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  • 西黄丸挥发油抗肿瘤作用及其免疫学机制的实验研究

    作者:杨伟;关硕;胡俊霞;曾常茜;梁文波;马杰;高文斌

    目的:研究西黄丸挥发油组分对荷瘤大鼠的抗肿瘤作用及其免疫学机制,筛选西黄丸抗肿瘤的活性部位。方法:雌性Wistar大鼠70只,随机抽取10只为空白对照组,剩余60只建立Walker256乳腺癌细胞荷瘤大鼠模型,建模后随机分为阴性对照组(模型组)、挥发油高、中、低剂量组,西黄丸高剂量组和香菇多糖组(阳性对照组),每组10只,灌胃给药,2次/天,连续14天。腹主动脉采血,取瘤组织称重,计算抑瘤率;采用ELISA法检测外周血IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TGF-β水平;采用流式细胞术检测CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、粘附分子B7-1(CD80)细胞含量。结果:挥发油高、中剂量组抑瘤率分别为28.4%、24.1%;与模型组比较,挥发油高、中剂量组IL-2和IFN-γ平均水平及CD3+ T细胞、CD8+ T细胞、B7-1含量均明显升高(P<0.05)。结论:西黄丸挥发油具有一定的抗肿瘤作用,是西黄丸抗肿瘤活性部位之一;西黄丸挥发油可通过上调外周血IL-2、IFN-γ水平及CD3+ T细胞、CD8+ T细胞、B7-1细胞含量提高荷瘤大鼠免疫清除功能。

  • 全蝎-蜈蚣对 CIA 大鼠外周血协同刺激分子 B7-1,B7-2表达的影响

    作者:黄小英;赵海梅;左志琴;程绍民;刘端勇

    目的:观察全蝎-蜈蚣对胶原免疫性关节炎( collagen-induced arthritis,CIA)大鼠外周血协同刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达的影响.方法:Wistar大白鼠60只,随机分成6组,即正常组,模型组,全蝎-蜈蚣高,中,低剂量组,Ⅱ型胶原蛋白( typeⅡcollagen,CⅡ)组.采用Ⅱ型胶原蛋白诱导法复制大鼠关节炎模型,并ig给予全蝎-蜈蚣混悬液(0.4,0.2,0.1 g·kg-1)进行干预,CⅡ组予CⅡ白冻干粉60 μg· kg -1 ig进行对照,共计40 d.并采用流式细胞术检测大鼠外周血单核细胞表达CD80,CD86情况.结果:与正常组大鼠外周血 CD80+(44.8±11.61)% CD80+CD86-(32.4±9.18)%比较,模型组大鼠外周血CD80+细胞(55.7±6.31)%及CD80+ CD86 -细胞(43.7±10.26)%水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,全蝎-蜈蚣中、低剂量组大鼠外周血CD80+细胞(46.6±6.34)%,(30.8±15.14)%明显降低(P<0.05),及且全蝎-蜈蚣低剂量组大鼠外周血CD80+ CD86 -细胞(25.3±12.67)%水平显著下降(P<0.05).结论:全蝎-蜈蚣药对治疗CIA大鼠的作用机制可能与降低外周血单核细胞表达CD80+及CD80+ CD86 -分子表达水平相关.

  • B7-1与B7-2对调节人IL-2基因的转录因子NF-κB和AP-1的相同作用

    作者:克晓燕;John Gribben;王晶;王德炳

    为了解B7共刺激对细胞因子,特别是对IL-2 mRNA及转录因子NF-κB出和AP-1的影响,探讨B7介导的IL-2调节的分子机制,在异基因混合淋巴细胞反应(MLR)体系中分别或联合加入抗B7-1、抗B7-2单克隆抗体和CTLA-4 Ig以阻断B7/CD28信号传导,通过竞争性PCR定量检测其对IL-2和IL-4 mRNA的影响,并初步测定IFN-γ mRNA的改变,同时用转染MHCⅡ类分子及联合转染等量B7-1或B7-2的NIH3T3转基因细胞tDR7,tDR7/B7-1和tDR7/B7-2刺激CD28+T细胞,通过DNA-蛋白结合实验观察B7对IL-2转录因子NF-出和AP-1的影响.结果表明:抗B7-2单抗和CTLA-4 Ig可明显抑制B7介导的IL-2和IL-4 mRNA合成,而抗B7-1单抗仅有轻度抑制作用,2种或3种抗体联合应用时抑制作用相加.MLR 1-6小时,单独tDR7即可诱导NF-κB的表达,联合转染B7早期对其结合活力无明显影响,6小时后tDR7诱导作用减弱,B7却可显著延长tDR7的诱导作用至72小时.tDR7早期同样可诱导AP-1的表达,联合转染B7分子在24小时内对其有一定的抑制作用,而在反应后期可延长tDR7对AP-1的上调作用,B7-1与B7-2间作用未见明显不同.结论:B7通过减少IL-2 mRNA降解和影响基因转录而上调IL-2分泌,并可同时影响多种细胞因子分泌;在转录水平B7-1与B7-2作用未见明显不同,提示两者的功能差异可能与细胞表达和时间动力学不同有关.详细了解B7介导的T细胞免疫耐受的分子机制有助于设计更好的临床方案预防移植排斥和GVHD.

