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CCR7在恶性肿瘤细胞侵袭及淋巴定向转移中的作用
CCR7 属于CC 类趋化因子受体,曾用名EBI-1、BLR-2 和CMKBR2,含378 个氨基酸残基,基因定位于17q12 ～q21.2.与其结合的CC 类趋化因子配体为CCL21(也称为次级淋巴组织趋化因子,secondary lymphoid-tissue chemokine,SCL)和CCL19 (也称为EBI1 配体趋化因子,EBI1-ligand chemokine,ELC),均特异性高表达于淋巴结、扁桃体、非淋巴组织的内皮淋巴导管、脾T 细胞富集区及淋巴内皮中.
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趋化因子CCL19/CCR7对中枢神经系统功能的影响
趋化因子CCL19及其受体CCR7在机体内来源广泛,包括外周血的中性粒细胞、巨噬细胞及中枢神经系统(CNS)的胶质细胞等.CCL19/CCR7参与机体内免疫细胞的归巢和炎症反应的发生,与生物体正常的生理功能亦关系密切.近年来,CCL19及其受体CCR7在多发性硬化、脑缺血性损伤等神经系统疾病中的作用逐渐受到关注,CCL19/CCR7对CNS的作用尚未完全明确,值得深入探究.本文将对CCL19/CCR7的来源及其对神经系统功能的影响进行综述.
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NF-κB抑制剂PDTC对CCL19调控人头颈鳞癌细胞增殖活性的作用
目的 探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)在CCL19调控人头颈鳞癌细胞活性中的作用.方法 依次使用不同浓度PDTC、CCL19、顺铂处理人头颈鳞癌转移细胞PCI-37B,应用TransAMTM NF-κB p65试剂盒、噻唑蓝比色(MTT)、流式细胞仪等方法 观察NF-κB活性变化,及其与细胞生长抑制、细胞周期、凋亡的关系.结果 不同浓度PDTC可以使CCL19诱导的NF-κB活性显著降低(P<0.05),同时恢复CCL19作用后的细胞对顺铂化疗的敏感性,使细胞生长抑制率、细胞G1期比例、凋亡率等显著上升(P<0.05).结论 PDTC能阻断CCL19对人头颈鳞癌细胞活性的调控、促使细胞死亡.
关键词： 核因子κB 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 CCL19 顺铂 -
HCV感染男性吸毒者血浆CCL19及CCL21浓度变化分析
目的:分析丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染男性吸毒者血浆CCL19及CCL21浓度变化.方法:采用定量ELISA法检测血浆CCL19和CCL21浓度,ELISA法检测血浆抗HCV,Real-time RT-PCR法检测HCV RNA,以国家哨点监测HCV感染的391名男性吸毒者为研究对象,60名健康男性为对照,分析不同抗HCV/HCV RNA状况男性吸毒者血浆CCL19和CCL21浓度变化.结果:391名男性吸毒者中,180名感染HCV,感染率为46.04%.未感染HCV男性吸毒组血浆CCL19及CCL21浓度较健康男性组升高(P≤0.001).吸毒抗HCV(-)/HCV RNA(+)组血浆CCL19和CCL21浓度低,与其他组差异明显(P≤0.05);吸毒抗HCV(+)/HCV RNA(-)组的高,与健康男性组差异显著(P<0.05).结论:吸毒可使男性血浆CCL19和CCL21浓度升高.血浆CCL19和CCL21浓度升高可能有助于HCV自发清除;血浆CCL19和CCL21浓度降低可能预示着病程持续转归较差.
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类风湿关节炎血清中CCL19和CCL21的表达水平与肺间质病变的关系
目的:探讨趋化因子CCL19和CCL21在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达水平与肺间质病变之间的关系,以及与临床指标间的相关性.方法:收集2016年5月至2017年3月于中国医科大学附属第一医院住院的RA患者62例,其中肺间质未受累的34例,合并肺间质改变的28例,特发性间质性肺炎(ⅡP)患者18例,以健康正常人20例为对照组.ELISA测定血清中的CCL21和CCL19水平.采用单因素方差分析,LSD-t检验,Kruskal-Wallis检验,Pearson和Spearman相关分析等进行统计分析.结果:RA患者血清中的CCL21和CCL19水平均高于正常人(P＜0.05;P＜0.01),合并间质性肺炎(ILD)的RA患者血清中CCL21浓度高于无ILD的RA,高于正常人(P＜0.05;P＜0.01);ⅡP患者血清中的CCL21水平比正常人高(P＜0.01);男性血清中的CCL21水平高于女性(P＜0.05);RA患者血清中CCL21水平与白蛋白和BMI负相关(r=-0.280,P＜0.05;r=-0.605,P＜0.05);CCL19水平与C4水平负相关(r=-0.326,P＜0.05),与D-二聚体水平正相关(r=0.592,P＜0.05).结论:趋化因子CCL21和CCL19在RA患者血清中高表达,可能参与了RA的发病过程,其中CCL21可能还参与了RA的肺间质受累过程.
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血清趋化因子CCL19和CCL21水平变化在慢性阻塞性肺疾病中的意义及对肺动脉高压的预测价值
目的 探讨血清趋化因子CCL19和CCL21水平变化在慢性阻塞性肺疾病中的意义及对肺动脉高压的预测价值.方法 选择于我院住院治疗的慢性阻塞性肺疾病患者150例,根据肺动脉压是否正常分为肺动脉压增高组(68例)和肺动脉压正常组(82例),并选取健康体检者60例作为对照组.比较各组血清趋化因子CCL19和CCL21水平的差异.应用logistics回归模型分析影响慢性阻塞性肺疾病患者发生肺动脉高压的危险因素.应用受试者工作(ROC)曲线评价CCL19和CCL21水平对肺动脉高压的诊断价值.结果 CCL19和CCL21水平在对照组、肺动脉压正常组、肺动脉压增高组间逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05).单因素和多因素回归分析显示:CCL19和CCL21为影响慢性阻塞性肺疾病患者发生肺动脉高压的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,CCL19的曲线下面积为0.905,CCL21的曲线下面积为0.937.结论 CCL19和CCL21水平是影响慢阻肺患者发生肺动脉高压的危险因素,并与肺动脉压力呈正相关,可作为预测发生肺动脉高压的参考指标.
