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单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征
本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征.建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型.应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV 20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质.对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子.结果表明:单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现.移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞.肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C'末端保守的CDR3氨基酸基序(motif).结论:单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原.
关键词： 单倍体相合骨髓移植 GVHD T细胞受体β链可变区 CDR3 -
单倍体相合骨髓移植白血病患者造血重建的临床研究
为研究未去除T细胞的单倍体骨髓移植后造血重建的特点,对15例HLA 2-3个位点不匹配骨髓移植亲属供者使用G-CSF 3-4 μg/(kg*d),连续7天后采髓.预处理方案采用大剂量阿糖胞苷联合环磷酰胺和全身照射.应用环孢菌素A和氨甲喋呤、抗胸腺细胞球蛋白及霉酚酸酯(MMF)预防移植物抗宿主病.移植后观察血像、骨髓像、行染色体分析及HLA位点鉴定.移植后分别于3,6和12个月及2年追踪鉴定植入状态.结果发现,15例患者全部移植物植入,移植后中性粒细胞>0.5×109/L和血小板>20×109/L的时间分别为18(13-23)天及22(16-32)天.骨髓像显示各系造血均恢复.7例应用染色体检查,8例应用HLA位点,4例应用血型,1例应用DNA指纹检测,植入鉴定结果除1例复发患者于移植后2个月骨髓复发植入鉴定为供、受者嵌合外,其他患者均呈持续全部稳定植入.移植后发生I度急性GVHD 8例,II-IV度GVHD 5例,可评价的慢性GVHD共8例.结论:供者应用G-CSF后采髓,加大预处理剂量,联合应用作用机理不同的多种免疫抑制剂进行HLA单倍体的骨髓移植,可跨越人类HLA多样性屏障.
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异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相合骨髓移植中的作用
本研究观察异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相合骨髓移植中的作用.建立荷EL9611(H-2d)红白血病细胞的CB6F1H-2b/d小鼠动物模型,5天后将其随机分为7组,每组10只.CB6F1H-2b/d受鼠为移植组,9 Gy(60Co)照射后以C57BL/6H-2b/d为供鼠,进行骨髓移植.对照组分为5组:对照1组为未治疗组;对照2组为单纯照射组;对照3组为阿糖胞苷治疗组:小鼠腹腔注射阿糖胞苷50 mg/kg×6d;对照4组为单纯骨髓细胞移植组:小鼠照射后4小时移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞;对照5组为GVHD对照组:小鼠照射后4小时移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞.实验组分为2组:实验A组,照射后输注C57BL/6H-2b小鼠NK细胞1×106/只,4小时后移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞;实验B组:照射后同实验1组,4小时后移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞.以血象、体重、生存Supported by Guangdong Natural Doctor Initial Funding, research project number: 06301119 Fundation of State Key Laboratory of Oneology in Southern China期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较.结果表明,对照1、2、3、5组小鼠生存期分别为(10.10±0.88)天、(9.80±0.92)天、(22.70±3.23)天、(20.10±1.73)天,对照4组生存期为(30.10±15.95)天,其中2只小鼠超过30天;实验A、B组小鼠生存期分别为(39.10±18.11)天、(49.30±17.24)天,实验1组4只小鼠生存期超过30天,实验2组7只生存期超过30天,其中实验1组与对照1、2、3、5组比较均有显著性差异(p<0.01),实验2组同其他组比较均有显著性差异(p<0.05).因白血病死亡的小鼠,可见肝脾明显肿大,结构破坏,有大量白血痛细胞浸润.实验组长期存活的小鼠出现Y染色体(嵌合率80%-90%).结论:在荷EL9611(H-2d)红白血病细胞CB6F1H-2b/d小鼠模型的单倍体相合骨髓移植中供者NK细胞具有杀灭白血病细胞并降低GVHD的双重作用.
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单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症
为了探讨单倍体相合骨髓移植术后不同时期肺部并发症发生情况,对18例单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症的发生时间、病因、治疗措施及顸后等临床资料进行了总结分析.结果表明:70例接受单倍体相合骨髓移植病人中18例发生肺部并发症,其中细菌性肺炎7例,发生在移植后3-12月,治疗过程中继发真菌感染4例;肺真菌病5例,CMV肺炎4例,均发生在移植后2-3月;阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎1例,发生在移植后12月;原发肺炎综合征1例,发生在移植后50天;因肺部并发症直接导致死亡8例.结论:单倍体相合骨髓移植术后肺部靠并发症是移植术后常见并发症,主要是真菌肺炎,对病人威胁较大.
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供者使用G-CSF与受者加用ATG和霉酚酸酯的单倍体相合骨髓移植
为了探讨供者应用G-CSF与受者加用抗胸腺细胞球蛋白(ATG)与霉酚酸酯(MMF)HLA单倍体相合未去T细胞骨髓移植的可行性,对17例白血病病人进行HLA 2-3个位点不匹配的相关供者的骨髓移植.17例病人中11例急性淋巴细胞白血病(CR2 6例,＞CR2 4例,复发状态1例),2例急性非淋巴细胞白血病(CR1 1例,CR21例),4例慢性粒细胞白血病(慢性期2例,加速期2例).预处理方案是阿糖胞苷3.0g/m2,2次/日,连用3天(于移植前7至5天)、环磷酰胺45 mg/(kg@d),连用2天(于移植前5天和移植前4天)和全身照射10 Gy,分2次(于移植前2天和移植前1天进行).供者应用G-CSF 250μg/d,连用7日后采髓;预防GVHD除应用CSA和MTX外,在移植前4至1天应用ATG 5mg/(kg@d),移植后7天开始每天加用霉酚酸酯1.0 g,连用100天.结果表明:17例移植后均取得植入,中性粒细胞＞0.5×109/L的中位天数是18(13-23)天,血小板＞10×109/L的中位天数是20(16-32)天.Ⅱ-Ⅳ度急性GVHD病人5例(29.4%),其中2例肠道Ⅱ度急性GVHD,2例肠道Ⅲ度急性GVHD,1例肝和肠道Ⅳ度GVHD.可评价的慢性GVHD病例9例,均发生慢性局限性GVHD.未发生移植方案相关Ⅲ级以上的毒性.中位随访时间是13(3-27)月.死亡6例,其中3例死于GVHD,2例死于感染,1例死于白血病复发,其余11例无病存活,存活率为64.7%.结论:供者使用G-CSF和移植后受者使用不同作用机制的免疫抑制剂,其组合模式可以跨越HLA基因屏障.
