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人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系
目的 研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系.方法 用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coli B121(DE3)中进行表达.hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化.hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性.结果 测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在.GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在.3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性.与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,a螺旋完全缺失)大趋化活性分别下降34.3%和70.5%.结论 hHSFC末端结构,特别是a螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用.
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支气管哮喘患者血浆白细胞介素16的变化及吸入糖皮质激素对其影响
支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾患,糖皮质激素是目前治疗哮喘有效的抗炎药物[1].白细胞介素-16(IL-16)是支气管哮喘发病机理中近发现的一种细胞因子,对CD4T细胞具有特异性趋化活性,参与哮喘发病极早期调节[2].本实验通过观察支气管哮喘患者血浆IL-16水平的变化,旨在初步探讨IL-16在哮喘发病中的作用,并进一步探讨吸入糖皮质激素治疗对哮喘患者血浆IL-16及肺功能的影响,观察吸入糖皮质激素在治疗哮喘的作用机制.
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小鼠恶性黑色素瘤MCP-1趋化型肿瘤疫苗的研究
目的:构建 MCP-1的真核表达载体,并转染小鼠恶性黑色素瘤细胞株 B16,从而构建含有趋化因子MCP-1的小鼠恶性黑色素瘤疫苗,研究该疫苗在体外对淋巴细胞的趋化作用。方法通过对目的基因的提取来构建重组质粒pEGFP-N1-MCP-1并转染裸鼠恶性黑色素瘤细胞株B16,观察其对单个核细胞体外趋化的活性。结果趋化型肿瘤细胞疫苗B16-MCP-1组细胞侵袭数目明显高于空白培养基阴性对照组及野生型B16疫苗组,而野生型B16疫苗组趋化的单个核细胞数目与阴性对照组相似。结论成功构建 MCP-1真核表达载体 pEGFP-N1-MCP-1及小鼠趋化型肿瘤疫苗B16-MCP-1,该疫苗在体外具有趋化小鼠单个核细胞的功能。
关键词: 癌症疫苗 单核趋化因子蛋白-1 小鼠恶性黑色素瘤细胞B16 趋化活性 -
趋化因子与病毒性肝炎的关系
0引言趋化因子(Chemokines)是一类结构相似的糖蛋白,具有较强的白细胞激活和趋化活性,包含有70-90个氨基酸,相对分子质量8-10kD,带有4个半胱氨酸残基,根据其末端的2个半胱氨酸残基是直接相连或是被一个氨基酸分开而分为α和β两大家族、19个成员,具有趋化和激活中性粒细胞、单核细胞或某些T细胞亚群、趋化嗜酸性粒细胞、趋化嗜碱性粒细胞并刺激其释放组织胺及刺激造血细胞、成纤维细胞、角化细胞或黑素瘤细胞的生长等作用,近年来研究发现,Chemokines在病毒性肝炎的发病过程中也起着重要的作用[1-2].
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严重烫伤后补体动态变化与内源性机会菌感染关系的实验研究
目的探讨严重烫伤后血清补体趋化活性的动态变化及其与内源性机会菌感染的关系. 方法采用小鼠 30%TBSAⅢ度烫伤模型,分为正常对照组、单纯烫伤组和去补体烫伤组,检测血清补体趋化活性的动态变化,取肺组织及心内血培养,肺组织进行动态细菌定量培养. 结果烫伤后血清补体的趋化活性在伤后30 min迅速升高,6 h达到高峰;单纯烫伤组的肺组织细菌定量培养的动态变化与补体趋化活性的动态变化呈显著正向相关;单纯烫伤组的肺组织及心内血培养阳性率分别为90%、60%,去补体烫伤组的分别为70%、40%;去补体烫伤组的肺组织在伤后12 h的细菌量明显减少,与单纯烫伤组的比较相差显著(P<0.05). 结论去补体后烫伤可减轻并发机会菌感染,提示过量的补体碎片可诱发机会病原菌的易位和感染.
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芳维A酸乙酯对小鼠多形核白细胞趋化活性的影响
1 材料与方法1.1 动物分组 90只小鼠随机均分3组.空白对照组:根据体重每天用0.5ml左右的花生油灌胃;小剂量芳维A酸乙硝(arotinoid ethylester, AE)组:按7.4g/(kg·d)灌胃;大剂量AE组,按14.8g/(kg·d)灌胃.观察时相点:未灌胃时(0天)、灌胃后第1、2、4、6、8天.
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062 T细胞反应趋化因子提供新的药物靶标
近的研究结果表明,某些趋化因子如 CCL19和CCL21是T细胞增殖重要且有效的诱导物,两种因子趋化活性的研究证实,其能诱导T细胞和树突状细胞的迁移,并能促进胞吞作用的抑制细胞凋亡.
