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中药二仙汤对骨髓干细胞增值和迁移能力的影响
目的:观察二仙汤对骨髓间充质干细胞增殖能力和迁移能力的影响,为二仙汤协同骨髓间充质干细胞治疗卵巢早衰提供基础实验依据.方法:分别将20只SD雌性大鼠制备含二仙汤的药物血清(含药组)和无药物血清(对照组),取10只大鼠体外分离骨髓间充质干细胞进行培养,通过对照法对细胞形态学观察、MTT法测定、细胞周期及细胞迁移能力进行检测并分析.结果:与对照组相比,含药组细胞增殖能力和迁移能力均明显增强.结论:二仙汤协同骨髓干细胞自体移植治疗卵巢早衰疾病具有可行性.
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大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质化的影响
目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10 μg·L-1转化生长因子-β1(TGF-β1),10 μg·L-1TGF-β1+5 mg·L-1大蒜素,5 mg·L-1大蒜素处理PANC-1细胞,另设空白组,镜下观察细胞形态学改变.细胞划痕实验检测大蒜素是否能降低胰腺癌细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学法及免疫印迹法(Western blot)检测各组钙黏附蛋白-E(E-cadherin),波纹蛋白(Vimentin)的表达变化.结果:TGF-β1能够刺激PANC-1细胞发生典型的EMT形态变化,并伴有E-cadherin表达的上调及Vimentin的下调.划痕实验表明大蒜素能降低胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力.免疫荧光细胞化学法及Western blot结果显示,与空白组及TGF-β1组比较,大蒜素组的E-cadherin 表达明显上调(P＜0.05),Vimentin明显下调(P＜0.05),这表明大蒜素具有抑制PANC-1细胞产生EMT的效应.结论:大蒜素可抑制胰腺癌细胞发生EMT,进而可能在抑制肿瘤浸润与转移过程中发挥重要作用.
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熊胆粉对人脐静脉内皮细胞增殖与迁移作用的实验研究
目的:确定熊胆粉(BBP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及迁移能力的影响.方法:MTT法检测BBP干预下HUVEC增殖活力的影响;划痕实验分析BBP对HUVEC迁移能力的影响.结果:BBP干预24h后,HUVEC的增殖活力受到抑制,尤其到72h时,各药物浓度下HUVEC增殖活力受到显著抑制(P＜0.05,P＜0.01),以药物浓度0.3、0.6、0.9mg/mL分别干预24、48、72h后,表现出时间与药物浓度依赖的特征,HUVEC的迁移能力也受到明显抑制.结论:BBP对HUVEC的增殖与迁移能力有显著的抑制作用,表现出潜在的抑制血管生成的活性.
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血管细胞黏附分子-1增强人脑胶质瘤细胞系迁移和侵袭能力
目的：探讨血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）在脑胶质瘤细胞迁移侵袭能力中作用。方法用慢病毒pSGU6／GFP／Neo介导VCAM-1的shRNA、慢病毒EF1a-GFP／puro介导VCAM-1过表达载体、划痕迁移、Transwell 侵袭、蛋白免疫印迹（Western blot）和细胞染色等实验技术和方法，观察了VCAM-1蛋白表达水平对人脑胶质瘤T98G和U251细胞系细胞迁移和侵袭能力的影响。其中，T98G细胞分为空白对照组、空载体对照组、乱序对照组和实验组（抑制VCAM-1蛋白表达水平组），U251细胞分为空白对照组、空载体对照组和实验组（过表达VCAM-1组），每组6个复孔。结果首先利用慢病毒介导VCAM-1的shRNA和过表达载体建立了稳定低表达VCAM-1的T98G细胞和稳定过表达VCAM-1的U251细胞。稳定低表达VCAM-1的T98 G细胞划痕恢复能力（迁移能力）明显减弱（ P＜0.01）；而稳定过表达VCAM-1的U251细胞迁移能力明显提高（P＜0.05）。同样，稳定低表达VCAM-1的T98G细胞侵袭能力显著减弱（ P ＜0.05）；而稳定过表达 VCAM-1的 U251细胞侵袭能力明显增强（ P ＜0.01）。结论VCAM-1可显著增强人脑胶质瘤细胞系细胞的迁移和侵袭能力。
关键词： 血管细胞黏附分子-1 脑胶质瘤 慢病毒转染 迁移能力 侵袭能力 -
珠心算练习对儿童数字记忆能力的影响
目的 观察珠心算练习对儿童数字记忆能力的影响,从而说明珠心算练习对儿童数字的记忆能力有提高作用.方法 采用基本认知能力测验的方法来观察珠心算练习儿童与非珠心算练习儿童对数字记忆能力的影响差别.结果 殊心算练习儿童与非珠心算练习儿童对数字快速拷贝、心算效率、工作记忆广度、无意义图形再认有显著不同(P＜0.05).结论 珠心算练习能促进儿童对数字的记忆能力,对感觉记忆、短时记忆、长时记忆都有提高作用;通过珠心算练习,儿童对数字的记忆可以迁移到对图形的记忆和识别能力上,说明练习珠心算形成的记忆能力具有正迁移性.
