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抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响
目的 研究抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响,为进一步优化卵母细胞体外成熟培养体系提供理论依据. 方法 对照组采用基础体外培养液,共培养101枚GV期小鼠卵母细胞;实验组采用基础体外培养液+0.6 mmol/L半胱氨酸,共培养115枚GV期小鼠卵母细胞.观察两组卵母细胞的成熟率、谷胱甘肽的含量和线粒体内膜电位. 结果 对照组和实验组卵母细胞的成熟率分别为68.3％和80.0％,差别具有统计学意义(P＜0.05)；对照组和实验组卵母细胞平均谷胱甘肽含量分别为0.48±0.6 μg/L和0.51±0.5 μg/L,实验组谷胱甘肽含量略高,但两者无统计学差异(P＞0.05).线粒体内膜电位,对照组与实验组分别为0.04±0.003 △Ψm与0.39±0.020△Ψm,实验组线粒体内膜电位明显高于对照组(P＜0.05). 结论 抗氧化剂半胱氨酸对体外培养小鼠卵母细胞成熟有一定的促进作用,并可能会提高卵母细胞的发育潜能.
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谷胱甘肽对顺铂致猴和大鼠肾细胞毒性的影响
目的探讨顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞的毒性及半胱氨酸和GSH合成抑制剂BSO对其影响.方法从猴和大鼠的肾脏分离培养的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板,培养24h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4 h,分别加入GSH合成抑制剂BSO和GSH的前体物半胱氨酸,继续培养,分别在8、24和48 h 3个时间点用MTr方法检测细胞存活率.结果顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞有明显的毒性,在不同的时间点有各自的剂量-反应关系,顺铂对大鼠肾小管上皮细胞在8、24和48 h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1 105.12、513.25和71.24μmol/L;BSO能使3组IC5o均降低,分别为66.00、21.43和7.23 μmol/L,而半胱氨酸则使3组IC5o均升高,均大于5 000 μmol/L;顺铂对猴肾小管上皮细胞在3个时间点IC5o分别为3 026.00、1238.35和664.44μmol/L;BSO使3组IC50分别降为480.10、108.61和31.43 μmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均大于5 000μmol/L.结论顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞均具有明显毒性作用,对猴的毒性低于大鼠;BSO可增强顺铂的细胞毒性,对大鼠的影响大于猴,而半胱氨酸对两种细胞的保护作用无显著性差异,提示细胞内GSH对顺铂所致肾小管上皮细胞毒性有保护作用.
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还原型谷胱甘肽对不同药物所致肾细胞毒性的影响
还原型谷胱甘肽(GSH)是公认的细胞内氧化还原状态的调节剂,对毒物所致的氧化性损伤具有保护作用.肾小管上皮细胞具有极高活性的合成与分解GSH的酶以及介导完整的GSH三肽转运的膜运输蛋白[1],所以肾小管上皮细胞对GSH的代谢非常活跃.我们以往的研究表明,GSH对顺铂(CP)所致肾小管上皮细胞毒性有很大影响[2,3].多种药物对肾小管上皮细胞具有毒性作用,GSH是否对它们都有影响?国内外尚未见相关报道.
