抑制大鼠肝脏移植排斥反应的研究
目的 探讨RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作原位肝脏移植物大鼠模型,供体DA大鼠,受体Lewis大鼠.移植术毕时将5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒经阴茎背静脉在10秒内注射受鼠体内,术后观察受鼠存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查,采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2、IFN-γ的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混和淋巴细胞反应(MLR). 结果转染组大鼠肝脏移植物的存活时间为(74.0±9.3)d,明显长于对照组(7.3±0.5)d和未转染组(7.5±0.5)d;转染组移植肝组织炎细胞浸润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻;耐受组大鼠脾脏中T淋巴细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力较对照组降低(t=25.1,P＜0.01);移植术后第7 d,转染组血清IL-2浓度为(46±8.4)pg/ml,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)pg/ml,均显著低于对照组和未转染组(分别t=176.4,45.5,P＜0.01).结论 转染靶向OX40的siRNA,可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.
-
Rho激酶抑制剂对OX40及其配体mRNA在实验性变态反应性神经炎中表达的影响
目的 研究Rho激酶(ROK)抑制剂对OX40及其配体(OX40L)mRNA在实验性变态反应性神经炎(experimental allegic neuritis,EAN)大鼠坐骨神经、脾脏、外周血和淋巴结中表达的影响.方法 54只Lewis大鼠随机分为EAN模型组、EAN+ROK抑制剂干预组和完全弗氏佐剂对照(CFA)组.分别在免疫后第9、17、26天处死动物,取其坐骨神经根、脾脏、外周血单个核细胞和淋巴结,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测OX40和OX40L mRNA在各组织的表达水平.结果 EAN+ROK抑制剂组大鼠OX40 mRNA在坐骨神经中第9、17、26天的表达分别为0.266±0.031、0.298±0.024和0.113±0.018;在淋巴结中第9、17、26天的表达分别为0.453±0.030、0.496±0.100和0.220±0.016;OX40L mRNA在坐骨神经中第9、17、26天的表达分别为0.247±0.018、0.298±0.026和0.165±0.013;在淋巴结中第9、17、26天的表达分别为0.283±0.027、0.306±0.011和0.161±0.012.与EAN组比较,OX40和OX40L mRNA的表达明显降低(t=2.24～4.89,P＜0.05),坐骨神经炎性细胞浸润和脱髓鞘减轻.CFA组大鼠无症状.结论 ROK抑制剂可以减轻EAN发病程度,抑制OX40/OX40L的表达可能是其作用机制之一.
-
OX40基因原核表达及优化
目的 构建小鼠OX40胞外段基因的原核表达载体,进行诱导表达并优化表达条件.方法 PCR扩增OX40胞外段基因并将其插入原核表达质粒pET32a(+),重组pET32a-OX40经测序鉴定后转入表达菌株BL21(DE3)进行融合蛋白的小量诱导表达,并优化表达条件.结果 出现新增蛋白条带,融合蛋白主要存在于包涵体中;Western Blotting分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合.结论 构建了小鼠OX40基因的原核表达载体,获得OX40胞外段融合蛋白的佳表达条件,为后续单抗制备等工作奠定了基础.
-
OX40在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达及意义
目的 观察共刺激分子(costimulatory molecule) OX40在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠肝组织中表达的变化,探讨OX40在急性肝衰竭发病机制中的作用.方法 雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、急性肝衰竭(ALF)模型组.急性肝衰竭组:腹腔同时注射D-氨基半乳糖(D-GalN) 800mg/kg和脂多糖(LPS)8微克/只,在D-GalN和LPS注射后6、12、24、48h 4个时间点留取大鼠血及肝脏标本.全自动生化仪检测血清ALT、AST水平.苏木素-伊红(HE)染色下观察肝组织变化.RT-PCR法检测大鼠肝组织OX40mRNA表达.Western blot法检测肝组织OX40蛋白表达.结果 肝衰竭组血清ALT和AST水平在12h升高明显,24h开始下降.肝衰竭组肝组织OX40mRNA水平至12h达峰值,之后逐渐下降,与对照组比较,各时间点差异具有统计学意义(F =29.970,162.975,62.476,25.124,P＜0.05).肝衰竭组OX40蛋白的表达于12h达到大值,与对照组相比,差异有统计学意义(F=17.240,169.298,88.289,74.984,P＜0.05).结论 OX40在急性肝衰竭过程中呈上升趋势,于12h达高峰,提示OX40可能在急性肝衰竭过程中发挥重要作用.
