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干扰素治疗慢性乙型肝炎患者B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系
目的 初步探讨聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞和mDCs上共刺激分子B7-H1/PD-1表达与早期病毒学应答的关系.方法 纵向观察接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗的28例CHB患者其mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达变化,分析B7-H1/PD-1表达与聚乙二醇干扰素α-2a治疗效果之间的关系.结果 聚乙二醇干扰素α-2a治疗12周时,早期病毒学应答组患者B7-H1在CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、mDC上表达及PD-1在CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞上表达水平均明显低于非早期病毒学应答组患者,两组差异显著,P值分别为0.009,0.009,0.009,0.042,0.004,0.017,0.004.结论 聚乙二醇干扰素α-2a抗病毒疗效可能与CHB患者mDCs和T细胞上B7-H1/PD-1的表达相关.
关键词： 慢性乙型肝炎 B7-H1 PD-1 共刺激分子 聚乙二醇干扰素α-2a -
慢性乙型肝炎患者血清中sICOS和sPD-1升高及意义
目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中可溶性可诱导共刺激分子(sICOS)和可溶性程序性死亡蛋白1(sPD-1)的蛋白水平,并初步探讨其意义.方法 收集80例CHB患者和30例健康对照者外周血单个核细胞(PB-MCs)和血液上清.根据HBsAg和HBeAg测定值,将CHB患者分为HBeAg(-)和HBeAg(+)两组;并将HBeAg(+)组分为免疫耐受期和免疫清除期.用ELISA法检测以上研究对象外周血上清中sICOS和sPD-1蛋白浓度.用实时荧光定量PCR检测PBMCs中ICOS、PD-1和PD-1△ex3的表达.结果 与对照相比,sICOS在CHB患者中均增高(P＜0.05);而sPD-1仅在HBeAg(+)组显著增高(P＜0.01),其中免疫清除期比免疫耐受期患者增高更明显(P＜0.05).CHB患者的sPD-1与AST呈正相关(P＜0.01);且HBeAg(+)组的sPD-1与ALT呈正相关(P＜0.01);CHB患者的sICOS与HBV-DNA呈弱的负相关性(P＜0.05).活化前,两组CHB患者的ICOS mRNA表达水平均降低(P＜0.05).结论 sICOS和sPD-1在CHB患者的血清中均异常增高,提示sICOS和sPD-1可能参与了CHB的发生发展.
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EGFR突变型非小细胞肺癌中PD-1、PD-L1表达的研究进展
继酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)靶向治疗之后,免疫治疗现已成为非小细胞肺癌冶疗的新研究热点.免疫治疗相关蛋白PD-1和PD-L1与EGFR突变相关的研究,可能为两种治疗方式在临床中的联合应用提供相关的理论基础.本文就目前EGFR突变型非小细胞肺癌中PD-1、PD-L1表达的新研究进展作一汇总.
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疟原虫全虫疫苗长效保护性下降机制初探
目的 探讨疟疾红外期全虫疫苗免疫保护性随时间逐渐降低的机制. 方法 取C57BL/6及BALB/c小鼠,经尾静脉分别接种10 000或50 000约氏疟原虫(P.yoelii)17XNL子孢子,3h后给予氯喹控制红内期感染的发生.一部分小鼠于接种后30、90、180d用10 000同种疟原虫子孢子进行攻击检查保护性;另一部分在相同时间点取血,分离淋巴细胞,进行流式抗体染色,检测免疫保护性及其与肝脏淋巴细胞表型间的相互关系. 结果 疟原虫全虫抗原免疫后 30d两种小鼠均可产生100％的免疫保护;免疫后90d,C57BL/6保护性开始下降,180d时保护性将至40％,而BALB/ c小鼠保护性无明显变化.C57BL/6小鼠肝脏CD8+TEM细胞PD-1的表达在免疫后180d显著上升(t=7.369,P＜ 0.01),BALB/c小鼠无明显变化(t=1.368,P＞0.05).C57BL/6小鼠肝脏CD8+TEM细胞PD-1的表达免疫后随时间增加而升高,其中免疫后180d较90d时上升趋势更显著(t=6.175,P＜0.01). 结论 在C57BL/6小鼠,疟原虫红外期全虫疫苗免疫保护性随免疫时间延长逐渐降低与肝脏CD8+T细胞PD-1表达增高有关.