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白细胞介素-8与肺炎
白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)于1986年由Kownatyti首次发现,同年,Matsoshima首先将IL-8基因克隆成功,为人工合成重组IL-8,制备IL-8单克隆抗体铺平了道路[1].IL-8是一种强烈的中性粒细胞趋化和激活因子,含有促泌物,具有趋化活性.
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趋化因子在风湿病中的研究进展
20世纪60年代末发现活化的T淋巴细胞能分泌淋巴因子,这些淋巴因子对单核细胞和中性粒细胞有较强的趋化活性,至今已发现至少35种趋化因子.
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109.趋化因子
自从1989年发现对中性粒细胞具有强烈趋化活性的白细胞介素-8(IL-8)之后,又发现一些与IL-8同源性虽不是很高,但具有类似结构,即有四个胱氨酸残基,分子量在10000左右的分子.这些分子是特定地对白细胞具有趋化性(chemotaxis)的细胞因子,统称为趋化因子(chemokine).其具有的第1、3和第2、4位胱氨酸残基形成二硫键结合,致使趋化因子的二硫键之间形成3列β-折叠结构和在C末端形成α-螺旋结构.趋化因子受体是G蛋白偶联受体,具有7个跨细胞膜结构.
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在大肠杆菌中融合高效表达人MCP-1
目的:利用含强启动子的融合表达载体pGEX-2T对编码人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的基因进行高效表达.方法:基因重组技术及蛋白纯化技术.结果:SDS-PAGE显示表达产物占菌体蛋白的50%.Western Blot检测表明,表达产物可与抗MCP-1抗体特异反应.生物学活性测定结果表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性.结论:融合蛋白对MCP-1趋化活性无影响.
关键词: 人单核细胞趋化蛋白-1 高表达 趋化活性 -
严重烫伤后补体对外源性铜绿假单胞菌感染的影响
目的探讨严重烫烧伤后血清补体趋化活性的动态变化及其对外源性铜绿假单胞菌感染的影响.方法采用小鼠30%TBSAⅢ度烫伤模型,分为正常对照给菌组、单纯烫伤给菌组和去补体烫伤给菌组.检测血清补体趋化活性的动态变化,取肝、肺组织及心内血细菌培养,肝、肺组织进行细菌定量培养.结果烫伤后血清补体的趋化活性在伤后30min迅速升高,6 h达到高峰;单纯烫伤给菌组肝、肺组织及心内血培养阳性率分别为67%、48%、68%,去补体烫伤给菌组分别为44%、30%、51%;去补体烫伤给菌组肝、肺组织在伤后12 h的细菌量明显减少,与单纯烫伤给菌组比较相差显著(P<0.05).结论去补体后烫伤可减轻铜绿假单胞菌感染,提示过量的补体碎片可诱发外源性病菌感染.
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CCL27及其受体在抗病毒免疫中的作用
趋化因子是一类结构相关、对白细胞具有趋化活性、相对分子质量为(8~10)×103的小分子蛋白质,在炎症和免疫反应中可诱导白细胞和淋巴细胞迁移.CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10.CCL27与接触性软疣病毒编码产生的蛋白质MC148有较高的同源性,但却与人疱疹病毒8型编码产生病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ竞争结合受体CCR10.
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小鼠趋化因子CCL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定
通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot 鉴定目的基因的表达,利用趋化小室法测趋化活性.结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgG1 Fc段序列,其序列分别与GenBank中公布序列比对一致,IgG1 Fc段读码框未发生改变;Western blot结果证实转染了pcDNA3.1-mCCL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达;体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性,且呈剂量依耐关系.
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CXCR4/CXCL12在肺癌转移中的初步研究
肿瘤转移是一个具有高度组织性和器官选择性的复杂连续过程, 虽然已证明很多因素参与肿瘤的转移,但是不同组织来源的肿瘤细胞迁移、侵袭到特定部位的分子机制还不清楚.趋化因子是一组结构相关的小分子,具有调节各种类型的白细胞迁移、吸引具有特定的趋化因子受体的炎症细胞浸润到炎症部位参与炎症反应的作用. 不同组织类型的肿瘤细胞常见的转移部位不同,趋化因子及受体是否如趋化炎症细胞的定向移动一样来参与调节肿瘤细胞的定向迁移与转移成为目前研究的热点.近来的研究表明,趋化因子受体及配体与肿瘤细胞的定向迁移、侵袭和转移有密切关系[1,2].为探索趋化因子受体及配体CXCR4/CXCL12 在肺癌细胞迁移中的作用,作者检测肺癌组织、肺癌细胞系A549、血管内皮细胞系VEC 中趋化因子受体CXCR4 以及肺癌患者胸水与淋巴组织中趋化因子CXCL12 的表达,并对其趋化活性进行相应分析,以期为趋化因子受体及配体CXCR4/CXCL12 诱导肺癌细胞的定向迁移提供实验依据.
