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浅谈血液辐照机
辐照可以预防GVHD,因此血照仪的使用和引进越来越多.本文认为应从适当的活度,低的表面剂量率,佳均匀度,可调剂量率和安全性对血照仪进行评价.
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白血病小鼠造血干细胞移植模型的研究进展
小鼠造血干细胞移植模型是进行白血病治疗实验研究的关键,现已广泛应用于抗癌药物筛选、白血病发病机制以及实验性治疗研究等.小鼠造血干细胞移植模型具有建立周期短,重复性好,使用的肿瘤细胞株生物特性较稳定等优点.本文将从白血病及肿瘤细胞株的来源、小鼠种属的选择、移植模型的构建及GVHD模型新进展等方面对小鼠造血干细胞移植模型进行综述.
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CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性
CD4+CD25+调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群,具有免疫无能和免疫抑制两大特性,通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4+CD25-T细胞的抑制作用.GVHD是异基因造血干细胞移植严重的并发症之一,近来有关CD4+CD25+调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论,即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比.这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路.本文就CD4+CD25+调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4+CD25+T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述.
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单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征
本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征.建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型.应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV 20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质.对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子.结果表明:单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现.移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞.肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C'末端保守的CDR3氨基酸基序(motif).结论:单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原.
关键词： 单倍体相合骨髓移植 GVHD T细胞受体β链可变区 CDR3 -
供者自然杀伤细胞减轻GVHD并提高移植成活率的实验研究
本研究观察激活的供、受者NK细胞能否减轻骨髓移植后GVHD和增加移植成活率.以C57BL/6小鼠作为供者,将接受6.5 Gy 60COγ射线全身照射的BALB/c受鼠随机分为4组,对照l组(无任何处理)、对照2组(骨髓移植)、实验1组(骨髓移植同时输注激活的受者NK细胞)和实验2组(骨髓移植同时输注激活的供者NK细胞),观察每组小鼠的活存期、嵌合率、GVHD临床和病理改变.结果表明:对照1组全部活存,实验1组比对照2组活存期短(P＜0.05),实验2组比对照2组活存期延长(P＜0.01).实验1组GVHD临床及病理评分高于对照2组(P＜0.05),实验2组GVHD临床及病理评分明显低于对照2组(P＜0.01).实验1组和实验2组嵌合率均较对照2组高(P＜0.05),实验2组的嵌合率比实验1组明显增加(P＜0.01).结论:激活的供者NK细胞能延长实验小鼠的活存期,降低GVHD严重程度,增加移植成活率;而激活的受者NK细胞却缩短实验小鼠的活存期,加重GVHD严重程度.受者NK细胞也增加移植成活率,但比供者NK细胞作用小.
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在小鼠骨髓移植中CCR5与急性移植物抗宿主病的相关性研究
本研究评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据.经过致死剂量照射的BALB/c小鼠接受异基因C57BL/6小鼠的骨髓移植.根据回输的细胞不同实验分为4组:B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞.结果表明:较之B6 WT组,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD;其受者体内的CD8+T细胞更大量的增殖;其T细胞恢复后产生更多的INF-γ和TNF-α并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,从而进一步促进T细胞的增殖,提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8+T细胞的增殖.组织学评价提示,移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在有更为严重的病理变化.结论:剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率的增加,供者CD8+T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重,这提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用.