关键词： 顺铂 双氯芬酸钠 头孢噻啶 DL-甲硫氨酸磺酰亚胺 半胱氨酸 -
常见还原性物质还原五价无机砷的实验研究
目的 研究还原型谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸(Cys)、维生素C(VC)和亚铁离子(Fe2+)等常见还原性物质对五价无机砷[As(Ⅴ)]的还原作用及特点.方法 模拟体内环境建立还原体系[37℃、pH7.0的磷酸盐缓冲液、3μmol/L As(Ⅴ)、60mmol/L巯基化合物(GSH和Cys)、0～30mmol/L VC、0～40mmol/L Fe2+],采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光法(HPLC-HG-AFS)检测各种反应过程中的三价无机砷[AS(Ⅲ)]和AS(Ⅴ).结果 AS(Ⅴ)还原率和AS(Ⅲ)生成率随GSH浓度增加(0～60mmol/L)而增加;当GSH浓度为60mmol/L时,AS(Ⅴ)还原率和As(Ⅲ)生成率达到峰值;随着GSH浓度继续增加(60～80mmol/L),As(Ⅴ)还原率和As(Ⅲ)生成率反而下降;巯基化合物中的巯基(-SH)在还原As(Ⅴ)过程中起关键作用,60mmol/L的-SH反应30分钟后As(Ⅴ)还原率达到60%,As(Ⅴ)还原率与-SH的具体存在形式(GSH或Cys)无关;单独VC或Fe2+不能还原As(Ⅴ),但是当VC浓度大于10mmol/L或Fe<'2+>浓度大于20mmol/L时,可以增加60mmol/L的-SH的还原作用(P<0.01).结论 巯基化合物中的-SH可以非酶促还原As(Ⅴ),VC和Fe2+可以增强-SH的还原作用.
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小麦面筋蛋白降低血浆同型半胱氨酸水平的研究
目的 探讨不同水平下的酪蛋白和小麦面筋蛋白对血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响.方法 健康Wistar大鼠48只随机分为6组,分别为12.5％、25％、50％酪蛋白组和14.5％、29％、58％小麦面筋蛋白组.大鼠自由进食、饮水,每天称重并记录大鼠进食量.喂养实验饲料14天后处死,采集血液,取肝脏组织,用于测定血浆和肝脏中Hcy、半胱氨酸(Cys)等氨基酸指标以及同型半胱氨酸甜菜碱甲基转移酶(BHMT)和胱硫醚β-合成酶(CBS)等酶学指标.结果 小麦面筋蛋白组的大鼠体重增长显著低于酪蛋白组,而在小麦面筋蛋白组随着蛋白含量的提高,大鼠的饲料摄入量明显逐渐减少.小麦面筋蛋白的摄入使血浆Hcy浓度显著低于酪蛋白组,相反血浆Cys的浓度,小麦蛋白组明显高于酪蛋白组.结论 小麦面筋蛋白对血浆Hcy水平的影响主要取决于高Cys与低蛋氨酸含量,但是其赖氨酸和苏氨酸含量较低也是不能忽视的影响因素之一.其主要的作用机制是Cys的升高促进了Hcy代谢的酶活性,增加了Hcy的代谢消耗.
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同型半胱氨酸、半胱氨酸在动脉粥样硬化发病机制中作用的对照研究
目的 以动脉粥样硬化(As)病灶中的主要细胞类型-血管平滑肌细胞为模型,对比研究同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸(Cys)在致As发病效应上的异同,以期为Hey作为As独立危验因子的分子机制提供有比较的证据.方法 体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用不同浓度的Hcy和Cvs作用于细胞24h后:(1)用分光光度比色法测定细胞中SOD和MDA的含量;(2)流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR方法检测caapases-3 mRNA的表达;(3)MTT法测定细胞的增殖率;(4)用1000μmol/L Hcy和Cvs分别作用VSMCs 24、48和72h后,MS-PCR法检测ERa启动子区甲基化的状态,半定量RT-PCR法检测ERa mRNA的表达.结果 (1)Hcy可导致细胞内MDA、SOD呈剂量依赖性增加,Cys使MDA、SOD增加的效应远弱于Hcv(P<0.01).(2)流式细胞术、cmpasew3 mRNA的表达和MTT试验的结果显示,Hcy、Cys对血管平滑肌细胞凋亡率和增殖丰的影响差异不太明显.(3)Hcy显著增加ERa基因启动区的甲基化修饰,并使ERn mRNA的表达进行性减少. Cys不影响ERa启动子区的甲基化状态,对ERa mRNA表达的影响也远小于Hcv.结论 氧化应激对DNA甲基化修饰的影响可能在Hcy致As发病的机制中占据着重要的地位,这也可能是Hcy和Cys在As发病机制中作用不同的重要原因.
