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表达轮状病毒VP7基因重组腺病毒载体的构建及免疫活性研究
目的 包装表达轮状病毒VP7基因的重组腺病毒,并检测其免疫活性.方法 RT-PCR扩增病毒结构蛋白VP7基因,定向克隆于腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV中,在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,并用RT-PCR和Western blot检测.将包装好的腺病毒免疫小鼠,应用间接ELISA检测小鼠血清中特异性轮状病毒IgG抗体.结果 酶切和测序鉴定证实成功构建携带VP7基因的重组腺病毒表达载体,并在293细胞中成功包装病毒;RT-PCR和Western blot 均能特异检测VP7基因的表达;重组腺病毒免疫小鼠后可诱导针对轮状病毒的特异性免疫.结论 重组腺病毒的成功包装,为新型轮状病毒基因疫苗的研制提供了一种可行的途径.
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慢性结膜炎患者泪液中腺病毒与单纯疱疹病毒的检测分析
目的 探讨腺病毒和单纯疱疹病毒在慢性结膜炎患者泪液中的分泌情况,为临床诊断提供参考.方法 收集慢性结膜炎患者、急性病毒性结膜炎患者及健康体检者的泪液标本,采用聚合酶链反应(PCR)法检测三组患者泪液标本腺病毒和单纯疱疹病毒核酸,并进行对比分析.观察腺病毒或单纯疱疹病毒阳性患者的临床症状.结果 慢性结膜炎组标本中腺病毒与单纯疱疹病毒核酸阳性率分别为48.5％(33/68)和17.6％(12/68).慢性结膜炎组有明确既往急性结膜炎病史的患者中腺病毒核酸阳性率为62.5％ (15/24),高于无既往病史组(20.0％),差异有统计学意义(P＜0.01)；有既往病史的慢性结膜炎患者的单纯疱疹病毒感染阳性(29.2％)率亦高于无既往病史者(15.0％)(P＜0.05).急性结膜炎组患者的泪液中腺病毒和单纯疱疹病毒的核酸阳性率分别为100.0％(15/15)和86.7％(13/15),健康对照组标本中两种病毒核酸的检测结果全部为阴性.眼红、眼痒、下睑滤泡是感染以上两种病毒感染的主要临床表现.结论 腺病毒和单纯疱疹病毒在慢性结膜炎患者中的阳性率差异不明显.但有既往感染史患者上述两种病毒的阳性率显著高于无既往感染史患者,下睑滤泡症状对评估是否存在病毒感染有一定的参考价值.
关键词： 慢性结膜炎 聚合酶链反应(PCR) 腺病毒 单纯疱疹病毒 -
急性呼吸道感染住院患儿RSV和ADV与病情严重程度相关性研究
目的 通过对呼吸道合胞病毒(RSV)及腺病毒(ADV)临床检测阳性率来评价儿童急性呼吸道感染病情严重程度的相关性分析.方法 将82例患急性呼吸道感染的儿童(感染组)及30例健康儿童(健康组)作为观察对象,比较两组RSV和ADV阳性率;同时根据感染严重程度,将感染组患儿分为28例的非肺炎组、33例的普通肺炎组及21例的重症肺炎组,对比三组间RSV和ADV阳性率.此外,对感染组患儿中RSV和ADV阳性率与感染严重程度、血常规白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N％)及淋巴细胞百分比(L％)的相关性.结果 感染组RSV和ADV阳性率明显高于健康组(P ＜0.05),而不同严重程度感染组中,以重症肺炎组RSV和ADV阳性率高(P＜0.05),同时感染组中,RSV和ADV阳性率与患者的感染严重程度存在显著的直线相关性,但与WBC、N％及L％无直线相关性.结论 RSV和ADV阳性率可作为评价急性呼吸道感染患儿病情严重程度的指标.