关键词： CCR5 GVHD 异基因造血干细胞移植 CD8+细胞 -
GVHD患者外周血Th17/Treg细胞相关的细胞因子检测与临床意义
本研究旨在探讨急性移植物抗宿主病(aGVHD)、慢性GVHD(cGVHD)患者外周血中Th17/Treg细胞相关的细胞因子的水平与临床意义.外周血样品采集自造血干细胞移植术后患者和健康人,其中aGVHD组10例、cGVHD组13例、无GVHD组16例,健康人20名.采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测各组外周血血浆中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、TGF-β1、IL-17、IL-23的表达水平.结果表明:a/cGVHD组IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-17及IL-23水平显著高于无GVHD组和健康人(p<0.05),而IL-10、TGF-β1水平显著低于无GVHD组和健康人(p<0.05).aGVHD和cGVHD组患者治疗有效后,外周血中IL-6、IL-17及IL-23水平较治疗前明显降低;IL-10、TGF-β1水平明显升高,而IFN-γ、IL-4无明显变化.各组患者血浆中TGF-β1与IL-6、TGF-β1与IL-17、TGF-β1与IL-23水平呈负相关(r分别等于-0.36、-0.51和-0.44,p均<0.05),IL-6与IL-17、IL-6与IL-23、IL-17与IL-23水平呈正相关(r分别等于0.62、0.71和0.93,p均<0.05).结论:Th17/Treg细胞相关的细胞因子可能在aGVHD和cGVHD的发生、发展中具有重要作用,对它们的研究有助于寻找治疗a/cGVHD的新犯点.
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肝细胞生长因子对ALL小鼠骨髓移植后GVHD和血清Th1/Th2相关细胞因子的影响
为了观察肝细胞生长因子(HGF)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后GVHD和血清Th1/Th2相关细胞因子的影响,BALB/c小鼠ALL模型建立后,接受11Gy全身照射,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠.随机将BALB/c小鼠分A、B两组,A组移植后0天至7天皮下注射HGF,B组皮下注射PBS.移植后观察A、B两组的GVHD症状和肝、小肠、皮肤的病理学变化;移植后第8天取血检测IFN-γ和IL-4水平.结果表明:A组的GVHD症状积分低于B组(P＜0.05);A、B两组的IFN-γ均高于正常组(P值分别＜0.05和0.001),但A组低于B组(P＜0.01);A、B两组的IL-4均低于正常组(P＜0.05),而A组的IL-4高于B组(P＜0.05).结论:HGF可减轻GVHD的严重程度,与HGF有调节Th1/Th2相关细胞因子趋于平衡的作用有关.
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大鼠骨髓间充质干细胞对同种异体骨髓移植造血重建的影响
为了探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对同种异体骨髓移植造血重建的影响,建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过外周血像检测、病理分析和流式细胞术检测综合评价MSC对骨髓移植(bonemarrow transplantation,BMT)的积极作用.结果表明:①共移植后30天,MSC可在致死量照射的受者存活,并被发现受者胸腺、脾脏和骨髓;②MSC可促进BMT后造血重建,促进外周血白细胞、淋巴细胞和血小板的明显恢复;促进骨髓细胞数恢复及B淋巴系、巨核系分化增强;有利骨髓组织学的明显恢复发善.结论:大鼠MSC与骨髓共移植可在受体的造血器官长期存在,MSC可明显促进同种异体骨髓移植后造血重建.
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HLA氨基酸三维构象差异在非血缘造血干细胞移植中的作用分析
本研究探讨HLA氨基酸三维构象软件在评价不同HLA构象对造血干细胞移植预后的作用.回顾分析62例北京市道培医院单中心非血缘造血干细胞移植(30例HLA等位基因10/10全合和32例HLA等位基因9/10相合).应用Histocheck和HLA-Matchmaker 2个HLA抗原三维空间构象分析软件,分析其评分系统与移植后1年总生存率、急性GVHD和复发率的相关性.结果表明:①随着Histocheck软件的评分的增加Ⅲ-Ⅳ度GVHD的发生率增加(0%增加到20%,p=0.25),但是高分组中仍有70%病例没有或只有轻度GVHD.对移植后的复发进行统计,除Histocheck分数偏高组(11-20)9例没有复发,其它组复发率差别不大(20%左右),(p=0.56).②应用HLA-Matchmaker软件分析,随着供受者Eplet差异数目的增加,重度GVHD的发生率明显增加(0%增加到30%),无或轻度GVHD的发生率下降(p=0.019),但高分组中仍有60%没有或只有轻度GVHD,统计学有差异.差异数目偏高组(≥3)共10例均没有复发,偏低组(＜3)复发率偏高(20%左右p=0.54).结论:Histocheck和HLA-Matchmaker两个分析软件虽然对于HLA抗原构象差异的计算方法不同,但结果有很多的相近性.对于同一组供受者,两个给分系统与急性GVHD和复发的相关性类似,高分组中重度GVHD的比例增加,复发率下降,但相关性都不准确.HLA-Matchmaker软件的相关性略好于Histocheck.