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不同种类的膳食蛋白对血浆同型半胱氨酸浓度的影响
目的 探讨不同种类膳食蛋白对血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响.方法 48只健康Wistar大鼠随机分为6组:酪蛋白组、乳清蛋白组、卵白蛋白组、大豆分离蛋白组、小麦蛋白组、玉米蛋白组.分别给予含有不同膳食蛋白的饲料喂养10 d后处死动物,采集血液样品,测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)及半胱氨酰甘氨酸(Cys-Gly)等指标的浓度.结果 小麦蛋白组的体质量增长低于蛋白含量相同的酪蛋白组、乳清蛋白组、卵白蛋白组及大豆分离蛋白组,玉米蛋白组的体质量呈现负增长,且与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).小麦蛋白组和玉米蛋白组血浆Hcy浓度低于其他蛋白组,且差异均有统计学意义(P＜0.05).与酪蛋白组比较,乳清蛋白组的血浆Hcy浓度也有所降低.结论 膳食蛋白的种类能够影响大鼠血浆中的Hcy水平,可能与蛋白中氨基酸组成有关.高Cys含量的膳食蛋白能提高促进Hcy代谢的酶活性,增加Hcy的代谢消耗,从而降低血浆中的Hcy水平.
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营养强化面粉对山西神经管畸形高发地区育龄妇女血清叶酸、同型半胱氨酸及VB12的影响
目的 在神经管畸形高发地区,观察营养强化面粉干预后育龄妇女血清叶酸、同型半胱氨酸及VB12变化.方法 在山西省吕梁地区强化面粉覆盖的10个乡镇和未覆盖的3个乡镇中,选择18～39岁育龄妇女218人,进行营养强化面粉干预研究,干预组155人,食用维生素B1、维生素B2、铁、锌、叶酸5种营养素强化面粉,对照组63人,未食用强化面粉.干预组在食用营养强化面粉20个月后采集空腹静脉血,测定血清叶酸、同型半胱氨酸、维生素B12.结果 两组血清叶酸、同型半胱氨酸、维生素B12差异有统计学意义(P<0.000 1).干预组血清叶酸水平11.1ng/ml高于对照组的8.1 ng/ml,干预组同型半胱氨酸水平12.91 μmol/L低于时照组的21.77 μmol/L,两组维生素B12都在较低水平.但干预组220.5 pg/ml高于对照组173.5 pg/ml.对照组和干预组的叶酸缺乏率分别为11.9%和6.0%,高同型半胱氨酸率分别为69.5%和24.3%,维生素B12缺乏率分别为61.4%和43.9%.结论 两组受试人群普遍存在维生素B12营养缺乏状况;项目地区存在较为严重的高同型半胱氨酸血症发生率状况;采用强化面粉进行20个月干预后,干预组的叶酸营养状况明显优于时照组.
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添加赖氨酸和苏氨酸对小麦面筋蛋白降低大鼠同型半胱氨酸效果的影响
目的 在小麦面筋蛋白中添加赖氨酸和苏氨酸,探讨两种限制氨基酸在小麦面筋蛋白中降低大鼠血浆高同型半胱氨酸(Hcy)血症的影响.方法 32只健康Wistar大鼠随机分为4组,分别为大豆分离蛋白组(25S)、酪蛋白组(25C)、小麦面筋蛋白组(29G)、赖氨酸+苏氨酸添加组(29GLT).各组大鼠分别给予不同饲料喂养14 d后处死,采集血液、肝脏等样品,用于测定生化、酶学指标.结果 添加赖氨酸和苏氨酸可有效改善大鼠因摄入小麦面筋蛋白导致的体重、血浆中Hcy的降低,可抑制血浆S-腺苷蛋氨酸(SAM)和肝脏甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)活性的升高,但对胱硫醚β-合成酶(CBS)活性无影响.蛋氨酸含量较低的大豆分离蛋白组,血浆中同型半胱氨酸的含量并未降低.结论 小麦面筋蛋白对大鼠血浆同型半胱氨酸浓度的影响可能与其氨基酸的组成特点有关.小麦面筋蛋白的高半胱氨酸和低赖氨酸及低苏氨酸的氨基酸组成是小麦面筋蛋白降低同型半胱氨酸水平的可能因素.
