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抵当汤加减对痰瘀互结证糖尿病下肢动脉血管病变患者中CD40/CD40L和IL-10的影响
目的:观察抵当汤加减对痰瘀互结证糖尿病下肢动脉血管病变的临床疗效,同时分析其对血糖及部分血液指标的影响.方法:选取2016年4月至2017年4月十堰市太和医院收治的痰瘀互结证2型糖尿病伴下肢动脉血管病变患者70例,随机分为对照组和观察组,每组35例.对照组接受调节膳食结构、加强锻炼,每日注射人胰岛素,观察组在对照组治疗基础上加用抵当汤加减.比较2组患者中医证候积分,胰岛素水平空腹血糖(FPG)以及CD4、CD40L和IL-10表达的变化.结果:2组中医证候积分均较治疗前降低(P＜0.05),其中观察组患者降低大于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组每日的胰岛素用量及FPG均比本组治疗前降低,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后每日胰岛素的用量观察组均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后的CD40及CD40L均较治疗前减少,差异有统计学意义(P＜0.05),与治疗前比较,2组CD40及CD40L均减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 2照组治疗后IL-10均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),观察组IL-10升高大于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抵当汤加减可有效治疗痰瘀互结证糖尿病下肢动脉血管病变,其作用机制可能与降低CD40/CD40L,以及升高IL-10表达有关.
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清热祛瘀颗粒对稳定性冠心病患者颈动脉易损斑块的影响
目的 观察清热祛瘀颗粒对冠心痛伴颈动脉易损斑块患者的治疗作用.方法 82例稳定性劳力型心绞痛伴颈动脉易损斑块患者中医辨证属痰热血瘀型者,随机分为清热祛瘀颗粒加西医常规治疗的试验组(41例)和采用西医常规治疗加安慰剂治疗的对照组(41例),共观察25周.采用高频超声检测颈动脉复杂斑块的数目、简单斑块的数目、斑块的Crouse积分及颈动脉内中膜的厚度,观察清热祛瘀颗粒对颈动脉斑块及血浆高敏C反应蛋白(hs-CRP)、CD40L变化及肝肾功能.结果 试验组治疗后颈动脉复杂斑块的数目、斑块的Crouse积分、颈动脉内中膜的厚度较治疗前为低,差异均有统计学意义(P<0.05);颈动脉斑块的Crouse积分、颈动脉内中膜的厚度也较对照组治疗后为低,差异亦有统计学意义(P<0.05),试验组治疗后hs-CRP及CD40L与治疗前及对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).治疗过程中未见明显不良反应.结论 清热祛瘀颗粒对冠心病伴颈动脉易损斑块患者的颈动脉斑块具有一定的稳定作用.
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B7-1与CD40L在淋巴瘤免疫治疗中的协同作用
为了研究B7-1与CD40L共刺激途径在淋巴瘤的免疫治疗中的作用,探讨治疗淋巴瘤疫苗有效的作用方式,将A20淋巴瘤细胞株接种在BALB/c小鼠身上以构建荷瘤小鼠模型,将B7-1与CD40L表达载体单独或联合导入肿瘤内,以PBS和空载体作为对照,观察肿瘤生长的情况;应用肿瘤病理切片和HE染色技术观察肿瘤组织形态及淋巴细胞浸润情况,采用CCK-8试剂盒检测荷瘤小鼠脾CTL杀伤效应.结果显示,瘤内注射B7-1或CD40L表达载体可导致肿瘤生长延缓或体积缩小,两者联合注射较对照组和单独注射组的肿瘤消退效应明显增强.肿瘤形态学观察表明,治疗小鼠肿瘤局部有炎性细胞浸润并伴有大面积的坏死,肿瘤局限化;CCK8试剂盒检测显示小鼠脾CTL杀伤能力增强.结论:B7-1与CD40L疫苗对淋巴瘤具有治疗效应,两者联合治疗的效果优于单一治疗.质粒载体瘤内注射可作为一种安全有效的肿瘤疫苗作用方式.
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血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化
本研究探讨人血小板Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达及其在细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccsharide,LPS)诱导血小板活化中的作用.对15例健康人肘静脉抽血各20 ml,制备富含血小板血浆(PRP)和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS(0.2μ/ml)孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹(Western blot)方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达.结果表明:流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25.44%,凝血酶刺激后明显升高(32.34%,p<0.05),LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高(39.16%,p<0.01);在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果.Western blot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达(流式细胞术)在静止血小板分别为6.39%和2.45%,凝血酶刺激后明显增高,分别为42.68%和14.8%,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63.03%和13.94%,均明显高于仅用凝血酶的刺激组(p<0.001);抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达.结论:人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应.