  • B7-1与CD40L在淋巴瘤免疫治疗中的协同作用

    作者:赵灵芝;王晶;李敏;克晓燕

    为了研究B7-1与CD40L共刺激途径在淋巴瘤的免疫治疗中的作用,探讨治疗淋巴瘤疫苗有效的作用方式,将A20淋巴瘤细胞株接种在BALB/c小鼠身上以构建荷瘤小鼠模型,将B7-1与CD40L表达载体单独或联合导入肿瘤内,以PBS和空载体作为对照,观察肿瘤生长的情况;应用肿瘤病理切片和HE染色技术观察肿瘤组织形态及淋巴细胞浸润情况,采用CCK-8试剂盒检测荷瘤小鼠脾CTL杀伤效应.结果显示,瘤内注射B7-1或CD40L表达载体可导致肿瘤生长延缓或体积缩小,两者联合注射较对照组和单独注射组的肿瘤消退效应明显增强.肿瘤形态学观察表明,治疗小鼠肿瘤局部有炎性细胞浸润并伴有大面积的坏死,肿瘤局限化;CCK8试剂盒检测显示小鼠脾CTL杀伤能力增强.结论:B7-1与CD40L疫苗对淋巴瘤具有治疗效应,两者联合治疗的效果优于单一治疗.质粒载体瘤内注射可作为一种安全有效的肿瘤疫苗作用方式.

  • 表达大鼠IL-2、B7-1基因CBRH7919细胞的建立

    作者:史瑶平;郭燕;李鹤平;沈俊杰;杨建勇

    目的:研究携带大鼠IL-2、B7-1目的基因的CBRH7919细胞(即CBRH7919/IL-2/B7-1)体外表达目的基因的能力,方法:RT-PCR扩增Wistar大鼠IL-2、B7-1目的基因,分别克隆至重组逆转录病毒载体pBaBe-puro及pMSCV-neo,构建逆转录病毒载体pBaBe-puro-IL-2及pMSCV-neo-B7-1,重组质粒转染病毒包装细胞293FT(胚胎肾细胞),产生病毒后感染CBRH-7919,用抗生素puro/G418筛选出细胞抗性克隆,并用RT-QPCR、Western blot及ELISA实验证实抗性细胞在转录水平和蛋白水平IL-2、B7-1的表达情况.结果:用RT-PCR方法成功扩增了Wistar大鼠IL-2及B7-1目的基因,经测序结果证实成功构建了pBaBe-puro-IL-2及pMSCV-neo-B7-1重组质粒.利用该重组质粒成功构建了CB RH7919/I L-2/B7-1细胞系,实时荧光定量PCR检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞中IL-2和B7-1基因的平均表达量分别是CBRH-7919-pmscv-neo的4.153倍和17.040倍;West blot检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞B7-1表达是无基因修饰CBRH7919的3倍;ELISA法检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞IL-2表达量是无基因修饰CBRH7919的190余倍.结论:成功建立了稳定高效表达大鼠IL-2、B7-1的CB RH7919/IL-2/B7-1细胞系,为下一步开展研究肝癌免疫基因治疗奠定了基础.