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G-CSF预处理供者单倍体相合骨髓移植加用CD25 单克隆抗体预防急性GVHD的临床研究
探索单倍体相合未去T细胞骨髓移植应用CD25单克隆抗体预防急性移植物抗宿主病(GVHD)的疗效.在1999年2月至2001年11月期间,对28例白血病病人进行HLA 2-3个位点不合骨髓移植,其中2000年11月前完成的不使用CD25单抗的15例为对照组,此后完成的13例为本方案组,两组供者均接受粒细胞集落刺激因子(G-CSF,Lenograstim)250μg/d,皮下注射,连用7天后采髓;环孢菌素A,氨甲蝶呤,抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯(MMF)联合用于GVHD预防.研究组病例在移植前2 小时和移植后第4天加用CD25单克隆抗体(Basiliximab)进一步预防GVHD;并对两组移植后植入,GVHD发生和无病存活情况进行比较.结果表明,28例患者移植后均植入成功,植入直接证据的检测证实完全供者造血,两组造血重建时间比较无显著性差异(P＞0.05);未用抗体的对照组急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD发生率33.3%,本方案组加用CD25单克隆抗体,无1例发生急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD,两组之间差异有显著性(P＜0.05);慢性GVHD发生均为局限性,两组的差异无显著性(P＞0.05).对照组中位随访26(15-36)月,活存9/15例,本方案组中位随访8(3-15)月,活存12/13例,Kaplsn-Meier存活曲线分析与对数秩检验,本方案组1年无病生存率明显高于对照组(P＜0.05).结论:单倍体相合骨髓移植加用CD25单克隆抗体有利于急性重度GVHD的预防,显著提高单倍体相合骨髓移植无病生存率.
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单倍相合骨髓移植术后中枢神经系统并发症
为了探讨单倍体骨髓移植术后神经系统并发症的发生情况,对10例单倍相合骨髓移植术后神经系统并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析.结果表明:74例接受单倍体相合骨髓移植病人中10例发生并发症,其中3例病人出现脑出血,感染3例(真菌感染,CMV脑炎,单纯疱疹病毒性脑炎各l例),癫痫、格林-巴利综合征、脑病和精神分裂症各1例,因神经系统并发症直接导致死亡的患者4例.结论:神经系统并发症是单倍相合骨髓移植术后常见的严重并发症之一,并导致较高的死亡率,尤其是脑出血对病人的威胁较大;单倍相合骨髓移植术后免疫重建缓慢,对相关感染并发症和周围神经的病变应引起重视.
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骨髓联合外周血单倍体相合造血干细胞移植治疗白血病
本研究探讨(G-CSF)动员骨髓加外周血联合进行单倍体相合造血干细胞移植(hiBM+PBSCT)治疗白血病的可行性及疗效.125例白血病患者接受了单倍体相合未去T细胞的造血干细胞移植.所有供者应用G-CSF5μg/(kg·d),皮下注射,连用7天.实验组(A组)29例患者在供者动员的第7、8天分别接受1次hiBMT+PBSCT移植;对照组(B组)96例仅接受1次单倍体相合骨髓造血干细胞移植(hiBMT).对两组患者应用相同的免疫抑制荆预防急性GVHD,观察临床的移植效果.结果表明:除hiBMT组有1例慢性髓系白血病合并骨髓纤维化患者移植失败外,其余全部患者移植后经检测证实为完全供者造血,hiBM+PBSCT组和hiBMT组中性粒细胞数>0.5×109/L的中位时间分别为15(10-23)天和19(11-26)天;血小板数>20×109/L时间分别为18(9-33)天和23(13-35)天.hiBM+PBSCT组和hiBMT组急性Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的累计发生率分别是31.03%和12.5%.二者差异有显著性意义(P<0.05),但急性Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的发生率分别是13.79%和10.41%(P>0.05)、aGVHD相关死亡率分别为3.45%和5.21%(P>0.05),差异均无显著性意义.骨髓联合外周血移植组和单纯骨髓移植组慢性GVHD的累计发生率分别是48.2%和35.4%(P>0.05),二者差异无显著性意义.广泛型慢性GVHD发生率两组分别为23.3%和15.6%(P>0.05),差异无显著性意义.骨髓联合外周血移植组和单纯骨髓移植组疾病复发率分别是6.8%(2/29)和18.7%(18/%)(P<0.05),二者差异有显著性意义.结论:G-CSF动员骨髓联合外周血单倍体相合造血干细胞移植后造血重建更快,急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率和死亡率无明显增加,高危白血病的复发率下降.可以有效安全应用于临床.