-
OX40/OX40L与疾病
OX40/OX40L是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,参与T细胞的活化、增殖和迁移,以及生发中心的形成和树突状细胞的分化成熟.在介导肿瘤免疫应答和自身免疫疾病的发生、发展中具有重要作用.OX40只表达于活化的T细胞表面,且主要是CD4 +T细胞.OX40+T细胞是抗原特异性T细胞,集中于淋巴组织的T细胞区和外周的炎性位点,非炎性相关组织及外周血中很少出现,有很强的区域特异性.OX40L能协同刺激T细胞的活化,促进B细胞产生高效价抗体和类别转化,介导OX40+T细胞向炎症部位浸润.
-
OX40在溃疡性结肠炎中的表达及意义
目的:研究溃疡性结肠炎(UC)患者OX40分子的表达,以及CD4+OX40+T细胞的免疫表型和免疫学功能.方法:从活动性UC患者肠粘膜标本中分离和纯化粘膜固有层CD4+T细胞(LP-CD4+T).用FACS多参数分析法测定OX40在不同的CD4+T细胞上的表达.用ELISA BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶)法测定LP-CD4+T细胞的增生程度以及不同刺激剂对它们增生程度的影响.结果:UC病变部位LP-CD4+T细胞表达OX40明显高于健康对照者外周血、UC患者外周血CD4+T细胞以及UC患者非病变部位CD4+T的表达.LP-CD4+OX40+T细胞表达淋巴细胞活化标记CD25、CD38、CD45RO和HLA-DR均明显高于LP-CD4+OX40-T细胞的表达(P＜0.01).抗OX40单抗可明显增强病变部位LP-CD4+T细胞的增生反应.相反,抗OX40L单抗则能明显抑制病变部位LP-CD4+T细胞的增生.结论:OX40在UC患者病变部位的LP-CD4+T细胞上表达明显增加,LP-CD4+OX40+T细胞是一类在原位被特异性抗原激活后扩增的T细胞,它们在UC的免疫病理机制中起重要作用.抗OX40L能够抑制其增生反应,可能是一种有效治疗UC的新方法.
关键词： 溃疡性结肠炎 粘膜固有层CD4+T细胞 OX40 -
OX40对CD4记忆T细胞的调节
CD4记忆T细胞在保护机体免受病毒、细菌、寄生虫等物质感染中起十分重要的作用,并与自身免疫反应、变态反应等有关异常的免疫反应相关理解免疫记忆反应有效的控制机制对于疫苗的设计以及调控异常免疫反应有着重要的意义.近年来,肿瘤坏死因子受体超家族成员-OX40(CD134),作为一共刺激分子对于维持CD4+T细胞的活化、增值、存活起到关键性作用.本文对此研究进展作以综述.
-
原发性干燥综合征患者外周血OX40、OX40 L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达及临床意义
目的 研究原发性干燥综合征(primary sjogren's syndrome,PSS)患者外周血OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达水平及临床意义.方法 选择本院2012年3月—2015年3月收治的50例PSS患者(观察组),再根据疾病活动情况及病情程度分为活动期亚组(30例)、非活动期亚组(20例)和单系统亚组(29例)、多系统亚组(21例).选择同期我院行体检健康者50例作为对照组.两组均行免疫荧光标记、流式细胞术检测外周静脉血OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的表达情况;比较所有纳入研究者间OX40、OX40L、PD-1、PD-L1及SPD-1的表达情况,并记录观察组患者治疗前后上述指标的表达情况.结果 观察组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+、CD4+PD-1+和CD4+PD-1+及SPD-1表达均高于对照组,CD14+PD-L1+表达低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).对观察组亚组进行分析,活动期亚组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+、CD4+PD-1+及SPD-1表达显著高于非活动期亚组(P<0.05或P<0.01);单系统亚组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+及SPD-1表达明显低于多系统亚组(P<0.05或P<0.01).治疗前观察组CD4+OX40+、CD14+OX40L+、CD19+OX40L+和CD4+PD-1+表达显著高于治疗后(P<0.05);CD8+PD-1+、CD14+PD-L1+及SPD-1表达治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 PSS患者外周静脉血中OX40、OX40L、PD-1、PD-L1和SPD-1的异常表达,和疾病活动情况、组织损害情况有关联,可作为了解病情活动度和严重程度的检测指标.