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肠道病毒71型感染人横纹肌肉瘤细胞不同时期凋亡相关基因差异表达研究
目的 研究肠道病毒71型(EV71)感染人横纹肌肉瘤(RD)细胞后不同时期凋亡相关基因差异表达及信号通路转导机制.方法 锥虫蓝染色观察EV71感染RD细胞的存活率,Annexin V-FITC/PI双染色法检测病毒感染后凋亡细胞形态学及凋亡发生率,PCR芯片分析病毒感染RD细胞8h和20h后88个凋亡相关基因的表达情况.结果 EV71(MOI=5)感染RD细胞8h后存活率显著下降.流式细胞仪检测显示病毒感染20 h后早期凋亡及晚期凋亡细胞分别上升至18.0％和19.1％.PCR芯片检测88个凋亡相关基因,EV71感染8h后,除IFN-β1上调5.22倍外,ACIN1、Akt、Apaf1、caspase、CIDEB等47个基因发生明显下调.病毒感染20 h后,FasL、CD40L、TNF、caspase-10、caspase-3等28个基因发生2倍以上上调.结论 EV71感染早期RD细胞凋亡相关基因表达下调与病毒凋亡抑制效应相关,而感染晚期病毒可激活Fas/FasL、TNF/TNFR死亡受体信号通路诱导细胞凋亡.同时宿主细胞也通过调节CD40/CD40L、NF-κB/RelA、PI3 K/Akt等信号通路途径抑制凋亡作用.
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丹酚酸B对动脉粥样硬化CD40-CD40配体信号通路的影响
目的 探讨丹酚酸B对动脉粥样硬化CD40-CD40配体信号通路的影响.方法 24只日本大耳白兔给予普通颗粒饲料喂饲1周后,随机分为三组,每组8只:正常对照组、高脂模型组、丹酚酸B组,后两组家兔分别通过高脂饮食制备动脉粥样硬化模型.于给药12周末处死各组实验兔,获取血浆和主动脉全长标本.比较血脂、主动脉病理形态学改变,免疫组织化学法测定斑块部位CD40L的表达,采用酶联免疫吸附法测定可溶性血管细胞粘附分子-1和可溶性细胞间粘附分子-1变化,Western杂交分析测定基质金属蛋白酶-9的蛋白表达.结果 与高脂模型组比较,丹酚酸B组兔的主动脉CD40L的表达降低(P＜0.01),血清可溶性血管细胞粘附分子-1、可溶性细胞间粘附分子-1及基质金属蛋白酶-9的蛋白表达明显降低(P＜0.01),且兔主动脉内膜/中膜厚度比值明显降低.结论 丹酚酸B减轻动脉粥样硬化病变的作用,与抑制CD40-CD40配体信号通路,降低粘附分子及基质金属蛋白酶的表达水平有关.
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CD40-CD40L及基质蛋白酶在大鼠动脉粥样硬化中的表达
目的:为探讨粘附分子CD40、CD40配体(CD40 Ligand,CD40L)及基质蛋白酶在动脉粥样硬化中的表达;方法:利用高脂饮食制作大鼠动脉粥样硬化模型(AS组,n=6),与正常饮食大鼠模型(N组,n=6)作对照,流式细胞技术法检测外周血中CD40及CD40L,Zymography法检测外周血中基质蛋白酶-2(MMP-2)及基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况,免疫组织化学法观察CD40、CD40L及MMP-2、MMP-9在主动脉弓表达情况;并对CD40、CD40L与MMP-2、MMP-9做相关性分析;结果:动脉粥样硬化模型大鼠外周血CD40、CD40L、MMP-2、MMP-9表达均高于正常饮食组大鼠,免疫组织化学法显示CD40、CD40L在主动脉弓内膜上表达,MMP-2、MMP-9在主动脉弓内皮细胞及内皮细胞间质中表达,而且AS组表达强于N组;CD40、CD40L与MMP-2、MMP-9有相关性;结论:提示动脉粥样硬化的形成可能与CD40、CD40L及基质蛋白酶的异常表达有关.
