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超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞生物学特性及MR示踪成像研究进展
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有多向分化潜能,是良好的组织工程、基因工程的载体细胞.因此,通过移植MSC于活体内,对于创伤性疾病和组织缺损的修复与重建,具有广阔的临床应用前景[1,2].
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TLR2和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞迁移能力的影响
本研究探讨Toll样受体2(Toll-like receptors2,TLR2)和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)迁移能力的影响及其机制.采用流式细胞术检测MSC表面TLR2和TLR4的表达情况,应用趋化实验和黏附实验观察PAM3CSK4(TLR2激动剂)和LPS(TLR4激动剂)对人骨髓来源的MSC的趋化活性和黏附活性的影响.结果表明,人骨髓来源的MSC表面表达TLR2 (24.5±3.2)%和TLR4(91.3±5.2)%.与对照组相比,PAM3CSK4可明显抑制SDF-1诱导的MSC的趋化作用,并增强MSC的黏附作用;而LPS对MSC的趋化和黏附能力均无明显影响.进一步研究显示,PAM3CSK4可呈剂量依赖性抑制MSC的自发迁移作用,但对MSC表面CXCR4的表达无明显影响.结论:TLR2的活化可显著抑制MSC的迁移能力,这可能与其抑制MSC的自发迁移和增强MSC的黏附作用具有一定的关系.
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TLR2和TLR4活化的骨髓间充质干细胞对人脐血CD34+细胞迁移能力的影响
目的:本研究旨在探讨Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)和TLR4活化对人骨髓源性间充质干细胞(BM-MSC)诱导人脐血CD34+造血干/祖细胞迁移功能的影响及其机制.方法:流式细胞术检测健康供体BM-MSC表面TLR2和TLR4的表达情况;TLR2激动剂(PAM3 CSK4)和TLR4激动剂(LPS)活化人BM-MSC,收集培养上清,趋化实验测定BM-MSC培养上清对人脐血CD34+细胞的趋化作用;了解TLR2或(和)TLR4的活化对BM-MSC诱导CD34+细胞迁移活性的影响.ELISA法定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平.结果:人BM-MSC表面表达TLR2水平分别为(31.5±4.6)%和TLR4(85.6±6.7)%.与未加培养上清的空白组相比,对照组、LPS和/或PAM3 CSK4活化的MSC的培养上清对CD34+均有明显趋化作用(P<0.01).进一步研究显示,与未加激动剂的对照组(MSC上清组)相比,LPS组、PAM3CSK4组、LPS和PAM3CSK4联合刺激组的MSC培养上清诱导CD34+细胞的迁移均有显著促进作用(P<0.05),但LPS组、PAM3CSK4组、LPS和PAM3CSK4联合刺激组的培养上清中,SDF-1浓度与对照组相比未见明显变化(P>0.05).结论:TLR2和/或TLR4的活化可显著增强骨髓BM-MSC诱导人脐血CD34+细胞的迁移作用,但与趋化因子SDF-1无明显关系.
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KGF和EGFP双基因共表达的重组腺病毒转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究
为了将角质生长因子(KGF)基因通过腺病毒载体转染到间充质干细胞(MSC)中,增强MSC胸腺修复功能,利用DNA重组技术,将目的基因KGF克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中包装、扩增,并测定病毒滴度.转染至小鼠骨髓MSC中,为胸腺组织修复免疫功能恢复提供前期实验基础.结果表明:重组穿梭质粒pShuttle-GFP-mKGF重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.6kh和5.1 kb 2个条带;重组腺病毒载体质粒pAdxsi-mKGF病毒质拉经酶切鉴定得到阳性克隆;测定重组腺病毒Ad-EGFP-mKGF半数组织培养感染量的滴度为1.6×1010 pfu/ml.转染后10 hMSC开始表达荧光,6-8 d达高峰,转染率可达92.3%,28d仍有表达.结论:pAdxsi-mKGF病毒质粒构建成功并能高效、安全地转染MSC.
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胎盘组织——间充质干细胞的新来源
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞[1],随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC[2-5].目前MSC是临床研究普遍的细胞来源,在组织工程研究、刨伤修复和肿瘤治疗等领域应用广泛,但MSC在骨髓、外周血等组织中的含量极低,并且有研究表明MSC含量会随着人年龄的增长而逐渐降低,同时细胞的增殖分化能力也大大下降[6].
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间充质干细胞治疗自身免疫性疾病机制的研究进展
近年来,间充质干细胞(MSC)具有治疗自身免疫性疾病的发现已逐步引起研究者的浓厚兴趣.在MSC研究领域大部分研究者主要专注于研究控制这些细胞多向分化能力的潜在性治疗价值.但是,对于这种细胞具有免疫调节特性的关注程度相对较少.目前已有研究者正在对MSC在免疫调节方面的作用进行较为深入的研究.本文中,我们将就使用成人组织来源的MSC作为一种可能的调节工具治疗自身免疫性疾病的新概念进行一些讨论,同时讨论它们转化成临床应用的可能性.