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柱前衍生化HPLC法测定酱油中(半)胱氨酸的含量
目的 探讨建立柱前衍生HPLC法测定胱氨酸和半胱氨酸总含量的方法 .方法 以二硫代二丙酸(DTDPA)及异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生剂,采用反相高效液相色谱法测定酱油中胱氨酸和半胱氨酸总含量.通过对反应温度、反应时间、衍生溶液体积及浓度等影响两步衍生反应效率的因素的研究,获得了优化的实验参数.结果 在酱油基质中进行方法 认证,线性范围为0.02～1.00 mg/ml(R2=0.999 9).日内和日间精密度RSD<8%;日内和日间准确度(回收率)分别在100.1%～101.3%和96.4%～103.4%之间.结论 本方法 适用于酱油中的(半)胱氨酸检测,为鉴别"毛发水酱油"提供了有效的监测手段.
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进展期脑梗死合并高血压患者危险因素分析
目的 探讨进展期脑梗死合并高血压患者的危险因素.方法 2014年1月—2016年6月收集在北大医疗鲁中医院神经内科住院的高血压合并脑梗死患者136例(进展期,SIP 55例;非进展期,NSIP 81例,),选择同期内分泌科及体检科高血压非脑梗死患者(高血压组,HTN)126例,对3组血糖(Glu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)及血浆纤维蛋白原(FIB)的水平分别进行比较,分析可能诱导高血压患者发生脑梗死甚至进展性脑梗死的危险因素.结果 对于Glu、Hcy及FIB,3组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);TC、TG、LDL-C 3组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);HDL-C在NSIP组(1.37±0.38)mmol/L和HTN组(1.39±0.42)mmol/L差异无统计学意义(P>0.05),但在SIP组(1.25±0.35)mmol/L和HTN组(1.39±0.42)mmol/L、SIP组(1.25±0.35)mmol/L和NSIP组(1.37±0.38)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05).Logistic回归显示高血糖[OR=1.95,95%CI(1.05~3.63)]、高同型半胱氨酸[OR=1.65,95%CI(1.01~2.69)]、高纤维蛋白原血症[OR=1.79,95%CI(1.07~2.99)]是进展性脑梗死合并高血压患者的危险因素,HDL-C[OR=0.42,95%CI(0.17~0.99)]是进展性脑梗死合并高血压的保护因素.结论 高血压患者在积极降压的同时,应合理控制Glu、Hcy及FIB的水平,减少脑梗死的发生率,并检测HDL-C的水平,防止进展性脑梗死的发生.
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从脾论治糖尿病伴高同型半胱氨酸血症患者71例
目的 探讨研究从脾论治糖尿病伴高同型半胱氨酸血症的临床意义.方法 选择本院2011年7月-2013年1月间所收治的140例糖尿病伴高同型半胱氨酸血症患者分为对照组与从脾组进行了效果对比.结果 从脾研究组在治疗总有效率、治疗后高同型半胱氨酸水平指标均显著优于对照组.结论 从脾论治法除了效果显著外,还具备花费经济、毒副作用小等显著优点,并同时可有效预防糖尿病并发症的发生发展,应在糖尿病伴高同型半胱氨酸患者临床治疗中予以有效推广.