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HBV相关性肝细胞癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异分析
目的 分析慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异.方法 利用Taqman real-time PCR检测27例肝细胞癌患者肝癌切除术后石蜡包埋肝癌组织和癌旁组织PDCD1基因(PDCD1)拷贝数.结果 肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数之间无显著差异(P＞0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与术前AFP水平无显著相关性(P＞0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与肿瘤组织恶性程度无显著相关性(P＞0.05).结论 PD1在肿瘤免疫逃逸反应中起作用,但肝癌组织及癌旁组织中其基因PDCD1的拷贝数变异并不是影响慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌发生发展的因素.
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利用CRISPR技术下调T细胞功能负调节基因PD-1表达的研究
目的：探索慢病毒介导的成簇的规律间隔短回文重复序列( CRISPR)技术下调原代T细胞PD-1基因的可行性。方法将多个PD-1靶向序列作为sgRNA序列体外合成后,分别插入带有cas9基因的慢病毒载体 pLentiCRISPR 中,包装慢病毒并感染原代 T 细胞,通过流式细胞术分析CRISPR技术敲除对PD-1表达的影响。结果构建了6个靶向基因PD-1不同位点的pLentiCRISPR载体A1~A6,并且包装病毒。发现原代T细胞的激活状态与PD-1的表达相伴随,以及PD-1高表达细胞群中存在CD25共表达现象。含有靶向基因PD-1的CRISPR病毒分别感染T细胞后,A2和A6对PD-1高表达的细胞群敲除效率好,分别为19%和29%。结论 CRISPR技术可在原代T细胞中有效敲除PD-1。
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PD-1/PD-L1在儿童结核病中的表达研究
目的 研究负性协同刺激分子PD-1/PD-L1在小年龄儿童(≤5岁)结核病中的表达情况,探讨其在儿童结核病中的免疫作用.方法 结核病儿童36例和健康儿童20例(均≤5岁),取外周血5 ml,用淋巴细胞分离液分离PBMC,通过实时荧光定量PCR法检测PD-1/PD-L1 mRNA表达水平.结果 结核病儿童和健康儿童外周血PD-1/PD-L1表达水平进行比较,无论是肺结核还是肺外结核,患儿外周血中PD-1/PD-L1基因表达水平均升高(P＜0.05),其中PD-L1的基因表达水平升高更明显,PD-1表达水平略低于PD-L1.结论 本研究提示小年龄结核病儿童,无论是肺结核还是肺外结核,外周血PD-1/PD-L1基因表达水平均升高,提示PD-1/PD-L1可能在小年龄儿童结核病致病机制中起着重要的作用.
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SLE患者外周血CD4+CD28-、CD4+ CD28+ T细胞PD-1的表达及临床意义
目的 探讨PD-1在系统性红斑狼疮( SLE)患者外周血CD4+CD28-、CD4+CD28+T细胞上的表达及临床意义.方法 收集50例初发SLE患者和40例正常对照外周血标本,PBMC法分离单个核细胞后,应用流式细胞仪分别检测两组外周血中 CD4+CD28-、CD4+CD28+、CD4+CD28+/-PD-1+T细胞的百分比水平,详细记录SLE患者的临床资料,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将SLE分为稳定组(SLEDAI<10)和活动组(SLEDAI≥10),根据有、无肾脏损害分为狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组,然后比较SLE活动组、稳定组和健康对照组以及有、无狼疮肾炎组之间细胞表达的百分比,统计学分析其与该病相关实验室参数、临床参数及与疾病活动指标间的相关性.结果 SLE患者活动组外周血中CD4+CD28-、CD4+CD28+PD-1+、CD4+CD28-PD-1+T细胞表达水平高于稳定组和正常对照组(P<0. 05),狼疮肾炎组表达水平明显高于无狼疮肾炎组(P<0. 01);SLE患者中抗dsDNA抗体阳性、抗SmRNP抗体阳性、补体C3降低、血小板减少和淋巴细胞减少组外周血CD4+CD28-T细胞的表达水平均高于对应阴性组;患者中抗dsDNA抗体阳性、抗SmRNP抗体阳性、补体C3降低、补体C4降低和淋巴细胞减少组外周血 CD4+CD28+PD-1+T细胞的表达水平均高于对应阴性组;患者中抗dsDNA抗体阳性、补体C3降低、淋巴细胞减少以及脱发组外周血CD4+CD28-PD-1+T细胞的表达水平均高于对应阴性组,且差异均具有统计学意义(P<0. 05).结论 SLE患者外周血中CD4+CD28-T细胞以及CD4+CD28+PD-1+、CD4+CD28-PD-1+T细胞上PD-1出现异常表达,并且与该病相关实验室参数及临床指标存在一定的相关性.