-
CD40-CD40L与OX40在急性髓性白血病中的表达意义
目的:检测在急性髓性白血病细胞中CD40、CD40L、OX40的表达并探讨其临床意义.方法:应用流式细胞仪检测46例未经治疗的初诊急性髓性白血病患者骨髓单个核细胞表面CD40、CD40L、OX40的表达,分为四组:仅表达CD40的患者组(①组)、表达CD40+CD40L+OX40-的患者组(②组)、三种抗原全部表达组(③组)和全部不表达组(④组).利用SPSS统计软件分析.结果:在有高白细胞表现的患者中,②组的发病率(100%)高;在有血小板减少表现的患者中,①组的发病率(100%)高;在有脾大表现的患者中,④组的发病率(6.7%)低.结论:CD40的单独表达可能使白血病患者血小板的降低更加严重,而当合并CD40L表达时,会减少血小板低下的发生率.CD40的表达能增加患者伴有脾大表现的可能性.
-
急性髓性白血病中CD40-CD40L与OX40的表达与Bcl-2和Bcl-xL表达的相关性分析
水平低于②、③组的表达水平.结论:在CD40与CD40L同时表达时,可以提高白血病细胞Bcl-2和Bcl-xL的表达.
-
小干扰RNA对大鼠OX40基因表达的沉默作用
目的:研究靶向大鼠OX40基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-OX40) 对靶基因表达的沉默作用.方法:建立并筛选稳定表达OX40基因的293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-OX40转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR检测靶基因OX40 mRNA表达情况.结果:用不同浓度的siRNA-OX40转染细胞48小时,10 nmol/L浓度对293T细胞靶基因表达的抑制作用强 [抑制率(68.3±8.7)%],1 nmol/L浓度仍有一定的抑制作用[(37.2±4.8)%];25、10 nmol/L siRNA转染293T细胞后,均在24小时内起效[(21.4±3.2)%,(26.8±3.8)%],抑制作用至少能维持72小时[(61.7±8.4)%,(39.6±5.6)%].结论:siRNA-OX40对293T细胞外源性靶基因表达有较强的特异性沉默作用,siRNA在24小时内起效,48～72小时达高峰,抑制作用至少能维持72小时.本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据.
-
101 OX40信号在免疫应答中的作用
OX40是表达在活化T细胞上的一种糖蛋白，近年来发现OX40及其配体的作用可能与CD4+ T细胞的活化、T细胞与B细胞的相互作用以及Th1、Th2发育，还有某些疾病的发生、发展关系密切。
-
083 OX40在免疫治疗中的应用
OX40及OX40配体(OX40L)是一对在T细胞初次和再次应答中都发挥重要作用的共刺激分子[1],它们对于维持CD4+T细胞的增殖、存活,记忆性T细胞的形成起到关键作用,从而影响细胞免疫、体液免疫应答以及免疫耐受.越来越多的研究显示,OX40在调节自身免疫性疾病,治疗移植物抗宿主病(GVHD)中有明显疗效,尤其在抗肿瘤、抗感染疫苗设计中有很好的应用前景.
-
OX40在免疫耐受中的调节作用
T细胞的激活不仅需要T细胞受体与靶细胞表面的抗原肽-主要组织相容性复合物特异性结合产生的第一信号,还需要共刺激分子传导的第二信号.OX40就是共刺激分子之一,其与配体OX40L的相互作用对维持T细胞活化后的进一步扩增、存活、分化为效应细胞及记忆性T细胞具有重要作用.阻断这一信号通路对增强免疫耐受,治疗移植排斥反应具有重要价值.近年来OX40在免疫耐受中对不同类型T细胞的调节作用及其在器官移植及移植物抗宿主病中应用的研究备受瞩目.