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原发性高血压人群同型半胱氨酸与脑血管功能积分的相关性研究
目的 分析原发性高血压人群同型半胱氨酸(Hcy)与脑血管功能积分的相关性.方法 对2015年10月—2018年3月在重庆市人民医院健康管理(体检)中心同时进行血清Hcy和脑血管功能检测的2 767例原发性高血压人群进行横断面调查,了解高血压人群高同型半胱氨酸血症(HHcy)的检出情况,采用方差分析、χ2检验和秩和检验分析不同Hcy水平的脑血管功能积分值及其异常率的差异,采用Logistic回归分析Hcy水平与脑血管功能积分的相关性.结果 2 767例原发性高血压人群Hcy浓度为11.8(9.3～15.0)μmol/L,HHcy的检出率为25.15%(男性27.01%,女性19.80%),男性高于女性(χ2=14.576,P<0.001),男性和女性HHcy检出率随着年龄的增长均呈上升趋势(P均<0.001).脑血管功能积分异常组(<75分)在卒中病史比例、服用降压药比例、年龄、空腹血糖、收缩压、脉压和Hcy水平上均高于积分正常组(≥75分),差异有统计学意义(P均<0.001).原发性高血压人群脑血管功能积分为(86.99±16.10)分,其中Hcy高四分位组的积分值为(77.91±23.77)分,明显低于其他四分位组(P均<0.001).脑血管功能积分总体异常率(<75分)为15.25%,异常率随着Hcy水平的升高呈上升趋势(χ2=13.986,P<0.001).Logistic回归结果显示,校正性别、年龄、卒中病史、服药史等混杂因素后,Hcy第二、第三和高四分位组发生脑血管功能积分异常的风险分别是低四分位组的1.913、2.045和7.497倍(P均<0.001).结论 原发性高血压人群中Hcy与脑血管功能积分异常相关.当Hcy≥15 μmol/L时,脑血管功能异常显著加重,需引起重视.
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镉诱导HL-7702细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达
镉是一种有毒的重金属元素,易在体内蓄积,镉对机体毒性效应十分复杂.肝脏是镉损伤的主要靶器官之一,目前对镉致肝细胞损伤机制尚不十分清楚.镉可诱导多种细胞发生凋亡,如大鼠肝细胞、人肝癌细胞株和原代培养的鼠肺上皮细胞等[1-6].
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基于Lable-free蛋白质组学技术研究大黄素致大鼠肝损伤作用机制
目的:探索连续4周服用大黄素对大鼠肝组织蛋白表达的影响.方法:选取以大黄折算临床剂量100倍的大黄素灌胃SD大鼠4周(HG1,HG2,HG3,HG4)为模型,采用Lable-free蛋白质组学方法检测肝组织蛋白表达,并对所得结果进行分析.结果:通过筛选,HG1、HG2、HG3、HG4组中分别有158个、650个、219个、378个差异蛋白,这些差异蛋白经GO分析发现主要与细胞和代谢过程相关.其中,4组中共有差异蛋白25个,GO分类表明25个蛋白中有10个为与催化活性相关的蛋白.大黄素的存在使 α-2-HS-糖蛋白(热稳定性糖蛋白)表达上调,该蛋白的浓度与肝病的严重程度正相关;并且组织蛋白酶家族蛋—富含半胱氨酸的蛋白酶表达下调.结论:长期服用大黄素会增加肝损伤的概率,其可能是由于含半胱氨酸蛋白酶的表达下调,使组织功能出现紊乱,导致肝损伤的出现,并且这一结果在低剂量组中也得到了印证.