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TLR2和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞迁移能力的影响
本研究探讨Toll样受体2(Toll-like receptors2,TLR2)和TLR4激动剂对人骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)迁移能力的影响及其机制.采用流式细胞术检测MSC表面TLR2和TLR4的表达情况,应用趋化实验和黏附实验观察PAM3CSK4(TLR2激动剂)和LPS(TLR4激动剂)对人骨髓来源的MSC的趋化活性和黏附活性的影响.结果表明,人骨髓来源的MSC表面表达TLR2 (24.5±3.2)％和TLR4(91.3±5.2)％.与对照组相比,PAM3CSK4可明显抑制SDF-1诱导的MSC的趋化作用,并增强MSC的黏附作用;而LPS对MSC的趋化和黏附能力均无明显影响.进一步研究显示,PAM3CSK4可呈剂量依赖性抑制MSC的自发迁移作用,但对MSC表面CXCR4的表达无明显影响.结论:TLR2的活化可显著抑制MSC的迁移能力,这可能与其抑制MSC的自发迁移和增强MSC的黏附作用具有一定的关系.
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沉默Annexin-A1对小胶质细胞BV-2生长和迁移能力的影响及其机制
目的 探讨沉默Annexin-A1(Anxa1)基因对小胶质细胞系BV-2细胞生长、迁移能力的影响及其可能机制.方法 采用RT-PCR和Western blot法从基因和蛋白水平验证小干扰RNA(siRNA)对小胶质细胞系BV-2细胞内Anxa1的沉默效率,采用MTT法检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞增殖的作用,膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染流式细胞术检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞凋亡的影响,应用Transwell小室检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞迁移能力的影响,Western blot法检测细胞周期和迁移相关信号通路蛋白的表达.结果 Anxa1 siRNA干扰组在24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率分别为(16.9±2.1)%、(23.1±3.6)%和(42.4±1.7)%,与siRNA-NC组[分别为(1.35±0.5)%、(2.06±0.7)%和(8.65±0.9)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05),沉默Anxa1对BV-2细胞的增殖发挥抑制作用;转染后48 h Anxa1 siRNA组细胞凋亡率为(18.4±2.1)%,明显高于siRNA-NC组(5.2±0.3)%和空白对照组(4.3±0.2)%;Anxa1 siRNA干扰组细胞迁移能力(28.7±5.2)明显低于siRNA-NC组(173.4±11.4,P<0.01),Anxa1 siRNA干扰可显著下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平和激活p38与JNK信号通路.结论 siRNA沉默Anxa1基因可抑制小胶质细胞的生长、迁移能力,分别通过下调Cyclin D1和激活p38与JNK信号通路来实现.