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间充质干细胞迁移的研究进展
骨髓中主要包括两种多能干细胞,即造血干细胞(hemato-poietic cell,HSC)和非造血干细胞,后者中以间充质干细胞(mes-encbymal stem cell,MSC)为主.MSC具有自我增殖和多向分化的潜能,特定条件下可分化为中胚层和外胚层细胞,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经细胞等.
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异基因造血干细胞联合脐带间充质干细胞移植术后并发症的护理
异基因造血干细胞移植是目前治疗恶性血液病的有效手段,但是仅有25%的患者能找到人类白细胞抗原(HLA)全相合的亲缘供者从而顺利实施移植.因此HLA单倍体相合移植越来越受到重视,但移植后排异反应及并发症严重影响患者的生活质量,甚至威胁生命.人脐带间充质干细胞(MSC)具有多能干细胞特性[1],输注后可重建骨髓微环境、促进移植后造血干细胞的植入[2],减少相关并发症的发生.我科近期行异基因造血干细胞联合脐带MSC移植患者26例,总结临床护理经验如下.
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酒精性骨质疏松发病机制研究进展
随着世界酒精性饮品消耗量的不断增长,酒精性骨质疏松对人民健康和生活质量的危害也越来越大.目前认为酒精主要通过改变MSCs、成骨细胞、破骨细胞等的增殖、分化和功能,抑制成骨、促进骨吸收,引起骨组织形成减少同时脂肪组织增多等一系列病理生理变化,终形成骨质疏松.笔者就酒精性骨质疏松形成的细胞、分子生物学机制做一综述.
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间充质干细胞治疗激素耐药的重度急性移植物抗宿主病的Ⅱ期临床研究
重度移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植的致命性并发症,糖皮质激素是急性GVHD的一线治疗药物,但激素治疗的有效率仅为30%~50%,且激素耐药的重度急性GVHD患者预后极差.间充质干细胞(MSC)可以调节体内外的免疫反应,因此MSC可用于治疗异基因造血干细胞移植后急性GVHD.本研究旨在观察骨髓MSC治疗激素耐药的重度急性GVHD的疗效.
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骨髓间充质干细胞移植对肺动脉高压大鼠模型肺组织超微结构的影响
肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一类以肺血管阻力进行性增高为主要特征,终导致右心衰竭甚至死亡的疾病.肺血管重建是PAH的核心病理机制~([1]).近年来,随着干细胞治疗技术在临床的逐步应用,使用干细胞修复损伤的肺动脉或使其再生,有可能达到根治PAH的效果.本研究通过建立野百合碱(monocrotaline)诱导的大鼠PAH肺血管重构模型,观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植对肺组织超微结构的影响,探讨MSC移植逆转肺血管重构的机制.
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IL-10基因修饰骨髓间充质干/祖细胞治疗小鼠急性移植抗宿主病模型的疗效观察及机制研究
间充质干细胞(MSC)除在造血微环境的形成及造血调控(如促进造血干细胞归巢及定植等)中起重要作用外,近年其免疫学特性也颇受重视.有报道显示MSC可减低移植物抗宿主病(GVHD)发生率及严重程度[1-2],但部分Ⅱ期研究与体外及动物实验的结论并不一致.
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免疫抑制剂联合脐带间充质干细胞输注治疗单倍型相合造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的初步观察
急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)尤其是单倍型相合造血干细胞移植的严重并发症之一,约半数患者对激素等一线治疗耐药.重度aGVHD患者病死率较高,成为影响造血干细胞移植总体疗效的重要因素.间充质干细胞( MSC)为中胚层发育的早期细胞,是一类多能干细胞.近年来的研究显示[1],MSC具有促进造血和减轻GVHD作用.我院2008年1月以来应用体外扩增的人脐带组织源间充质干细胞( hUC-MSC)治疗9例单倍型相合HSCT后激素耐药aGVHD患者,获得较好疗效,现将结果报告如下.
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人骨髓间充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖及Treg细胞亚群的影响
间充质干细胞(MSC)可抑制移植物抗宿主病(GVHD),提高异基因移植的成功率[1],但具体机制尚不清楚.我们通过观察人MSC直接和间接对T淋巴细胞增殖及调节性T淋巴细胞(Treg)亚群的影响,探讨MSC抑制GVHD可能的作用机制.