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小鼠趋化因子CCL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定
通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot 鉴定目的基因的表达,利用趋化小室法测趋化活性.结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgG1 Fc段序列,其序列分别与GenBank中公布序列比对一致,IgG1 Fc段读码框未发生改变;Western blot结果证实转染了pcDNA3.1-mCCL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达;体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性,且呈剂量依耐关系.
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趋化因子受体CCR7及配体对肿瘤生物学行为的影响
在正常和非正常的生理状况下,趋化因子受体通过与其配体的结合在体内发挥着多种生物学作用.全文就新近发现的趋化因子受体CCR7及其配体CCL21和CCL19的研究进展作一综述.
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大鼠CCL19体外表达及趋化树突状细胞的功能研究
目的 构建大鼠趋化因子CCL19表达慢病毒,建立CCL19体外表达模型.方法 以CCL19亚克隆载体为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增和双酶切连接构建CCL19慢病毒包装载体,采用第3代慢病毒包装系统制备CCL19慢病毒颗粒,定量PCR方法检测病毒滴度,Western blot法检测CCL19在IEC6细胞中的表达.分离大鼠树突状细胞,并采用侵袭小室(Transwell)实验检测慢病毒感染的IEC6细胞对树突状细胞趋化功能的影响.结果 PCR和测序结果表明326 bp的CCL19基因表达序列连人慢病毒表达载体,质粒构建正确,定量PCR检测结果表明病毒包装滴度达到2×109 TU/ml.荧光显微镜观察表明慢病毒体外感染IEC6获得80％以上的阳性表达率.Western blot 检测验证了CCL19蛋白在表达慢病毒感染的IEC6细胞中高表达.Transwell检测表明过表达CCL19的IEC6细胞可以提高树突状细胞的净迁移率达4倍以上.结论 成功制备高滴度的CCL19表达慢病毒,并在IEC6细胞中检测到CCL19蛋白高表达,体外条件下CCL19的IEC6细胞可以提高树突状细胞趋化性.
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P1/Fas-CCL19双表达重组腺病毒载体的构建及表达鉴定
目的 利用pAdEasy-1腺病毒包装系统构建血型B抗原模拟多肽P1/Fas CCL19双表达重组腺病毒,并在体内外试验中验证其表达及可能的疗效.方法 应用腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV、骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒质粒pAd-CMV-P1/Fas-CCＬ19并转染至HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19颗粒后进一步感染乳腺癌4T1细胞并鉴定转染4T1细胞内P1/Fas-CCL19mRNA和蛋白质的表达.构建经人B型血红细胞免疫的4T1荷瘤小鼠模型,比较瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19组、空腺病毒组、0.9％氯化钠溶液组的荷瘤小鼠的肿瘤变化及生存期.结果 感染后4T1细胞中P1/Fas-CCL19 mRNA和蛋白质均有表达.瘤内注射重组腺病毒Ad-P1/Fas-CCL19较瘤内注射空腺病毒、0.9％氯化钠溶液明显抑制4T1肿瘤的生长,但三组小鼠的生存期无明显区别.结论 P1/Fas-CCL19重组腺病毒载体成功构建,体内外实验均证明了其稳定表达及有效性,为进一步临床研究奠定了基础.
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人CCL19基因重组腺病毒载体的构建及其在A549细胞中的表达
目的:构建人CCL19重组腺病毒,在肺癌细胞株A549中验证其表达情况.方法:通过pAdeasy-1系统,获得重组腺病毒Ad-CCL19颗粒,测定病毒滴度.RT-PcR和Western blot分别检测转染A549细胞内CCL19 mRNA和蛋白质的表达.结果:经PCR、双酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒构建成功;效价为1.2×1011 pfu/mL;感染后A549细胞中CCL19mRNA和蛋白质均有表达.结论:成功构建CCL19重组腺病毒栽体,并可在A549细胞中有效表达,为进一步研究CCL19的功能奠定了基础.
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类风湿关节炎中CCL19/IL-1β正反馈环路的体外实验
目的 探讨趋化因子(C-C基序)配体19(CCL19)在类风湿关节炎发病中的功能及机制.方法 收集5例类风湿关节炎患者的滑膜细胞,另采用密度梯度离心法分离出5例健康人外周血单个核细胞(PBMCs),对两种细胞分别给予白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17等细胞因子刺激,实时定量PCR检测细胞中CCL19和其受体CCR7基因的表达.同时,采用不同浓度的CCL19处理滑膜细胞和PBMCs,实时定量PCR检测细胞中IL-1β、TNF-α及CCR7的表达改变.利用Western blot技术检测不同浓度CCL19处理后的PBMCs中磷酸化的脑外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化p38 (p-p38)的表达情况.结果 IL-1β和TNF-α能促进滑膜细胞和PBMCs中CCL19/CCR7的表达,并具有协同效应;CCL19能促进滑膜细胞和PBMCs中IL-1β、TNF-α和CCR7的表达;CCL19可以活化PBMCs中的p-ERK和p-p38.结论 CCL19可能通过活化p-ERK和p-p38上调IL-1β表达,而高表达的IL-1β通过正反馈进一步促进CCL19的表达参与类风湿关节炎疾病的发生发展.