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血清可溶性CD40L水平与2型糖尿病视网膜病变的关系
目的 探讨血清可溶性CD40L(sCD40L)水平与2型糖尿病视网膜病变(DR)的关系.方法应用酶联免疫吸附法对30例无DR的糖尿病患者(NDR)、29例非增生性DR患者(NPDR)、31例增生性DR患者(PDR)和32名正常人的血清sCD40L水平进行测定.结果 NDR组、NPDR组和PDR组患者血清sCD40L水平依次增高,分别为4.55±3.66μg/L、6.65±4.24 μg/L、8.31±5.23μg/L ,各组间差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 DR患者血清sCD40L水平显著增加,提示其可能与DR的发生有关.
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早期调脂干预对急性心肌梗死患者炎症因子的影响
目的观察早期较大剂量阿托伐他汀治疗急性心肌梗死(AMI)3d后患者血清可溶性CD40L(sCD40L)、P-选择素及可溶性血管粘附分子水平的变化,以探讨早期调脂干预对AMI斑块稳定、抑制炎症反应的作用.方法选取43例AMI患者随机分为常规治疗组(无服用任何调脂药物,21例)和阿托伐他汀组(立普妥20mg,qd,22例),测定治疗前后sCD40L、P-选择素、可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)和可溶性血管细胞间粘附分子-1(sV-CAM 1)的水平.结果两组治疗前后血脂水平变化无显著性差异.阿托伐他汀组治疗后血清sCD40L、P-选择素、sICAM 1分别下降35%、41%、30%,明显低于治疗前水平(P＜0.05),sVCAM-1稍下降,但无统计学意义;在常规治疗组治疗前后上述指标均无明显变化.在阿托伐他汀组sCD40L、P-选择素、sICAM-1的降低与总胆固醇(TC)(分别为r=0.08,P=0.56;r=0.16,P=0.34;r=0.12,P=0.41),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(分别为r=0.09,P=0.88;r=0.11,P=0.46;r=0.18,P=0.77)的下降百分数之间无相关关系.结论在AMI的早期使用阿托伐他汀治疗3d,可明显降低血清炎症因子水平,可能有利于动脉粥样硬化斑块的稳定.
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人CD40L在肿瘤细胞株中的表达
目的 探讨重组表达载体pcDNA3.1(+)-CD40L在肿瘤细胞中的表达状况.方法 将两种不同构型的pcDNA3.1(+)-CD40L重组载体以脂质体法分别转染于H446、H460 及SK-hepⅠ细胞株,对三种转染细胞用PE标记的抗CD40L进行染色,采用流式细胞技术测试上述细胞中CD40L表达情况.结果 CD40L在SK-hepⅠ的表达,线型明显高于环型重组体;而在H446细胞,环型虽高于线型,但无统计学意义;三种细胞中CD40L的表达率,H446＞SK-hepⅠ＞H460,P＜0.05.当对H460进行稳定转染时,其表达率明显增高.结论 三种癌细胞被转染pcDNA3.1(+)-CD40L后,CD40L瞬时表达明显不同,主要与细胞代谢特点、吸收质粒颗粒的能力及增殖状态等生理因素密切相关.
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急性冠状动脉综合征患者血浆CD40L变化及其与可溶性血管黏附分子关系
目的观察冠心病不同类型患者中CD40L水平的变化及其与血管性黏附分子之间的关系,进一步探讨急性冠状动脉(冠脉)综合征临床识别和预测的炎症指标.方法采用酶联免疫吸附法测定血清可溶性CD40L(sCD40L)、可溶性细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1浓度.结果急性冠脉综合征患者sCD40L水平(3.17±2.84) ng/ml显著高于对照(1.19±1.05) ng/ml,P<0.01和稳定性冠心病患者(1.61±1.46) ng/ml, P<0.05.sCD40L水平与可溶性细胞间黏附分子-1呈显著正相关(r=0.413, P<0.01).sCD40L水平受甘油三酯(r=0.23,P=0.041)、载脂蛋白B(r=0.248, P=0.027)及高密度脂蛋白胆固醇等因素影响(r=-0.253, P=0.024).结论本研究结果表明急性冠脉综合征患者外周血sCD40L水平升高,提示其可能与急性冠脉综合征的发生有关,是动脉粥样硬化斑块不稳定的标志.CD40L可能通过上调黏附分子表达而促发急性冠脉综合征.