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2013-2017年徐州市儿童腺病毒流行特征与基因分型
目的 了解2013-2017年徐州市儿童腺病毒感染的流行情况及其分型特征.方法 采集2013-2017年在徐州市儿童医院就诊的5 177份流感样患儿的鼻或咽拭子.采用实时荧光PCR方法进行腺病毒的检测,对阳性标本扩增其六邻体基因并测序进行型别分析.结果 5 177例患儿中共检出174例腺病毒阳性,检出率为3.36％.其中,3～6岁年龄组的患儿检出率高,为5.30％(111/2 095);全年各月份均有腺病毒检出,其中5月和6月为检出高峰,两月合计检出的腺病毒例数占检出总数的43.10％(75/174).型别分析结果显示,本次研究共检出B、C和E共3组10种型别腺病毒,其中B组腺病毒所占比例高,为80.46％ (140/174),包括腺病毒3型107例,7型20例,55型8例和14型5例;其次为C组,占12.07％(21/174),包括1型13例,2型5例,腺病毒5型、6型和57型各1例;以及E组腺病毒4型,占7.47％ (13/174).结论 2013-2017年徐州地区儿童呼吸道疾病腺病毒检出率为3.36％,感染以腺病毒3型和7型为主,其次为腺病毒1型和4型等.2013-2014年腺病毒流行以3型和7型为主,2015年后腺病毒3型逐渐成为优势型别.
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重组p53腺病毒基因治疗联合化疗动脉栓塞治疗肝癌的护理分析
目的 对应用针对性护理干预模式对患有肝癌疾病的患者在接受动脉栓塞化疗联合重组P53腺病毒基因治疗期间实施护理的临床效果进行研究.方法 选择在我院就诊的接受动脉栓塞化疗联合重组P53腺病毒基因治疗的患有肝癌疾病的患者88例,随机分为对照组和观察组,平均每组44例.采用常规肝癌疾病化疗护理模式对对照组患者实施护理,采用针对性护理干预模式对观察组患者实施护理.结果 观察组患者肝功能改善时间和化疗计划实施总时间明显短于对照组;在化疗期间出现不良反应的人数明显少于对照组;对化疗期间临床护理服务的满意度明显高于对照组.结论 应用针对性护理干预模式对患有肝癌疾病的患者在接受动脉栓塞化疗联合重组P53腺病毒基因治疗期间实施护理的临床效果非常明显.
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人腺病毒感染进展
腺病毒(adenovirus,AdV)在自然界普遍存在,全球各国家或地区均有腺病毒感染(adenovirus infection)出现.1953 年人类首次分离到腺病毒,现有研究发现腺病毒约有100 个血清型,分为哺乳动物腺病毒和禽类腺病毒两属 [1].依据腺病毒中和试验(viral neutralization assay)结果,可将人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)分为 69 种不同的血清型;结合生物学和免疫学特性又将其划分为 A~G 的 7 个亚群.腺病毒可以导致上 / 下呼吸道、胃肠道、结膜和泌尿系的感染,少数则表现为现肝炎、肾炎、胰腺炎、出血性膀胱炎、出血性结肠炎、脑膜脑炎;其中,肠道腺病毒(enteric adenovirus,EAdV)是导致儿童腹泻的重要致病原.随着对腺病毒所致疾病临床表现研究的深入和病毒检测技术的发展,现对国内外人腺病毒感染的研究进展综述如下.
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腺病毒载体在皮肤科基因治疗中的应用
腺病毒载体是经去除腺病毒基因组的某些区而获得的,由于其诸多优点,正在成为皮肤科基因治疗中使用多的载体之一,本文就腺病毒载体的特点及其在皮肤科基因治疗中的应用进展,作一综述.
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人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展
人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒,其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白.E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构,可与pRB、P53反应,改变宿主细胞G1/S期的转化.E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应,影响宿主细胞代谢,直接导致宿主细胞中心体的变化.E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用.
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靶向重组腺病毒载体研究进展及其在肿瘤基因治疗中的应用
腺病毒载体已经广泛应用于肿瘤的基因治疗临床试验,然而某些组织和细胞表面缺乏或低表达其相应的受体,使得腺病毒不能有效感染并发挥作用.研究新型重组腺病毒载体使之特异性感染靶器官,降低对正常组织的损伤,已成为肿瘤基因治疗研究的热点.靶向基因治疗可通过靶向性导入和靶向性基因表达调控等策略来达到.本文介绍了重组腺病毒载体系统靶向改造及在肿瘤基因治疗应用方面的新研究进展.