关键词： 系统性红斑狼疮 PD-1 CD4+CD28+/-T细胞 临床研究 -
系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25high Tr和 CD4+CD25low T细胞PD-1表达的分析和意义
目的 探讨PD-1(programmed death-1)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)和CD4+ CD25lowT细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血CD4+ CD25high Tr和CD4+ CD25lowT细胞表面PD-1表达水平,同时收集SLE患者临床表现、实验室检查数据,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4+ CD25 high Tr和CD4+CD25lowT细胞表PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果 (1)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 high Tr和CD4+ CD25lowT细胞的百分率均低于对照组.(2)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 highTr表达PD-1的百分率均高于对照组.SLE稳定组和对照组外周血CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率均高于活动组.(3)狼疮肾炎患者外周血CD4+CD25highTr表达PD-1的百分率高于无狼疮肾炎患者.而狼疮肾炎患者CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率低于无狼疮肾炎患者.(4) CD4+CD25high PD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈正相关;CD4+ CD25high Tr、CD4+CD25lowPD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈负相关.结论 SLE患者外周血中CD4+ CD25high Tr、CD4+ CD25lowT细胞以及它们表面PD-1表达异常,并且与疾病活动性相关,PD-1/PD-L1信号通路可能对CD4+CD25highTr、CD4+CD25lowT细胞的数量和功能有影响.
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CTLA-4和PD-1：恶性淋巴瘤免疫治疗中潜在的作用靶点
人体免疫系统具有根除病原体同时限制自身过度炎症反应,避免周围组织损伤的重要调节功能。这种免疫自限性平衡主要由抗原提呈细胞( antigen presentation cell,APC)和T细胞之间复杂的相互作用而控制。然而在恶性肿瘤中,该免疫平衡被破坏,导致肿瘤细胞发生免疫逃逸,进而致使肿瘤细胞无限增殖甚至转移,或者促进肿瘤细胞耐药性。其中免疫检查点扮演着关键作用。因此靶向这些免疫检查点,阻断肿瘤细胞免疫逃逸成为当前复发/难治性恶性肿瘤治疗的研究热点。在恶性淋巴瘤中,目前一些关于免疫检查点抑制剂的Ⅰ/Ⅱ期临床研究正在进行或已结束,并取得了令人惊喜的疗效,其治疗前景值得期待。本文将对恶性淋巴瘤的免疫检查点在微环境中的调节及以其为靶点的新临床治疗进展做一综述。
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分泌型重组多肽sPD-1-CellⅠ(P/C-1)调节免疫细胞功能活性及抗肿瘤效应的研究
目的 构建双结构域重组多肽sPD-1-CellⅠ(P/C-1)分泌型真核表达载体,并研究体内外表达重组多肽在调节免疫细胞功能活性及抗肿瘤方面的作用和机制.方法 用PCR方法分别扩增出编码PD-1胞外结构域的cDNA与编码CH50 CellⅠ结构域的cDNA,3片段连接法插入分泌型真核表达载体pSecTag A中,获得真核表达载体pP/C-1;脂质体介导体外转染BHK细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR及免疫印迹检测重组多肽P/C-1的表达,MTT法检测表达产物对脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞杀伤活性的影响,建立小鼠H22肝细胞癌移植瘤模型,裸DNA肌肉注射法分别于体内转染sPD-1、CH50和P/C-1基因,观察并比较各处理因素对小鼠的肿瘤生长的抑制作用.结果 酶切及测序鉴定结果表明重组多肽P/C-1真核表达载体构建成功,在BHK细胞培养上清中检测到重组多肽P/C-1的表达,后者能显著增强脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞对H22细胞的杀伤作用,体内实验表明,P/C-1转染对肿瘤生长的抑制作用强烈而持久,显著优于sPD-1和CH50治疗组.结论 重组多肽P/C-1真核表达载体构建成功,表达产物P/C-1兼有sPD-1和CH50的生物学功能,能够激活巨噬细胞和脾淋巴细胞,发挥二者协同抗肿瘤作用,从而将非特异性和特异性抗肿瘤免疫有机地结合起来,为肿瘤基因治疗提供新的思路.