  • 人大肠癌细胞蛋白质组中免疫球蛋白重链可变区和B7-1的表达

    作者:张盈涛;耿宜萍;来宝长;司履生;王一理

    目的分析人大肠癌LS174T及SW480细胞株的蛋白质表达谱.方法通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离人大肠癌LS174T及SW480细胞总蛋白质,经基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图(PMFs),通过Mascot软件查询蛋白质数据库进行蛋白质的初步鉴定.结果获得了分辨率较高的人大肠癌LS174T及SW480细胞的双向电泳图谱,初步鉴定了一批蛋白质,包括免疫球蛋白重链可变区(IgVH)和共刺激分子B7-1,并通过电喷雾离子阱串联质谱(ESI-MS/MS)分析和免疫细胞化学染色得到进一步证实.结论在人大肠癌LS174T和SW480细胞中存在IgVH和B7-1的表达,这一发现有助于进一步阐明肿瘤的免疫逃逸机制.

  • B7-1及B7-2绒毛共刺激分子习惯性流产不明原因患者体内分子的表达研究

    作者:张兰;张耀

    目的:探讨不明原因习惯性流产(UHA)患者体内绒毛共刺激分子B7-1和B7-2的表达情况。方法:分别选取35例UHA患者作为病例组,50例正常妊娠组和50例正常未妊娠组,采用Epics-XLII型流式细胞仪记录单核细胞中的B7-1和B7-2阳性细胞百分比。结果:3组的B7-1水平差异有统计学意义(F=23.725,P=0.000),病例组高于正常妊娠组和正常未孕组(P<0.05);3组的B7-2水平差异有统计学意义(F=19.807,P=0.001),病例组低于其他两组(P<0.05);相关性分析:B7-1与不明原因习惯性流产疾病呈正相关关系,r=0.832(t=5.632,P=0.012);B7-2与不明原因习惯性流产疾病呈负相关, r=-0.745(t=6.032,P=0.009)。结论:不明原因习惯性流产患者体内B7-1较高,B7-2较低,通过选择性的减弱B7-1水平,增强B7-2水平或可改善不明原因习惯性流产患者病情。

  • X射线全身照射对免疫细胞共刺激分子表达的影响

    作者:金顺子;刘树铮

    目的探讨低剂量电离辐射对免疫细胞表面分子的影响.方法用流式细胞术FITC-CD28/PE-CTLA-4双染法观察了小鼠胸腺和脾细胞的CD28和CTLA-4表达变化,用免疫细胞化学(ABC)法观察了小鼠腹腔巨噬细胞B7-1和B7-2的表达变化.结果低剂量电离辐射和较高剂量电离辐射均能增强腹腔巨噬细胞B7分子的表达;同时发现,低剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CD28的表达,而CTLA-4的表达降低,脾细胞较胸腺细胞更明显.较高剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CTLA-4的表达,同时抑制两种细胞CD28的表达,以脾细胞为更显著.结论共刺激分子CD28和B7的表达上调可能是低剂量电离辐射免疫兴奋效应机理中的重要因素.

  • 人B7-1、IFN-γ双顺反子逆转录病毒载体的构建和表达

    作者:曹善津;钱和年;冯捷;付天云;叶雪;姚煜

    目的:制备免疫基因修饰的卵巢癌肿瘤疫苗.方法:利用口蹄疫病毒的内在性核糖体插入位点(internal ribosome entry sites,IRES),通过基因克隆技术构建人B7-1、IFN-γ双顺反子逆转录病毒载体PLXSN/B7-1 IFN-γ.结果:将PLXSN/B7-1 IFN-γ转染逆转录病毒包装细胞,包装成病毒,经滴度测定后,转导卵巢上皮癌细胞系3AO,筛选稳定表达克隆,RT-PCR和免疫流式细胞测定均可证实B7-1、IFN-γ在同一转导细胞的共表达.结论:口蹄疫病毒的IRES可提供B7-1、IFN-γ的共表达.

  • 制备淋巴瘤多基因肿瘤疫苗的方法学探索

    作者:王晶;赵灵芝;克晓燕

    目的 探讨用于淋巴瘤的多基因肿瘤疫苗的制作方式及淋巴瘤的基因治疗方法.方法 采用腺病毒转染、脂质体辅助转染、脂质体辅助腺病毒转染的方式,将带GFP的载体转染B系淋巴瘤A20细胞株,并以Hela细胞作为对照,荧光显微镜下观察转染效率.将B7 1与CD40L表达载体联合导入A20荷瘤小鼠肿瘤内,观察肿瘤生长情况,应用肿瘤病理切片和HE染色技术观察肿瘤组织形态及淋巴细胞浸润情况.结果 对A20细胞而言,单纯脂质体和单纯腺病毒转染效率均非常低,脂质体辅助腺病毒转染效率有所提高.但均显著低于采用腺病毒转染Hela细胞.瘤内联合注射B7 1和CD40L表达载体可导致肿瘤生长延缓及体积缩小,肿瘤消退效应较明显.肿瘤形态学观察表明,治疗小鼠肿瘤局部有炎性细胞浸润并伴有大面积的坏死,肿瘤局限化.结论 B系淋巴瘤细胞株难于通过体外基因导入制作肿瘤疫苗,脂质体辅助腺病毒转染效果较好,质粒载体瘤内注射可作为一种安全有效的肿瘤疫苗作用方式.