关键词： 腺病毒 靶向基因治疗 柯萨奇病毒腺病毒受体 肿瘤 -
慢病毒载体与基因治疗
载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具.常用的有SV40衍生载体、逆转录病毒载体、腺病霉载体、腺病毒相关病毒载体、细小病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等.近几年来,慢病毒载体受到高度重视,慢病霉载体来源于人类免疫缺陷病霉HIV-1、HIV-2、SIV,具有转染分裂和非分裂的T细胞、树枝状细胞、造血干细胞及巨噬细胞[1],基因疗法是一种新方法.Hawley[2]等的文章中指出,由于慢病毒载体可作用于细胞周期的G0/G1期,成为遗传性疾病治疗的有效手段.基因治疗的初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞,并且直接表达该基因的性质,达到治疗效果.在治疗遗传性、代谢性、神经系统疾病、癌症及艾滋病方面有广泛的应用前景[3].
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腺病毒感染所致婴幼儿腹泻的研究进展
腺病毒(adenovirus,AdV)是1953年由Rowe等从健康人腺样组织的细胞培养中首次发现的,随后Hilleman和Wener等在新兵的呼吸道疾病患者进行流行病学调查时,从患者的呼吸道分泌液中分离到同样的病毒.1975年Flewen等首次应用电镜技术,从急性胃肠炎患儿粪便中发现与婴幼儿胃肠炎直接相关的AdV,这些在电镜下观察到的大多数AdV,不能在常规应用的AdV细胞培养系统中培养,这些AdV称之为肠道腺病毒(enteric adenovirus,EAdV).1995年程绪杰等首次在我国从腹泻患儿粪便中分离到EAdV,证明我国也存在EAdV的感染[1].目前临床上针对该病毒导致的感染,尚无有效的预防疫苗和治疗药物,主要采取对症治疗.
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一起腺病毒7型引起的儿童游泳者咽结膜热暴发疫情的调查
目的 调查2011年7月石家庄市游泳馆暑假游泳培训班儿童游泳后出现以高热、咽痛、扁桃体肿大为特征的暴发疫情的病原和危险因素.方法 制定病例临床诊断标准,采用统一的流行病学个案调查表对病例进行现场调查;采集患者咽拭子进行呼吸道病毒多重PCR检测与腺病毒分型PCR检测进行病原学调查;采用回顾性队列研究分析暴发的流行因素,其中暴露组为游泳馆暑假游泳培训班儿童,分别以该游泳馆服务半径3 km内无该馆游泳史的非游泳培训班儿童、市区内其他室内游泳馆暑期游泳培训班儿童、同馆的体校运动员为非暴露组,分析游泳行为、该馆游泳史、该馆2～5号泳池暴露史、不同时段游泳史与发病的关联强度.结果 2011年7月,石家庄市游泳馆暑假游泳培训班儿童(2～5号池)中,发现咽结膜热病例131例,罹患率为58.22％,发病高峰为7月18日.腺病毒7型阳性30例,hexon基因和fiber基因的核酸序列无变异.队列研究显示该游泳馆暑期培训班儿童发病是无该馆游泳史的非游泳培训班儿童的26.58倍(RR =26.58,AR =56.03％,AR％=96.24％),是市区内其他室内游泳馆暑期游泳培训班儿童的12.55倍(RR=12.55,AR=53.58％,AR％ =92.03％),是同馆体校运动员(1号池)的21.81倍(RR =21.81,AR=55.55％,AR％=95.41％);患病危险性随着游泳时段的后移而增加,呈时间效应关系(趋势性x2=29.43,P=0.000).结论 石家庄市游泳馆暑期游泳培训班儿童游泳后发病是由该馆2～5号池水质受到腺病毒7型污染而引起的咽结膜热.应加强暑期培训班的传染病报告管理,严格泳池池水消毒,合理安排培训人次,防止疫情发生.
