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供体淋巴细胞在GVHD模型小鼠组织器官中迁移和分布的动态观察
本研究应用小鼠GVHD模型探讨异基因T淋巴细胞在移植受体体内的迁移和分布.将C57BL/6的骨髓细胞和转基因荧光C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞输入经8 Gy全身照射的BALB/c小鼠,建立eGFP标记供体淋巴细胞的GVHD小鼠模型;应用荧光显微镜和流式细胞术观测GVHD模型中eGFP+细胞的分布;ELISA法检测GVHD靶组织中趋化因子MIP-1d水平的改变.结果表明:①输入脾细胞和骨髓细胞第8天后出现GVHD临床及病理表现;②GVHD模型中,受体鼠肝、皮肤、肠、脾、肺、舌有eGFP+细胞浸润;③GVHD小鼠肝、脾eGFP+细胞中CD4+、CD8+细胞比例均逐渐升高;④GVHD鼠脾、肝组织中MIP-1α水平升高,脾中MIP-1α水平高峰出现于移植后第3天,肝中MIP-1d水平高峰出现于移植后第7天.结论:除肝、肠、皮肤外,肺、舌可能也是GVHD靶器官.肝、脾组织中供体淋巴细胞浸润伴随MIP-1α水平的升高.
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小鼠白细胞介素17A的原核表达及对RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响
目的 在大肠杆菌中高效表达与纯化小鼠白细胞介素17A(mIL-17A),并研究其对巨噬细胞分泌炎症因子的影响.方法 以活化的脾细胞为模板,通过RT-PCR法扩增小鼠IL-17a基因的编码序列,构建重组表达质粒pET28a/mIL-17a,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,经亲和层析获得纯化的mIL-17A蛋白.以mIL-17A蛋白刺激体外培养的鼠巨噬细胞RAW264.7,72 h后应用realtime PCR法分析IL-6、巨噬细胞炎症蛋白1(Ccl3)、巨噬细胞炎症蛋白2(Cxcl3)、β防御素2(defensinβ2)的mRNA表达量,并用ELISA法检测培养上清中Ccl3、Cxcl3、IFN-γ、IL-4及IL-6的蛋白质表达水平.结果 在E.coli中成功高效表达了有生物活性的IL-17A蛋白,可促进体外培养的RAW264.7细胞IL-6、Cxcl3、defensin β2 mRNA的表达,并能促进Ccl3、Cxcl3、IFN-γ、IL-4以及IL-6蛋白的表达.结论 成功表达并制备了具备生物学活性的mIL-17A,该蛋白具有刺激巨噬细胞表达趋化因子、防御素及细胞因子的能力.
关键词： 重组白细胞介素17A 巨噬细胞炎症蛋白 抗感染免疫 β防御素 -
重组白细胞介素-17A鼻黏膜免疫抗肺炎链球菌感染的实验研究
目的 观察小鼠重组白细胞介素-17A (rIL-17A)鼻腔黏膜免疫对感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)小鼠防御素β-2(Defb2)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)等表达的影响,探讨rIL-17A抗肺炎链球菌感染的机制.方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为3组:肺炎组、干预组、对照组,以鼻腔接种的方法建立肺炎模型,采用鼻黏膜免疫的方法进行rIL-17A干预.以real-time荧光定量PCR法检测肺组织Defb2、MIP-1α、MIP-2β mRNA的表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞以及纵膈淋巴结细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IFN-γ、IL-4的浓度,并对BALF进行白细胞分类计数和Sp菌落计数,对肺组织进行病理分析.结果 rIL-17A干预组BALF中Sp菌落数较肺炎组明显降低(2.18±0.94 vs 4.37+0.57,P＜0.01),中性粒细胞及巨噬细胞数量显著高于肺炎组(P＜0.01)；干预组肺组织Defb2、MIP-1α mRNA表达上调,其中Defb2 mRNA表达量为对照组的53.93倍,与肺炎组比较差异有统计学意义(53.93±4.80 vs 14.49±5.84,P＜0.01)；rILL-17A干预组与肺炎组比较,淋巴结细胞培养上清中MIP-1α浓度增高明显(431.80±31.57 vs 291.10±5.62,P＜0.01)；MIP-2β浓度在脾细胞和淋巴结细胞培养上清中较肺炎组显著增高(246.20±11.50 vs 183.70±10.64,508.50+20.26 vs 290.90+15.20,P＜0.01),而肺泡灌洗液中浓度变化不显著(P＞0.05)；IFN-γ浓度在BALF和细胞培养上清中均较肺炎组显著升高；ILM除淋巴结细胞培养上清中外,BALF和脾细胞培养上清中均较肺炎组显著升高(92.42±3.82 vs 80.68±4.83,106.80±8.07 vs 73.57+7.43,P＜0.01)；干预组与肺炎组小鼠支气管及血管周围炎症细胞浸润无显著差异,但干预组组织损伤较轻.结论rIL-17A可通过促进Ddb2以及MIP、IFN-y、IL-4等炎症因子的表达,增加炎症部位白细胞募集,提高Sp清除率来增强肺炎小鼠的抗感染能力.