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小鼠CCL21真核表达载体构建及趋化活性检测
目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性.方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-mCCL21,将其转染到小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma,MFC).利用趋化小室法,检测表达产物针对树突状细胞(DC)趋化活性.结果:基因测序结果证实克隆产物为CCL21基因scya21b型,pcDNA3.1-mCCL21载体构建成功,Western印迹法检测到CCL21蛋白表达,转基因细胞的培养上清对树突状细胞具有显著趋化活性.结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-mCCL21,其表达产物具有针对DC的趋化活性.
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冠状动脉粥样硬化易损斑块与单核细胞趋化活性的相关性研究
目的 利用血管内超声(IVUS)探讨冠状动脉易损斑块与血中单核细胞趋化活性的相关性.方法 对40例稳定型心绞痛(sAP)和40例不稳定型心绞痛(UAP)患者分别进行冠脉造影(CAG)和血管内超声(IVUS)检查.应用IVUS分别观察比较冠状动脉内斑块的性质,同时测量冠脉病变部位及其参考部位的血管外弹力膜面积(EEMA)、管腔面积(LA)、斑块面积(PA)及斑块负荷(PB%),并计算斑块的偏心指数(EI)及血管的重构指数(RI).应用Transwell小室检测两组患者血液中单核细胞的趋化活性.相关性分析ⅣUS检测指标与单核细胞活性的相关性.结果 IVUS检测显示,UAP组主要为脂质性斑块,约占50%(46/92),而SAP组主要为纤维性斑块,约占55%(46/83),脂质斑块仅占17%(14/83).与SAP组比较,UAP组斑块负荷和血管重构指数显著增高(P均<0.01).与SAP组的斑块相比较,UAP组的斑块具有较大的偏心,性(P<0.05),不稳定斑块呈明显的正性重构,约占68%(27/40),而稳定斑块主要表现为负性重构,约占75%(30/40).UAP组单核细胞趋化活性明显增强,单核细胞移动数量明显多于SAP组,差异有统计学意义(P<0.01).相关性分析显示,IVUS测值PB与单核细胞趋化活性呈显著正相关(γ=0.52,P<0.01).结论 IVUS能够准确地识别AS易损斑块.单核细胞趋化活性反映了粥样斑块的稳定性.
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突变型单核细胞趋化蛋白-1构建及其对单核细胞趋化蛋白-1的干预作用
目的:构建表达N端2-8位氨基酸缺失的突变型单核细胞趋化蛋白-1(mMCP-1),并观察其对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的干预作用.方法:Megaprimer-PCR构建mMCP-1-pVAX1(pVMm).以脂质体将pVMm转染真核细胞系C2C12,ELISA分析mMCP-1的表达情况.采用趋化实验分析mMCP-1对病毒性心肌炎小鼠外周血单个核细胞(PMNCs)的趋化活性及其对MCP-1的干预作用.结果:①酶切和测序显示野生型MCP-1真核表达载体(pVM)和pVMm构建成功.pVMm在真核细胞C2C12中有效表达.②mMCP-1不具有趋化病毒性心肌炎小鼠PMNCs的活性.与单纯使用MCP-1相比,以不同浓度的mMCP-1和MCP-1同时行趋化实验,被趋化的细胞明显减少(P<0.01),25 μg/L mMCP-1可阻断10 μg/L MCP-1对病毒性心肌炎小鼠PMNC的趋化活性.结论:小鼠MCP-1 N端2-8位氨基酸决定其趋化活性.mMCP-1可用于干预MCP-1的作用.
关键词: 单核细胞趋化蛋白-1 趋化因子 趋化活性 干预作用 -
反义肽核酸下调树突状细胞CCR7基因表达及意义
肽核酸(PNA)是一种新型核酸类似物[1].树突状细胞(DCs)是功能强的抗原提呈细胞,DCs从外周迁移到淋巴组织的T细胞区完成抗原递呈并激活初始T细胞.目前认为DCs向淋巴组织的迁移动力主要通过趋化因子作用于DCs趋化因子受体CCR7这条途径[2].我们通过反义PNA抑制体外培养的大鼠DCsCCR7的表达及趋化活性,探讨其在调节免疫反应方面的理论意义.
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趋化因子UCK-1对小鼠骨骼肌趋化活性的研究
目的研究趋化因子UCK-1对小鼠骨骼肌的趋化活性、生物学效应及其作用机制.方法将小鼠分为实验组、实验对照组和正常组,实验组又分为UCK-1直接肌内注射于小鼠骨骼肌组(肌注组)、电针刺激加UCK-1肌内注射组(针刺组);实验对照组以肌内注射生理盐水替代UCK-1,分别做镜下观察及部分酶染色分析.结果正常组及实验对照组的小鼠骨骼肌细胞的形态及酸性磷酸酶(AcP)、三磷酸腺苷酶(ATPase)未见明显改变,而实验组的则有显著改变,尤以注射后第10天为显著,同时伴随着明显的单核/巨噬细胞、肥大细胞等免疫细胞的浸润.结论 UCK-1具有显著的促骨骼肌增殖的作用.