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一起游泳池儿童腺病毒感染聚集性事件
目的 调查福建省长泰县一起以儿童发热、咽痛、咳嗽为主要症状的事件感染来源和传播途径,以便采取有效控制和预防措施,并总结经验教训.方法 进行流行病学调查,并采集相关标本进行实验室检测.采用回顾性队列研究验证危险因素,同时对游泳池进行卫生学调查.结果 2011年9月,福建省长泰县某少体校游泳队发生一起咽结膜热暴发,共22例病例,罹患率为51.16％.病例的主要症状包括发热(100.00％)、咽痛(77.27％)等.首例病例9月5日发病,9月11-14日为发病高峰,9月15日后无新发病例,疫情共持续11天.22例病例中,21例是队员(罹患率为52.50％),1例是教练(罹患率为33.33％),罹患率无统计学意义(RR =1.6,95％ CI=0.3～8.0).病例的年龄中位数是10岁(范围:8～ 38岁).男性6例(罹患率30.00％),女性16例(罹患率69.57％),女性的罹患率高于男性(RR =2.3,95％ CI=1.1 ～4.8).回顾性队列研究显示,9月4日在B游泳馆直接接触消毒不彻底的游泳池水是发病的危险因素.实验室检测13份咽拭子中11份腺病毒核酸呈阳性.卫生学调查显示游泳池每周一换水一次并投放消毒剂一次.游泳池水量约为650 m3,投放漂白粉消毒量应需9.75 kg,实为1.00 kg.结论 未经严格消毒处理的游泳池极易导致咽结膜热暴发,建议卫生行政部门加强对游泳池的管理和监督.对不符合条件的游泳池应坚决关闭,直到其符合国家有关标准,可有效防止类似事件的发生.
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174例轻型急性呼吸道感染症流行病学调查分析
目的分析东台市一起轻型急性呼吸道感染症疫情的临床特点和流行过程,为疾控工作提供科学依据.方法选取许河、三仓两镇174名轻型急性呼吸道感染症住院病人,对病人的基本情况、临床表现、治疗转归和接触史等方面展开流行病学调查,并汇总分析.结果 (1)疫情集中在5、6月份,病例主要分布于镇区中小学及幼儿园.(2)临床特点有发热、咽痛、扁桃体肿大,肺纹理增强,白细胞升高以中性粒细胞升高为主.(3)对病人咽拭子和血样等进行病原学检测,结果表明腺病毒(3型)感染是本病的主要原因.阿奇霉素、头孢呋新和病毒唑等药物治疗效果较好.(4)大多数病人发病前有类似病人的接触史,平均潜伏期4～5d.结论此类轻型急性呼吸道感染症传染性强,传播速度快,但病原体毒力较弱,症状较轻.加强疫情监测、早期发现病人,减少同学之间的相互接触、注重饮食和环境卫生,加强个人卫生和防护等,是控制本病传播的主要措施.
关键词： 轻型急性呼吸道感染症 腺病毒 流行病学调查 -
海岛地区婴幼儿呼吸道感染的病原学研究
目的 探讨海岛地区婴幼儿急性呼吸道感染的病毒病原.方法 采取211例急性呼吸道感染患儿的痰液做病毒检测.结果 病毒感染35例,其中呼吸道合胞病毒(RSV)感染20例(9.5%),流感病毒感染6例(2.8%),腺病毒9例(4-3%),副流感病毒Ⅲ型4例(1.9%),副流感病毒Ⅰ、Ⅱ型各2例(1%).结论 RSV感染仍是海岛婴幼儿急性呼吸道病毒感染常见的病原,病毒病原的诊断可为临床诊断和治疗提供可靠的依据.
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一起新生儿病毒性腹泻病原学分析
目的 查明引起新生儿病毒性腹泻疫情的病原并对其进行分子生物学特征分析.方法 采用金标法检测轮状病毒抗原,采用乳胶凝集法检测腺病毒;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测粪便样品中的轮状病毒核酸;利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒和扩增轮状病毒VP7基因并测序;利用DNAstar和Blast软件对测序结果进行分析.结果 11份样品中,金标法检测到轮状病毒阳性样品9份,阳性率为81.82%;腺病毒和肠道病毒检测均为阴性;PAGE法检测到10份轮状病毒阳性样品,电泳带型为4-2-3-2的样品有8份,阳性率为72.73%,另2份阳性样品的电泳条带特殊;8份带型为4-2-3-2的阳性样品均能通过RT-PCR扩增出VP7基因,选择其中3份样品进行测序,测序结果经过比对发现这3个毒株的核苷酸的同源性为99.90%,氨基酸的同源性为100%,与G1型标准株Wa的核苷酸同源性分别为91.30%～91.50%,氨基酸同源性为94.80%;与泰国流行株Thai-2104亲缘关系近,与中国以前的流行株处于不同的进化分支上.结论 引起此次新生儿病毒性腹泻疫情的病原是A组轮状病毒,PAGE带型主要为4-2-3-2,其血清型为G1型.