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支气管哮喘患者血清巨噬细胞炎症蛋白1α的变化
巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)是支气管哮喘气道炎症过程中嗜酸细胞(EOS) 、肥大细胞及肺泡巨噬细胞等释放的一种化学介质,为69个氨基酸组成的多肽,属趋化性细胞因子.有研究表明,哮喘患者支气管肺泡灌洗液中及儿童哮喘患者的鼻吸出物中MIP-1α浓度明显增加[1,2].为此,我们观察了哮喘患者血清MIP-1α的变化及与外周血EOS计数、气流阻塞的关系.对象与方法哮喘发作组42例,男21例,女21例,年龄16～67岁,平均年龄(40±12)岁,为2001年1月～4月本院门、急诊哮喘患者.诊断均符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的诊断标准[3].受检前3个月未应用糖皮质激素,受检前8 h内未用β2激动剂.其中轻、中度发作28例,重度发作14例.均嘱吸入二丙酸倍氯米松(每日400～600 μg) 及按需吸入沙丁胺醇气雾剂;重度发作组患者静脉滴注甲基泼尼松龙(每日80～160 mg),治疗后5～7天复查.哮喘缓解组24例,男13例,女11例,年龄18～65岁.正常对照组:健康体检者28名,男、女各14名,平均年龄(38±10)岁.
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慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺组织细胞间粘附分子1及部分中性粒细胞炎症因子的研究
我们探讨细胞间粘附分子1（ICAM-1）、中性粒细胞趋化因子巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）及中性粒细胞活性产物髓过氧化物酶（MPO）在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道炎症中的作用。 材料与方法 雄性二级Wistar大鼠48只，体重270±20 g，随机分为4组，每组12只。（1）模型组：用每日熏香烟及两次气管内滴入200 μg脂多糖法制作COPD大鼠模型［1］。布地奈德组和异丙托溴铵组先按模型组制备模型。(2)布地奈德组：第8天起每日雾吸布地奈德溶液0.5 mg/ml×4。（3）异丙托溴铵组：第8天起每日雾吸异丙托溴铵溶液0.25 mg/ml×4。（4）对照组：不做任何干预。4周后采用小动物呼吸功能测定仪（北京宣武医院），测定大鼠分钟通气量（VE）、呼气峰流速（PEF）及0.3秒用力呼气容积（ FEV0.3）后，即刨腹抽取腹主动脉血处死动物。于4 ℃离心取血清，-20 ℃冻存。左肺行支气管肺泡灌洗（3 ml×2次，回收率60％～70％），灌洗液（BALF）甩片行细胞计数及分类计数，离心后上清液-20 ℃冻存。取右下肺组织用组织匀浆器在冰浴下制成肺组织匀浆，4 ℃，10 000 r/min 离心15 min，取上清-20 ℃冻存。于右肺中叶矢状面大周径处横贯取材，制成石蜡切片和冰冻切片。
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广西医科大学第一附属医院呼吸内科关于支气管哮喘发病机制的研究进展
广西医科大学附属第一医院呼吸内科自1994年开始进行支气管哮喘发病机制的专项研究，取得了较好的成绩。具体工作如下：(1) 证实血小板活化因子选择性拮挤剂YM-264和ONO-6240、血栓素A2合成酶选择性抑制剂OKY-046、血栓素A2受体拮抗剂S-1452均能通过抑制了体内CD+4细胞产生某些细胞因子如白细胞介素5(IL-5)，从而大大地缓解气道变应性炎症。(2) 证实IL-4和IL-5不但可以趋化嗜酸细胞浸润到哮喘患者的气道，还可促使其活化从而释放毒性蛋白，引起气流阻塞和促使气道反应性增高，其机制很可能是依赖细胞间黏附分子的作用而实现的。(3) 发现哮喘患者痰和血清IL-16、血清趋化分子RANTES (Regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted)和巨噬细胞炎症蛋白1α水平升高。这些趋化因子水平的高低对哮喘虽无太大的诊断意义，但对于每例患者而言，监测这些趋化因子水平的动态变化，却可以较好地反映出气道炎症的反应过程。(4) 证实气道嗜酸细胞因为能够表达Ⅱ类主要组织相容性复合体分子和多种协同刺激分子从而成为抗原呈递细胞，无论在体外还是在体内都能将抗原信息呈递给T细胞促使后者增殖。 (覃寿明)
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新疆经典型卡波氏肉瘤组织HHV-8与血清巨噬细胞炎症蛋白表达关系的分析