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54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析
本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究脐血移植的相关影响因素.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量.结果表明:1998年6月至2003年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例.其中同胞脐血移植11例.对54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6%,非恶性病患者11例,占20.4%,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107/kg,移植后60天植入43例(ANC＞500/μl的中位时间为17天),植入率为79.6%.脐血移植有核细胞重建时间与输入的有核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关.急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6%,慢性GVHD发生率为5.4%.6例患者出现自体恢复(11.1%).存活率42.6%.结论:非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小儿白血病方面具有良好的应用前景.
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HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析
1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例.本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLASSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系.利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析.结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008).结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值.
关键词： 非亲缘性脐血移植 HLA-DRB1等位基因 GVHD -
造血干细胞移植供者TNF-α基因多态性在GVHD中的频率分析
探讨供者肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因多态性在重度急性移植物抗宿主病(aGVHD)和广泛型慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的作用.本研究应用变性高效液相色谱结合DNA测序检测了TNF-α-308和TNF-α-238基因在重度aGVHD和广泛型cGVHD的分布.结果表明,21例Ⅲ度/Ⅳ度aGVHD病人中有8例呈现TNF-α-308(G/A)阳性,而28例0度/Ⅰ度aGVHD病人中仅1例呈现TNF-α-308(G/A)阳性,提示TNF-α-308(G/A)在Ⅲ度/Ⅳ度aGVHD中的频率明显高于0度/Ⅰ度aGVHD的病人(P＜0.01).在23例广泛性cGVHD病人中有7例呈现TNF-α-308(G/A)阳性,而17例未发生cGVHD的病人中仅1例呈现TNF-α-308(G/A)阳性,提示TNF-α-308(G/A)在广泛性cGVHD中的频率高于未发生cGVHD的病人(P＜0.05).在21例Ⅲ度/Ⅳ度aGVHD和28例0度/Ⅰ度aGVHD及23例广泛性cGVHD及17例未发生cGVHD的病人中均有1例呈现TNF-α-238(G/A)阳性,提示TNF-α-238(G/A)在上述各组病人间的频率无明显差异.结论:TNF-α-308(G/A)阳性与Ⅲ度/Ⅳ度aGVHD和广泛型cGVHD的发生密切相关.
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人骨髓间充质干细胞体外对异基因T淋巴细胞表型的影响
为了研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的免疫调节作用,探讨防治异基因骨髓移植中移植物抗宿主病(GVHD)和移植排斥反应(HVGR)的可能途径,从人骨髓中分离培养间充质干细胞,并通过其形态的均一性及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度,将MSC分别以8×104(A组)、4×104(B组)和2×104(C组)个细胞/孔分别接种于6孔板,并与经分离的外周血T淋巴细胞共培养7天,以单独培养的外周血T淋巴细胞为对照组,用流式细胞仪分别在培养0、24、72小时和7天测定各组T细胞上CD3、CD4、CD8、CD25表达的变化.结果表明:T细胞和MSC共培养组与T细胞单独培养组相比,A组和B组CD4+CD25+免疫调节性T细胞和CD8+T细胞明显增多,A组和B组之间无明显差别.实验组和对照组相比CD3、CD4、CD25表达无明显差别.结论:骨髓MSCs在体外可使外周血T细胞表型发生改变,CD4+CD25+免疫调节性T细胞和CD8+T细胞明显增多,本研究结果为临床异基因造血干细胞移植预防GVHD时MSCs的输注数量提供了参考.