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不同浓度木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎模型的比较研究
目的:比较不同浓度木瓜蛋白酶建立的兔膝骨关节炎模型,为研究骨关节炎病理及诊疗方法提供数据支持.方法:将60只新西兰大耳白兔随机分为4组,分别在1、3、5d右膝关节腔注射2％(低剂量组)、5％(中剂量组)、10％(高剂量组)(w/v)木瓜蛋白酶和0.03 mol/L的L-半胱氨酸混合溶液0.1 ml/kg(实验组),以及等量生理盐水(对照组).整个实验过程观察兔状态并记录体重和膝关节宽度.首次注射后第2、4、6周将兔分批处死,取股骨髁、胫骨平台及滑膜做大体及组织病理学观察,并进行评分.结果:实验组均出现关节宽度增大、关节软骨变薄、基质分解破坏、滑膜增生等炎症及退行性改变,严重程度随浓度增高而增高,也随时间延长而发展；对照组无上述改变,二者比较差异有统计学意义.结论:兔膝骨关节腔注射2％、5％、10％木瓜蛋白酶和0.03 moL/L L-半胱氨酸混合溶液0.1 ml/kg可制备不同严重程度的骨关节炎模型,周期短,可重复且成功率高.
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药食心葆汤对心血瘀阻证冠心病患者血清同型半胱氨酸及凝血功能的影响
目的:观察药食心葆汤联合西药治疗冠心病的临床疗效及其对血清同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)水平凝血功能的影响,并探讨其作用机制.方法:选取2015年1月至2016年1月于郑州市中医院心内科入院治疗并确诊为心血瘀阻证的冠心病患者200例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,对照组102例,观察组98例,对照组患者采用常规西药治疗,观察组在此基础上联合药食心葆汤治疗,药物干预治疗8周,比较两组患者血清同型半胱氨酸(HCY),凝血功能[凝血酶原时间(prothrombin time,PT),部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT),纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)]等指标.结果:治疗后观察组患者凝血功能、血清HCY水平改善程度优于对照组(P＜0.05);观察组可明显降低CHD患者血清HCY水平(P＜0.05),调节患者的凝血功能(P＜0.05),组间比较显示两组有明显差别,特别是在改善凝血功能方面,观察组明显优于对照组(P＜0.05),对照组治疗前后各项指标没有统计学差异.结论:药食心葆汤联合西药治疗冠心病的临床疗效确切,能有效降低CHD患者HCY水平、调节凝血功能,值得临床推广使用.
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风疹病毒包膜糖蛋白E1中二硫键对其细胞融合活性的影响
为了探讨风疹病毒包膜糖蛋白E1中二硫键对风疹病毒细胞融合活性的影响,在构建重组载体pBSK-SPE2E1的基础上,利用PCR定点突变与体内同源重组相结合的方法,构建了11个突变体,分别将E1外功能区的11个半胱氨酸残基突变为其它氨基酸残基,从而去除一个二硫键,利用Giemsa染色法定性检测由此引起的细胞融合情况,流式细胞术检测导入的外源DNA在细胞表面的表达效率,血吸附检测重组表达的突变体蛋白的受体识别活性.结果表明E1外功能区的10个二硫键对RV的细胞融合活性都有重要影响,任何一个二硫键的去除均导致E1的细胞融合活性丧失;其中第5和第8个半胱氨酸残基所形成的二硫键与E2和E1的相互作用有关,第3、第4和第13个半胱氨酸残基所形成的二硫键可能直接影响E1的细胞融合功能.
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趋化因子及其受体在系统性红斑狼疮发病机制中的作用
趋化因子由一系列结构相似, 分子量约8-17kD,具有趋化功能的细胞因子组成.趋化因子是一个蛋白质家族, 在氨基端多含有一个或两个半胱氨酸,根据单胱氨酸的排列方式, 将趋化因子分为4个家族, 即CXC(α),CC(β),C(γ)和CX3C(δ).
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胱硫醚-β-合成酶在SHR脑组织表达下调
内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)由L-半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-1yase,CSE)及半胱氨酸转移酶催化作用下产生,它通过中枢机制参与调节心血管活动[1-2].高血压时脑内局部H2S浓度的改变可能参与了高血压的发病,自发性高血压大鼠(SHR)脑内CBS表达未见报道.本实验检测CBS在SHR脑组织的分布及表达,探讨其与高血压发病的关系.