目的:初步探讨在新疆经典型卡波肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)组织人疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)阳性的患者血清中,巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory proteins-1α,MIP-1α)和MIP-1β表达水平差异与KS发病的关系.方法:采用PCR法扩增16例经典型KS肉瘤组织中HHV8ORF26基因片段,证实存在HHV-8病毒.采用ELISA法检测16例KS患者和20名健康对照者血清中MIP-1α和MIP-1β浓度水平.采用2组均数比较t检验来评价其与KS发病的相关性.结果:16例经典型KS患者HHV-8 DNA检出率为100％.MIP-1α在KS患者血清中呈现低浓度表达,为(126.72±70.26) ρg/mL；在健康对照组中均呈现高浓度表达,为(1 382.50±448.89) ρg/mL;差异有统计学意义,t=-11.05,P＜0.01.MIP-1β在KS血清和健康对照组中呈现高浓度表达,分别为(733.75士276.02)和(886.00±395.65) ρg/mL,差异无统计学意义,t=-1.304,P=0.201.结论:新疆经典型KS患者皮损组织中普遍存在HHV-8 DNA病毒,患者血清中MIPs水平的紊乱与新疆经典型KS的发病存在一定的关系.
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丁咯地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤后炎症反应的干预
近年来,缺血性脑损伤后多形核白细胞(polymorphonuclear cells,PMN)浸润现象受到研究人员的重视,其通过多种途径介导脑缺血再灌注损伤.盐酸丁咯地尔是临床常用的治疗缺血性脑血管病的药物,具有改善微循环,抑制血小板聚集的作用,有实验提示盐酸丁咯地尔还具有抗炎的作用.我们通过观察PMNs浸润过程中核因子(nuclear factor kappa B,NF-KB)、细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammation protein-1,MIP-1α)的变化,检测髓过氧化物酶(MPO),反映PMN的浸润情况,以探讨盐酸丁咯地尔是否具有抗PMN浸润的作用.
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RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MCP-1趋化因子在慢性肝病患者的水平
目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）、乙肝肝硬化（LC）、乙肝相关肝细胞癌（HCC）患者体内正常T细胞表达和分泌调节活化因子（RANTES）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP-1α和MIP-1β）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的表达水平。方法收集2010年2月至2011年11月首都医科大学附属北京佑安医院收治的CHB患者（40例）、LC患者（40例）、HCC患者（53例）的血液标本，采用Luminex 技术检测血清趋化因子RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MCP-1的表达水平，并以25例健康志愿者血液标本作为正常对照。结果趋化因子MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在正常对照组表达水平的中位数分别为9.590、106.490和72.330 pg/ml，高于CHB组、LC组和HCC组；趋化因子RANTES在HCC组的表达水平为16948.440 pg/ml，依次高于正常对照组、CHB组、LC组，差异有统计学意义（α<0.008）。结论趋化因子RANTES的表达水平与乙肝相关HCC的发生关系密切，可以作为HCC发生发展的辅助监测指标。
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IL10缺陷小鼠多器官衰竭发生率和死亡率增加
荷兰研究人员分别给白介素10(IL10)基因缺陷型小鼠（IL10－/－）和IL10基因表现型小鼠（IL10+/+）腹腔注射大肠杆菌，造成腹膜炎和脓毒症，研究内源性IL10在局部细菌感染和全身炎症反应中的作用。研究结果显示，2组小鼠腹膜炎和脓毒症的严重程度均与腹腔液及血清中细菌数量及IL10的水平相关。与IL10+/+小鼠相比，注射大肠杆菌后，IL10－/－小鼠的腹腔液、血液及肺组织中细菌的清除较快，细菌含量较少；但肿瘤坏死因子(TNF)，巨噬细胞炎症蛋白2等炎性介质含量显著增高，腹腔液、血清中性粒细胞数量增多，临床生化和病理检查显示器官损伤严重。用TNF的单克隆抗体对抗TNF不能影响IL10+/+及IL10－／－小鼠对大肠杆菌的清除能力，但能显著减轻IL10－/－小鼠中性粒细胞聚集和多器官损伤，降低死亡率；却不能减少IL10+/+小鼠腹腔液中的白细胞数量和改善器官损伤及存活。实验结果表明，尽管内源性的IL10能影响机体清除入侵的细菌，促进细菌的生长和播散，但通过抑制TNF的释放，IL10能减轻全身炎症反应和多器官损害，减少死亡，在脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS)发病过程中对机体起保护作用。胡森编译自《The Journal of Immunology》2001,166:6323-6331.