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sPD-1封闭PD-L促进抗瘤免疫的机制研究
目的研究本室构建的可溶性PD-1(sPD-1)真核表达质粒pPD-1A的抑瘤机理.方法用转染了pPD-1A的BHK细胞分泌产物去封闭树突状细胞上的PD-1配体(PD-L),并用MTT法检测树突状细胞(DC)对小鼠脾细胞的增殖激活作用.BALB/c小鼠接种H22肝癌细胞后次日开始接受质粒pPD-1A的注射.用RT-PCR法分析小鼠脾细胞的细胞因子和共刺激分子的mRNA表达水平,用流式细胞术测定肿瘤内T淋巴细胞的数量.结果在淋巴细胞活化的早期sPD-1对IL-10-DC激活淋巴细胞的作用有一定的促进,但作用并不十分显著(P＞0.05).注射了质粒pPD-1A的小鼠产生了较强的抗瘤免疫反应,H22肝癌细胞的生长明显受到抑制(P＜0.01).脾脏淋巴细胞的4-1BB、B7.1、IFN-γ和TNF-α表达均上调,以IFN-γ的增加明显;OX40、IL-10表达下调.肿瘤内TIL数量明显增多(75.86%).结论sPD-1通过对PD-L的封闭,不仅增加了肿瘤内部CD3+T细胞的数量,而且可以调节细胞因子和共刺激分子的表达,从而促进抗瘤免疫.
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肺腺癌组织PD-1、PD-L1表达水平对晚期肺腺癌放化疗后预后判断的价值
目的 探讨肺腺癌组织程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)及其配体(PD-L1)表达水平对晚期肺腺癌放化疗后预后判断的价值.方法 回顾性分析2016年1月至2017年12月广西钦州市第二人民医院初治确诊的肺腺癌患者114例的病例资料.对比分析肺腺癌组织PD-1及PD-L1表达阳性与晚期肺腺癌放化疗3个月预后的相关性.结果 晚期肺腺癌组织PD-1或者PD-L1表达阳性的患者在放化疗3个月后预后效果均显著低于PD-1或者PD-L1表达阴性的患者,差异均具有统计学意义(P ＜0.05).结论 阻断PD-1与PD-L1结合的治疗方案对于晚期肺腺癌组织PD-1或者PD-L1表达阳性的患者可能获得更好的临床获益,需引起临床上引起重视.
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PD-1/PD-L对免疫调节作用的研究进展
程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)/PD-1的配体(programmed death ligand,PD-L)属于抑制性共刺激分子,能对免疫反应的产生起负调节作用.PD-1在慢性感染性疾病中的功能缺陷型CD8+T细胞上高表达,导致功能性CD8+T细胞的功能受损,包括细胞增殖、细胞因子分泌和杀伤能力.在肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病中,PD-I/PD-L参与免疫反应的涮节,抑制抗瘤及抗病毒免疫反应,阻断此通路后可以恢复特异性CD8+T细胞的部分功能,因此,PD-1/PD-L通路可能与肿瘤细胞免疫逃避和病毒感染疾病慢性化有关.
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重组腺病毒Ad-PD-L1转染供体小鼠树突状细胞对受体小鼠淋巴细胞激活的影响
目的:观察重组腺病毒载体Ad-PD-L1转染供体C57BL/6(H-2b)小鼠树突状细胞(DC)对受体DBA/2(H-2d)小鼠淋巴细胞增殖和激活的影响.方法:构建腺病毒穿梭质粒pShuttle-GFPCMV(-)-PD-L1和腺病毒骨架质粒pAdxsi-GFP-CMV-PD-L1,重组腺病毒Ad-PD-L1进行包装、扩增和纯化.分离培养供体C57BL/6小鼠的DC,分为3组:腺病毒载体Ad-PD-L1转染组(A组),空载体转染组(B组)和对照组(C组).Western blot检测转染后各组细胞PD-L1的表达.分离受体DBA/2小鼠的淋巴细胞,用羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,将供体C57BL/6小鼠的DC和受体DBA/2小鼠淋巴细胞混合培养,流式细胞仪观察淋巴细胞的增殖情况.结果:酶切及测序证实含PD-L1的重组腺病毒载体Ad-PD-L1构建成功.转染供体C57BL/6小鼠的DC后其PD-L1的表达升高37% (P<0.05),将转染了PD-L1的DC与受体DBA/2小鼠的淋巴细胞进行共培养.与对照组相比,PD-L1表达升高后,明显地抑制了淋巴细胞的增殖和活化.受体DBA/2小鼠的淋巴细胞增殖降低41% (P<0.01).结论:转染供体C57BL/6小鼠DC后通过共刺激通路PD-1/PD-L1抑制了受体DBA/2小鼠淋巴细胞的增殖和激活.
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血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤的研究进展
血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤(AITL)是淋巴瘤中较少见的一类亚型,属外周T细胞淋巴瘤(PTCL),占非霍奇金淋巴瘤(NHL)的1%～2%.该疾病肿瘤细胞起源于生发中心CD_4~+T辅助(Th)细胞,具有特异的组织病理特征,协同表达CD_(10)、趋化因子CXCL_(13)~([1-2])、细胞程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)~([1,3]).