关键词： RNA干扰 Annexin-A1 BV-2细胞 细胞生长 迁移能力 -
TIPE2-shRNA慢病毒载体的构建、病毒包装及功能检测
TIPE2（ TNFAIP8L-2， tumor necrosis factor-a induced protein-8-like 2）2008年作为新型免疫调节因子被首次鉴定出来［1］，它由184个氨基酸构成，具有与死亡受体结构域（ DED ）相似的结构域和6个保守的α螺旋结构，隶属于TNFAIP8家族。 TIPE2是一种胞质蛋白，高表达于髓系和淋巴系的免疫细胞。研究表明， TIPE2是炎症反应及免疫自稳过程中不可或缺的调控因子，可通过负调T cell receptor （ TCR）和Toll-like receptor （ TLR）信号通路来达到抗炎的目的，TIPE2缺失的老鼠可表现出脾脏肿大、体重减轻、多器官功能衰竭等［1］。近有研究发现，肝癌患者中 TIPE2蛋白水平明显降低，敲除TIPE2后Ras 下游Ral 及AKT等信号分子显著活化，从而拮抗细胞死亡，增强细胞迁移能力［2］，这就提示TIPE2可能具有除免疫调节之外的更多功能。本研究旨在构建针对TIPE2的特异性shRNA 慢病毒表达载体，包装高效的慢病毒颗粒，为深入探索TIPE2功能奠定良好的基础。
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过表达小窝蛋白-1对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力及MMP-2、MMP-9表达的影响
目的：应用基因过表达质粒载体上调小窝蛋白-1（caveolin-1）的表达，观察其对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力、基质金属蛋白酶-2（ MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（ MMP-9）表达和活性的影响。
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肌成纤维细胞与血管内再狭窄
肌成纤维细胞(myofibroblast)是一种具有平滑肌细胞样特点的成纤维细胞,广泛存在于机体各组织中.具有强收缩和迁移能力,同时仍保留成纤维细胞的功能和特性,例如,表达间充质细胞表型蛋白--波形蛋白(vimentin),合成分泌细胞外基质,如Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、纤连蛋白(fibronectin,FIN)等.
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骨桥蛋白在脑动静脉畸形栓塞治疗中的意义
脑动静脉畸形(cerebral arterivenous malformations,CAVM)是颅内常见的血管畸形,血管内栓塞是主要治疗方法之一.骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是近年发现的具有多种重要生物学功能的机体反应蛋白,在多种病理性血管重塑过程中起重要作用.本实验研究OPN在栓塞后血管的表达及其对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)迁移能力的影响,探讨其意义.
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miR-203调控ΔNp63异常表达与子宫颈癌发生的关系
已知HPV特别是持续性高危型HPV（HR-HPV）感染是子宫颈癌发生的重要原因，尤以HPV16为常见[1]。然而， HPV并非导致子宫颈癌的唯一因素。近年来，HPV感染与微小RNA（miRNA）协同作用导致子宫颈癌的发生是研究者关注的焦点。其中，miRNA 203（miR-203）是近年发现的参与肿瘤发生、发展的重要miRNA，具有抑癌基因的作用[2-6]。本课题组的前期研究发现，miR-203在HPV16阳性的子宫颈癌组织中的表达与正常子宫颈组织相比下调；另在HPV16阳性的子宫颈癌细胞系Caski细胞中，使miR-203的表达上调或下调可引起细胞凋亡、增殖及迁移能力的改变。然而， miR-203在HPV16阳性子宫颈癌细胞中的靶基因及其作用机制鲜有报道。有研究提出，p63基因的ΔN异构体（ΔNp63）是miR-203的潜在靶基因。本研究就miR-203是否在HPV16阳性的子宫颈癌细胞中调控潜在靶基因ΔNp63异常表达进行研究，旨在探讨HPV16感染后导致子宫颈癌发生、发展的可能作用机制。
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shrew-1与MMP-9蛋白的表达及其联合检测对早期子宫颈鳞癌复发的预测价值
宫颈癌是全世界妇女的第二大常见恶性肿瘤.我国的新统计显示,宫颈癌的发病率正呈逐年上升趋势,每年新发患者约137000例.目前,临床针对宫颈癌复发的系统化治疗已在广泛开展,但是复发率仍高达40％[1-2].寻找有效的生物学标志物用于预测宫颈癌复发已成为临床亟待解决的重要问题.shrew-1是2004年新发现的由上皮细胞合成的膜蛋白,由411个氨基酸组成,C端位于细胞内[3 ].目前的体外研究证实,该分子能够提高肿瘤细胞表面CD147及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平,从而影响细胞的迁移能力,提示其可能参与了体内肿瘤的转移[4 ].本研究初步探讨shrew-1与MMP-9蛋白的表达及其联合检测对早期宫颈癌复发的预测价值.
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慢病毒介导的AQP8稳定表达对子宫颈癌SiHa细胞迁移能力的影响
水通道蛋白(aquaporins,AQP)是一个疏水的、小而完整的膜蛋白家族,广泛表达于动植物体内,相对分子质量约为30 000,迄今为止,哺乳动物体内共发现有13个AQP成员(AQP0～12)[1].研究提示,AQP作为一个关键因素直接参与人类恶性肿瘤的发生过程[2],与正常人绒毛滋养层细胞相比,AQP8在绒毛膜癌(绒癌)细胞系JAR细胞中表达异常上调,可能是导致绒癌发生的原因之一[3].肿瘤细胞的迁移是肿瘤浸润和转移的关键步骤.目前已报道至少有12种肿瘤细胞在人或鼠体内表达AQP.本研究使用红色荧光蛋白(RFP)标记的重组慢病毒载体将AQP8转染入宫颈癌细胞系SiHa细胞,建立稳定表达AQP8的SiHa细胞系,探讨AQP8对SiHa细胞体外迁移能力的影响.