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S1P受体激动剂FTY720抑制小鼠体内成熟DC的分布并减轻急性GVHD
目的探讨S1P受体激动剂FTY720在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease，aGVHD）进程中的作用及其可能的机制。方法 BALB/c （H2d）受体鼠接受750 cGy全身性致死性辐照，4 h后通过尾静脉注射的方法输注1×107个C57BL/6（H2b）小鼠来源的骨髓细胞和5×106个全脾细胞，建立aGVHD模型。从移植前第1天（ day 1）至移植后第4天（day 4）每天给小鼠腹腔注射FTY720（3 mg/kg）或等体积对照组溶剂，观察小鼠生存。移植后第4天采用流式细胞术检测两组小鼠的脾脏、肝脏、肺和小肠4个脏器中的免疫细胞的表型。结果FTY720能显著延长异基因造血干细胞移植后aGVHD的相关存活；流式细胞术结果发现FTY720能显著抑制肺和小肠中成熟DC的分布。结论 FTY720能显著抑制肺和小肠中成熟DC分布，从而减轻aGVHD。
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异基因造血干细胞移植中GVL和GVHD的研究进展
造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是近半个世纪临床医学中具有巨大创新性的技术,目前已经广泛应用于恶性血液病、非恶性难治性血液病、先天性免疫缺陷性疾病、遗传性疾病及某些实体肿瘤的治疗.
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难治性移植物抗宿主病治疗新进展
异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation ,allo-SCT)通常是治愈各种血液、遗传或免疫疾病的重要方法,特别对于一些恶性血液病患者,allo-SCT 已成为其治愈的惟一选择.然而,移植物抗宿主病(GVHD)无论急性和慢性仍然是allo-SCT 后提高移植效果的主要障碍,如何更好地预防及治疗GVHD 是亟待解决的问题.
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第三方脐血辅助输注的单倍型造血干细胞移植36例疗效分析
目的：探讨经第三方脐血辅助输注的异基因造血干细胞移植患者植入和移植后严重移植物抗宿主病（GVHD）情况与第三方脐血之间的关系。方法回顾性分析我中心2012年1月至2013年4月进行的使用脐血辅助输注的异基因造血干细胞移植患者36例的临床资料。结果所有患者均为恶性血液病，达到完全缓解者55.6%，约一半为未缓解或复发患者。患者年龄为4～55岁，中位年龄15.0岁。患者男女比例为1.4∶1。供者年龄为4～58岁，中位年龄36.0岁。从供者与患者关系来看，父母供子女者占75.0%，子女供父母者占11.1%，半相合同胞供者占13.9%，三种供者来源比较，存在统计学差异（P＜0.05），提示父母供子女者显著多于另两组，另两组间无统计学差异。从供受者性别比率来看，男供男比率为33.3%，男供女为27.8%，女供男为16.7%，女供女为22.2%，四组间比较无统计学差异，提示四组供受者性别比率无统计学差异。回输 MNC （9.62±2.9）×108/kg（患者体重），CD34+细胞（3.87±1.36）×106/kg。移植后1.5个月复查STR-PCR，34例为100%供者型，仅2例为非完全供者型，1周后复查均转变为100%供者型。观察至移植后100 d，未发生GVHD者占55.6%，发生GVHD者44.4%，其中发生Ⅰ～Ⅱ度GVHD者占38.9%，Ⅲ～Ⅳ度GVHD者占5.6%。结论从临床上可认为使用脐血进行辅助输注在一定程度上促进供者造血干细胞成功植入，造血恢复快且稳定，治疗效果好，而发生严重GVHD的概率也大大降低，值得进一步深入研究。
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间充质干细胞治疗激素耐药的重度急性移植物抗宿主病的Ⅱ期临床研究
重度移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植的致命性并发症,糖皮质激素是急性GVHD的一线治疗药物,但激素治疗的有效率仅为30%～50%,且激素耐药的重度急性GVHD患者预后极差.间充质干细胞(MSC)可以调节体内外的免疫反应,因此MSC可用于治疗异基因造血干细胞移植后急性GVHD.本研究旨在观察骨髓MSC治疗激素耐药的重度急性GVHD的疗效.
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慢性移植物抗宿主病的治疗
慢性移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是严重、常见的异基因造血干细胞移植术后的远期并发症,在接受移植100 d后的患者中的发病率高达30% ～70%.虽然慢性GVHD的发生可以减少原发疾病复发的可能性,但是慢性GVHD却是移植受者远期非复发死亡的一大主要原因.