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巨噬细胞炎症蛋白1α对多发性骨髓瘤细胞增殖与迁移能力的影响
我们通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓及KM3细胞培养上清液中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)水平,体外运用细胞培养技术分析瘤细胞在MIP-1α作用下的增殖、迁移作用,从而探讨MIP-1α对瘤细胞增殖与迁移能力的影响.
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巨噬细胞炎症蛋白与呼吸机所致肺损伤
呼吸机所致肺损伤(ventilator induced lung injury,VILI)是机械通气过程中的严重的并发症,也是促使患者病情加重和死亡的重要因素.巨噬细胞炎症蛋白(macrophage inflammatory protein,MIP)是近年来发现的一种参与机体炎症反应和免疫反应的趋化性细胞因子,其在VILI中的作用日益受到人们的关注,文献报道越来越多.本文就其分子结构、细胞来源、生物学活性、自身表达调节以及与VILI的关系作一综述.
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巨噬细胞炎症蛋白与呼吸系统疾病
巨噬细胞炎症蛋白是一组多源的细胞因子,具有广泛的生物学活性,其合成和分泌的异常与多种疾病有关.该文从巨噬细胞炎症蛋白的结构、来源、表达及生物学活性几个方面概述其近年的研究进展和热点,以及它在呼吸系统疾病中的变化和临床意义.
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重组IL-17A耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞表达炎症因子的影响
目的 构建携带小鼠IL-17a编码基因的重组耻垢分枝杆菌(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs),并研究其对巨噬细胞表达炎症因子的影响.方法 双酶切质粒pET28a/mIL-17a和pMFA41,转化感受态E.coli TOP10,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMFA41/mIL-17a,电转化耻垢分枝杆菌mc2155,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.分别以MOI为10∶1加入rMs、rMs+anti-IL-17A、Ms感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,并设PBS对照组.荧光定量PCR法检测转染细胞中β防御素-2(Defensin β2,Defb-2)、巨噬细胞炎症蛋白(Macrophage inflammatory protein,MIP)-1α和MIP-2β基因mRNA水平；ELISA法检测细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFNγ蛋白的表达水平.结果 重组表达质粒pMFA41/mIL-17a经双酶切及测序鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白mIL-17A可与大鼠抗小鼠IL-17A单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约20 000处可见特异性反应条带；rMs组RAW264.7细胞中Defb-2、MIP-1α、MIP-2β基因mRNA水平较Ms组及PBS组明显升高(P＜0.01);rMs组细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4和IFNγ的蛋白浓度较Ms组及PBS组明显升高(P＜0.01).结论 成功构建了表达具有生物学活性mIL-17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗,该疫苗可有效促进体外培养的巨噬细胞表达MIP、Defb2、IFN-γ及IL-4,为新型疫苗的研发奠定基础.
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CCL27及其受体在抗病毒免疫中的作用
趋化因子是一类结构相关、对白细胞具有趋化活性、相对分子质量为(8～10)×103的小分子蛋白质,在炎症和免疫反应中可诱导白细胞和淋巴细胞迁移.CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10.CCL27与接触性软疣病毒编码产生的蛋白质MC148有较高的同源性,但却与人疱疹病毒8型编码产生病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ竞争结合受体CCR10.