  • 吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响

    作者:王洁;许建英

    目的 通过研究吸烟对大鼠肺组织B7-1/B7-2及其相关配体表达的影响,探讨专职抗原提呈细胞(APC)在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中的作用.方法 将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组,每组10只.采用免疫组化半定量法测定大鼠气道周围肺间质中慢性炎症细胞胞膜B7-1B7-2、CD28和CTLA-4的表达水平.结果 吸烟6周组与吸烟12周组大鼠肺组织B7-1、B7-2、CD28和CTLA-4表达量较不吸烟组均显著增高(P<0.01),吸烟12周组较吸烟6周组表达量也均增高(P<0.01),随吸烟时间的延长各指标表达量均呈上升趋势.结论 吸烟可引起大鼠肺组织B7/CD28/CTLA-4表达水平的增高,提示APC可能在吸烟所致肺部慢性炎症发生发展中起重要作用.

  • 肾移植的临床进展第五节肾移植免疫现状(下)

    作者:鲍镇美

    3T淋巴细胞的共刺激位于巨噬细胞、树突状细胞及激活的B细胞表面参与共刺激的蛋白称为B7.而在T淋巴细胞表面则有B7的受体CD28.B7-CD28的结合对T细胞具有共刺激作用,辅助T细胞繁衍、分化、成熟.如B7-CD28被阻断,T细胞表现无反应.激活的人类B细胞,有B7-1、B7-2、B7-3三种表达.即使B细胞未受到刺激,B7-2的mRNA亦有表达,而B7-1一般于刺激,后4小时始出现,24小时后才能充分表达,故B7-2能较早地传导重要的共刺激信号.

  • 人B7-1和B7-2 cDNA的克隆及鉴定

    作者:张惠丽;奚永志;孔繁华;陈汝光;屠敏;刘楠

    目的:为探索性构建全新型重组人B7-PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中克隆N-末端分别缺失34和16个氨基酸的人B7-1和B7-2基因胞外区,并构建含此基因的重组质粒.方法:根据B7-1和B7-2基因序列设计合成可扩增B7-1和B7-2 cDNA的特异性引物,用RT-PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7-1和B7-2 cDNA,并克隆至pGEM-T载体中,经酶切鉴定后再进行序列分析.结果和结论:从Raji细胞中扩增出预期的624和675bp的B7-1和B7-2 cDNA,将其克隆至pGEM-T载体中,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/Sphl双酶切电泳和序列分析确证,为进一步构建人B7-PE40外毒素融合蛋白奠定了基础.

    关键词: B7-1 B7-2 基因 淋巴瘤
  • B7-1在足细胞损伤相关肾病中的研究进展

    作者:于言铭;张燕;邱世磊;李文娜

    足细胞病是肾脏中肾小球内的足细胞出现异常的一种疾病. 肾小球内包括三种固有细胞,即系膜细胞、内皮细胞、足细胞,不同病因可导致不同固有细胞的损伤,临床表现为不同类型的肾小球疾病. 足细胞是位于肾小球毛细血管基底膜外侧的脏层上皮细胞,因其胞浆在基底膜表面形成伪足样突起而得名. 足细胞损伤后临床主要表现为蛋白尿,主要是由于足突间裂孔膜是肾小球滤过的后一道屏障,故足细胞损伤将会导致蛋白尿.