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不同胎龄早产儿脐带血中内皮祖细胞水平及迁移能力研究
目的：探讨不同胎龄早产儿脐带血中内皮祖细胞（EPC ）水平及迁移能力的差异。方法选择2014年10月至2015年7月，于四川大学华西第二医院、四川省医学科学院·四川省人民医院、成都市第一人民医院收集的47份新生儿的脐带血为研究对象。根据收集脐带血的新生儿胎龄，将其分为极早产儿组（胎龄为28～32孕周，n＝12），早产儿组（胎龄为32～36孕周，n＝20），以及足月儿组（胎龄＞37孕周，n＝15）。将3组新生儿脐带血于诱导分化前，采用流式细胞仪检测脐带血中EPC水平；于诱导分化后，采用荧光探针标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil‐Ac‐LDL ）与异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素（FITC‐UEA‐1）对单个核细胞进行孵育、染色，荧光显微镜下观察3组单个核细胞染色情况，判断EPC是否诱导分化成功。采用T ransw ell迁移实验，检测3组新生儿脐带血EPC迁移能力。统计学比较3组新生儿脐带血诱导分化前EPC水平，诱导分化后 EPC迁移数量。本研究遵循的程序符合收集脐带血的上述3家医院伦理委员会所制定的伦理学标准，得到批准，脐带血获取前，均征得产妇的知情同意，并与之签署临床研究书知情同意书。3组收集脐带血的新生儿性别构成比、分娩方式及出生时Apgar评分等基本资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果①流式细胞仪检测结果显示，脐带血诱导分化前，3组新生儿脐带血中，EPC水平比较，差异无统计学意义（F＝0.302，P＝0.654）。②Dil‐Ac‐LDL、FITC‐UEA‐1双荧光染色结果显示，3组新生儿脐带血中EPC均诱导分化成功，并且随着胎龄增加，单个核细胞诱导分化为 EPC 的数量逐渐增多。③T ransw ell迁移实验结果显示，极早产儿组、早产儿与足月儿组新生儿脐带血中EPC迁移数量分别为（13．8±21．7）个／视野、（18．8±12．4）个／视野与（39．9±23．8）个／视野，3组比较，差异有统计学意义（F＝3．826，P＝0.027）。其中，极早产儿组与早产儿组EPC迁移数量，均显著低于足月儿组，差异均有统计学意义（P＝0.016、0.035）；极早产儿组EPC迁移数量，亦显著低于早产儿组，二者比较，差异亦有统计学意义（P＝0.042）。结论随着胎龄增加，早产儿脐带血中EPC水平虽然无明显增高，但其迁移能力逐渐提高。
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高压电场对A549肺癌细胞株转移潜能影响研究
目的:研究不同强度的体外高压电场对肺癌细胞系A549细胞的黏附、迁移及侵袭等能力的影响.方法:选择处于生长周期的A549细胞,实验组共分为7个亚组,分别施加500～2 500 V/cm的高压电场,对照组未施加电场处理.经生长抑制实验、黏附实验、侵袭及转移实验检验不同强度高压电场对A549细胞的影响.结果:1)细胞黏附能力:实验组各亚组的黏附细胞数明显少于对照组,实验组各亚组与对照组、实验组各亚组之间差异有统计学意义,P＜0.001.2)细胞迁移能力:电场强度为500 V/cm的实验亚组与对照组比较,差异无统计学意义,P=0.089;电场强度≥750 V/cm的各实验亚组之间、及其与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.001.3)细胞侵袭能力:电场强度为500和750 V/cm的实验亚组与对照组比较,差异无统计学意义,P=0.181;电场强度≥1 000 V/cm的实验亚组与对照组间比较,差异有统计学意义,P＜0.001;电场强度为1 000～1 250 V/cm的实验亚组和1 500～2 000 V/cm实验亚组间比较,差异有统计学意义,P＜0.001.结论:体外高压电场可以明显抑制A549细胞的黏附、迁移和侵袭等能力;随着电场强度的增加,肿瘤细胞的抑制程度也随之增加.