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通过PD-1/PD-L1共刺激通路诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的研究
目的 观察重组腺病毒Ad-PD-L1对诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的作用.方法 酶切含有小鼠全长PD-L1 cDNA的pSport 1-mCD274质粒,亚克隆到穿梭质粒pShuale-GFP-CMV(-)上,再通过酶切、连接等方法构建腺病毒骨架质粒pAdxsi-GFP-CMV-PD-L1,转化DH5α感受态细菌,筛选阳性克隆.经酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,氯化铯密度梯度离心纯化病毒.链脲霉素(250 mg/kg)腹腔注射诱导C57BL/6(H-2b)小鼠糖尿病模型,将C57BL/6小鼠随机分为3组,A为对照组,B为Ad-EGFP处理组,C为Ad-PD-L1处理组,在进行胰岛移植的前1天,经尾静脉输注5×108 pfu的Ad-PD-L1.将DBA/2(H-2d)小鼠的胰岛移植在糖尿病小鼠肾被膜下.术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及胰岛移植物的存活时间,并观察混合淋巴细胞反应的特异性.结果 酶切及测序证实Ad-PD-L1构建成功.Ad-PD-L1在小鼠体内可以高效地表达PD-L1,Ad-PD-L1治疗组胰岛移植物的存活时间明显延长到27.63±3.51 d(P<0.01),混合淋巴细胞反应表明小鼠对供体反应特异性降低. 结论通过PD-L1/PD-1共刺激通路可以抑制T细胞的活化,从而延长了胰岛移植物的存活时间.
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康莱特对晚期乳腺癌患者外周血CD4及PD-1阳性T细胞的影响
目的：检测康莱特（KLT）对晚期乳腺癌患者外周血CD4+及程序性死亡分子1（PD-1）阳性T细胞比例的影响，探讨KLT在乳腺癌患者中诱导抗肿瘤免疫的作用。方法选取接受过化疗或内分泌治疗后肿瘤进展的晚期乳腺癌患者30例，以KLT注射液处理；处理前后取外周血经流式细胞术检测治疗前后外周血中CD4+和CD4+PD-1+T淋巴细胞数量变化。并选取同期健康体检者20名为对照组，常规抽血检测。结果晚期乳腺癌患者治疗前外周血CD4+T细胞较健康人群低，而CD4+PD-1+T细胞的比例较健康人群高；经KLT治疗后的晚期乳腺癌患者外周血CD4+T细胞较治疗前显著增高，而CD4+PD-1+T细胞的比例较治疗前显著降低，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 KLT有效降低晚期乳腺癌患者外周血CD4+PD-1+T淋巴细胞比例，减弱机体肿瘤免疫抑制状态。
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PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂抗肿瘤治疗现状及其疗效预测标志物的研究进展
肿瘤免疫治疗是近年肿瘤治疗领域的研究热点,尤其是免疫检查点抑制剂的成功开发与应用,更是将肿瘤免疫治疗带入了一个新时代.与化疗、放疗、靶向治疗等常规治疗方法直接作用于肿瘤细胞不同,免疫检查点抑制剂是通过阻断肿瘤微环境中免疫检查点通路,激发肿瘤特异性T细胞功能,从而改善内源性抗肿瘤免疫,达到抗肿瘤效果.现在已有多种程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)单抗获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于临床抗肿瘤治疗;但PD-1/PD-L1单抗在临床应用中也面临诸多挑战,如疗效预测生物标志物的选择和联合治疗等.本文对PD-1/PD-L1通路的免疫学机制、PD-1/PD-L1通路与肿瘤免疫逃逸以及目前经FDA批准的PD-1/PD-L1单抗研究现状作一综述,并讨论了目前比较热门的预测PD-1/PD-L1单抗疗效的生物标志物的研究进展.
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PD-1和PD-L1治疗非小细胞肺癌的临床研究现状
程序性死亡受体1(PD-1)与其配体PD-L1属于CD28/B7家族,两者相互结合后能够调节肿瘤的微环境,使突变的细胞在变成无限增殖的肿瘤细胞之前被特异性清除,对免疫应答发挥负性调节的作用.目前研究表明,PD-1/PD-L1抑制剂在非小细胞肺癌(NSCLC)的临床应用中显示出巨大的潜力,成为继化疗、放疗、手术治疗和分子靶向治疗之后的又一大焦点.因此,本文对PD-1/PD-L1治疗NSCLC的临床研究现状及展望进行综述.