  • 妊娠期高血压疾病患者胎盘共刺激分子 B7-1和B7-2的研究

    作者:刘影;张文真;张国华;李望

    目的:探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘巨噬细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平,探讨B7-1、B7-2和B7-1/B7-2在发病中的作用。方法采集28例子痫前期患者(包括12例轻度和16例重度),12例妊娠期高血压患者,12例正常妊娠妇女的胎盘巨噬细胞,用流式细胞技术分别测B7-1、B7-2的表达率。结果子痫前期患者B7-1/B7-2(0.75±0.13)均高于其余各组( P <0.05),子痫前期组胎盘B7-1(19.50±4.05%)高于其它各组( P <0.05),结论妊娠期高血压疾病患者胎盘局部B7-1的过度表达及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其发生的重要原因。

  • 原因不明复发性流产患者外周血Th1/Th2与共刺激分子B7-1、B7-2的关系

    作者:刘影;张素娥;方方;张文真

    目的 探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2、辅助性T淋巴细胞1(Th1)及辅助性T淋巴细胞2(Th2)的表达水平,分析B7-1、B7-2与Th1/Th2比率的关系.方法 流式法检测20例原因不明复发性流产女性(流产组)、19例正常妊娠女性(正常妊娠组)和15例正常未孕女性(正常未孕组)的Th1/Th2和B7-1、B7-2的表达水平.结果 流产组Th1/Th2(15.8±4.2)、B7-1的表达水平(11.4±1.6)%,显著高于其余2组(P<0.01);流产组B7-2的表达水平(17.5±2.0)%,显著低于其余2组(P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-1的表达水平之间存在显著正相关(r=0.9136,P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-2的表达水平之间存在显著负相关(r=-9571,P<0.01).结论 原因不明复发性流产患者B7-1、B7-2、Th1及Th2的表达水平显著异常,B7-1、B7-2与Th1/Th2比率显著相关,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因.

  • 原因不明习惯性流产患者绒毛共刺激分子B7-1和B7-2的表达水平变化

    作者:荣博会;刘影;张国华;方芳;张文真

    近年来,国内外对原因不明习惯性流产病因的研究取得了很大进展,其病因十分复杂,涉及遗传、内分泌、免疫学机制、解剖和感染等诸多因素,已有研究证明80%的原因不明习惯性流产与免疫学机制有关[1,2],其中淋巴细胞亚群及其相关细胞因子与原因不明习惯性流产关系更是目前研究的新热点.研究发现辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2(Th1/Th2)比值失衡与原因不明习惯性流产有密切关系[3].但导致其失衡的原因和机制尚不清楚,B7-1,B7-2是B7家族中重要的共刺激分子,有研究表明,B7家族介导的免疫应答反应参与T淋巴细胞的活化[4].有关B7-1,B7-2在原因不明习惯性流产患者绒毛中表达的研究尚未见报道.本文运用流式细胞技术,首次检测原因不明习惯性流产患者绒毛B7-1、B7-2表达水平变化.

  • 急性心肌梗死患者外周血B7-1、B7-2的临床意义

    作者:王景全;李丽敏

    急性心肌梗死(AMI)的发病与炎症有密切关系[1].本研究通过检测AMI患者发病时外周血B7-1、B7-2的表达水平,探讨其在AMI发病和损伤中的作用.

  • 蜕膜共刺激分子B7-1和B7-2与原因不明习惯性流产的关系

    作者:荣博会;刘影;张国华;方芳;张文真

    原因不明习惯性流产是妇产科常见疾病,其病因至今尚未阐明.蜕膜是母胎直接接触的界面,是母体产生免疫应答的重要部位.研究表明,蜕膜辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2(Th1/Th2)比值失衡与原因不明习惯性流产有密切关系[1],共刺激分子B7-1和B7-2在调控Th分化发挥了重要作用[2].本文运用流式细胞技术,测定蜕膜巨噬细胞表面B7-1和B7-2的表达水平,了解B7-1和B7-2在原因不明习惯性流产发生中的作用和意义.

  • 慢性乙型肝炎肝组织B7-1表达与α-干扰素近期疗效的关系

    作者:任星峰;骆抗先;章廉

    目的了解慢性乙型肝炎(CHB)肝组织B7-1表达与α-干扰素(α-IFN)近期疗效的关系。方法对68例使用α-IFN的CHB患者治疗前行肝组织活检,采用免疫组织化学方法观察其B7-1的表达。结果 68例CHB中45例(66.2%)B7-1表达阳性,5例正常人肝组织无表达。α-IFN的总应答率,肝组织B7-1表达阳性组为66.7%(30/45),阴性组为39.1%(9/23),二者差异显著(x2=7.20,P<0.01)。随B7-1阳性表达程度的增强,肝组织炎性活动积分(HAI)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常值明显增加。结论肝组织B7-1表达水平可能是预测α-IFN近期疗效的重要参数之一。

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