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基质细胞衍生因子-1对骨髓间充质干细胞迁移能力及其信号轴的影响
目的 利用基质细胞衍生因子-1(SDF-1α)腺病毒载体,观察其对骨髓间充质干细胞(MSC)体外迁移能力及迁移信号轴缺氧诱导因子-1(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/SDF-1α/趋化因子受体(CXCR4)的影响.方法 将前期构建的Ad-SDF-1α、阴性对照Ad-GFP及CXCR4抑制剂AMD3100转染MSC.转染后48 h观察Ad-SDF-1α的转染效果,Transwell小室检测处理后MSC的迁移能力,qPCR检测各组MSC HIF-1α/VEGF/CXCR4的mRNA表达,Western印迹检测各组HIF-1α/CXCR4的蛋白表达,ELISA检测各组培养基上清VEGF表达水平.结果 Ad-SDF-1α转染效果良好;其细胞迁移数量较其他组多(P<0.05),且Ad-SDF-1α组与Ad-SDF-1α+AMD3100组的细胞数量均较空白组多(P<0.05),抑制剂AMD3100组细胞数量明显低于其他各组(P<0.05);Ad-SDF-1α组及Ad-SDF-1α+AMD3100组的HIF-1α、VEGF及CXCR4 mRNA及蛋白表达水平显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);而Ad-SDF-1α+AMD3100组的HIF-1α、VEGF及CXCR4 mRNA及蛋白表达水平表达水平较Ad-SDF-1α组低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Ad-SDF-1α可提高MSC的体外迁移能力,同时SDF-1α基因能促进HIF-1α、VEGF及CXCR4表达,因此MSC迁移能力的提高是通过HIF-1α/VEGF/SDF-1α/CXCR4信号轴实现的.
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CD26在肾癌细胞中的表达及对迁移能力的影响
目的:探讨CD26在肾癌细胞中的表达及对迁移能力的影响.方法:采用分子生物学的方法检测人肾癌细胞系A498和786-O中CD26蛋白的表达及对迁移能力的影响.结果:A498细胞内CD26蛋白表达相对水平高于786-O细胞内CD26蛋白表达,二者具有统计学意义(P＜0.05);抗CD26抗体和酶抑制剂能够显著抑制细胞迁移的进程.结论:CD26蛋白表达水平可能和肾癌细胞恶性度及迁移能力相关.
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巨噬细胞炎症蛋白1α对多发性骨髓瘤细胞增殖与迁移能力的影响
我们通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓及KM3细胞培养上清液中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)水平,体外运用细胞培养技术分析瘤细胞在MIP-1α作用下的增殖、迁移作用,从而探讨MIP-1α对瘤细胞增殖与迁移能力的影响.
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TCF21在非小细胞肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞迁移能力的影响
目的 探讨转录因子21(TCF21)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对肺癌细胞迁移能力的影响.方法 以2016年5月至2017年12月我院收治的118例行手术治疗的NSCLC患者为研究对象,采集其癌组织标本与癌旁正常组织标本,采用荧光定量聚合酶链反应法检测其中T C F21的表达水平.比较肺癌组织与癌旁组织中T C F21表达水平的差异;分析肺癌组织中TCF21水平与NSCLC患者临床特征及预后的关系;在肺癌A549细胞中转染pCMV6-TCF21质粒与pCM V6质粒,采用划痕实验评估细胞迁移能力.结果 本研究中118例NSCLC患者肺癌组织中TCF21相对表达量(0.37±0.15)显著低于癌旁组织(1.21±0.04,t=58.775,P=0.000);肺癌组织中TCF21表达水平与NSCLC患者年龄、性别、病理学类型无关,而与患者TNM分期及分化级别有关;T C F21高表达组中位生存期较T C F21低表达组显著延长(P=0.000);划痕实验结果显示,转染pCMV6-TCF21质粒组的肺癌A549细胞迁移率为(28.14±3.32)％,显著低于转染pCMV6质粒组[(45.48±2.50)％,t=9.329,P=0.000].结论 TCF21在NSCLC组织中处于低表达水平,且与TNM分期、癌细胞分化级别相关,其水平可影响患者的预后生存期,高表达TCF21可抑制肺癌细胞迁移,从而发挥抑癌效果.