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急性心肌梗死早期普伐他汀治疗对血浆CD40L、金属蛋白酶-9及C反应蛋白的影响
目的观察较大剂量普伐他汀治疗急性心肌梗死患者3d后金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)及C-反应蛋白(CRP)的变化,以了解短期普伐他汀治疗对斑块稳定和免疫炎症抑制的影响.方法 35例急性心肌梗死患者随机分为常规治疗组(无服用任何调脂药物,17例)和普伐他汀组(40mg/d,18例)治疗,测定治疗前后sCD40L、MMP-9、CRP和血脂水平的变化.结果二组治疗前后血脂各组成分的变化差异均无显著性,而普伐他汀治疗组治疗后sCD40L、MMP-9及CRP水平分别降低38%、48%、33%,与治疗前比较有统计学差异(P<0.05).在普伐他汀治疗组,sCD40L、MMP-9的降低与TC(r=0.09,P=0.57; r=0.15, P=0.38)、LDL-C(r=0.08,P=0.87; r=-0.03,P=0.83)的下降百分数之间无相关关系.结论在急性心肌梗死的早期予以3d的普伐他汀治疗,可明显减低血浆炎症因子的水平、可能有利于动脉粥样硬化斑块的稳定.
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阿司匹林、肝素对血小板活化及表达CD40L的影响
目的探讨血小板活化与表达CD40L的关系以及阿司匹林、肝素对此过程的影响.方法体外分离健康人血小板,经不同浓度二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶诱导后,应用流式细胞术测定血小板活化指标P选择素和炎性标志CD40L表达水平,观察二者随诱导时间延长的变化过程,并分析阿司匹林、普通肝素、低分子肝素对血小板活化及表达CD40L的影响.结果 ADP、凝血酶均呈浓度依赖方式增加血小板P选择素、CD40L表达,二者表达水平随诱导时间延长而同步增减,呈显著正相关(P<0.05).阿司匹林(2.5 μg/ml)对ADP(4 μmol/L)和凝血酶(1U/ml)诱导的血小板活化及CD40L表达无任何影响(P>0.05);普通肝素(2.5U/ml)和低分子肝素(2.5U/ml)单独或与阿司匹林合用,均能极显著地抑制凝血酶诱导的血小板活化及CD40L表达(P＜0.001),但对ADP的诱导过程无影响(P>0.05).结论炎性介质CD40L可表达在活化血小板表面,在多种诱导剂存在的情况下,阿司匹林及肝素能部分抑制血小板的活化及CD40L表达.
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表达CD40L基因的卵巢癌细胞诱导树突状细胞成熟及分泌Th1型细胞因子的作用机制
目的 探讨转染CD40L cDNA的卵巢癌细胞株OVHM对树突状细胞(DC)成熟、分化的影响及诱导其分泌细胞因子的机制.方法 采用脂质体转染法将鼠全长CD40L基因转染人小鼠卵巢癌细胞株OVHM中,用G418筛选出表达CD40L基因的抗药性克隆细胞(CD40L-OVHM).应用免疫磁珠分选并纯化小鼠骨髓DC.将DC与转染和未转染CD40L cDNA的OVHM细胞混合培养,流式细胞术检测DC细胞表面人主要组织相容性复合物Ⅰ类分子(MHC-Ⅰ)、Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ)、CD80、CD86和CCR7的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测共培养细胞中白细胞介素(IL)-12、IL-23、IL-27、IL-18、γ干扰素(IFN-γ)、Mig基因的表达.结果 DC与CD40L-OVHM细胞混合培养后可形成集落,且上调了DC细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CCR7的共刺激分子和黏附分子的表达.在DC+CD40L-OVHM组可检测到细胞因子IL-12、IL-23、IL-27、IL-18、IFN-γ、Mig基因的表达,而在DC组、DC+OVHM组、CD40L-OVHM组、OVHM组未检测到这些基因的表达.结论 表达CD40L的卵巢癌细胞促进了DC的成熟,诱导了Th1型细胞因子的分泌,这可能是转染CD40L基因的卵巢癌细胞产生抗肿瘤效应的机制之一.
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CD40/CD40L与系统性红斑狼疮的相关性研究进展
系统性红斑狼疮( systemic lupus erythematosus,SLE)是一种可累及多系统、多器官的典型的自身免疫性疾病.该病的发病率和致残率已成为一个全球性的健康问题.SLE以显著的T、B淋巴细胞异常活化,产生致病性自身抗体为特征,此过程中B细胞功能的改变具有重要意义.