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多发性骨髓瘤骨病研究进展
多发性骨髓瘤(MM)的骨病主要包括骨质疏松、溶骨性损害、病理性骨折、高钙血症和骨痛.骨髓瘤细胞与骨髓微环境相互作用在激活破骨细胞及抑制成骨细胞活性中起重要作用[1].研究发现,一些细胞因子,如白介素(IL)-6、IL-18、血管内皮生长因子(VEGF)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、核因子(NF)-kB的受体激活剂(RANK)及其配体RANKL,还有骨保护素(OPG)等,均参与骨髓瘤骨病的发生.现就骨髓瘤骨病的研究进展作一综述.
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巨噬细胞炎症蛋白-2和肺型氧中毒
趋化性细胞因子是由相对分子质量为8000～10000的小分子量蛋白质组成的细胞因子超家族.趋化因子与炎症之间的关系引起研究者的极大兴趣,现就趋化因子和肺型氧中毒的研究现状及发展趋势作一综述.
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巨噬细胞炎症蛋白1α研究进展
近十年来,有关趋化因子的研究进展迅速,目前已有50种趋化因子和16种受体得以确认.根据其氨基酸序列中2个保守的半胱氨酸相对位置,即相邻或被任一氨基酸隔开而分成C-C、C-X-C、C和CX3C四个亚族.巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)属C-C亚族,分子量8kd,基因定位于小鼠第11条染色体,人第17条染色体上,其作用无种属特异性.在不同因素刺激下,MIP-1α可由多种细胞产生,如单核/巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、中性粒细胞、B细胞等.本文就MIP-1α的分子结构特性、受体、在造血中的作用、与其它负调控因子、与病毒感染的关系及临床应用价值作一综述.
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巨噬细胞炎症蛋白-1α在大鼠主动脉斑块中的表达及其与血管生成的关系
目的 探讨巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)在大鼠主动脉稳定斑块和不稳定斑块内的分布、与血管新生之间的关系及其在不稳定斑块形成过程中的可能作用.方法 将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只,C组)和动脉粥样硬化模型组(16只,A组).3个月后,免疫组织化学SABC+法检测MIP-1α蛋白的表达情况,鼠单克隆抗体CD34计数微血管密度(MVD).结果 模型组中,MIP-1α阳性表达率85.71%,正常组MIP-1α无表达(0)(P＜0.01);模型组中MVD(15.54±4.22)明显高于正常组(0)(P＜0.01);不稳定斑块组MIP-1α(28.99±3.43)、MVD(24.12±4.34)均高于稳定斑块组(分别为19.76±5.02,17.45±3.71,P＜0.05),MIP-1α蛋白表达与CD34呈正相关(r=0.671,P＜0.05).结论 不稳定斑块组较稳定斑块组的MIP-1α含量高,提示斑块内MIP-1α含量是影响斑块稳定性的重要因素,MIP-1α可以通过促进动脉粥样硬化斑块内血管生成,从而增加斑块的不稳定性.
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唑来膦酸治疗多发性骨髓瘤骨病疗效判定及血清中巨噬细胞炎症蛋白变化
目的：观察唑来膦酸治疗多发性骨髓瘤骨病的临床效果以及检验血清中巨噬细胞炎症蛋白（MIP）变化，探讨多发性骨髓瘤（MM）患者血清中巨噬细胞炎症蛋白水平与多发性骨髓瘤骨病疗效的相关性。方法48例多发性骨髓瘤骨病患者均予以 VTD 方案化疗，随机平均分为2组，一组（A 组）化疗间歇期应用唑来膦酸4mg，每月1次，治疗2个疗程，观察疗效和不良反应，另一组（B组）未予以唑来膦酸治疗。采用酶联免疫吸附法检测患者 A、B 两组治疗前后外周血清中 MIP-1α及MIP-1β的水平。结果 A 组骨痛缓解显效16例，有效4例，无效4例，有效率83．3％。B 组骨痛缓解显效12例，有效4例，无效8例，有效率66．7％。A 组疗效明显优于 B 组（P ＜0．05）。结论唑来膦酸治疗多发性骨髓瘤骨病有效，可明显改善患者生活质量。MM患者血清中 MIP-1α及 MIP-1β水平与多发性骨髓瘤骨病疗效呈负相关，可作为判断疗效的参考指标。