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一起腺病毒引起的咽结膜热爆发
目的 查明2005年7～8月发生在呼和浩特市一起儿童少年游泳后出现发热、咽痛、扁桃体红肿、眼结膜充血为特征的咽结膜热爆发的病原学病因和流行因素.方法 制定病例临床诊断标准,采用统一的流行病学个案调查表对病例进行调查,描述流行特征;采用回顾队列调查的方法分析流行因素;对患者咽拭子、便标本进行聚合酶链反应(PCR)、对患者的血清进行抗体检测.结果 2005年7～8月,呼和浩特市发生咽结膜热病例468例,疫情波及呼市四个市区,发病高峰为8月2日,病例主要为中小学生.病例的临床特征为发热伴咽痛、扁桃体炎、结膜炎.预后良好,无死亡病例.病例95.05%有游泳史.回顾队列调查显示发病危险因素与游泳馆游泳池水污染有关.PCR检测及血清学检测证实为腺病毒感染.对PCR阳性产物进行序列测定和分析,确定为腺病毒3型.结论 发生在呼和浩特市咽结膜热爆发疫情的病原体为腺病毒,爆发主要是通过被污染游泳池水传播造成的.
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2004年中国四省市腺病毒疫情的流行病学和病原学研究
目的 对2004年发生在湖北省、江西省、江苏省和北京市的腺病毒暴发及散发的疫情进行流行病学总结和分析以及病原学研究,以了解中国腺病毒感染状况.方法 对各地分离的共16株腺病毒毒株进行了病原学研究,包括病毒的培养,提取病毒核酸,针对Hexon蛋白基因的PCR扩增以及PCR产物的序列测定和分析,并根据流行病学资料对腺病毒的疫情特点进行总结和分析.结果 2004年引起湖北省、江西省、江苏省和北京市的腺病毒暴发及散发的疫情均为腺病毒3型;分离到的16株腺病毒毒株,在所选的900 bp Hexon基因片段,基因变异较小,核苷酸和氨基酸的同源性在98.5%～100%.结论 目前我国学龄儿童以及低年龄组儿童的腺病毒感染主要为3型所致,各地分离的病毒株未观察到明显的基因变异.
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甘肃省康县儿童腺病毒7型流行特征与病原学分析
目的 探讨甘肃省陇南市康县儿童腺病毒7型的流行病学及病原学特征.方法 采用统一的流行病学个案调查表对病例进行调查,采集病例咽拭子样本118份,采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法对流感病毒(influenza virus,Flu)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、呼吸道腺病毒(human adenovirus,HAdV)等12种病原进行初筛检测.对HAdV核酸初筛阳性样本进行病毒分离,并对分离到的病毒株进行Hexon基因片段测序,核酸序列采用Clustal X和Mega 6.0软件进行分析.结果 2014年12月20日至2015年2月2日共报告118例感染病例,均为儿童,年龄小的仅2个月,大的11岁,分布在康县21个乡镇中的17个乡镇,＜1岁27例,1～岁37例,2～岁40例;＞5岁14例,其中男性67人,女性51人,男女性别比为1.31∶1.临床特征以发热、咳嗽、咽痛为主,部分病例伴扁桃体发炎、腹泻等症状.实验室确诊为HAdV感染的有33例,分布在13个乡镇.118例病例咽拭子经实时荧光PCR检测,HAdV阳性33例,流感病毒H3N2阳性7例,RSV阳性6例,HAdV和RSV混合感染2例.HAdV阳性标本用Hep-2细胞分离到病毒18株.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所复核HAdV7 17株,HAdV3 1株,毒株测序结果表明,HAdV7毒株同源性高达100％,所有毒株位于同一分支上.结论 该起儿童呼吸道感染疫情的主要病原是HAdV7;疫情初期为H3N2流感病毒感染,后期RSV病毒感染病例使疫情持续时间延长;当地的恶劣气候,医院门诊对发热患者未按要求进行预检分诊,输液大厅、儿科病房等通风条件差,病例拥挤是本次疫情扩散的主要原因.
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东台市一起轻型急性呼吸道感染症疫情控制的分析
2004年4～6月,东台市部分学校发生以中小学生发热、咽喉肿痛等为主要症状的传染性疾病.经流行病学调查,中国疾病预防控制中心、江苏省疾病预防控制中心专家诊断为腺病毒引起的轻型急性呼吸道感染症.现将此次疫情情况及控制措施报告如下.