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骨髓间充质干细胞与免疫细胞的相互作用研究进展
骨髓间充质干细胞(MSC)是一种具有多向分化潜能的非造血干细胞,体外实验证实MSC能分化成不同谱系的间质细胞,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞和神经细胞等[1].此外,MSC作为骨髓基质组成成分,能产生多种细胞因子和生长因子支持造血[2].近年来报道MSC与造血干细胞(HSC)一同植入可以降低移植后移植物抗宿主病的发生率,延长移植物存活时间及用于治疗自身免疫性疾病,但是其具体机制并不十分清楚.我们就MSC与T、B、NK、DC免疫细胞的相互作用及机制的研究进展作一综述.
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血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC形态学改变及表达cTnT的实验研究
目的:探讨复方血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC分化为心肌细胞的能力,作为细胞移植治疗冠心病、心肌梗死等缺血性心脏病的种子细胞,旨在提高细胞移植治疗冠心病的安全性.方法:分离培养Wistar大鼠骨髓基质干细胞(MSC),用血府逐瘀汤含药血清诱导后,倒置荧光相差显微镜观察细胞形态学的改变,免疫细胞荧光染色法检测cTnT的表达.结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,MSC的细胞形态发生了变化,具有和5-氮胞苷类似的诱导作用,朝着心肌细胞形态学的方向发展,心肌肌钙蛋白T出现了阳性表达.结论:复方血府逐瘀汤含药血清体外可以诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞.
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间充质干细胞对T细胞的免疫调节与系统性红斑狼疮研究进展
系统性红斑狼疮(systemic lupus ervtlaematosus,SLE)以T、B淋巴细胞异常活化和自身抗体的产生为特征.近年来研究发现B细胞产生抗体呈T细胞依赖,T细胞的活化在SLE的发生发展中发挥了重要作用.因此,SLE也被认为是一种T细胞介导的疾病[1].间充质干细胞(MSC)是属于中胚层的一类多能干细胞,具有向多种细胞分化的能力,MSC也有多种免疫调节作用,目前许多研究表明MSC对T细胞免疫调节的异常参与了SLE的发病,现综述如下.
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骨髓间充质干细胞对异体T细胞几种细胞因子分泌的影响
目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对异体T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的影响,从而进一步探讨MSC诱导免疫耐受的机制.方法:将培养了3代后的MSC经照射后作为基底层细胞,接种分离的异体T淋巴细胞.共培养7天后,用ELASA方法检测上清中的上述四种细胞因子的蛋白含量,同时计数T淋巴细胞数量的变化,应用流式细胞仪检测与MSC共孵育前后T淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD25的变化.结果:(1)ELASA检测IFN-γ分泌量为667.07±14.76 pg/ml;IL-10为46.19±1.41 pg/ml;IL-2为33.01±5.92 pg/ml;IL-4为0.15 pg/ml.(2)共孵育组T淋巴细胞在数量上明显减少.(3)CD8+细胞数增多,CD25+细胞减少.结论:骨髓MSC在体外与异体T淋巴细胞共孵育后IFN-γ高分泌,可能与共孵育后T淋巴细胞亚群的改变有关.这一研究结果为预防HLA不相合的骨髓移植的GVHD的发生提供了一条新的思路.
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血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC分化为心肌样细胞的实验研究
目的:观察血府逐瘀汤含药血清体外能否诱导MSC分化为心肌样细胞,为安全有效治疗冠心病提供基础研究.方法:分离培养Wistar大鼠骨髓基质干细胞(MSC),用血府逐瘀汤含药血清培养诱导后,倒置荧光相差显微镜观察MSC细胞形态学的改变,免疫细胞化学染色法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达.结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,细胞形态发生了改变,出现了心肌样细胞的特征;免疫细胞化学染色发现心肌肌钙蛋白(cTnI)呈阳性表达.结论:血府逐瘀汤含药血清具有体外诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞的趋势.
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β-TCP三维支架用于骨髓间充质干细胞原位冻存研究
目的:探索骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)三维扩增原位冻存策略实践性及其对传代迁徙和成骨分化能力的影响.方法:制备β-TCP三维支架,相对2D平板考察三维扩增细胞数,冻存后以CCK-8染色计数考察收获冻存效率,迁徙率,并以ALP染色考察总体成骨分化水平和比分化活力.结果:与2D平板相比,3D培养速率提升7倍,原位冻存细胞收获存活效率由传统消化吹打方式的55.9%提升为81.3%;冻存处理后其迁徙率传代效率下降无统计学意义(P>0.05),比ALP活性经冻存处理非但未下降,反而在迁徙传代支架上显著性提升.结论:利用β-TCP三维支架扩增、传代MSC并进行原位冻存不影响传代迁徙能力,对成骨分化水平反而有贡献作用,具有较好的科研及工业生产应用前景.