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高甘油三酯血症促进动脉粥样硬化分子机制研究进展
近年来,高甘油三酯血症与动脉粥样硬化之间的关系已成为新的研究热点. 高甘油三酯血症患者血中胆固醇酯转运蛋白(CETP)的增加介导了脂蛋白之间的脂质交换,通过载脂蛋白CⅢ增加甘油三酯脂蛋白的含量,通过高表达血小板CD40L促进动脉粥样硬化的发生发展. 本文就新的流行病学调查数据和相关分子机制研究进行综述,并简要介绍相关药物的研究进展. 希望进一步明确甘油三酯在动脉粥样硬化发生发展过程中的重要作用,为防治动脉粥样硬化性心血管疾病提供参考.
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CD21和CD40L的表达与血清IgE相关性研究
目的研究哮喘的发病机制,探讨哮喘儿童白细胞表面分化抗原21(CD21)及CD40L的表达与血清IgE的相关性.方法利用流式细胞分析技术检测儿童哮喘发作期及缓解期外周血CD21+、CD40L+的百分率,同时用免疫化学发光法检测血清IgE的水平,并进行相关性分析.结果哮喘发作组CD21+、CD40L+的百分率明显高于哮喘缓解组、肺炎组和正常组(P均＜0.01);哮喘发作组IgE明显高于哮喘缓解组、肺炎组和正常组(P均＜0.01);哮喘发作组CD21+、CD40L+与IgE呈正相关.结论CD21+、CD40L+的表达与和血清IgE在哮喘的发病机制中发挥重要作用.
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龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注CD40L表达的影响
目的 探讨龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血机制,为其应用于冠心病的防治提供理论基础.方法 大鼠随机分为对照组(0.9%氯化钠溶液10 mL/kg)、龙牙楤木组(龙牙楤木总皂苷溶液0.5 g/kg)、氯吡格雷组(氯吡格雷溶液5 mg/kg).连续灌胃5 d后,结扎前降支,缺血45 min,再灌注5 min.观察各组心肌组织病理改变程度,免疫组化法检测心内膜CD40L表达,并检测心肌丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平.结果 与对照组比较,龙牙楤木总皂苷组及氯吡格雷组可减少CD40L表达(P<0.05),提高心肌组织GSH-PX活力(P<0.05),但无统计学差异(P>0.05);龙牙楤木总皂苷组并可降低心肌MDA水平(P<0.05).结论 龙牙楤木总皂苷可减轻心肌缺血再灌注CD40L表达,提高心肌GSH-PX活力,减少心肌MDA含量.
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制备淋巴瘤多基因肿瘤疫苗的方法学探索
目的 探讨用于淋巴瘤的多基因肿瘤疫苗的制作方式及淋巴瘤的基因治疗方法.方法 采用腺病毒转染、脂质体辅助转染、脂质体辅助腺病毒转染的方式,将带GFP的载体转染B系淋巴瘤A20细胞株,并以Hela细胞作为对照,荧光显微镜下观察转染效率.将B7 1与CD40L表达载体联合导入A20荷瘤小鼠肿瘤内,观察肿瘤生长情况,应用肿瘤病理切片和HE染色技术观察肿瘤组织形态及淋巴细胞浸润情况.结果 对A20细胞而言,单纯脂质体和单纯腺病毒转染效率均非常低,脂质体辅助腺病毒转染效率有所提高.但均显著低于采用腺病毒转染Hela细胞.瘤内联合注射B7 1和CD40L表达载体可导致肿瘤生长延缓及体积缩小,肿瘤消退效应较明显.肿瘤形态学观察表明,治疗小鼠肿瘤局部有炎性细胞浸润并伴有大面积的坏死,肿瘤局限化.结论 B系淋巴瘤细胞株难于通过体外基因导入制作肿瘤疫苗,脂质体辅助腺病毒转染效果较好,质粒载体瘤内注射可作为一种安全有效的肿瘤疫苗作用方式.
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CD40/CD40L在单核巨噬细胞上表达及其在类风湿关节炎中的作用
单核巨噬细胞在启动天然免疫和获得性免疫中均具有关键作用,是调控免疫应答的主要细胞.CD40/CD40L是免疫细胞间的重要信号转导途径,单核巨噬细胞表达CD40与CD40L,分泌许多促炎性因子,参与类风湿关节炎滑膜炎形成、骨和软骨破坏.在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎和其他自身免疫病中已检测出高水平表达的CD40与CD40L.本文就CD40、CD40L在单核巨噬细胞上表达及在类风湿关节炎中的作用机制做一综述.
